溫陽(yáng)振衰顆粒對(duì)慢性心力衰竭大鼠血清 Hcy及cTnT的影響

王濤 李少東 唐燕萍 楊樂 杜鳳嬌 鄧婧 齊珂瑢 熊紫妮 沈恬亦

【摘 要】 目的：觀察溫陽(yáng)振衰顆粒對(duì)阿霉素所致慢性心力衰竭（CHF）模型大鼠血清同型半胱氨酸（Hcy）和心肌肌鈣蛋白T（cTnT）的影響。方法：隨機(jī)抽取10只SD大鼠為正常組，余下50只大鼠運(yùn)用阿霉素進(jìn)行腹腔注射復(fù)制CHF模型。造模結(jié)束后進(jìn)行心功能測(cè)定，按心功能分層再隨機(jī)分為5組：模型組、陽(yáng)性對(duì)照組、溫陽(yáng)低劑組、溫陽(yáng)中劑組和溫陽(yáng)高劑組。各治療組用相應(yīng)藥物灌胃，正常組和模型組以等量的蒸餾水灌胃，連續(xù)4周。采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）測(cè)定大鼠血清Hcy、cTnT水平的變化。結(jié)果：與正常組比較，模型組大鼠血清Hcy和cTnT的含量均顯著增高（P<0.01）;與模型組相比較，陽(yáng)性對(duì)照組和溫陽(yáng)各劑量組大鼠血清Hcy和cTnT的含量均明顯減少（P<0.01）。結(jié)論：溫陽(yáng)振衰顆粒改善心功能的作用機(jī)制可能與抑制炎癥因子Hcy和心肌生化標(biāo)志物cTnT的含量有關(guān)。

【關(guān)鍵詞】

慢性心力衰竭;溫陽(yáng)振衰顆粒;同型半胱氨酸;心肌肌鈣蛋白T

【中圖分類號(hào)】R285.5?? 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A??? 【文章編號(hào)】1007-8517（2022）17-0028-04

Effects of Wenyang Zhenshuai Granules on Serum Hcy and cTnT of Rats with Chronic Heart Failure

WANG Tao LI Shaodong TANG Yanping* YANG Le DU Fengjiao DENG Jing QI Kerong XIONG Zini SHEN Tianyi

School of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine，Hunan University of Chinese Medicine， Changsha 410208，China

Abstract：

Objective To observe the effects of Wenyang Zhenshuai Granules on serum Hcy and cTnT in rats with chronic heart failure induced by adriamycin.Methods Ten of 60 SD rats were randomly selected as the normal group， and the remaining 50 rats were injected intraperitoneally with adriamycin to replicate the CHF model.After modeling， 50 rats were randomly divided into 5 groups according to their cardiac function：model group， positive control group， Wenyang low dose group， Wenyang medium dose group and Wenyang high dose group.Each treatment group was gavaged with corresponding drugs， and the normal group and model group were gavaged with the same amount of distilled water for 4 weeks.After the experiment， the changes of serum Hcy and cTnT levels were measured by enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA）.Results Compared with the normal group， the levels of Hcy and cTnT in the serum of the model group were significantly increased （P<0.01）; Compared with the model group， the levels of Hcy and cTnT in serum of rats in positive control group and Wenyang each dose group were significantly reduced （P< 0.01）.Conclusion The mechanism of Wenyang Zhenshuai Granules in improving heart function may be related to the inhibition of the content of inflammatory factor Hcy and myocardial biochemical marker cTnT.

Key words：

Chronic Heart Failure;Wenyang Zhenshuai Granule;Homocysteine;Cardiac Troponin T

慢性心力衰竭（congestive heart failure，CHF）簡(jiǎn)稱慢性心衰，為各種心臟疾病的終末階段，是導(dǎo)致心血管疾病患者死亡的重要原因之一，給患者家庭帶來(lái)巨大的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)[1]。因此對(duì)CHF發(fā)生和發(fā)展機(jī)制的研究一直是心血管病防治的重點(diǎn)。本課題采取動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，觀察溫陽(yáng)振衰顆粒對(duì)CHF大鼠血清同型半胱氨酸（Hcy）、心肌肌鈣蛋白T（cTnT）的影響，進(jìn)而探討溫陽(yáng)振衰顆粒治療CHF的作用機(jī)制，為臨床CHF的綜合治療提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 健康雄性SD大鼠60只，體重（200±20）g，由湖南中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物中心提供，動(dòng)物合格證編號(hào)為：SCXK（湘）2016-0002。

1.2 藥物與試劑 溫陽(yáng)振衰顆粒（批準(zhǔn)文號(hào)：201709，規(guī)格8g/包，湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院藥劑科）;馬來(lái)酸依那普利片（批準(zhǔn)文號(hào)：H32026567，規(guī)格：10 mg/片，揚(yáng)子江藥業(yè)集團(tuán)江蘇制藥股份有限公司）;鹽酸阿霉素（批準(zhǔn)文號(hào)：H44024359，規(guī)格 10 mg/瓶，深圳萬(wàn)樂藥業(yè)有限公司）。大鼠Hcy 酶聯(lián)免疫分析試劑盒（批號(hào)：YZR965611，上海研尊生物科技有限公司）;大鼠cTnT 酶聯(lián)免疫分析試劑盒（批號(hào)：YS-H5461，上海研生實(shí)業(yè)有限公司）。

1.3 儀器 GE LOGIQ-3彩色多普勒超聲診斷儀（美國(guó)）;MB-530多功能酶標(biāo)分析儀（深圳市匯松科技發(fā)展公司）;TGL-16臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)（湘儀離心機(jī)儀器有限公司）。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 造模 將注射用的鹽酸阿霉素，用0.9%NaCl注射液稀釋成1.0mg/mL溶液，進(jìn)行腹腔注射，每次2mg/kg，每周注射1次，連續(xù)注射6周，總累計(jì)藥量12mg/kg。每次注射前均應(yīng)重新測(cè)量體重，并作為該次用藥劑量的計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)。6周后對(duì)大鼠進(jìn)行心功能測(cè)定以確定心衰模型是否復(fù)制成功[2]。

2.2 分組與給藥 SD大鼠60只，隨機(jī)選取10只為正常組，其余的SD大鼠按照“2.1造?！狈椒ㄟM(jìn)行CHF模型復(fù)制。造模成功后對(duì)存活的SD大鼠做心臟彩超檢查進(jìn)行心功能測(cè)定，根據(jù)心功能分層隨機(jī)分成5組：模型組、陽(yáng)性對(duì)照組、溫陽(yáng)振衰顆粒低劑量組（溫陽(yáng)低劑組）、溫陽(yáng)振衰顆粒中劑量組（溫陽(yáng)中劑組）和溫陽(yáng)振衰顆粒高劑量組（溫陽(yáng)高劑組）。

第7周開始灌胃給藥，劑量參照人鼠體表面積法進(jìn)行換算[3]，溫陽(yáng)低、中、高劑量組分別給予溫陽(yáng)振衰顆粒0.72 g/kg、1.44 g/kg、2.88g/kg用蒸餾水稀釋后灌胃，陽(yáng)性對(duì)照組給予依那普利1.8mg/kg用蒸餾水配成混懸液灌胃，正常組和模型組給予等量蒸餾水灌胃，每天2次，各組均連續(xù)灌胃4周[2]。

2.3 心臟彩超檢查 將大鼠麻醉滿意后，行心臟彩超檢查。計(jì)算左室射血分?jǐn)?shù)（LVEF）、左室短軸縮短率 （LVFS）、左心室舒張末期內(nèi)徑（LVDD）、左室收縮末期內(nèi)徑（LVSD）。取5個(gè)心動(dòng)周期求平均值[4]。

2.4 血清Hcy、cTnT的測(cè)定 處死大鼠前對(duì)各組大鼠進(jìn)行腹主動(dòng)脈采血，經(jīng)肝素鈉抗凝，全血靜置30min后，離心（3000r/min，15min），分離血清置-80℃冰箱保存。Hcy、cTnT的測(cè)定均采用ELISA檢測(cè)，操作步驟嚴(yán)格按試劑盒說明進(jìn)行。

2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 使用SPSS 26.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料以均數(shù)加減標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，多樣本均數(shù)間比較采用單因素方差分析（One-way ANOVA）檢驗(yàn)，兩兩間比較采用LSD-t方法。

3 結(jié)果

3.1 一般情況 正常組大鼠反應(yīng)靈敏，活動(dòng)良好，進(jìn)食活躍、體質(zhì)量明顯增長(zhǎng);模型組大鼠在造模初期體質(zhì)量略有上升，造模后期，與正常組比較，模型組大鼠飲食、活動(dòng)明顯減少，出現(xiàn)腹瀉、體質(zhì)量降低、肢體浮腫等心功能不全癥狀;各治療組大鼠飲食活動(dòng)較正常組減少，體質(zhì)量略有下降，與模型組比較，各治療組大鼠的心功能不全癥狀明顯較輕。在實(shí)驗(yàn)結(jié)束前，模型組，陽(yáng)性對(duì)照組，溫陽(yáng)低、中、高劑量組因腹瀉各死亡1只，因麻醉意外模型組死亡2只，溫陽(yáng)低劑組死亡1只。

3.2 大鼠心功能指標(biāo)的變化 模型組大鼠的LVEF、LVFS均顯著降低，LVDD、LVSD均顯著升高，與正常組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）;各治療組大鼠的LVEF、LVFS均明顯升高，LVDD、LVSD均顯著降低，與模型組比較，其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01，P<0.05）。結(jié)果見表1。

3.3 各組大鼠血清Hcy、cTnT的變化 實(shí)驗(yàn)后各組大鼠血清Hcy、cTnT的變化情況見表1。與正常組比較，模型組大鼠血清中Hcy和cTnT的含量均顯著增高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）;與模型組相比較，陽(yáng)性對(duì)照組和溫陽(yáng)各劑量組大鼠血清中Hcy和cTnT的含量均明顯減少，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。結(jié)果見表2。

4 討論

CHF屬于中醫(yī)“心悸”“喘證”“水腫”“痰飲”等范疇。其病機(jī)主要是心氣（陽(yáng)）虧虛，陰陽(yáng)失調(diào)，瘀血水飲痰濁互結(jié)所致，治宜益氣溫陽(yáng)、利水消腫為主[4]。溫陽(yáng)振衰顆粒秉承扶陽(yáng)宗旨，化裁于仲景經(jīng)方[5]，具有溫陽(yáng)益氣、利水消腫之功，主要由附子、紅參、干姜、甘草等中藥組成。前期實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)溫陽(yáng)振衰顆粒能有效改善CHF動(dòng)物的癥狀，調(diào)控心室重構(gòu)，延緩CHF的病程。

同型半胱氨酸是蛋氨酸與半胱氨酸在代謝過程中產(chǎn)生的一個(gè)重要的中間產(chǎn)物。正常情況下，Hcy在血清內(nèi)呈低表達(dá)，一旦其水平表達(dá)升高，將損害機(jī)體血管基質(zhì)及內(nèi)皮細(xì)胞，對(duì)動(dòng)脈血管壁造成不利影響[6]。Hcy主要通過致炎癥因子、氧化應(yīng)激和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激、DNA低甲基化、免疫應(yīng)答等多種細(xì)胞機(jī)制激活炎癥細(xì)胞因子、細(xì)胞分化介質(zhì)，從而損傷內(nèi)皮細(xì)胞功能，進(jìn)而導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生與發(fā)展[7]。大量研究發(fā)現(xiàn)血漿HCY水平在CHF患者中明顯增加，高同型半胱氨酸血癥（HHCY）與心力衰竭的嚴(yán)重程度呈現(xiàn)出明顯的相關(guān)性，Hcy水平能夠反應(yīng)左室功能受損和慢性心功能不全的程度[8-9]。在心力衰竭嚴(yán)重的患者中，HCY還可以作為心力衰竭死亡率的預(yù)測(cè)指標(biāo)。HHCY伴心衰患者的3年死亡率是HCY正常的心衰患者的2倍[10]。實(shí)驗(yàn)研究[11]表明，HHcy可促使心室肌細(xì)胞膠原纖維過度增加，導(dǎo)致心室肥厚。心臟結(jié)構(gòu)改變最終轉(zhuǎn)變?yōu)楣δ苷系K，并同時(shí)損害心臟的左室收縮和（或）舒張功能[12]。

cTnT是一種30-35kDa的蛋白質(zhì)，主要存在于心肌細(xì)胞中，其作用主要是調(diào)節(jié)心肌收縮，通過抑制肌動(dòng)蛋白中ATP酶活性松弛心肌，是一種高靈敏度、高特異度的心肌損傷的監(jiān)測(cè)指標(biāo)[13]。正常人在無(wú)心肌損傷時(shí)血清中cTnT含量極低，當(dāng)心衰發(fā)生后，心肌組織受到損傷或生化刺激時(shí)，心肌缺血缺氧導(dǎo)致肌纖維溶解、壞死，細(xì)胞膜損傷破壞均可導(dǎo)致cTnT大量釋放進(jìn)入血液[14]。因此，血清中檢測(cè)到的cTnT濃度可用來(lái)評(píng)價(jià)心力衰竭的發(fā)生和嚴(yán)重程度，也是評(píng)估心衰預(yù)后的重要指標(biāo)[15]。有研究[16]指出，心衰患者可能有持續(xù)性的心肌損傷壞死，在大多數(shù)心衰患者血清中檢測(cè)到cTnT水平升高可證實(shí)這個(gè)推測(cè)。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明，急性心衰大鼠的血清中cTnT水平顯著升高[17]，也有臨床報(bào)道心衰患者接受β受體阻斷劑治療后，血清中cTnT水平明顯下降[18]。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，模型組大鼠血清Hcy和cTnT的水平與正常組比較明顯升高。當(dāng)給予溫陽(yáng)振衰顆粒和依那普利灌胃給藥后，大鼠血清Hcy和cTnT的水平明顯降低，且溫陽(yáng)高劑組療效優(yōu)于中、低劑組，與依那普利療效相當(dāng)。由此可見，溫陽(yáng)振衰顆粒改善心功能的作用機(jī)制可能與抑制炎癥因子Hcy和心肌生化標(biāo)志物cTnT有關(guān)。

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（收稿日期：2022-01-06 編輯：劉 斌）