不同炮制方法對(duì)路路通中揮發(fā)性成分的影響

劉杰英 楊長福 張明 張娜 李瑋 張雪麗 林昶

摘要 [目的]研究路路通清炒法、砂燙法對(duì)路路通中揮發(fā)性成分的影響。[方法]采用頂空-固相微萃取法（HS-SPME）提取路路通生品及炮制品揮發(fā)性成分，運(yùn)用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法（GC-MS）分析并鑒定其揮發(fā)性成分，經(jīng)峰面積歸一化法計(jì)算各成分的相對(duì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)。[結(jié)果]從路路通生品、清炒品和砂燙品中分別鑒定出65、71和80種化合物，分別占其揮發(fā)性成分總含量的74.08%、71.45%和74.14%。與生品相比，清炒品、砂燙品中烯類成分種類及相對(duì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)顯著增加;清炒品、砂燙品中酮類相對(duì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)顯著減少。清炒后揮發(fā)油中烯類成分種類從22種增加到29種，相對(duì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)從19.15%增加到40.61%;砂燙后揮發(fā)油中烯類成分種類從22種增加到36種，相對(duì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)從19.15%增加到43.62%。清炒后揮發(fā)油中酮類成分相對(duì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)從22.27%減少到9.10%，砂燙后揮發(fā)油中酮類成分相對(duì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)從22.27%減少到6.51%。清炒路路通新產(chǎn)生了7種萜烯類成分，砂燙路路通新產(chǎn)生了14種萜烯類成分，砂燙法較清炒法多增加7種萜烯類成分。[結(jié)論]清炒法、砂燙法炮制后，路路通揮發(fā)油中烯類成分的種類及相對(duì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)顯著升高，酮類成分相對(duì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)顯著降低，砂燙品中新增萜烯類成分較清炒品多。研究結(jié)果為不同炮制方法的炮制工藝研究提供試驗(yàn)依據(jù)。

關(guān)鍵詞 路路通;炮制方法;頂空-固相微萃取;氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用;揮發(fā)性成分

中圖分類號(hào) R283.3? 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A

文章編號(hào) 0517-6611（2022）10-0152-05

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2022.10.034

Effect of Different Processing Methods on Volatile Components in Liquidambar formosana Hance

LIU Jie-ying1，YANG Chang-fu1，2，ZHANG Ming3 et al （1.Guizhou University of Traditional Chinese Medicine，Guiyang，Guizhou 550025;2.Research Center of Traditional Chinese Medicine under Forest of Guizhou University of Traditional Chinese Medicine， Guiyang，Guizhou 550025;3. Key Laboratory of Natural Product Chemistry， Chinese Academy of Sciences，Guiyang，Guizhou 550002）

Abstract [Objective]To study the effect of stir-frying and sand-scorching on volatile components of Liquidambar formosana.[Method]Headspace solid-phase microextraction （HS-SPME） was used to extract the volatile components of Liquidambar formosana raw and processed products， and the volatile components were analyzed and identified by gas chromatography-mass spectrometry （GC-MS）， and the relative mass fraction of each component was calculated by the peak area normalization method.[Result]65，71 and 80 components were respectively identified from Liquidambar formosana，the stir-fried product of Liquidambar formosana and the sand-scorched product of Liquidambar formosana accounted for 74.08%，71.45% and 74.14% of the total content of volatile components，respectively.The types and the relative mass fraction of alkenes in the stir-fried product and the sand-scorched product of Liquidambar formosana were significantly higher than those in raw product;the relative mass fraction of ketones in stir-fried products and sand-scorched products of Liquidambar formosana were significantly reducer than those in raw product. After stir-frying，the types of alkenes increased from 22 to 29 in the volatile oil， and the relative mass fraction increased from 19.15% to 40.61%.After sand-scorching，the types of alkenes increased from 22 to 36 in the volatile oil， and the relative mass fraction increased from 19.15% to 43.62%. After stir-frying ，the relative mass fraction of ketones decreased from 22.27% to 9.10% in the volatile oil， and after sand-scorching，ketones decreased from 22.27% to 6.51% in the volatile oil.Compared with Liquidambar formosana，7 kinds of terpen ingredients were produced in stir-fried products，14 kinds of terpen ingredients were produced in sand-scorched products，sand-scorched method increased 7 terpen ingredients more than stir-fried method.[Conclusion]After stir-frying and sand-scalding，the types and relative mass fractions of alkenes in the volatile oil of Liquidambar formosana are significantly increased， while the relative mass fractions of ketones is significantly decreased，more terpenes ingredients are added in the sand-scorched product than in the stir-fried product.The results provides experimental basis for the study on processing technology of different processing methods.

Key words Liquidambar formosana Hance;Processing method;HS-SPME; GC-MS;Volatile components

基金項(xiàng)目 貴州食品藥品監(jiān)督管理局項(xiàng)目（DBYP52524）。

作者簡介 劉杰英（1995—），女，山西呂梁人，碩士研究生，研究方向：中藥及民族藥的基礎(chǔ)研究與開發(fā)。通信作者，副教授，碩士，碩士生導(dǎo)師，從事中藥、民族藥產(chǎn)地加工、炮制工藝及機(jī)理研究。

收稿日期 2021-12-05

路路通為金縷梅科植物楓香樹（Liquidambar formosana Hance）的干燥成熟果序，主產(chǎn)江蘇、浙江、江西、福建、廣東等省，具有利水除濕、祛風(fēng)通絡(luò)、明目通乳的功效[1]。路路通多用于炎癥、關(guān)節(jié)痛、腦血管病、腫瘤等治療[2]。路路通中存在大量的揮發(fā)油[3]，具有抑制微生物作用[2]。目前，關(guān)于路路通揮發(fā)性成分的研究主要集中在不同產(chǎn)地成分分析[4]、藥理藥效研究[2]等方面，而關(guān)于炮制對(duì)路路通中揮發(fā)性成分的影響方面的研究鮮有報(bào)道。路路通常用炮制方法為清炒法，砂燙法為貴州特色炮制方法[5-6]。該研究采用頂空-固相微萃取法（HS-SPME）和氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法（GC-MS）對(duì)路路通生品及炮制品中的揮發(fā)性成分進(jìn)行分析， 探尋清炒法和砂燙法對(duì)路路通中揮發(fā)性成分的影響。

1 材料與方法

1.1 儀器 HP 6890/5975 C氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀（美國安捷倫公司）;HP-5 MS彈性石英毛細(xì)管柱（60 m×0.25 mm×0.25 um）;手動(dòng)固相微萃取裝置（美國Supelco公司）;萃取纖維，2 cm-50/30 μm DVB/CAR/PDMS Stable Flex;電子天平（梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司）;多功能粉碎機(jī)（永康市金穗機(jī)械制造廠）。

1.2 藥材

路路通采于湖北，由貴州同濟(jì)堂有限公司提供，經(jīng)貴州中醫(yī)藥大學(xué)孫慶文教授鑒定為金縷梅科植物楓香樹 （Liquidambar formosana Hance）的干燥成熟果序。炮制品為實(shí)驗(yàn)室自制。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 樣品制備。

（1）路路通生品。參照2020年版《中國藥典》一部路路通炮制方法，除去雜質(zhì)即得。

（2）路路通清炒品（以下簡稱清炒品）。取原藥材，除去雜質(zhì)，洗凈泥沙，干燥，放入燒熱的鍋中，用微火加熱，炒脆時(shí)取出，用木板搓去刺尖，簸凈[5]。

（3）路路通砂燙品（以下簡稱砂燙品）。取凈河沙置鍋內(nèi)，用武火加熱至滑利狀態(tài)，投入路路通生品，不斷翻動(dòng)，炒至表面酥脆、鼓起并呈深棕色或較原色加深時(shí)，取出，篩去沙，放涼，干燥即得[6]。

1.3.2 頂空-固相微萃取條件。

取路路通生品、清炒品和砂燙品粗粉各0.3 g，置于50 mL頂空采樣瓶中，采用2 cm-50/30 μm DVB/CAR/PDMS Stable Flex纖維頭在55 ℃的平板加熱條件下頂空萃取40 min，在溫度250 ℃下熱解析5 min進(jìn)樣。

1.3.3 氣相色譜-質(zhì)譜條件。

1.3.3.1 氣相色譜條件。

色譜柱為HP-5MS彈性石英毛細(xì)管柱（60 m×0.25 mm×0.25 μm）;載氣為高純度He（99.999%）;載氣流速1.0 mL/min;汽化室溫度250 ℃;進(jìn)樣模式為不分流進(jìn)樣;升溫程序：初始柱溫40 ℃內(nèi)保持2 min，以3 ℃/min升溫至208 ℃，再以10 ℃/min升溫至268 ℃，總運(yùn)行時(shí)間為64 min。

1.3.3.2 質(zhì)譜條件。

離子源為EI源，離子源溫度230 ℃，四極桿溫度150 ℃，電子能量70 eV，發(fā)射電流34.6 μA，倍增器電壓1 894 V，接口溫度280 ℃，質(zhì)量范圍29～500 amu，溶劑延遲3.0 min。

2 結(jié)果與分析

采用HS-SPME技術(shù)萃取路路通生品、炒制品和砂燙品樣品中揮發(fā)性化合物，并應(yīng)用GC-MS對(duì)其進(jìn)行分離分析，分別得到總離子流圖（圖1）。對(duì)總離子流圖的各峰通過Nist 14和Wiley 275質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，確定揮發(fā)性化學(xué)成分，按照面積歸一化法確定路路通生品及炮制品中化合物相對(duì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)，具體結(jié)果見表1所示。從路路通生品鑒定出65種成分，占揮發(fā)性成分的74.08%;從清炒品中鑒定出71種成分，占揮發(fā)性成分的71.45%;從砂燙品中鑒定出80種成分，占揮發(fā)性成分的74.14%。生品與炮制品路路通揮發(fā)油中主要含有烯類、酮類、醇類、醛類、烴類、酯類、酸類等成分，其中烯類相對(duì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)最高，在所有組分中占比達(dá)19.15%～43.62%;

生品及炮制品中相對(duì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)大于1%的主要萜烯類成分有α-蒎烯、β-蒎烯和檸檬烯，且其在炮制品中的含量高于生品。其次為酮類、醇類、醛類、烴類成分，相對(duì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為6.51%～22.27%、10.15%～16.02%、 5.95%～10.21%、2.23%～7.28%。酯類、酸類成分相對(duì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)最低，分別為0.24%～0.54%、0.03%～0.05%。

進(jìn)一步分析生品、清炒品、砂燙品揮發(fā)性成分的種類和相對(duì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)（圖2～3）發(fā)現(xiàn)，與生品相比，清炒品和砂燙品中烯類成分的種類及相對(duì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)顯著增加，酮類成分相對(duì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)顯著減少。清炒品中烯類成分種類從22種增加到29種，新增7種萜烯類成分，相對(duì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)從19.15%增加到40.61%;砂燙品中烯類成分種類從22種增加到36種，新增14種萜烯類成分，相對(duì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)從19.15%增加到43.62%，砂燙品較清炒品多增加7種萜烯類成分。清炒品中酮類相對(duì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)從22.27%減少到9.10%，砂燙品中酮類相對(duì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)從22.27%減少到6.51%。

3 結(jié)論與討論

該研究發(fā)現(xiàn)，炒制前后顯著增加的烯類成分變化為清炒后烯類相對(duì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)從19.15%增加到40.61%，砂燙后烯類相對(duì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)從19.15%增加到43.62%;清炒后酮類相對(duì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)從22.27%減少到9.10%，砂燙后酮類相對(duì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)從22.27%減少到6.51%，路路通清炒品和砂燙品中烯類成分相對(duì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)均增加，酮類成分相對(duì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)均減少，可能與酮類成分高溫分解為烯類成分相關(guān)[7]。清炒路路通新產(chǎn)生了7種烯類成分;砂燙路路通新產(chǎn)生了14種萜烯類成分，砂燙法較清炒法多增加7種萜烯類成分;唐文文等[8]研究發(fā)現(xiàn)，升高溫度可使當(dāng)歸萜烯類成分的種類較生品顯著升高，這與該研究的結(jié)果相類似。砂燙溫度較清炒溫度高[9]、受熱更加均勻，是導(dǎo)致砂燙品萜烯類成分的種類較清炒品顯著增加的原因，推測在路路通的炮制中，砂燙法因受熱均勻，又因火力強(qiáng)， 溫度高，質(zhì)地變?yōu)樗执啵?以便于粉碎和有效成分的溶出[10]。

生品及炮制品中相對(duì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)大于1%的主要萜烯類成分有α-蒎烯、β-蒎烯和檸檬烯，且其在炮制品中的含量高于生品。α-蒎烯具有鎮(zhèn)咳、抗炎、祛痰的作用[11-12]，β-蒎烯具有抑菌、抗炎、抗癌的作用[13]，檸檬烯具有抗菌、消炎和抗腫瘤等生物功能[14]，炮制后新增成分中香檜烯具有消炎、鎮(zhèn)痛、抑菌、驅(qū)蟲等功效[15];3-蒈烯對(duì)銅綠假單胞菌有抑制作用[16]。這些結(jié)果說明炮制品比生品具有更強(qiáng)的抑菌、抗炎作用，陳婧[17]研究發(fā)現(xiàn)揮發(fā)性成分的抗炎活性隨給藥劑量的增加而增強(qiáng)，該試驗(yàn)為路路通及炮制品的抗炎活性研究提供研究思路。

該研究采用HS-SPME和GC-MS對(duì)路路通不同炮制品的揮發(fā)性成分進(jìn)行分析，路路通生品、清炒品、砂燙品中分別鑒定出65、71和80種成分，分別占揮發(fā)性成分的74.08%、71.45%和74.14%。清炒法、砂燙法炮制后，路路通揮發(fā)油中烯類成分的種類及相對(duì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)顯著升高，酮類成分相對(duì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)顯著降低，砂燙品中新增萜烯類成分較清炒品多。研究結(jié)果為不同炮制方法的炮制工藝研究提供試驗(yàn)依據(jù)。

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