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    發(fā)酵工藝對藍靛果酒功能性及香氣成分的影響

    2022-06-02 08:42:56張秀玲李鳳鳳張文濤
    食品科學(xué) 2022年10期
    關(guān)鍵詞:發(fā)酵酒藍靛果酒

    張秀玲,汲 潤,李鳳鳳,李 晨,張文濤

    (東北農(nóng)業(yè)大學(xué)食品學(xué)院,黑龍江 哈爾濱 150030)

    藍靛果(),又名藍靛果忍冬、羊奶子,為忍冬科忍冬屬植物,其果實呈橢圓形,果肉細膩且果汁含量豐富。主要產(chǎn)區(qū)為我國的東北和華北地區(qū),尤其是大興安嶺、小興安嶺地區(qū)。已有研究表明,藍靛果營養(yǎng)豐富,含有大量活性成分,尤其是花青素的含量遠高于其他漿果,具較好的抗氧化、抗菌、抗腫瘤、抗炎活性等,對人體健康十分有益。

    藍靛果存在采摘期短、不易貯藏的缺點,且果實中的不良風(fēng)味(酸味和苦味)限制了藍靛果鮮果的消費,考慮到風(fēng)味的改善和生物活性、香氣的保存,果酒發(fā)酵可能是提高藍靛果資源利用價值的有效方式之一。目前對藍靛果酒的研究主要集中在加工工藝及抗氧化活性物質(zhì)分析等方面,包洪濤等對藍靛果酒加工過程中降酸、澄清等工藝流程進行了研究,楊旭等研究了去渣發(fā)酵、帶渣發(fā)酵對于藍靛果酒香氣成分的變化,梁敏等對不同工藝條件下藍靛果酒發(fā)酵過程中花色苷的變化進行了研究,而對藍靛果酒釀制過程中果酒品質(zhì)變化的綜合性分析較少。

    已知關(guān)于藍靛果酒活性成分及香氣成分的研究主要集中在漿果品種、酵母菌株、發(fā)酵溫度和初始糖度等方面,卻鮮有關(guān)于發(fā)酵工藝對藍靛果酒活性成分、抗氧化能力及香氣輪廓變化的綜合研究,目前研究最多的釀酒工藝包括傳統(tǒng)的鮮汁發(fā)酵(利用果汁)、熟汁發(fā)酵(發(fā)酵前必須熱處理)和去渣發(fā)酵(發(fā)酵前去除果汁中的果皮和種子),不同發(fā)酵工藝的應(yīng)用導(dǎo)致最終果酒品質(zhì)的差異。因此,本研究選擇鮮汁發(fā)酵、熟汁發(fā)酵和去渣發(fā)酵3 種不同的發(fā)酵工藝,對不同工藝發(fā)酵藍靛果酒中乙醇體積分數(shù)、活性成分、體外抗氧化能力和香氣成分進行比較分析,以期能更好地了解不同發(fā)酵工藝對藍靛果酒整體質(zhì)量的影響。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    藍靛果(中科藍1號)于2021年成熟季節(jié)采自中國科學(xué)院東北地理與農(nóng)業(yè)生態(tài)研究所,速凍處理(-13~-15 ℃)后運回東北農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)產(chǎn)品加工實驗室冷藏。

    果酒專用酵母RW 安琪酵母股份有限公司;果膠酶 滄州夏盛酶有限公司;福林-酚顯色劑、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-dipheny l-2-picrylhydrazyl,DPPH)、水溶性VE(Trolox)、焦性沒食子酸 美國Sigma公司;其他試劑均為分析純。

    1.2 儀器與設(shè)備

    超聲波清洗儀 深圳市潔盟清洗設(shè)備有限公司;722紫外分光光度計 上海達平有限公司;PHS-3C-3E精密pH計 上海儀電科學(xué)儀器股份有限公司;RE-52CS-1旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器 上海亞榮生化儀器廠;WJS15E26榨汁機(原汁機) 廣東美的精品電器制造有限公司;6890-5973N氣相色譜-質(zhì)譜儀 美國安捷倫科技有限公司。

    1.3 方法

    1.3.1 藍靛果酒發(fā)酵工藝鮮汁發(fā)酵工藝路線:

    1.3.2 操作要點

    1)解凍:將藍靛果凍果置于室溫下解凍2 h;2)打漿破壁:將藍靛果放入榨汁機中破壁打碎,并充分攪拌;3)酶解:在果漿中添加0.3%果膠酶(3 000 U/g),充分攪拌后40 ℃條件下水浴90 min;4)煮制:將打漿破壁后的果漿加熱至沸騰,并在沸騰狀態(tài)下保持5~8 min;5)殺菌:向果漿中添加0.07 g/L KSO殺菌處理;6)調(diào)糖、調(diào)酸:加蔗糖至20 °Brix左右,加入NaHCO調(diào)酸至pH 3.6左右,轉(zhuǎn)移至發(fā)酵罐中;7)酵母活化:將安琪果酒專用酵母RW與5%糖水按質(zhì)量比為1∶10均勻混合,40 ℃條件下水浴40 min,10 ℃以下備用;8)主發(fā)酵:將果漿轉(zhuǎn)移至發(fā)酵罐中,28 ℃發(fā)酵10 d。發(fā)酵期間,需每日均勻攪拌一次,待含糖量降至1%以下,白利度不再減少時即為主發(fā)酵終點;9)補SO:過濾得到的原酒需補加SO,SO添加量為30 mg/L;10)后發(fā)酵:發(fā)酵罐密封處理進行無氧發(fā)酵,20 ℃條件下后發(fā)酵20 d;11)澄清:添加3%羧甲基纖維素,并靜置72 h;12)殺菌:將發(fā)酵酒轉(zhuǎn)移至密閉容器中,緩慢加熱至67 ℃,加熱時間為15 min。

    1.3.3 理化指標(biāo)及活性成分測定

    取樣:藍靛果鮮果記為第0天,各藍靛果醪記為第1天;藍靛果酒發(fā)酵周期為31 d,主發(fā)酵期間各成分變化差異較大,后發(fā)酵期間各成分變化差異較小,因此后發(fā)酵取樣時間適當(dāng)延長,設(shè)定檢測時間分別為第1、3、5、7、9、11、13、15、19、23、27、31天。

    乙醇體積分數(shù)測定參照GB/T 15038—2006《葡萄酒、果酒通用分析方法》;采用pH值示差法測定藍靛果酒中花青素含量;采用福林-酚法測定藍靛果酒中總酚含量,以沒食子酸為標(biāo)準(zhǔn)品繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得到回歸方程=13.75+0.045,=0.999 0,為沒食子酸質(zhì)量濃度(mg/L),為760 nm波長處吸光度;采用硝酸鋁法測定藍靛果酒中黃酮含量,以蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)品繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得到回歸方程=0.023 6+0.005,=0.999 6,為蘆丁質(zhì)量濃度(mg/L),為510 nm波長處吸光度。

    1.3.4 體外抗氧化活性測定

    1.3.4.1 DPPH自由基清除能力測定

    參照Rawat等方法并略以修改。稱取0.168 4 g DPPH并溶于無水乙醇中,配制0.1 mmol/L的DPPH溶液。取1 mL果酒稀釋液(量取1 mL酒液加入100 mL容量瓶中,加水定容,下同)加入試管中,再加入1 mL 0.1 mmol/L DPPH溶液,振蕩搖勻并避光放置30 min。取待測樣于517 nm波長處測定吸光度,以Trolox建立標(biāo)準(zhǔn)曲線,得到回歸方程為=0.707 2+0.008 1,=0.997 7。將吸光度帶入回歸方程得到DPPH自由基清除能力,結(jié)果以Trolox當(dāng)量表示,單位為mmol/L。

    1.3.4.2 羥自由基清除能力測定

    參照朱璐等方法并略以修改。取1 mL果酒稀釋液加入試管中,依次向試管中加入1 mL 10.0 mmol/L FeSO、1 mL 10.0 mmol/L水楊酸乙醇溶液以及1 mL 8.8 mmol/L過氧化氫溶液,振蕩搖勻,在37 ℃水浴中反應(yīng)30 min。待冷卻后在510 nm波長處測定吸光度。以Trolox建立標(biāo)準(zhǔn)曲線,得到回歸方程為=0.000 2+1.085 2,=0.994 6,將吸光度帶入回歸方程得到羥自由基清除能力,結(jié)果以Trolox當(dāng)量表示,單位為mmol/L。

    1.3.4.3 超氧陰離子自由基清除能力測定

    參照李斌等方法并略以修改。取1 mL果酒稀釋液加入試管中,依次加入4.5 mL Tris-HCl緩沖液和4 mL鄰苯三酚溶液。常溫下反應(yīng)5 min后,加入1 mL 12 mol/L HCl溶液結(jié)束反應(yīng),并在320 nm波長處測定吸光度。以Trolox建立標(biāo)準(zhǔn)曲線,得到回歸方程為=0.000 47+3.151 4,=0.991 2。將吸光度帶入回歸方程得到超氧陰離子自由基清除能力,結(jié)果以Trolox當(dāng)量表示,單位為mmol/L。

    1.3.5 香氣成分分析

    1.3.5.1 樣品處理

    移取100 mL果酒于250 mL配有聚四氟乙烯膠墊的帶蓋樣品瓶中,加入2 g氯化鈉,在60 ℃平衡15 min,將固相微萃手柄針頭插入密封樣品瓶中,推出萃取纖維頭頂空萃取40 min,推回萃取頭,拔出針頭后迅速插入氣相色譜進樣口中,250 ℃解吸3 min。在取樣前,應(yīng)將萃取頭置于氣相色譜進樣口中250 ℃活化5 min。

    1.3.5.2 氣相色譜-質(zhì)譜測定條件

    氣相色譜條件:色譜柱:Agilent DB-5色譜柱(60 m×0.25 mm,0.25 μm);進樣口溫度:250 ℃;進樣方式:不分流進樣;載氣:高純氦氣,流速:1.0 mL/min。程序升溫:初始溫度為100 ℃,保持5 min,以5 ℃/min速率升至250 ℃,保持5 min??倻y定時間:40 min。

    質(zhì)譜條件:電子電離源,電子能量70 eV;傳輸線溫度250 ℃;離子源溫度230 ℃;四極桿溫度150 ℃;掃描模式為Scan模式,質(zhì)量掃描范圍50~500 u。

    采用NIST02質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫檢索定性分析,單個化合物的相對含量采用峰面積歸一化法計算的百分比表示。

    1.3.5.3 關(guān)鍵揮發(fā)性物質(zhì)評價

    參照嚴(yán)超等的方法,對樣品中關(guān)鍵揮發(fā)性物質(zhì)采用相對氣味活度值(relative odor acivity value,ROAV)法進行分析。首先采用OAV法確定出樣品中貢獻率最大的揮發(fā)性成分,如式(1)所示:

    式中:為揮發(fā)性物質(zhì)質(zhì)量濃度/(mg/L);為該揮發(fā)性物質(zhì)的感覺閾值/(mg/L)。

    根據(jù)式(1)所求結(jié)果,規(guī)定對樣品風(fēng)味貢獻率最大的揮發(fā)性物質(zhì)其ROAV為100,其他物質(zhì)ROAV則根據(jù)式(2)進行計算:

    式中:CT分別表示不同揮發(fā)性成分質(zhì)量濃度/(mg/L)與感覺閾值/(mg/L);與分別表示貢獻率的最大揮發(fā)性成分質(zhì)量濃度/(mg/L)與感覺閾值/(mg/L)。

    當(dāng)ROAV≥1時,說明該物質(zhì)可對總體風(fēng)味有直接影響,為關(guān)鍵化合物;當(dāng)0.1≤ROAV<1時,說明該物質(zhì)可對總體風(fēng)味有修飾作用,為修飾化合物;當(dāng)ROAV<0.1時,說明該物質(zhì)對總體風(fēng)味無顯著影響,為潛在化合物。

    1.3.6 感官評定

    參照GB/T 15038—2006,在標(biāo)準(zhǔn)品嘗室進行品嘗,選擇10 名經(jīng)專業(yè)培訓(xùn)并有經(jīng)驗的感官評價人員對3 種不同工藝發(fā)酵的藍靛果酒分別從色澤、澄清度、香氣、滋味和典型性5 個方面進行感官評價(表1),分數(shù)從高到底表示感覺強烈程度逐漸降低,從優(yōu)質(zhì)藍靛果酒應(yīng)具備的特點到品質(zhì)較差,結(jié)果經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)化處理后進行分析。

    表1 感官評分細則Table 1 Criteria for sensory evaluation of L.edulis wine

    1.4 數(shù)據(jù)處理

    2 結(jié)果與分析

    2.1 藍靛果酒發(fā)酵過程中乙醇體積分數(shù)動態(tài)變化

    由圖1可知,藍靛果酒發(fā)酵期間,3 種藍靛果酒的乙醇體積分數(shù)均呈現(xiàn)先上升后趨于平穩(wěn)趨勢。發(fā)酵前期乙醇體積分數(shù)持續(xù)升高的原因主要是果漿中存在大量的糖分,釀酒酵母代謝活動旺盛,糖類物質(zhì)被迅速分解為乙醇和二氧化碳,隨著酵母菌呼吸作用持續(xù),酵母可利用的糖分迅速減少后,酵母活性降低,乙醇體積分數(shù)趨于平穩(wěn)。發(fā)酵結(jié)束后熟汁發(fā)酵酒中乙醇體積分數(shù)最高,為(12.29±0.08)%,分別比鮮汁和去渣發(fā)酵酒乙醇體積分數(shù)高出0.5%和2.27%,分析為經(jīng)熱處理的熟汁發(fā)酵酒中糖分更容易得到釋放,因此糖發(fā)酵得更徹底,乙醇體積分數(shù)更高。

    圖1 藍靛果酒釀造期間乙醇體積分數(shù)動態(tài)變化Fig.1 Dynamic changes of ethanol content during the brewing ofL.edulis wine

    2.2 藍靛果酒發(fā)酵過程中活性成分動態(tài)變化

    2.2.1 藍靛果酒發(fā)酵過程中花青素含量動態(tài)變化

    由圖2可知,藍靛果酒發(fā)酵期間,3 種不同工藝發(fā)酵酒中花青素呈現(xiàn)先上升后下降趨勢。在發(fā)酵第1天,3 種不同工藝發(fā)酵酒中花青素含量均達到峰值,熟汁發(fā)酵酒中花青素質(zhì)量濃度為(2.92±0.17)g/L,顯著高于鮮汁發(fā)酵與去渣發(fā)酵藍靛果酒中花青素含量(<0.05)。在發(fā)酵3~13 d,3 種發(fā)酵酒中花青素含量均呈現(xiàn)緩慢下降趨勢。這是由于在乙醇發(fā)酵期間,-葡萄糖苷酶會水解花青素,使花青素含量逐漸降低。王行等在藍莓酒發(fā)酵的研究中發(fā)現(xiàn),花青素含量在發(fā)酵期第1天到達峰值并隨后逐漸降低,與本研究的結(jié)果相似。

    圖2 藍靛果酒釀造期間花青素含量動態(tài)變化Fig.2 Dynamic changes of anthocyanin content in L.edulis wine during brewing

    在發(fā)酵13 d后,3 種不同工藝發(fā)酵酒中花青素含量趨于穩(wěn)定。發(fā)酵結(jié)束后,鮮汁發(fā)酵與熟汁發(fā)酵酒中花青素質(zhì)量濃度為(823.75±8.89)mg/L與(830.17±8.65)mg/L,均顯著高于去渣發(fā)酵酒(417.77±11.01)mg/L(<0.05),這表明在藍靛果酒釀制過程中,熟汁和鮮汁發(fā)酵能更好地保留花青素,分析原因為:在傳統(tǒng)發(fā)酵過程中40%的花青素從果皮、果渣中轉(zhuǎn)移到果酒中,但細胞壁以及細胞壁膜的滲透性不足影響了花青素等活性物質(zhì)的提取,而經(jīng)熱處理的熟汁發(fā)酵酒中細胞的結(jié)構(gòu)發(fā)生了破壞,果渣中水溶性花青素和單寧以非選擇性的方式進行釋放。因此,缺少果渣浸漬作用的去渣發(fā)酵酒中花青素含量較低,而經(jīng)熱處理的藍靛果酒花青素得到更好的釋放,這對充分汲取藍靛果活性物質(zhì)具有重要意義,也間接表明了藍靛果果渣中蘊含了巨大的功能價值。

    2.2.2 藍靛果酒發(fā)酵過程中總酚含量動態(tài)變化

    由圖3可知,在發(fā)酵過程中,3 種工藝發(fā)酵酒中總酚含量均呈現(xiàn)緩慢下降趨勢,出現(xiàn)這種情況的原因可能是在發(fā)酵過程中,由于酵母在代謝活動中產(chǎn)生了大量的次級代謝產(chǎn)物,酚類化合物與多糖、蛋白質(zhì)等物質(zhì)結(jié)合或吸附,使果酒中總酚含量迅速下降。發(fā)酵結(jié)束后,熟汁發(fā)酵酒中總酚含量最高,質(zhì)量濃度為(2.41±0.03)g/L,略高于鮮汁與去渣發(fā)酵酒,這表明熟汁發(fā)酵有利于果酒中多酚含量的增加。

    圖3 藍靛果酒釀造期間總酚含量動態(tài)變化Fig.3 Dynamic changes of polyphenols content in L.edulis wine during brewing

    研究發(fā)現(xiàn),在100 ℃加熱30 min后,花青素損失率約為30%,因此經(jīng)短暫熱處理(100 ℃、5~8 min)的熟汁發(fā)酵酒,酚類等活性物質(zhì)有一定損失,但損失較小,而熱處理后果酒中果皮、果渣中酚類物質(zhì)得到更好的釋放,同時酒中各種氧化酶的在較高溫度下受到破壞,活性大大降低,如多酚氧化酶等,使果酒中多酚等活性物質(zhì)在發(fā)酵期間損失減少,有利于果酒中活性物質(zhì)的保留。

    2.2.3 藍靛果酒發(fā)酵過程中黃酮含量動態(tài)變化

    由圖4可知,在藍靛果酒發(fā)酵期間,黃酮含量呈先緩慢上升后緩慢下降的總體趨勢。在發(fā)酵0~1 d,藍靛果經(jīng)破壁處理后黃酮含量損失較大。發(fā)酵1~7 d,在浸漬的作用下,鮮汁發(fā)酵與熟汁發(fā)酵酒中黃酮質(zhì)量濃度逐漸上升,分別從(482.50±39.50)、(538.00±14.50)mg/L升至(555.00±14.40)、(572.00±6.95)mg/L,去渣發(fā)酵酒中黃酮含量上升程度較緩。在發(fā)酵7~31 d,3 種工藝發(fā)酵酒中黃酮含量均緩慢下降并趨于穩(wěn)定,最終鮮汁發(fā)酵酒中黃酮質(zhì)量濃度最高,為(470.50±6.15)mg/L,但3 種工藝發(fā)酵酒中黃酮含量并無顯著差異,可見不同發(fā)酵工藝對于藍靛果酒中黃酮含量影響較小。與藍靛果漿相比,鮮汁發(fā)酵、熟汁發(fā)酵和去渣發(fā)酵酒中總酚保存率分別為90.31%、89.15%和88.58%,饒炎炎等研究發(fā)現(xiàn)在藍莓酒發(fā)酵過程中黃酮類化合物保存率為95%,在果酒釀制期間損失較少,與本研究結(jié)果相似。

    圖4 藍靛果酒釀造期間黃酮含量動態(tài)變化Fig.4 Dynamic changes of flavonoids content in L.edulis wine during brewing

    2.3 藍靛果酒發(fā)酵過程中體外抗氧化能力動態(tài)變化

    由圖5A可知,3 種工藝發(fā)酵酒的DPPH自由基清除能力基本呈逐漸下降并趨于穩(wěn)定的趨勢,這是因為隨發(fā)酵時間的延長,酒中抗氧化物質(zhì)不斷被分解,尤其是0~7 d減少較快,此后相對趨于平穩(wěn),與總酚含量變化趨勢總體保持一致。在發(fā)酵期結(jié)束后,熟汁發(fā)酵酒表現(xiàn)出最強的DPPH自由基清除能力,為(14.25±0.14)mmol/L,其次為鮮汁發(fā)酵酒(12.43±0.28)mmol/L、去渣發(fā)酵酒(11.37±0.14)mmol/L,這與熟汁發(fā)酵酒中含有相對較高含量的總酚有一定相關(guān)性。同時,研究表明花青素的一些熱降解產(chǎn)物也具有抗氧化能力,其活性可與商業(yè)抗氧化抗氧化劑如二丁基羥基甲苯相媲美,有助于熟汁發(fā)酵酒抗氧化能力的提高。

    圖5 藍靛果酒釀造期間體外抗氧化能力動態(tài)變化Fig.5 Dynamic changes of antioxidant capacity in vitro in L.edulis wine during brewing

    由圖5B可知,在發(fā)酵過程中3 種工藝發(fā)酵酒的超氧陰離子自由基清除能力均顯著下降(<0.05)并逐漸趨于穩(wěn)定,分析原因可能是由于單體酚和酚酸等物質(zhì)在發(fā)酵階段參與了果酒中尚未結(jié)束的發(fā)酵過程,總酚、花青素等活性成分不斷被分解,使果酒清除超氧陰離子自由基的能力下降。發(fā)酵期結(jié)束后,熟汁發(fā)酵酒呈現(xiàn)出最強的超氧陰離子自由基清除能力,為(8.93±1.37)mmol/L,是鮮汁發(fā)酵和去渣發(fā)酵酒的1.39 倍和1.36 倍,這是因為經(jīng)熱處理的熟汁發(fā)酵酒中果渣、果皮中花青素、多酚等活性物質(zhì)得到更快的釋放,使熟汁發(fā)酵酒中活性物質(zhì)含量高于鮮汁和去渣發(fā)酵酒,藍靛果酒的抗氧化能力更強。

    由圖5C可知,在發(fā)酵0~5 d,鮮汁與熟汁發(fā)酵酒的羥自由基清除能力均顯著升高(<0.05),在發(fā)酵第5天,鮮汁發(fā)酵酒的羥自由基清除能力達到峰值,為(135.77±5.58)mmol/L,原因是浸漬作用下,果皮、果肉中活性成分進入酒液,酒液對羥自由基清除能力升高,去渣發(fā)酵酒已將果皮、果渣進行過濾,因此其自由基清除能力呈現(xiàn)緩慢下降的趨勢。在發(fā)酵5~31 d,隨著3 種工藝發(fā)酵酒中活性物質(zhì)含量基本趨于穩(wěn)定,果酒中羥自由基清除能力緩慢下降并趨于穩(wěn)定。

    在發(fā)酵期結(jié)束后,鮮汁發(fā)酵酒清除羥自由基的能力最強,為(40.43±3.33)mmol/L,是熟汁和去渣發(fā)酵酒的1.82 倍和1.50 倍,表明鮮汁發(fā)酵有助于果酒羥自由基清除能力的增強,且整個發(fā)酵過程中,3 種藍靛果酒的羥自由基清除能力變化與黃酮含量變化趨勢基本相似,說明二者具有一定的濃度-效應(yīng)計量關(guān)系,黃酮含量的增加有助于提高羥自由基的清除能力,這與吳樹坤等在山葡萄酒中研究結(jié)果相似。

    2.4 藍靛果酒發(fā)酵過程中香氣成分動態(tài)變化

    香氣成分是影響藍靛果酒質(zhì)量和感官特性的關(guān)鍵因素,對消費者的可接受性起重要作用。由圖6、表2可知,3 種工藝發(fā)酵酒中共檢測出47 種香氣成分,鮮汁發(fā)酵酒、熟汁發(fā)酵酒及去渣發(fā)酵酒各檢測出21、27、31 種香氣成分,占各自揮發(fā)性物質(zhì)總峰面積的71.57%、89.71%、84.05%。

    圖6 不同工藝發(fā)酵酒氣相色譜-質(zhì)譜總離子圖Fig.6 GC-MS total ion current chromatograms of L.edulis wines produced with different processes

    表2 不同工藝發(fā)酵酒中各種香氣成分的含量和風(fēng)味特征描述Table 2 Contents of various aroma substances and description offlavor characteristics in L.edulis wines produced with different processes

    續(xù)表2

    由圖7可知,藍靛果酒的香氣成分可分為萜烯類、酯類、酸類、醛酮類、醇類5 個類別。大多數(shù)醇、酯和酸是發(fā)酵衍生的,而萜烯、酚、醛和酮是變體。鮮汁發(fā)酵酒檢測出16 種酯類、1 種酸類和4 種醇類,相對含量分別為60.23%、1.40%和9.94%;熟汁發(fā)酵酒檢測出18 種酯類、4 種酸類、2 種醛酮類和3 種醇類,相對含量分別為85.31%、1.35%、0.36%和2.69%;去渣發(fā)酵酒檢測出5 種萜烯類、18 種酯類、3 種酸類、3 種醛酮類、2 種醇類,相對含量分別為11.50%、61.96%、4.03%、2.79%和3.77%。熟汁發(fā)酵酒中,可能是因為熱處理加速了酯化反應(yīng)的進行。

    圖7 不同工藝發(fā)酵酒中各類揮發(fā)性物質(zhì)的比例Fig.7 Proportion of various classes of volatile substances in L.edulis wines produced with different processes

    2.4.1 3 種工藝發(fā)酵酒香氣成分比較

    2.4.1.1 醇類成分

    醇類物質(zhì)是酵母通過糖的分解代謝或脫羧反應(yīng)和氨基酸的脫氨基作用形成的代謝產(chǎn)物。適宜濃度的醇類物質(zhì)可以襯托酯香,促進協(xié)調(diào)性,是果酒中重要的香氣物質(zhì)。在3 種工藝發(fā)酵酒中共檢測出5 種醇類物質(zhì),鮮汁發(fā)酵酒、熟汁發(fā)酵酒、去渣發(fā)酵酒分別檢測出4、3 種和2 種。由圖7可知,醇類物質(zhì)在3 種工藝發(fā)酵酒中含量差異明顯,鮮汁發(fā)酵酒醇類物質(zhì)相對含量最高,為9.94%,有利于醇類物質(zhì)的保留,這是由于果渣中底物種類的多樣性,在發(fā)酵過程中產(chǎn)生了更多的醇類物質(zhì);而熱處理加速了酯化反應(yīng)以及缺少果渣使熟汁與去渣發(fā)酵酒醇類物質(zhì)相對含量較低,僅有2.69%與3.77%。鮮汁發(fā)酵酒中醇類物質(zhì)主要為苯乙醇和1-戊醇,相對含量為7.35%、2.39%,為鮮汁發(fā)酵酒增添了玫瑰香氣與溫和的特殊香氣;其次,鮮汁發(fā)酵酒中存在的香茅醇含量較低,但由于具有其低閾值的特點,極少量便可產(chǎn)生明顯的玫瑰香氣。熟汁發(fā)酵與去渣發(fā)酵酒中醇類物質(zhì)主要為苯乙醇,相對含量分別為2.00%與2.74%,是兩種工藝發(fā)酵酒的關(guān)鍵化合物,為酒液提供淡雅細膩的玫瑰香氣。

    2.4.1.2 酯類成分

    大多數(shù)發(fā)酵衍生的化合物是酯和醇類物質(zhì),由圖7可知,酯類物質(zhì)在3 種工藝發(fā)酵酒的揮發(fā)性物質(zhì)中占比最高,是構(gòu)成藍靛果酒特殊香氣的最重要成分,對藍靛果酒的香氣特征具有重要影響。鮮汁發(fā)酵的藍靛果酒共檢出16 種酯類香氣成分,相對總含量為60.23%,棕櫚酸乙酯和油酸乙酯含量較高,分別為17.79%與10.49%,此外還檢測出0.21%的乙酸乙酯(水果香氣),在其他兩種工藝發(fā)酵酒中并未檢出,是鮮汁發(fā)酵藍靛果酒獨有的香氣成分。

    熟汁發(fā)酵酒共檢出18 種酯類香氣成分,相對含量為85.31%,棕櫚酸乙酯、月桂酸乙酯、油酸乙酯、亞油酸乙酯等關(guān)鍵化合物的相對含量均高于鮮汁與去渣發(fā)酵酒;熟汁發(fā)酵酒中存在特有的己酸異戊酯和月桂酸異戊酯,賦予酒體濃郁的香蕉、菠蘿等水果香氣和油脂香氣,結(jié)合熟汁發(fā)酵酒中較低含量的醇類及酸類物質(zhì)可知,熟汁發(fā)酵可促進酯化反應(yīng)的進行,從而在一定程度上提高果酒中酯類物質(zhì)的種類及含量,賦予藍靛果酒更加濃郁的果香。

    去渣發(fā)酵的藍靛果酒共檢測出18 種酯類香氣成分,相對含量為61.96%,癸酸乙酯相對含量達到18.00%,能提供椰子型香氣,其次還檢測到具有玫瑰和蜂蜜花香香氣的乙酸苯乙酯,是去渣發(fā)酵酒所特有的香氣成分。

    2.4.1.3 醛酮類和萜烯類成分

    由表2可知,萜烯類化合物未在鮮汁和熟汁發(fā)酵酒中檢測出;醛酮類化合物未在鮮汁發(fā)酵酒中檢測出。熟汁發(fā)酵酒中檢測出苯丙酮和反式-2-癸烯醛,相對含量分別為0.20%和0.16%,苯丙酮可提供強烈持久的特殊香氣。去渣發(fā)酵酒中檢出醛酮類化合物3 種、萜烯類化合物5 種,包括相對含量較高的-檸檬烯和-蒎烯等,對果酒整體香氣影響較大,賦予了去渣發(fā)酵酒特殊的檸檬和松香氣味。

    2.4.2 不同發(fā)酵工藝藍靛果酒關(guān)鍵化合物的比較

    由表3可知,不同發(fā)酵工藝對藍靛果酒的關(guān)鍵化合物有較大影響,主要體現(xiàn)在關(guān)鍵化合物(ROAV≥1)的差異,修飾化合物和潛在化合物的ROAV較小,但在評價不同藍靛果酒的香氣時可與其他物質(zhì)相互作用,獲得特殊的香氣。癸酸乙酯為藍靛果酒賦予獨特的水果香、花香,對藍靛果酒的主體風(fēng)味貢獻最大,因此定義3 種工藝發(fā)酵酒的癸酸乙酯ROAV=100。鮮汁發(fā)酵酒中關(guān)鍵化合物共有11 種,分別為辛酸乙酯、癸酸乙酯、棕櫚酸乙酯、琥珀酸二乙酯、月桂酸乙酯、十四酸乙酯、亞油酸乙酯、油酸乙酯、1-戊醇、香茅醇及苯乙醇,賦予了鮮汁發(fā)酵酒更多玫瑰與水果香氣。熟汁發(fā)酵酒中關(guān)鍵化合物共有9 種,分別為癸酸乙酯、棕櫚酸乙酯、琥珀酸二乙酯、月桂酸乙酯、亞油酸乙酯、油酸乙酯、肉豆蔻酸乙酯、十一酸乙酯及苯乙醇,油酸乙酯具有較大的ROAV,為熟汁發(fā)酵酒賦予了更多的花果香氣。去渣發(fā)酵酒中關(guān)鍵化合物共有14 種,分別為辛酸乙酯、乙酸苯乙酯、癸酸乙酯、棕櫚酸乙酯、琥珀酸二乙酯、月桂酸乙酯、亞油酸乙酯、油酸乙酯、苯乙醇、苯甲酸、-檸檬烯、右旋萜二烯及-蒎烯,萜烯類物質(zhì)含量豐富,如-檸檬烯具有橙子及檸檬樣香氣,-蒎烯具有特殊的松香氣味。

    表3 不同工藝發(fā)酵酒中揮發(fā)性物質(zhì)的ROAVTable 3 ROAV of volatile substances in L.edulis wines produced with different processes

    2.5 主成分分析(principal component analysis,PCA)

    對3 種不同工藝發(fā)酵酒的香氣成分進行PCA,以發(fā)酵酒種類為變量,得到PCA散點圖。以特征值大于1為依據(jù),共提取了2 個PC,累計方差貢獻率達到89.46%,表明這2 個變量包含了主體的變量信息。從圖8可以看出,熟汁發(fā)酵酒主要分布在PC2的負半軸,鮮汁發(fā)酵酒主要分布在PC1的正半軸,去渣發(fā)酵酒主要分布在PC2的正半軸,3 種不同工藝發(fā)酵酒在PCA圖中得到了較好的區(qū)分。PCA散點圖清晰地展示出發(fā)酵工藝不同時,藍靛果酒PC存在顯著差異。綜合表2和圖8進行分析,3 種不同工藝發(fā)酵酒的香氣成分,從種類及相對含量上說彼此之間存在較大差異,而從單一的香氣成分來說可以分為2 個類型,每種類型間存在差異較大。因此,可以根據(jù)所需要的藍靛果酒產(chǎn)品特點選擇不同的加工工藝。

    圖8 不同工藝發(fā)酵酒香氣的PCA散點圖Fig.8 PCA scatter plot of aroma components in L.edulis wines produced with different processes

    2.6 感官評價結(jié)果

    如表4所示,3 種藍靛果酒均符合優(yōu)質(zhì)果酒的要求,酒體澄清透明,具有純正的果香和酒香,酒體協(xié)調(diào),具有藍靛果的典型性。就外觀而言,3 種果酒的色澤和澄清度無明顯差異,但熟汁發(fā)酵酒顏色較暗;香氣方面,熟汁發(fā)酵酒的香氣更為濃郁;與鮮汁和熟汁發(fā)酵酒相比,去渣發(fā)酵酒的滋味得分較低,典型性也不如熟汁發(fā)酵酒。綜合評價結(jié)果顯示,鮮汁和熟汁發(fā)酵酒感官品質(zhì)均較好,但經(jīng)熱處理后的熟汁發(fā)酵酒中蛋白質(zhì)絮凝下沉,酒體更加澄清且更加豐富的酯類物質(zhì)使熟汁發(fā)酵酒的香氣濃郁度更高,品質(zhì)更佳。

    表4 3 種藍靛果酒感官評價結(jié)果Table 4 Sensory evaluation results of L.edulis wines produced with different processes

    3 結(jié)論

    采用3 種不同工藝制作藍靛果酒,并在乙醇體積分數(shù)、活性成分含量、體外抗氧化活性、香氣成分等方面進行了比較分析。在3 種不同工藝發(fā)酵酒的發(fā)酵過程中,乙醇體積分數(shù)均呈現(xiàn)先迅速上升后趨于穩(wěn)定的趨勢,發(fā)酵結(jié)束后鮮汁、熟汁與去渣發(fā)酵酒乙醇體積分數(shù)分別為11.80%、12.29%與10.02%。鮮汁與熟汁發(fā)酵酒的花青素及總酚活性成分保存率明顯高于去渣發(fā)酵酒,3 種工藝發(fā)酵酒的黃酮保存率相似。

    在發(fā)酵過程中,由于-葡萄糖苷酶的分解作用和酵母產(chǎn)生次級代謝產(chǎn)物的結(jié)合作用,酒液的DPPH自由基和超氧陰離子自由基清除能力隨著花青素、黃酮等活性物質(zhì)含量的減少而不斷下降。不同的是,鮮汁與熟汁發(fā)酵酒的羥自由基清除能力呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢,而去渣發(fā)酵酒則呈緩慢下降趨勢,與酒液中花青素含量變化趨勢較為相似,說明酒液中的羥自由基清除能力受花青素含量的影響較大。

    發(fā)酵結(jié)束后鮮汁發(fā)酵酒對羥自由基清除能力最強,為(40.43±3.33)mmol/L,而熟汁發(fā)酵酒液的DPPH自由基和超氧陰離子自由基清除能力最強,分別為(14.25±0.14)mmol/L和(8.93±1.37)mmol/L。

    通過對3 種工藝發(fā)酵酒的香氣成分分析和比較,熟汁發(fā)酵酒香氣成分主要為酯類(85.31%),酯類物質(zhì)多數(shù)呈現(xiàn)成熟果香使得熟汁發(fā)酵酒香氣更加濃郁,香氣類別雖較為單一,但典型風(fēng)格最突出,更容易區(qū)分;鮮汁發(fā)酵酒的主要成分為酯類(60.23%)和醇類(9.94%);去渣發(fā)酵酒主要成分為酯類(61.96%)和萜烯類(11.50%),醇類及萜烯類物質(zhì)使得果酒香氣在感官上更為均衡,但整體香氣類別較為復(fù)雜并不突出。與鮮汁、去渣發(fā)酵相比,熟汁發(fā)酵工藝制作的藍靛果酒活性成分損失較小,體外抗氧化活性較強,含有較高的酯類化合物,且果酒香氣成分豐富,感官評價最佳,有利于藍靛果酒綜合品質(zhì)的提高。

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