妊娠期高血壓疾病孕婦血清AGEs、TGF-β1、PAPP-A及RBP4變化及臨床意義

程華英 胡婭萍 鄭璇 梅軍華

妊娠期高血壓疾病（hypertensive disorder complicating pregnancy，HDCP）是孕婦常見的妊娠期內(nèi)科并發(fā)癥，主要表現(xiàn)為血壓升高、水腫、蛋白尿等，包括有妊娠期高血壓（gestational hypertension，GHP）、子癇前期（preeclampsia，PE）、子癇等。HDCP 的發(fā)生可導(dǎo)致孕婦出現(xiàn)各系統(tǒng)功能損害及不良妊娠預(yù)后的發(fā)生，嚴(yán)重時(shí)還可導(dǎo)致孕產(chǎn)婦及新生兒死亡。目前，此病的治療尚無特效方法，需嚴(yán)密監(jiān)測孕期母兒情況，在病情加重時(shí)及時(shí)終止妊娠以保證母兒生命安全。HDCP 的發(fā)病機(jī)制仍不完全清楚，認(rèn)為可能與遺傳、免疫失衡、氧化應(yīng)激、炎癥、胎盤功能異常等多種因素有關(guān)［1-3］，全身小動(dòng)脈痙攣及內(nèi)皮細(xì)胞功能的損害是其主要的病理變化。研究發(fā)現(xiàn)［4］，胎盤晚期糖基化終末產(chǎn)物（advanced glycosylation end products，AGEs）及其受體在血管內(nèi)皮細(xì)胞及胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞中表達(dá)量較高，而且與炎癥反應(yīng)密切相關(guān)，認(rèn)為可能AGEs 介導(dǎo)的炎癥損傷與子癇前期的發(fā)生密切相關(guān)。轉(zhuǎn)化生長因子-β1（transforming growth factor-β1，TGF-β1）為轉(zhuǎn)化因子家族成員，為多功能細(xì)胞因子，研究發(fā)現(xiàn)妊娠子宮滋養(yǎng)細(xì)胞及蛻膜中有TGF-β1 mRNA 的表達(dá)［5］，因此認(rèn)為可能參與了胎盤相關(guān)功能的調(diào)節(jié)，而且與炎癥反應(yīng)也密切相關(guān)。妊娠相關(guān)蛋白A（pregnancy-associated plasma protein-A，PAPP-A）為胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞產(chǎn)生的糖蛋白化合物，能反應(yīng)出滋養(yǎng)細(xì)胞的功能狀態(tài)［6］。視黃醇結(jié)合蛋白4（retinol binding protein，RBP4）為體內(nèi)運(yùn)轉(zhuǎn)維生素A 視黃醇類活性代謝物的蛋白質(zhì)之一，可參與到胰島素抵抗和高胰島素血癥過程［7］。本研究對(duì)HDCP孕婦血清AGEs、TGF-β1、PAPP-A 及RBP4 的變化進(jìn)行了研究，嘗試分析其在HDCO 發(fā)生及發(fā)展中可能所起的作用，為HDCP孕婦的病情評(píng)估提供參考依據(jù)。報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2020年1月至2021年12月期間在武漢康健婦嬰醫(yī)院住院治療的HDCP 孕婦180 例為研究對(duì)象（HDCP 組），納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合HDCP 的診斷標(biāo)準(zhǔn)［8］。②單胎妊娠。③自愿參與本次研究。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并有肝腎、心肺等其他實(shí)質(zhì)性臟器功能異常者。②合并有其他妊娠期合并癥或并發(fā)癥。③合并有免疫功能障礙或凝血功能障礙。④合并惡性腫瘤、急慢性傳染病等。⑤合并有精神或智力無障礙性疾病者。⑥雙胎或多胎妊娠。⑦輔助生殖技術(shù)受孕者。HDCP 組孕婦年齡平均（28.54±3.49）歲，孕周平均（35.22±3.10）周，根據(jù)病情嚴(yán)重程度又可分為單純性妊娠期高血壓（GHP 組）98 例、輕度子癇前期（MPE 組）52 例和重度子癇前期（SPE 組）30 例。選取同期門診產(chǎn)檢的健康孕婦100 例為對(duì)照（對(duì)照組），年齡平均（28.20±3.58）歲，孕周平均（25.16±3.17）周。各組孕婦的年齡、孕周比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。本研究經(jīng)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 方法

空腹抽取孕婦外周靜脈血5 mL 置于無菌試管內(nèi)，以2 500 r/min 的轉(zhuǎn)速離心10 min，離心半徑8 cm，分離取得的血清檢測AGEs、TGF-β1、PAPP-A及RBP4 水平濃度，AGEs 及其受體TGF-β1 水平濃度以酶聯(lián)免疫吸附法，檢測試劑盒購自美國RB公司；PAPP-A 采用雙抗體酶聯(lián)免疫吸附法檢測，檢測試劑盒購自上海勁馬試驗(yàn)設(shè)備有限公司；RBP4 采用免疫比濁法檢測，檢測試劑盒購自上?？迫A生物工程股份有限公司。操作步驟嚴(yán)格按照試劑盒操作說明書進(jìn)行。

記錄GHP 組、MPE 組、SPE 組及對(duì)照組上述各指標(biāo)水平，分別繪制ROC 曲線分析各指標(biāo)對(duì)HDCP 的診斷價(jià)值，同時(shí)通過明確健康孕婦與GHP 孕婦、GHP 孕婦與MPE 孕婦、MPE 孕婦與SPE 孕婦各指標(biāo)的最佳截點(diǎn)值，總結(jié)不同病情嚴(yán)重程度孕婦上述指標(biāo)的參考值范圍。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 22.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料以（±s）表示，多組比較采取方差分析，兩兩比較采用t檢驗(yàn)，相關(guān)性分析采取Spearman 相關(guān)分析，繪制ROC 曲線分析相關(guān)指標(biāo)對(duì)HDCP 的診斷價(jià)值及不同病情嚴(yán)重程度孕婦相關(guān)指標(biāo)的參考值范圍。以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 HDCP 組與對(duì)照組孕婦水平血清AGEs、TGF-β1、PAPP-A 及RBP4 水平比較

HDCP 組孕婦血清AGEs、TGF-β1 及RBP4 水平高于對(duì)照組，PAPP-A 水平低于對(duì)照組，比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

表1 HDCP 組與對(duì)照組孕婦水平血清AGEs、TGF-β1、PAPP-A 及RBP4 水平比較（±s）Table 1 Comparison of AGEs，TGF-β1，PAPP-A and RBP4 levels in the HDCP group and the control group（±s）

表1 HDCP 組與對(duì)照組孕婦水平血清AGEs、TGF-β1、PAPP-A 及RBP4 水平比較（±s）Table 1 Comparison of AGEs，TGF-β1，PAPP-A and RBP4 levels in the HDCP group and the control group（±s）

組別HDCP 組對(duì)照組t 值P 值n 180 100 AGEs（ng/mL）42.79±4.17 38.99±4.55 7.084＜0.001 TGF-β1（ng/mL）8.08±1.38 6.63±0.90 9.444＜0.001 PAPP-A（mU/L）2924.40±742.61 3642.56±708.82 7.880＜0.001 RBP4（μg/mL）9.02±3.17 6.16±1.99 8.160＜0.001

2.2 血清AGEs、TGF-β1、PAPP-A 及RBP4 水平對(duì)HDCP 的診斷價(jià)值

ROC 曲線結(jié)果顯示，各指標(biāo)診斷HDCP 的AUC 由高到低依次為TGF-β1、RBP4、PAPP-A、AGEs，且均＞0.7，具有一定的診斷價(jià)值（P＜0.05）。見表2，圖1。

圖1 血清AGEs、TGF-β1、PAPP-A 及RBP4 診斷HDCP 的ROC 曲線Figure 1 ROC curves of AGEs，TGF-β1，PAPP-A and RBP4 in serum for HDCP diagnosis

表2 血清AGEs、TGF-β1、PAPP-A 及RBP4 水平對(duì)HDCP 的診斷效能參數(shù)Table 2 Diagnostic efficacy parameters of SERUM AGEs，TGF-β1，PAPP-A and RBP4 levels for HDCP

2.3 不同病情嚴(yán)重程度HDCP 孕婦血清AGEs、TGF-β1、PAPP-A 及RBP4 水平比較

不同病情嚴(yán)重程度HDCP 孕婦血清AGEs、TGF-β1 及RBP4 水平比較：SPE 組＞MPE 組＞GHP組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；PAPP-A 水平比較：SPE 組＜MPE 組＜GHP 組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表3。

表3 不同病情嚴(yán)重程度HDCP 孕婦組血清AGEs、TGF-β 1、PAPP-A 及RBP4 水平比較（±s）Table 3 Comparison of AGEs，TGF-β1，PAPP-A and RBP4 levels in the HDCP group with different severity of disease（±s）

表3 不同病情嚴(yán)重程度HDCP 孕婦組血清AGEs、TGF-β 1、PAPP-A 及RBP4 水平比較（±s）Table 3 Comparison of AGEs，TGF-β1，PAPP-A and RBP4 levels in the HDCP group with different severity of disease（±s）

注：與GHP 組比較，aP＜0.001，與MPE 組比較，bP＜0.001。

RBP4（μg/mL）7.84±2.25 9.21±2.93a 12.57±3.50ab 35.700＜0.001組別GHP 組MPE 組SPE 組F 值P 值n 98 52 30 AGEs（ng/mL）41.12±3.72 43.70±3.70a 46.67±3.23ab 29.015＜0.001 TGF-β1（ng/mL）7.29±0.93 8.49±0.97a 9.95±1.09ab 92.966＜0.001 PAPP-A（mU/L）3233.06±727.95 2656.20±537.17a 2380.98±606.25ab 25.286＜0.001

2.4 HDCP 孕婦病情嚴(yán)重程度與血清AGEs、TGF-β1、PAPP-A 及RBP4 水平的相關(guān)性

Spearman 相關(guān)分析顯示，孕婦血清與血清AGEs、TGF-β1 及RBP4 水平與病情嚴(yán)重程度呈顯著正相關(guān)（P＜0.05），PAPP-A 水平與病情嚴(yán)重程度呈顯著負(fù)相關(guān)（P＜0.05）。見表4。

表4 HDCP 孕婦病情嚴(yán)重程度與血清AGEs、TGF-β1、PAPP-A 及RBP4 水平的相關(guān)性Table 4 Correlation between the severity of HDCP and serum levels of AGEs，TGF-β1，PAPP-A and RBP4 in pregnant women

3 討論

HDCP 是導(dǎo)致母兒不良預(yù)后的主要原因之一，也是導(dǎo)致孕產(chǎn)婦死亡的主要病因之一。HDCP 的發(fā)病原因較為復(fù)雜，目前認(rèn)為是多因素共同作用所致［1-3］，炎癥免疫過度激活、子宮螺旋動(dòng)脈重鑄不足、血管內(nèi)皮損傷、家族遺傳等是目前認(rèn)可的HDCP 發(fā)展機(jī)制學(xué)說。胎盤在HDCP 的發(fā)生及發(fā)展中均起到了核心作用，因此適時(shí)終止妊娠是阻止病情進(jìn)一步發(fā)展的唯一有效方法。

AGEs 是葡萄糖、脂肪、核酸的氨基、酮基、醛基等在無酶條件下反應(yīng)形成的的糖基化終產(chǎn)物，在體內(nèi)可與其受體結(jié)合從而誘導(dǎo)機(jī)體炎癥反應(yīng)及氧化應(yīng)激的發(fā)生，同時(shí)可調(diào)控TGF-β1 等細(xì)胞因子的表達(dá)，通過影響基質(zhì)金屬酶的產(chǎn)生從而起到抑制基質(zhì)降解的作用，最終可導(dǎo)致血管壁增厚導(dǎo)致血管腔狹窄。氧化應(yīng)激同時(shí)也可促使AGEs 的表達(dá)上調(diào)［9］，加劇氧化應(yīng)激及炎癥反應(yīng)，使得機(jī)體組織損傷更為嚴(yán)重。研究發(fā)現(xiàn)［10-11］，PE 孕婦可出現(xiàn)AGEs 表達(dá)的上調(diào)，AGEs 上調(diào)可導(dǎo)致孕婦胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞功能及形態(tài)發(fā)生異常，子宮螺旋動(dòng)脈重鑄不足，胎盤供血出現(xiàn)異常。TGF-β1 在機(jī)內(nèi)主要通過旁分泌或自分泌方式調(diào)節(jié)細(xì)胞的生長和分化，在妊娠后滋養(yǎng)細(xì)胞及子宮蛻膜中可出現(xiàn)TGF-β1的表達(dá)［5］，而且隨著孕周增加表達(dá)水平逐漸升高，在孕34 周時(shí)可達(dá)高峰，在PE 患者中可出現(xiàn)TGF-β1的明顯升高，與AGEs 結(jié)合共同影響到滋養(yǎng)細(xì)胞、子宮螺旋動(dòng)脈的形態(tài)和功能，導(dǎo)致PE 的發(fā)生。PAPP-A 主要是胎盤組織產(chǎn)生，在孕早期就可在血清中檢出，隨著孕周增加逐漸增加，孕晚期可達(dá)高峰，可反應(yīng)胎盤功能狀態(tài)［6］，如出現(xiàn)胎盤功能不良可影響到PAPP-A 的分泌，研究發(fā)現(xiàn)HDCP 孕婦PAPP-A 下降［12-13］，推測可能是因?yàn)樘ケP功能不良PAPP-A 分泌不足，因此使得胰島素樣生長因子處于結(jié)合狀態(tài)，胰島素樣生長因子不足，影響到滋養(yǎng)細(xì)胞和胎盤功能，這成為引發(fā)PE 發(fā)生的重要原因之一。RBP4 屬于體內(nèi)負(fù)責(zé)運(yùn)轉(zhuǎn)維生素A 視黃醇類活性代謝物的一類蛋白質(zhì)，正常妊娠狀態(tài)下可隨著妊娠孕周增加而升高，研究證實(shí)HDCP 孕婦可出現(xiàn)血清RBP4 的升高［14-16］，本研究結(jié)果提示上述各指標(biāo)變化與HDCP 的發(fā)病密切相關(guān)。分析不同病情嚴(yán)重程度HDCP 孕婦上述指標(biāo)的變化，結(jié)果顯示隨著HDCP 孕婦病情的加重血清AGEs、TGF-β1、RBP4 出現(xiàn)升高趨勢，與病情嚴(yán)重程度之間有正相關(guān)性，而PAPP-A 則出現(xiàn)下降趨勢，與病情嚴(yán)重程度之間有負(fù)相關(guān)，提示血清上述各指標(biāo)變化與HDCP 病情發(fā)展也密切相關(guān)。

綜上所述，HDCP 孕婦可出現(xiàn)血清AGEs、TGF-β1 及RBP4 水平的升高及PAPP-A 水平下降，與病情嚴(yán)重程度密切相關(guān)，通過檢測孕婦血清AGEs、TGF-β1、PAPP-A 及RBP4 變化有助于評(píng)估病情嚴(yán)重程度。本研究也存在一些局限性，本研究為回顧性研究，對(duì)于嘗試對(duì)不同病情嚴(yán)重程度HDCP 孕婦上述指標(biāo)參考值范圍的總結(jié)，樣本量較小，且均為本院患者，因此很難得出可靠的結(jié)論，仍需進(jìn)行進(jìn)一步大樣本、多中心的前瞻性研究對(duì)參考值范圍進(jìn)行分析及修正。