炎可寧片中黃柏浸膏的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究＊

遲江 杜成興,2 潘年瓊 李松,2 楊迺嘉

（1.貴州省生物技術(shù)研究開發(fā)基地有限公司，貴州貴陽 550002；2.貴州省科暉制藥有限公司，貴州清鎮(zhèn) 551400）

炎可寧片[1]是由中藥黃柏、大黃、黃芩、板藍(lán)根和黃連5味中藥組方，經(jīng)加工制成的片劑，具有清熱瀉火、消炎止痢的作用。臨床用于急性扁桃腺炎、細(xì)菌性肺炎、急性結(jié)膜炎、中耳炎、癤癰瘰疬、急性乳腺炎、腸炎、細(xì)菌性痢疾及急性尿道感染。炎可寧片在部頒標(biāo)準(zhǔn)中沒有薄層鑒別和含量測(cè)定項(xiàng)，其制劑的質(zhì)量無法有效地控制。我們前期進(jìn)行了炎可寧片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)[2-3]研究，制劑質(zhì)量得到了控制。但在實(shí)際生產(chǎn)過程中發(fā)現(xiàn)黃柏浸膏的質(zhì)量[4-7]直接影響了片劑的崩解時(shí)限。為了更好地控制炎可寧片的內(nèi)在質(zhì)量，我們對(duì)黃柏浸膏進(jìn)行了薄層色譜鑒別，并采用高效液相色譜法對(duì)黃柏浸膏的鹽酸小檗堿進(jìn)行了含量測(cè)定，所建立的方法操作簡(jiǎn)便、分離效果好、專屬性強(qiáng)、重復(fù)性也好，可有效地控制炎可寧片中黃柏浸膏的質(zhì)量。

1.儀器和材料

1.1 儀器

AUW120D型電子天平（島津儀器蘇州有限公司），AL204型電子天平（梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司），Ultimate 3000高效液相色譜儀（美國(guó)賽默飛公司）；島津手動(dòng)高效液相色譜儀（日本島津公司，包含SHIMADZU Essentia LC-16型輸液泵、SHIMADZU SPD-16型紫外檢測(cè)器、SHIMADZU Essentia CTO-16等），依利特C18柱（250mm×4.6mm，5μm）。其他儀器均由貴州省生物技術(shù)研究開發(fā)基地有限公司提供。

1.2 材料

鹽酸小檗堿對(duì)照品（批號(hào)：110713-201212）購(gòu)于中國(guó)食品藥品檢定研究院；鹽酸黃柏堿（批號(hào)：Y-O87-121129）購(gòu)于成都瑞芬思生物科技有限公司。黃柏浸膏樣品、藥材及試劑由貴州省生物技術(shù)研究開發(fā)基地有限公司提供。

2.方法和結(jié)果

2.1 色譜適應(yīng)性條件

依利特C18柱（250mm×4.60mm，5μm）；流動(dòng)相為乙腈：0.05ml/L磷酸二氫鉀：三乙胺（35:65:0.1）；流速為1.0 ml·min-1；柱溫30℃；檢測(cè)波長(zhǎng)為265nm。

2.2 溶液的制備

2.2.1 樣品溶液制備方法

精密稱取黃柏浸膏0.1g，加入25ml甲醇，超聲10min，取出，稱重，補(bǔ)足減少的重量，過濾，取續(xù)濾液2ml。用甲醇定容至10ml，過0.45μm微孔濾膜，作為樣品溶液。

2.2.2 對(duì)照品制備方法

精密稱取鹽酸小檗堿對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml含25μg的溶液，即得。

2.3 線性關(guān)系考察

精密量取鹽酸小檗堿對(duì)照品溶液，配制成6.28μg/ml，12.56μg/ml，25.12μg/ml，50.24μg/ml，100.48μg/ml，200.96μgml，401.92μg/ml溶液。分別進(jìn)樣10uL，以鹽酸小檗堿濃度為X軸，峰面積為Y軸，得線性回歸方程。結(jié)果表明，鹽酸小檗堿在6.28μg/ml～401.92μg/ml范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好線性關(guān)系，回歸方程為Y=46558X+29207（r=0.9999）。

2.4 精密度實(shí)驗(yàn)

取鹽酸小檗堿對(duì)照品溶液（50.24μg/ml）適量，按2.1項(xiàng)下色譜條件，進(jìn)樣6次，每次10μL，測(cè)定鹽酸小檗堿的峰面積。結(jié)果顯示RSD=0.18%，表明儀器精密度良好。

2.5 中間精密度實(shí)驗(yàn)

取鹽酸小檗堿對(duì)照品溶液（50.24μg/ml）適量，按2.1項(xiàng)下色譜條件，進(jìn)樣6次，每次10μL，測(cè)定鹽酸小檗堿的峰面積。結(jié)果顯示RSD=0.94%，表明中間精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

精密稱取黃柏浸膏0.1g，按2.2.1項(xiàng)下制備方法，得樣品溶液。按2.1項(xiàng)下色譜條件，間隔1h進(jìn)樣，進(jìn)樣6h共7次，每次10μL，計(jì)算樣品中鹽酸小檗堿的含量。結(jié)果顯示RSD=0.53%，表明樣品中鹽酸小檗堿在6h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

精密稱取0.1g黃柏浸膏6份，按2.2.1項(xiàng)下制備方法，得樣品溶液，按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，每次10μL，計(jì)算樣品中鹽酸小檗堿的含量。結(jié)果顯示RSD=0.58%，表明實(shí)驗(yàn)重復(fù)性良好。

2.8 加樣回收率實(shí)驗(yàn)

精密稱取黃柏浸膏樣品0.05g共9份，分為3組，編號(hào)。每組按樣品取樣量的50%、100%、150%分別加入鹽酸小檗堿對(duì)照品，按2.2.1項(xiàng)下制備方法，得樣品溶液。按2.1項(xiàng)下色譜條件，進(jìn)樣9次，每次10μL，計(jì)算樣品中鹽酸小檗堿的含量，見表1。結(jié)果顯示，樣品中鹽酸小檗堿的平均加樣回收率為99.65%，RSD=1.51%，表明實(shí)驗(yàn)可行性良好，該方法可用于黃柏浸膏的含量測(cè)定。

表1 加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.9 含量測(cè)定

取10個(gè)不同批次的黃柏浸膏，每批稱取2份，每份0.1g，按2.2.1項(xiàng)下制備方法，得樣品溶液，按2.1項(xiàng)下色譜條件，進(jìn)樣10μL，計(jì)算樣品中鹽酸小檗堿的含量，結(jié)果見表2。結(jié)果顯示：黃柏浸膏鹽酸小檗堿的平均含量為43.32mg/g，最低含量為32.69mg/g。

表2 十批黃柏浸膏含測(cè)結(jié)果

2.10 薄層色譜鑒別

2.10.1 黃柏浸膏和藥材薄層色譜鑒別

分別稱取黃柏浸膏和黃柏藥材細(xì)粉0.25g，加入25ml甲醇，超聲30min，過濾，濾液揮干后，加1%醋酸水溶解后過濾，濾液揮干后，加少量甲醇，作為供試品溶液。另取鹽酸小檗堿對(duì)照品和鹽酸黃柏堿對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。吸取上述4種溶液3uL～5uL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以二氯甲烷：甲醇：水（30:15:4）的下層溶液為展開劑，置氨蒸氣飽和的展開缸內(nèi)，展開、取出、晾干、噴以稀碘化鉍鉀試液顯色。供試品色譜中，黃柏藥材和黃柏浸膏在與鹽酸小檗堿色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)如圖1所示。

圖1 薄層色譜圖1

2.10.2 10批黃柏浸膏薄層色譜鑒別

分別稱取10批黃柏浸膏樣品0.25g，按2.10.1項(xiàng)下方法進(jìn)行薄層色譜鑒定，如圖2所示。結(jié)果表明：在供試品色譜中，10批黃柏浸膏樣品在與鹽酸小檗堿色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。

圖2 10批黃柏浸膏薄層色譜圖

3.結(jié)語

在測(cè)定10批黃柏浸膏樣品的含量時(shí)發(fā)現(xiàn)，黃柏浸膏中鹽酸小檗堿的平均含量為43.32mg/g，最低含量為32.69mg/g，考慮到實(shí)際生產(chǎn)過程中含量會(huì)有所不同，因此我們暫將黃柏浸膏中的鹽酸小檗堿的限量定為：每克黃柏浸膏含鹽酸小檗堿不得少于30mg。經(jīng)過方法學(xué)考察，黃柏浸膏中鹽酸小檗堿在6.28μg/ml～401.92μg/ml范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好線性關(guān)系，回歸方程為Y=46558X+29207（r=0.9999），平均回收率為99.65%（RSD=1.51%），說明本方法專屬性強(qiáng)，重現(xiàn)性好，可有效控制黃柏浸膏的質(zhì)量，為炎可寧片的生產(chǎn)工藝控制提供了質(zhì)量?jī)?nèi)控標(biāo)準(zhǔn)，也為炎可寧片的成品質(zhì)量控制提供了保障。