胸腔積液病理診斷中細(xì)胞蠟塊技術(shù)與傳統(tǒng)涂片技術(shù)的應(yīng)用對(duì)比

林秋月，林秀香

福建省莆田市第一醫(yī)院病理科，福建莆田 351100

胸腔積液是一種常見的臨床炎性疾病，循環(huán)障礙、惡性腫瘤均可引起，以病理性積液在胸膜腔內(nèi)積聚為特征，其發(fā)生和胸部損傷和胸膜通透性增加、靜水壓在胸膜腦細(xì)血管內(nèi)增高和壁層胸膜淋巴回流障礙等因素相關(guān)，發(fā)病后患者容易出現(xiàn)咳痰、發(fā)熱和呼吸困難等癥狀[1]。由于該疾病初期無顯著癥狀表現(xiàn)易被患者忽略，發(fā)病后病情往往已發(fā)展至中晚期，錯(cuò)過手術(shù)治療最佳時(shí)期，部分患者因胸腔積液入院檢查，所以對(duì)胸腔積液細(xì)胞學(xué)結(jié)果準(zhǔn)確檢測(cè)，對(duì)臨床疾病的鑒定有重要意義。以往傳統(tǒng)涂片技術(shù)是主要檢測(cè)手段，該方法存在制片不均勻、陽性率低下，缺乏組織形態(tài)結(jié)構(gòu)或明顯増生的間皮細(xì)胞等局限性，導(dǎo)致診斷效果不理想，易出現(xiàn)漏診[2]。因此，為避免上述情況發(fā)生，利用胸腔積液制作細(xì)胞塊不僅可以做常規(guī)HE染色,顯示組織結(jié)構(gòu),利用其可以反復(fù)、連續(xù)切片的特點(diǎn)，結(jié)合免疫組化,分子病理鑒別腫瘤細(xì)胞來源,為分子靶向藥物的選擇提供臨床依據(jù)顯得尤為重要。該研究以2019年6月—2021年4月時(shí)段該院接收的84例胸腔積液患者為研究對(duì)象，以傳統(tǒng)涂片技術(shù)作為參照，對(duì)開展細(xì)胞蠟塊技術(shù)的效果情況做進(jìn)一步分析。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1 納入標(biāo)準(zhǔn) 研究所選病例均伴呼吸異常、發(fā)熱和胸腔積液過多現(xiàn)象；研究所選病例年齡均≥19歲，但≤74歲；選取患者均知曉同意研究進(jìn)行。

1.2.2 排除標(biāo)準(zhǔn) 伴惡性腫瘤者；伴嚴(yán)重精神功能異常者；對(duì)研究進(jìn)行不配合者。

1.3 方法

采集研究所選對(duì)象的胸腔積液標(biāo)本。對(duì)照組患者采取傳統(tǒng)涂片技術(shù)，觀察組患者采取細(xì)胞蠟塊技術(shù)，具體操作開展如下。

1.3.1 對(duì)照組①把采集的標(biāo)本置于常溫環(huán)境下30 min左右(送檢量一般需要50~200 mL)，如果長(zhǎng)時(shí)間延長(zhǎng)送檢,則應(yīng)該放入4℃冰箱保存或加入固定劑，然后輕輕地把送檢液體上部倒掉,取下層液體，20 mL離心管4管或50 mL離心管2管,放入離心機(jī)內(nèi)。轉(zhuǎn)速2 000 r/min,離心10 min,隨機(jī)取20 mL 2管或50 mL 1管。

②用移液管小心吸去上清液，輕輕向下斜置試管(注意沉淀物必須是凝聚在底部不會(huì)流動(dòng)的)，用吸水紙或棉簽吸去管口多余的液體。

③用吸管吸取沉淀物上層細(xì)胞（吸取沉淀物時(shí)，將試管口向下傾斜45℃），防止試管壁上的液體流入管底，造成細(xì)胞稀釋，這是離心細(xì)胞塊制片的關(guān)鍵。

④涂片要求涂片均勻，平整，不能太厚。

1.3.2 觀察組 ①取剩余的20 mL 2管或50 mL 1管（如果是血性液體時(shí)，可加入冰醋酸乙醇液體處理后離心沉淀）。

②加入10%中性甲醛溶液，將沉淀物打勻（如果沉淀物量較少，應(yīng)放至1 mL的尖頭離心管內(nèi)）。

娘子關(guān)泉域巖溶地下水主要接受降雨入滲及河流、水庫(kù)等地表水滲漏補(bǔ)給。城市及工礦企業(yè)主要分布于陽泉市內(nèi)各河流的中上游地區(qū)，大量污染物隨地表水一起進(jìn)入地下含水層，產(chǎn)生了對(duì)地下水的污染[1]。近年來，陽泉市政府在環(huán)境治理方面做了大量扎實(shí)有效的工作，開展了泉域保護(hù)、污水處理廠建設(shè)、垃圾電廠建設(shè)、黑臭水體治理等工作，娘子關(guān)泉域水環(huán)境得到有效改善。

③以轉(zhuǎn)速2 000 r/min，離心10 min。吸干上清液，輕輕地沿管壁加入95%乙醇，靜置1~2 h。用尖頭的硬簽輕輕地將沉淀物挑出,放在包埋紙上，可用伊紅染色標(biāo)記，包好放入包埋框內(nèi)蓋好,再放入常規(guī)脫水機(jī)程序內(nèi)處理。待充分進(jìn)行常規(guī)脫水，浸蠟，石蠟包埋，切片染色和鏡檢等操作,待標(biāo)本鏡驗(yàn)完成后，通過結(jié)合免疫組織化學(xué)技術(shù)，對(duì)涂片及細(xì)胞塊的效果進(jìn)行診斷鑒別。

1.4 觀察指標(biāo)

①觀察分析兩組經(jīng)檢測(cè)方法后的診斷效果情況。

②觀察分析免疫組織化學(xué)技術(shù)聯(lián)合細(xì)胞蠟塊的分型診斷情況。

1.5 統(tǒng)計(jì)方法

采用SPSS 25.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料以頻數(shù)和百分比（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 患者臨床特征分析

在研究選取的84例患者中，男占63.10%，女占36.90%；年齡＜65歲者占54.76%，年齡≥65歲者占45.24%；發(fā)病部位：右側(cè)占52.38%，左側(cè)占47.62%；血性胸腔積液占21.43%，非血性胸腔積液占78.57%；渾濁胸腔積液占82.14%，透明胸腔積液占17.86%。見表1。

表1 患者臨床特征分析Table 1 Analysis of clinical characteristics of patients

2.2 兩組診斷結(jié)果比較

對(duì)照組、觀察組疑似惡性腫瘤細(xì)胞檢出率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；對(duì)照組惡性腫瘤細(xì)胞檢出率是19.05%，明顯低于觀察組的54.76%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；對(duì)照組未檢出腫瘤細(xì)胞所占比是50.00%，明顯高于觀察組的19.05%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表2。

表2 兩組診斷結(jié)果比較[n（%）]Table 2 Comparison of diagnosis results between the two groups[n(%)]

2.3 免疫組織化學(xué)技術(shù)聯(lián)合細(xì)胞蠟塊的分型診斷情況分析

對(duì)細(xì)胞蠟塊診斷陽性標(biāo)本34例，通過與免疫組織化學(xué)方法相結(jié)合，經(jīng)采取Syn和TTF-1、CgA和CK7、WT-1和P63、CK5/6和Calretinin等標(biāo)記開展組織學(xué)分型。其中，腺癌（64.71%）的所占比最高，其次分別是無法確定 （14.71%）、其他類型腫瘤（8.82%）、鱗癌（2.94%）、小細(xì)胞癌（2.94%）、惡性間皮瘤（2.94%）、惡性淋巴瘤（2.94%），見表3。

表3 免疫組織化學(xué)技術(shù)聯(lián)合細(xì)胞蠟塊的分型診斷情況分析Table 3 Analysis of the typing and diagnosis of immunohistochemistry combined with cell wax block

3 討論

近年來，由于病理制片技術(shù)質(zhì)控的加強(qiáng)和細(xì)胞塊制作新技術(shù)的推廣，使疾病的陽性檢出率大大提高。

胸腔積液是一種受多原因影響而引發(fā)胸膜內(nèi)部液體過多，且影響該病因的因素較多，判斷該病難度較大，如炎性胸腔積液的中間皮細(xì)胞受炎性刺激，易出現(xiàn)不典型增生，且間皮細(xì)胞以輕度異型性為主，其核輕度增大，容易產(chǎn)生假桑葚立體結(jié)構(gòu)[3]；另外，經(jīng)放療后間皮細(xì)胞受放射線刺激影響，會(huì)出現(xiàn)不典型增生，腺癌細(xì)胞等惡性腫瘤細(xì)胞容易和這些細(xì)胞形態(tài)混淆[4-5]。

對(duì)于傳統(tǒng)的細(xì)胞涂片檢測(cè)技術(shù)，通常在制作時(shí)易使涂片制作厚薄程度出現(xiàn)差異，細(xì)胞退變、重疊、黏液覆蓋率較高而且易發(fā)生掉片情況，發(fā)生腫瘤細(xì)胞丟失情況，不僅會(huì)增加炎性細(xì)胞，而且還會(huì)提高血細(xì)胞假陰性率[6-7]。所以，在檢測(cè)胸腔積液細(xì)胞中，傳統(tǒng)涂片檢測(cè)技術(shù)的實(shí)施往往會(huì)產(chǎn)生敏感度低下問題，通常在50%~78%之間[8-9]。該檢測(cè)方法的應(yīng)用可靠性低，難以令人信服，無法有效滿足臨床需求。相比之下，細(xì)胞蠟塊制片技術(shù)的應(yīng)用，通過開展離心固定切片方式對(duì)腫瘤細(xì)胞聚集，能有效保證腫瘤細(xì)胞結(jié)構(gòu)的清晰性，從而能保持其組織結(jié)構(gòu)和其排列方式的一致性，能防止發(fā)生細(xì)胞人為重疊情況，提高診斷胸腔積液細(xì)胞的準(zhǔn)確性[10-11]。細(xì)胞蠟塊制片技術(shù)在血性胸腔積液中，對(duì)紅細(xì)胞溶解的方式能有效清除對(duì)紅細(xì)胞產(chǎn)生的制片干擾，而且還能使其制片背景更具干凈性與整潔性，可保留核的特異性及腫瘤細(xì)胞的完整性，使檢測(cè)陽性率有效提高[12-13]。有報(bào)道指出，予以患者采取細(xì)胞蠟塊制片技術(shù)檢測(cè)，能有效提高診斷細(xì)胞病理的準(zhǔn)確性，而且此檢測(cè)方法也具有一定有效性[14-15]。細(xì)胞蠟塊制片技術(shù)不僅具備可重復(fù)性，同時(shí)還能提供較多的類似于細(xì)胞和組織學(xué)的形態(tài)特征，與傳統(tǒng)涂片制片技術(shù)相比，有效性更好，而且對(duì)于原發(fā)灶不明確和無法取得組織標(biāo)本的患者，該技術(shù)經(jīng)細(xì)胞蠟塊采取免疫組織化學(xué)染色，能標(biāo)記相應(yīng)抗體，對(duì)細(xì)胞學(xué)診斷準(zhǔn)確性的提高有重要意義，同時(shí)還能有效判斷惡性腫瘤細(xì)胞的來源，從而能更好地開展臨床指導(dǎo)[16]。有研究指出，以非小細(xì)胞癌為例，在細(xì)胞蠟塊中，大部分患者均能通過形態(tài)學(xué)準(zhǔn)確診斷鱗癌、腺癌病情，隨后利用免疫組織化學(xué)標(biāo)記物Syn和P63、CK7和CgA及WT-1等標(biāo)記后，能準(zhǔn)確獲取分型信息[17]。在該次研究中，以該院接收的84例胸腔積液患者為對(duì)象，經(jīng)對(duì)上述闡述總結(jié)可知，對(duì)照組惡性腫瘤細(xì)胞檢出率是19.05%，明顯低于觀察組的54.76%（P＜0.05）；對(duì)照組未檢出腫瘤細(xì)胞所占比是50.00%，明顯高于觀察組的19.05%（P＜0.05），說明，在胸腔積液病理診斷中實(shí)施細(xì)胞蠟塊技術(shù)能準(zhǔn)確進(jìn)行診斷，并通過結(jié)合免疫化學(xué)技術(shù)，可使診斷價(jià)值進(jìn)一步提升，為臨床對(duì)治療方案的制訂提供借鑒與參考，有較好的臨床應(yīng)用價(jià)值。另外，在上述研究結(jié)果中還可知，經(jīng)采取Syn和TTF-1、CgA和CK7、WT-1和P63、CK5/6和Calretinin等標(biāo)記開展組織學(xué)分型發(fā)現(xiàn)，腺癌22例、鱗癌1例、小細(xì)胞癌1例、惡性間皮瘤1例、惡性淋巴瘤1例、其他類型腫瘤3例、無法確定5例。對(duì)于無法確定分型的5例患者，其原因是，由于胸腔積液外觀相對(duì)透明清洗，且有較少纖維成分，所以離心沉淀物獲取較少；有些細(xì)胞異型性無顯著，易被看作為退變間皮細(xì)胞。

在喻鑫等[17]研究中，以胸腔積液患者500例為研究對(duì)象，分別實(shí)施傳統(tǒng)涂片技術(shù)和細(xì)胞蠟塊技術(shù)開展病理診斷。從上述研究結(jié)果中可知，行細(xì)胞蠟塊技術(shù)后患者惡性檢出率為69.00%，明顯高于行傳統(tǒng)涂片技術(shù)檢查的42.00%；行細(xì)胞蠟塊技術(shù)后疑似惡性檢出率為16.00%，低于傳統(tǒng)涂片技術(shù)的22.00%；細(xì)胞蠟塊技術(shù)檢出率為15.00%，低于傳統(tǒng)涂片技術(shù)的36.00%（P＜0.05）。相比傳統(tǒng)涂片技術(shù)，細(xì)胞蠟塊技術(shù)的應(yīng)用其診斷準(zhǔn)確性更高。由此說明，病理診斷胸腔積液患者時(shí)，實(shí)施細(xì)胞蠟塊技術(shù)，能使陽性檢出率有效提高，確保病理診斷準(zhǔn)確性。

在胡瓊[18]學(xué)者的研究中，選取120例胸腔積液者為對(duì)象，根據(jù)診斷方法實(shí)施的不同進(jìn)行分組，即對(duì)照組（開展傳統(tǒng)涂片技術(shù)診斷）、研究組（開展細(xì)胞蠟塊技術(shù)診斷）。其結(jié)果顯示，研究組惡性腫瘤率為41.7%，惡性腫瘤細(xì)胞率為45.0%，均高于對(duì)照組的23.3%、31.7%（P＜0.05）。由此說明，細(xì)胞蠟塊技術(shù)可準(zhǔn)確診斷胸腔積液病理結(jié)果，且相比傳統(tǒng)涂片技術(shù)，診斷準(zhǔn)確率更好，可為臨床治療方案的制訂提供借鑒及參考。上述內(nèi)容與該次研究報(bào)道相符。

綜上所述，在病理診斷胸腔積液中細(xì)胞蠟塊技術(shù)的應(yīng)用能有效提高診斷準(zhǔn)確率，使診斷治療療效提升，同時(shí)還能提高胸腔積液細(xì)胞學(xué)診斷檢出率及準(zhǔn)確性，應(yīng)用價(jià)值高。