結(jié)核感染T細胞斑點試驗、結(jié)核分枝桿菌抗體檢查在診斷肺結(jié)核患者診斷中的應用比較*

張雅惠，伍小英，何剛（廣州市胸科醫(yī)院二分所，廣東 廣州 510000）

肺結(jié)核屬于臨床發(fā)病率較高的傳染病，患者主要由結(jié)核分枝桿菌引起，能侵及諸多臟器，臨床多表現(xiàn)為低熱、乏力及消瘦等［1］。由于肺結(jié)核患者發(fā)病早期臨床癥狀缺乏典型性，多數(shù)患者在因胸痛、咳嗽或體檢時發(fā)現(xiàn)，增加臨床診療難度。痰涂片檢查或血培養(yǎng)是肺結(jié)核診斷“金標準”，能確定患者是否感染結(jié)核桿菌，亦可指導患者臨床治療。但是，檢查周期較長且難以動態(tài)了解患者病情［2］。T 細胞斑點試驗（T-SPOT.TB）是肺結(jié)核患者中常用的輔助診斷方法，借助試劑盒完成特異性T細胞測定，能完成潛伏期或疑似肺結(jié)核患者進行篩查［3］；而結(jié)核分枝桿菌抗體（TB-Ab）則測定血液中IgG抗體，實現(xiàn)疾病的篩查。但是，該檢測方法存在明顯的局限性，臨床診斷假陽性率較高［4］。國外學者研究表明：將T-SPOT.TB、TB-Ab兩種診斷方法聯(lián)合用于肺結(jié)核患者中，能發(fā)揮不同診斷方法優(yōu)勢，可提高臨床確診率，但是該結(jié)論并未得到證實。因此，本研究以疑似肺結(jié)核患者為對象，探討T-SPOT.TB 及TB-Ab 在肺結(jié)核患者中的應用效果。報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2019年2月至2021年2月疑似肺結(jié)核患者200例，其中男125例、女75例；年齡15～85（60.59±4.61）歲；臨床表現(xiàn)：低熱、盜汗1例、發(fā)熱2例，發(fā)熱、咳嗽5例，發(fā)熱、咳嗽、胸悶1例，咯血2例，咳嗽56例，咳嗽、低熱、盜汗1例，咳嗽、咳痰20例，咳嗽、咳痰、發(fā)熱1例，咳嗽、咳血痰4例，咳嗽、氣促1例，咳嗽、胸悶1例，咳嗽、胸痛4例，咳血痰6例，體檢發(fā)現(xiàn)、無癥狀81例，胸悶2例，胸痛12例。本研究經(jīng)我院醫(yī)學倫理委員會審核批準，患者及家屬簽署同意書。

1.2 納入與排除標準 納入標準：（1）參考肺結(jié)核、肺部疾病診斷相關(guān)標準，并以“痰涂片及病原菌培養(yǎng)”作為“金標準”；（2）均完成T-SPOT.TB 及TB-Ab檢查，且患者均可耐受（3）具有較為完整的檢查資料和隨訪資料。排除標準：（1）精神異常、伴有自身免疫系統(tǒng)疾病者；（2）認知功能異常、血液系統(tǒng)疾病或伴有先天性畸形者［5］。

1.3 方法 所有患者入院后均完成T-SPOT.TB 及TB-Ab檢查，具體方法如下：

1.3.1 T-SPOT.TB 檢查 （1）檢測方法。所有患者入院后次日空腹狀態(tài)下，經(jīng)肘靜脈取外周空腹血8 ml，將其放置在含有肝素的抗凝管中，充分混合均勻（溫度控制在18℃～25℃）后4 h 內(nèi)完成檢測，所有操作均嚴格遵循操作說明書完成。檢測時分離單個核細胞（PBMCs），洗滌后計數(shù)，根據(jù)工作需要完成細胞懸液的制備，并與抗原混合，加入微孔培養(yǎng)板中。同時，患者監(jiān)測時常規(guī)選擇TB特異性ESAT-6（抗原A）和CFP-10（抗原B）肽段進一步刺激，并常規(guī)孵化后PBS 沖洗，加入酶標抗體，洗滌后置入反應液；上述操作完畢后，借助ELISPOT 讀板儀完成斑點數(shù)閱讀和統(tǒng)計。（2）判斷標準。對于A 孔與B 孔中任意孔檢測出一下情況即可診斷為陽性：對照孔內(nèi)斑點數(shù)草果6，抗原A/B 孔≥2×（空白對照孔斑點數(shù)）；對照組孔內(nèi)斑點數(shù)＜6 時，且（抗原A 或B 孔斑點數(shù)）-（空白對照孔斑點數(shù)）≥6，反之則為陰性［6］。

1.3.2 TB-Ab 檢查 （1）檢測方法。借助膠體金免疫層析技術(shù)完成血液標本中結(jié)核分支桿菌抗體IgG，具體方法如下。向試劑盒、儀器中加入標本及稀釋液，觀察標本顯色情況。（2）判定標本。對于反應孔中空間紅色質(zhì)控線、紅線檢測線的為陽性說明標本中檢出結(jié)核分支桿菌抗體IgG；反應孔中僅出現(xiàn)紅色質(zhì)控線為陰性，對于反應孔中未顯示紅色質(zhì)控線，結(jié)果無效［7］。

本研究中以“痰涂片及病原菌培養(yǎng)”作為“金標準”，并將T-SPOT.TB及TB-Ab檢查結(jié)果與金標準進行比較（計算方法如下：靈敏度=真陽人數(shù)/（真陽人數(shù)+假陰人數(shù)）；特異度=真陰/（真陰人數(shù)+假陽人數(shù)）；陽性預測值=真陽人數(shù)/（真陽人數(shù)+真陰人數(shù)）；陰性預測值=假陽人數(shù)/（假陽人數(shù)+假陰人數(shù)））。

1.4 統(tǒng)計學處理 采用SPSS 24.0 統(tǒng)計學軟件進行處理。計數(shù)資料采用例（百分率）表示，行χ2檢驗。P＜0.05示差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 T-SPOT.TB 在肺結(jié)核患者中的診斷價值分析疑似200例肺結(jié)核患者經(jīng)“痰涂片及病原菌培養(yǎng)”檢查確診57例，確診率為28.50%。T-SPOT.TB檢查確診51例，與金標準診斷符合率為89.47%。T-SPOT.TB檢查用于肺結(jié)核患者中診斷靈敏度為73.68%（42/57），特異度為93.71%（134/143）；陽性預測值為82.35%（42/51）、陰性預測值為89.93%（134/149）。見表1。

表1 T-SPOT.TB在肺結(jié)核患者中的診斷價值分析

2.2 TB-Ab 檢查在肺結(jié)核患者中的診斷價值分析TB-Ab 檢查用于肺結(jié)核患者中最終確診45例，與金標準診斷符合率為78.95%。TB-Ab檢查用于肺結(jié)核患者中靈敏度為59.65%（34/57），特異度為92.31%（132/143），陽性預測值為75.56%（34/45）、陰性預測值為85.16%（132/155）。見表2。

表2 T-SPOT.TB在肺結(jié)核患者中的診斷價值分析

2.3 T-SPOT.TB 聯(lián)合TB-Ab 檢查在肺結(jié)核患者中的診斷價值分析 T-SPOT.TB聯(lián)合TB-Ab檢查用于肺結(jié)核患者中確診55例，與金標準診斷符合率為96.49%（P＞0.05）；T-SPOT.TB 聯(lián)合TB-Ab 檢查診斷靈敏度為85.96%（49/57），診斷特異度為95.80%（137/143）；陽性預測值為89.09%（49/55）、陰性預測值為94.48%（137/145）。見表3。

表3 T-SPOT.TB聯(lián)合TB-Ab檢查在肺結(jié)核患者中的診斷價值分析

2.4 不同診斷方法在肺結(jié)核患者中的診斷效能比較 根據(jù)公式完成不同診斷方法靈敏度與特異度，結(jié)果表明：T-SPOT.TB、TB-Ab 檢查及二者聯(lián)合檢查診斷特異度比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；TSPOT.TB聯(lián)合TB-Ab檢查用于肺結(jié)核患者中診斷靈敏度、陽性預測值與陰性預測值均高于T-SPOT.TB、TB-Ab檢查，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表4。

表4 不同診斷方法在肺結(jié)核患者中的診斷效能

3 討論

肺結(jié)核是由于結(jié)核分枝桿菌感染引起，由于發(fā)病初期癥狀不明顯，導致臨床診斷、鑒別難度較大［8］。痰涂片及病原菌培養(yǎng)是肺結(jié)核患者診斷“金標準”，借助上述檢查能了解并判斷患者是否感染結(jié)核桿菌。本研究中，疑似200例肺結(jié)核患者經(jīng)“痰涂片及病原菌培養(yǎng)”檢查確診57例，確診率為28.50%，從本研究結(jié)果看出，痰涂片及病原菌培養(yǎng)能提高肺結(jié)核確診率，可指導臨床診療。但是，痰涂片及病原菌培養(yǎng)臨床使用時亦存在諸多局限性，該檢查方法出結(jié)果時間檢查，可重復性較差，難以動態(tài)了解患者病情變化情況。

近年來，T-SPOT.TB 及TB-Ab 檢查在肺結(jié)核患者中得到應用，且效果理想。本研究中，T-SPOT.TB檢查確診51例，診斷靈敏度為73.68%，特異度為93.71%，說明疑似肺結(jié)核患者臨床診斷確診率較高，且T-SPOT.TB檢查診斷符合率較高。T-SPOT.TB是肺結(jié)核患者中常用的篩查方法，通過測定機體T 細胞水平，能反映患者的免疫應答狀態(tài)，并分泌γ-干擾素［9］。因此，T-SPOT.TB試驗通過酶聯(lián)免疫斑點計數(shù)能判斷機體是否存在γ-干擾素效應的T 淋巴細胞，且與傳統(tǒng)皮膚結(jié)核菌素試驗相比，具有特異性好，不受卡介苗接種與環(huán)境分支桿菌的影響，具有檢出率、靈敏度高及快速的特點。而TB-Ab檢查屬于體液免疫檢查技術(shù)，患者受結(jié)核桿菌感染后，能產(chǎn)生一組免疫球蛋白。通過TB-Ab檢查則能通過免疫應答機制檢測機體抗結(jié)核免疫反應，判斷患者是否感染結(jié)合桿菌，可指導臨床早期診斷及治療［10］。本研究中，TB-Ab 檢查用于肺結(jié)核患者中最終確診45例，靈敏度為59.65%，特異度為92.31%。為了進一步分析TSPOT.TB 及TB-Ab 檢查在肺結(jié)核患者中的診斷價值，本研究中對二者聯(lián)合檢查進行分析，結(jié)果表明：T-SPOT.TB聯(lián)合TB-Ab檢查用于肺結(jié)核患者中確診55例，斷靈敏度為85.96%，診斷特異度為95.80%；TSPOT.TB聯(lián)合TB-Ab檢查用于肺結(jié)核患者中診斷靈敏度、陽性預測值與陰性預測值均高于T-SPOT.TB、TB-Ab 檢查（P＜0.05），由此看出，T-SPOT.TB 及TBAb 聯(lián)合檢查用于肺結(jié)核患者中靈敏度、特異度更高。因此，臨床上對于疑似肺結(jié)核患者，應加強患者T-SPOT.TB及TB-Ab檢查，必要時二者聯(lián)合檢查，發(fā)揮不同檢查方法優(yōu)勢，幫助患者早期確診；對于確診的肺結(jié)核患者，則應及時采取相應的措施治療干預，并定期復查T-SPOT.TB 及TB-Ab，為臨床診療提供參考依據(jù)。

綜上所述，T-SPOT.TB 及TB-Ab 檢查用于肺結(jié)核患者中能獲得較高的檢出率，且兩種方法聯(lián)合測定能獲得較高的診斷效能，可指導臨床診療。