GDF15、TK1在卵巢癌患者血清中的表達(dá)及與預(yù)后的Cox回歸分析

王慶玲，王 斌，李秋芬，易莉莎*

(1.廣東省廣州市婦女兒童醫(yī)療中心生殖內(nèi)分泌婦科，廣東 廣州 510000；2.山東省菏澤市中醫(yī)醫(yī)院影像科，山東 菏澤 274000)

卵巢癌發(fā)病機制與環(huán)境、內(nèi)分泌、飲食習(xí)慣、年齡有關(guān)，是女性生殖系統(tǒng)常見惡性腫瘤，由于發(fā)病隱匿，確診時大多已進(jìn)入中晚期，容易引發(fā)盆腔、腹腔廣泛轉(zhuǎn)移，病死率較高，故需盡早診療，挽救患者生命[1]。而尋找可靠的腫瘤標(biāo)志物顯得尤為重要。細(xì)胞質(zhì)胸苷激酶(thymidine kinase 1，TKI)與細(xì)胞增殖存在密切關(guān)聯(lián)，是胸苷激酶在細(xì)胞內(nèi)存在的一種表現(xiàn)，可反映機體異常增殖類病變[2]，但關(guān)于其與卵巢癌關(guān)系仍有待探索。生長分化因子15(recombinant growth differentiation factor 15，GDF15)是一種分泌性細(xì)胞因子，屬于轉(zhuǎn)化生長因子β超家族成員，在細(xì)胞受到炎癥刺激或壓力信號時，可誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡及介導(dǎo)細(xì)胞生長阻滯，有研究表明，GDF在結(jié)腸癌[3]、冠心病[4]等多種疾病中有異常升高表達(dá)，因此GDF15有可能成為惡性病變的典型生物標(biāo)志物，但目前關(guān)于其與卵巢癌相關(guān)性研究報道較少。對此本文不僅深入探索了GDF15、TK1在卵巢癌患者中表達(dá)情況以及潛在臨床意義，還分析了GDF15、TK1與預(yù)后的關(guān)系，以便為日后治療、預(yù)后鑒定提供科學(xué)依據(jù)。

1 資料與方法

1.1一般資料 前瞻性選取2017年3月—2019年4月入院的卵巢癌患者(卵巢癌組)51例、卵巢良性疾病組(良性組)52例、接受血清檢測的健康體檢者(對照組)50例作為研究對象，卵巢癌組均為已婚女性，平均年齡(57.13±3.63)歲，平均體重(60.13±5.36)kg。良性組均為已婚女性，平均年齡(57.46±3.59)歲，平均體重(60.22±5.41)kg。對照組均為已婚女性，平均年齡(57.89±3.52)歲，平均體重(60.45±5.47)kg，三組比較年齡、體重比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。符合《赫爾辛基宣言》的倫理審查。納入標(biāo)準(zhǔn)：①卵巢癌組符合卵巢癌診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]；②受檢者均簽署書面知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并感染性疾病者；②合并其他惡性腫瘤者；③合并嚴(yán)重內(nèi)分泌疾病、肝腎功能異常者。

1.2方法 血清檢測：抽取受檢者3 mL空腹肘靜脈血，收集至真空促凝管內(nèi)，血清分離，離心15 min，3 000 r/min速率，離心半徑10 cm，放于低溫(-80 ℃)冰箱內(nèi)保存，使用廈門科豪自動化有限公司提供的ZX-6020型號全自動生化分析儀檢測血清水平，GDF15予以酶聯(lián)免疫吸附測定法，TK1予以酶免疫點印跡發(fā)光法。

1.3治療方法 所有卵巢癌患者均接受化療干預(yù)，第1天靜脈滴注175 mg/m2紫杉醇(齊魯制藥；H20023461)、50～70 mg/m2順鉑(德州德藥制藥；H20023236)，每個周期21 d，連續(xù)治療三個周期。隨訪2年，統(tǒng)計患者生存時間，并根據(jù)是否生存分為兩組，即生存組(n=41)、死亡組(n=10)。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 22.0統(tǒng)計分析軟件處理數(shù)據(jù)，預(yù)測價值評估采用ROC曲線分析；計數(shù)資料比較采用χ2檢驗；計量資料比較采用t檢驗、單因素方差分析和SNK-q檢驗；生存曲線運用Kaplan-Meier分析；多因素分析運用Cox回歸模型。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1三組血清表達(dá)比較 卵巢癌組血清GDF15、TK1表達(dá)情況高于對照組、良性組(P<0.05)，良性組GDF15、TK1表達(dá)情況高于對照組(P<0.05)，見表1。

表1 三組血清表達(dá)情況比較

2.2ROC曲線分析 經(jīng)ROC曲線分析，GDF15、TK1預(yù)測卵巢癌的AUC分別為0.879、0.813。將兩項指標(biāo)納入Logistic回歸分析，根據(jù)回歸結(jié)果中的回歸系數(shù)值擬合兩項聯(lián)合診斷的數(shù)值計算公式：兩項聯(lián)合=GDF15+(-1.297)/(-0.015)×TK1，兩項聯(lián)合預(yù)測的AUC為0.884。見表2。ROC曲線見圖1。

表2 分析各項指標(biāo)預(yù)測卵巢癌的AUC值

圖1 GDF15、TK1及兩項聯(lián)合預(yù)測卵巢癌的ROC曲線

2.3卵巢癌患者預(yù)后生存情況 患者接受2年隨訪，生存組41例患者隨訪生存時間(22.56±1.15)個月高于死亡組10例隨訪的生存時間(14.16±2.65)個月(t=15.473，P<0.001)，見圖2。

圖2 卵巢癌患者生存曲線

2.4兩組臨床病理特征比較 兩組年齡、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腹腔積液、絕經(jīng)狀態(tài)、腫瘤直徑差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，但FIGO分期、GDF15、TK1表達(dá)情況比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表3。

表3 兩組臨床病理特征比較

2.5Cox回歸模型分析 在列出變量賦值后，進(jìn)行分析。如表4所示。將FIGO分期、GDF15、TK1共3項作為自變量進(jìn)行Cox回歸研究，模型公式為：ln[h(t,X)/h0(t)]=3.059×FIGO分期-1.687×GDF15-2.208×TK1[ln代表取對數(shù)，h0(t)代表基準(zhǔn)風(fēng)險率]。最終具體分析可知：FIGO分期共1項會對生存時間產(chǎn)生顯著的正向影響關(guān)系，GDF15、TK1共2項會對生存時間產(chǎn)生顯著的負(fù)向影響關(guān)系。見表5。

表4 生存情況Cox回歸模型賦值表

表5 Cox回歸模型分析結(jié)果匯總

2.6PH假定檢驗結(jié)果 Cox回歸模型時通常需要數(shù)據(jù)滿足PH假定檢驗P>0.05，P<0.05說明未通過PH檢驗。針對表5Cox回歸模型進(jìn)行PH假定檢驗。該模型通過PH假定檢驗，可直接使用Cox回歸模型結(jié)果進(jìn)行分析。見表6。

表6 PH假定檢驗結(jié)果

3 討 論

卵巢癌是婦科常見惡性腫瘤，經(jīng)流行病學(xué)調(diào)查[6]，發(fā)病率占婦科腫瘤的4%，病死率位居第五位，由于卵巢位于盆腔深度，早期癥狀不具有特異性表現(xiàn)，臨床也無有效篩查手段，導(dǎo)致初診時已為進(jìn)展期，加之晚期也缺乏有效治療手段，導(dǎo)致5年生存率僅達(dá)到15%～30%，晚期治愈率更低，因此尋找可靠的血清標(biāo)志物已迫在眉睫[7]。但臨床關(guān)于卵巢癌可靠的預(yù)測生物標(biāo)志物相對缺乏，因此長期以來學(xué)者一直在尋找能夠有效評估卵巢癌發(fā)生、發(fā)展、預(yù)后的腫瘤標(biāo)志物。

GDF15屬于轉(zhuǎn)化生長因子β超家族成員，相對分子質(zhì)量約為17 000，前體包含308個氨基酸，即112個氨基酸的成熟序列、167個氨基酸前肽、29個氨基酸信號肽。GDF15蛋白前體在細(xì)胞中被水解后，可通過二硫鍵將修飾后前體連接為二聚體，再送入內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，之后被特定的二聚體前體蛋白轉(zhuǎn)換為剪切修飾，從而分泌至細(xì)胞外基質(zhì)中[8]。有研究表明[9]，成熟的GDF15蛋白能夠行使生物學(xué)功能，在細(xì)胞外基質(zhì)釋放和儲存，能夠調(diào)控外周血GDF15濃度，影響細(xì)胞應(yīng)答功能和生物學(xué)活性。本研究結(jié)果中，卵巢癌組血清GDF15表達(dá)情況更高于良性組和對照組，說明GDF15水平可受惡性病變影響，呈現(xiàn)高表達(dá)狀態(tài)。原因在于一方面GDF15可受到遺傳突變、炎癥刺激、細(xì)胞應(yīng)激等影響，出現(xiàn)信號通路改變，被異常激活，導(dǎo)致GDF15表達(dá)升高；另一方面GDF15作為分泌性細(xì)胞因子，能夠通過ERK1/2通路上調(diào)UPA系統(tǒng)，增強腫瘤細(xì)胞侵襲性，且可激活A(yù)kt活性，促進(jìn)磷酸化，在加速腫瘤細(xì)胞DNA增殖中發(fā)揮著重要作用[10]。經(jīng)ROC曲線分析結(jié)果顯示，GDF15預(yù)測卵巢癌AUC為0.879，具有較高預(yù)測價值，說明血清GDF15極有可能成為很好的腫瘤預(yù)測分子。

TK1是在DNA合成嘧啶補救期間形成的一種激酶，屬于合成關(guān)鍵酶，主要作用是參與DNA前體合成[11]。由于TK1參與細(xì)胞分裂，正常人體TK1含量較少，但在癌變?nèi)巳褐锌蓹z出，與腫瘤細(xì)胞增殖有關(guān)，同時也是預(yù)測健康人群發(fā)生癌變風(fēng)險重要指標(biāo)之一[12]。本研究結(jié)果中，卵巢癌組TK1含量高于健康人群和良性病變者，說明TK1在評估癌變增殖活性中具有一定效能。TK1作為細(xì)胞異常增殖標(biāo)志物，能反映體內(nèi)癌細(xì)胞的增殖情況，在卵巢癌療效、預(yù)后判定中均具有一定作用[13]。且本研究經(jīng)ROC預(yù)測評估顯示，TK1的AUC值為0.813，再次證實了TK1是診斷卵巢癌的敏感指標(biāo)。王春陽等[14]學(xué)者也佐證了本次研究結(jié)果。此外，經(jīng)Cox回歸模型分析，GDF15、TK1會對生存時間產(chǎn)生顯著的負(fù)向影響關(guān)系，TK1、GDF15增加一個單位時，生存時間的變化(減少)幅度分別為0.110倍、0.185倍，說明GDF15、TK1參與了卵巢癌的發(fā)生、發(fā)展全過程，高表達(dá)狀態(tài)是影響卵巢癌預(yù)后獨立因素，有望成為卵巢癌預(yù)后評估重要指標(biāo)[15]。GDF15、TK1作為促細(xì)胞增殖的關(guān)鍵因子，在癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移、侵襲期間發(fā)揮著重要作用，若長時間處于高表達(dá)狀態(tài)，可通過改變卵巢癌患者體內(nèi)內(nèi)分泌環(huán)境，抑制抑癌基因發(fā)揮作用，從而促進(jìn)卵巢上皮細(xì)胞侵襲、遷移、增殖[16]。

綜上所述，GDF15、TK1在卵巢癌預(yù)判中具有較高特異性和敏感性，聯(lián)合預(yù)測可降低誤診、漏診率，且兩項指標(biāo)與卵巢癌發(fā)生、預(yù)后均具有一定相關(guān)性，有望成為新型分子標(biāo)志物。