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    親環(huán)素A在人卵巢癌組織中表達(dá)情況及臨床意義

    2022-06-06 10:02:14嚴(yán)京哲梁衍濤
    臨床軍醫(yī)雜志 2022年5期
    關(guān)鍵詞:陽(yáng)性細(xì)胞卵巢癌陽(yáng)性率

    嚴(yán)京哲, 梁衍濤, 袁 勇, 周 莉

    吉林省腫瘤醫(yī)院1.腹部腫瘤二科;2.骨及軟組織腫瘤外科;3.婦瘤二科,吉林 長(zhǎng)春 130021

    卵巢癌是常見的女性生殖器官惡性腫瘤,因卵巢位于盆腔深部,早期病變不易被發(fā)現(xiàn),多數(shù)患者出現(xiàn)癥狀時(shí)已處于晚期。卵巢上皮性癌病死率居?jì)D科惡性腫瘤第1位[1]。因此,尋找特異性的卵巢癌治療及預(yù)后標(biāo)志物有助于卵巢癌的早期診治,進(jìn)而改善患者預(yù)后。親環(huán)素A(Cyclophilin A,CypA)是免疫抑制劑環(huán)孢霉素A在細(xì)胞內(nèi)的作用靶點(diǎn)[2-3]。有研究表明,多種實(shí)質(zhì)性腫瘤組織中CypA蛋白均高表達(dá)[4-8];而卵巢癌與CypA蛋白相關(guān)性的研究較少。因此,本研究通過手術(shù)切除人卵巢癌組織標(biāo)本,采用免疫組化法分析人卵巢癌組織中CypA蛋白表達(dá)與其病理分級(jí)、臨床分期及預(yù)后的相關(guān)性,探討CypA蛋白作為輔助標(biāo)志物診斷人卵巢癌的可行性?,F(xiàn)報(bào)道如下。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑 選取吉林省腫瘤醫(yī)院自2000年1月至2012年12月收治的37例接受婦科手術(shù)切除并病理證實(shí)為卵巢癌的患者為研究對(duì)象。卵巢癌患者年齡32~71歲,平均年齡(47.3±8.8)歲;病理分級(jí)高(G1級(jí))、中分化(G2級(jí))13例,低分化(G3級(jí))24例;臨床分期Ⅰ/Ⅱ期15例,Ⅲ/Ⅳ期22例;均為初發(fā),且術(shù)前未接受過放化療。收集卵巢癌患者的卵巢癌組織。另選取同期10例接受婦科子宮肌瘤手術(shù)的患者作為對(duì)照。子宮肌瘤患者年齡36~60歲,平均年齡(46.0±8.2)歲。收集子宮肌瘤患者的正常卵巢組織?;颊呒凹覍倬橥狻1狙芯拷?jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。組織標(biāo)本甲醛40 g/L固定,石蠟包埋,連續(xù)切片,厚度約5 μm。DAB、ABC復(fù)合物、羊抗兔二抗購(gòu)自Vector公司,兔抗人CypA多克隆抗體ab41684購(gòu)自abcam公司。

    1.2 實(shí)驗(yàn)方法 (1)常規(guī)脫蠟、水化切片;(2)用pH 6.0的枸櫞酸鈉緩沖溶液0.01 mol/L抗原修復(fù)1~2次;(3)用含H2O230 ml/L的甲醇800 ml/L室溫條件下封閉切片20 min,目的在于消除內(nèi)源性過氧化物酶的影響;(4)用PBS溶液0.01 mol/L清洗3次,每次清洗時(shí)間5 min,加入0.3% Triton X-100,置于室溫條件下孵育30 min,目的在于提高細(xì)胞的通透性;(5)用PBS溶液0.01 mol/L清洗3次,每次清洗時(shí)間5 min,加入CypA多克隆抗體(1∶200),置于4℃條件下24 h;(6)用PBS溶液0.01 mol/L清洗3次,每次清洗時(shí)間5 min,加入二抗(1∶400),置于室溫條件下孵育2 h;(7)用PBS溶液0.01 mol/L清洗3次,每次清洗時(shí)間5 min,加入ABC復(fù)合物(1∶400),置于室溫條件下孵育2 h;(8)用PBS溶液0.01 mol/L清洗3次,每次清洗時(shí)間5 min,用蒸餾水迅速?zèng)_3次,然后再加入DAB-H2O2顯色3 min,蘇木精復(fù)染,脫水、封片。將PBS溶液0.01 mol/L代替一抗作空白對(duì)照。

    1.3 結(jié)果判定 CypA蛋白表達(dá)結(jié)果判定:陽(yáng)性細(xì)胞為細(xì)胞有棕褐色、棕色、淺黃色顆粒;以陽(yáng)性顆粒定位好,細(xì)胞結(jié)構(gòu)清洗、著色與背景對(duì)比清晰為陽(yáng)性染色細(xì)胞條件。觀察5個(gè)(400倍)高倍視野陽(yáng)性細(xì)胞所占比例,其中,(-)表示陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)<1%或無陽(yáng)性細(xì)胞,(+)表示陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)1%~10%,(++)表示陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)11%~50%,(+++)表示陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)>50%。

    1.4 隨訪 采用信訪和電話隨訪方式,于患者手術(shù)之日開始,隨訪至2013年6月。統(tǒng)計(jì)資料除外隨訪期內(nèi)死于卵巢癌以外原因或術(shù)后3個(gè)月內(nèi)死亡者。記錄患者生存時(shí)間。

    2 結(jié)果

    2.1 CypA蛋白表達(dá)情況 子宮肌瘤患者的正常卵巢組織CypA蛋白陰性表達(dá)(圖1a);病理分級(jí)G1~G2級(jí)卵巢癌細(xì)胞胞質(zhì)有棕黃色細(xì)顆粒,染色淡,陽(yáng)性細(xì)胞少(圖1b);病理分級(jí)G3級(jí)卵巢癌細(xì)胞陽(yáng)性細(xì)胞多,且胞質(zhì)棕黃色著色較深(圖1c)。37例卵巢癌組織中,CypA蛋白表達(dá)22例,陽(yáng)性率為59.5%(22/37);10例正常卵巢組織中,CypA蛋白表達(dá)0例,陽(yáng)性率為0(0)。卵巢癌組織CypA蛋白表達(dá)陽(yáng)性率明顯高于正常卵巢組織,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。CypA蛋白表達(dá)22例患者中:(1)病理分級(jí)G1~G2級(jí)4例,陽(yáng)性率為30.8%(4/13);病理分級(jí)G3級(jí)18例,陽(yáng)性率為75.0%(18/24)。G3級(jí)卵巢癌組織CypA蛋白表達(dá)陽(yáng)性率明顯高于G1~G2級(jí)卵巢癌組織,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。(2)臨床分期Ⅰ/Ⅱ期5例,陽(yáng)性率為33.3%(5/15);臨床分期Ⅲ/Ⅳ期17例,陽(yáng)性率為77.3%(17/22)。Ⅲ/Ⅳ期卵巢癌組織CypA蛋白表達(dá)陽(yáng)性率明顯高于Ⅰ/Ⅱ期卵巢癌組織,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

    圖1 卵巢組織CypA蛋白表達(dá)情況[a.正常卵巢組織,CypA蛋白表達(dá)陰性,200倍;b.人卵巢癌病理分級(jí)G1級(jí)組織,CypA蛋白表達(dá)弱陽(yáng)性(+),400倍;c.人卵巢癌病理分級(jí)G3級(jí)組織,CypA蛋白表達(dá)強(qiáng)陽(yáng)性(+++),400倍]

    2.2 CypA蛋白在人卵巢癌組織中表達(dá)強(qiáng)度與預(yù)后相關(guān)性 37例卵巢癌患者平均隨訪43.54個(gè)月(3~87個(gè)月)。15例患者CypA蛋白表達(dá)陰性(-),7例患者弱陽(yáng)性(+),6例患者中度陽(yáng)性(++),9例患者強(qiáng)陽(yáng)性(+++)。CypA蛋白表達(dá)陰性(-)患者平均生存時(shí)間(62.55±14.32)個(gè)月,弱陽(yáng)性(+)(44.29±13.33)個(gè)月,中度陽(yáng)性(++)(31.83±7.78)個(gè)月,強(qiáng)陽(yáng)性(+++)(19.11±10.79)個(gè)月,組間兩兩比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。CypA蛋白表達(dá)強(qiáng)度與患者生存時(shí)間呈負(fù)相關(guān)(r=-0.792,P<0.05)。

    3 討論

    有研究報(bào)道,CypA蛋白在胰腺癌[4]、肺癌[5-6]、大腸癌[7]等多種腫瘤細(xì)胞中高表達(dá),與腫瘤發(fā)生發(fā)展具有相關(guān)性。多項(xiàng)研究證實(shí),癌組織中CypA蛋白表達(dá)增高,在子宮內(nèi)膜癌和胰腺癌中,CypA的表達(dá)與病理分級(jí)、預(yù)后密切相關(guān)[8-9]。本課題組既往研究發(fā)現(xiàn),胰腺癌組織中CypA蛋白的表達(dá)在胰腺癌的生長(zhǎng)、侵潤(rùn)、轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用[10-11]。

    本研究結(jié)果顯示:CypA蛋白在正常卵巢組織中表達(dá)陰性,而在人卵巢癌組織中表達(dá)陽(yáng)性率高,主要為胞漿著色;卵巢癌組織CypA蛋白表達(dá)陽(yáng)性率高于正常卵巢組織,病理分級(jí)G3級(jí)卵巢癌組織CypA蛋白表達(dá)陽(yáng)性率高于G1~G2級(jí)卵巢癌組織,臨床分期Ⅲ/Ⅳ期卵巢癌組織CypA蛋白表達(dá)陽(yáng)性率高于Ⅰ/Ⅱ期卵巢癌組織,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);CypA蛋白表達(dá)強(qiáng)度與患者生存時(shí)間呈負(fù)相關(guān)(r=-0.792,P<0.05)。即隨著卵巢癌惡性程度增長(zhǎng),CypA蛋白表達(dá)水平呈升高趨勢(shì),不同病理級(jí)別、臨床分期卵巢癌組織的CypA蛋白表達(dá)差異明顯,且CypA蛋白表達(dá)與患者生存時(shí)間密切相關(guān)。這提示,人卵巢癌組織中CypA蛋白的表達(dá)可反映卵巢癌的病理級(jí)別、臨床分期及預(yù)后等因素,CypA蛋白表達(dá)水平可以作為判斷人卵巢癌惡性程度的指標(biāo)之一。

    綜上所述,人卵巢癌組織中CypA蛋白的表達(dá)強(qiáng)度與腫瘤的惡性程度及預(yù)后相關(guān),檢測(cè)CypA蛋白表達(dá)對(duì)于判斷人卵巢癌的性質(zhì)和預(yù)后具有一定價(jià)值,其可能為癌癥治療方式的發(fā)展提供新的藥物靶點(diǎn)。

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