打箭菊水溶性成分的研究

齊樺琳，杜 艷，陳 玉，楊光忠，胡 鑫

(1.中南民族大學(xué) 藥學(xué)院，湖北 武漢 430074;2.中南民族大學(xué) 化學(xué)與材料科學(xué)學(xué)院，湖北 武漢430074)

1 引言

打箭菊，又叫打箭韃新菊、韃箭菊、川西小黃菊韃等，為菊科植物川西小黃菊(Pyrethrumtatsienens)的干燥頭狀花序。在西藏、云南、四川等地均有分布，是藏藥“阿恰塞俊”的藥源植物之一[1]。打箭菊體輕質(zhì)軟，氣香，味微苦。現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明打箭菊入藥具有止痛散瘀的功效，臨床常用于治療急性腦震蕩、黃水病、太陽穴痛以及溫?zé)嵝灾摊彲僛2]。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，從該植物中分離出的化合物打主要包括氨基酸、有機(jī)酸、黃酮類、生物堿[3]。為進(jìn)一步研究其化學(xué)成分，探究打箭菊的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，本文采用了正、反相硅膠柱層析及半制備高效液相色譜法，從打箭菊的正丁醇提取物中分離得到6個化合物，包含3個芳香類化合物和3個生物堿，根據(jù)其波譜數(shù)據(jù)分別鑒定為：2-苯乙基-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(1)，3,5-dimethoxyl-4-hydroxybenzylalcohol-4-O-β-D-glucoside(2)，2-O-β-D-吡喃葡萄糖基順式肉桂酸(3)，腺苷(4)，2'-O-甲基腺苷(5)，胸腺嘧啶脫氧核苷(6)，所有化合物都是首次從該植物中分離得到。

2 材料與方法

2.1 儀器與試劑

核磁共振輻射波譜儀(AM-600/500型,德國布魯克)；紫外光譜分析儀(ZF-I型，上海顧村電光儀器)；循環(huán)水真空泵(SHB-IIIA型，上海貝菌科技)；高速旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(RE2000A，上海亞榮生化儀器)；高效液相色譜儀(Ultimate 3000 半制備型，美國戴安，DAD檢測器)；反相色譜柱(YMC-pack ODS-A，250 mm×10 mm，10 μm)；正相柱層層析硅膠填料(300～400母，濟(jì)南博納生物技術(shù)有限公司)；TLC(薄層硅膠分析板，濟(jì)南博納生物技術(shù)有限公司)；分析純試劑(湖北弗頓生化制造有限公司)；色譜純試劑(湖北弗頓生化制造有限公司)。

2.2 提取與分離

稱取干燥的打箭菊12.0 kg并將其粉碎；然后在室溫的條件下，將粉末完全浸泡在70%的乙醇中，反復(fù)浸泡3次，每次12 h。合并3次所得乙醇提取液，經(jīng)抽濾后再將再將該減壓抽取的濾液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮，從而得到乙醇提取物的浸膏2.92 kg。乙醇提取物先用石油醚萃取脫脂并除去極性小的組分，再用乙酸乙酯和正丁醇依次萃取，分別得乙酸乙酯組分280 g和正丁醇組分535 g[4]。

本實(shí)驗(yàn)取正丁醇組分430 g使用大孔樹脂柱層析的方法[5]，依次用30%、50%、70%、95%的乙醇梯度洗脫，分別得到浸膏100 g，120 g，20 g，10 g。將30%乙醇洗脫組分的100 g浸膏上正相硅膠柱，以乙酸乙酯/甲醇(100∶1→1∶100)為洗脫劑梯度洗脫，用薄層色譜法檢測后合并，最終將洗脫液分為12個組分(Fr.1～Fr.12)，F(xiàn)r.5和Fr.7經(jīng)HPLC反復(fù)制備得到化合物1(3.5 mg),2(3.14 mg),3(5.86 mg)，4(2.5 mg),5(1.14 mg)和6(8.32 mg)。

圖1 化合物1～6的化學(xué)結(jié)構(gòu)式

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1:白色粉末。1H-NMR (500 MHz,CD3OD)δH 7.18-7.26(5H,m),2.93(2H,m,H-7),4.09(1H,dd,J =16.2,8.4 Hz,H-8),3.86(1H,d,J =12.0 Hz,H-8),3.18-3.55(4H,m,H-2′,H-3′,H-4′,H-5′),3.66 (1H,dd,J =4.8,12.0 Hz,H-6′),3.76 (1H,dd,J =7.8,16.2 Hz,H-6′),3.66 (1H,dd,J =4.8,12.0 Hz,H-6′);13C NMR (150 MHz,CD3OD)δC 140.3 (C-1),129.5 (C-2),130.2 (C-3),127.4 (C-4),130.2 (C-5),129.5 (C-2,6),37.4 (C-7),71.9 (C-8),104.5 (C-1′),75.3 (C-2′),78.3 (C-3′),71.8 (C-4′),78.1 (C-5′),62.9 (C-6′)。將以上研究數(shù)據(jù)與相關(guān)參考文獻(xiàn)[6]中的數(shù)據(jù)對照結(jié)果基本一致，故最終可以鑒定分析出的該有機(jī)化合物為2-苯乙基-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物2：無色結(jié)晶。1H-NMR (500 MHz,CD3OD)δH 6.71 (1H,s,H-2),6.71 (1H,s,H-6),4.55 (2H,br s,H-7),4.85 (1H,d,J =7.5 Hz,H-1′),3.20-3.77 (6H,m,H-2′,H-3′,H-4′,H-5′,H-6′),3.85(6H,s,3-OCH3,5-OCH3);13C-NMR (150 MHz,CD3OD)δC 135.2 (C-1),105.6 (C-2),154.2 (C-3),139.7 (C-4),154.2 (C-5,),105.6 (C-6),65.1 (C-7),105.4 (C-1′),75.7 (C-2′),77.8 (C-3′),71.3 (C-4′),78.3 (C-5′),62.5 (C-6′)，57.0 (C-3,5-OCH3)。將以上研究數(shù)據(jù)與相關(guān)參考文獻(xiàn)[7]中的數(shù)據(jù)對照結(jié)果基本一致，故最終可以鑒定分析出的有機(jī)化合物為3,5-dimethoxyl-4-hydroxybenzylalcohol-4-O-β-D-glucoside。

化合物3:白色粉末。1H-NMR (500 MHz,CD3OD)δH 7.18 (1H,d,J =8.4 Hz,H-3),7.27 (1H,t,J =7.2 Hz,H-4),6.96 (1H,t,J =7.2 Hz,H-5),7.57 (1H,d,J =7.8 Hz,H-6),7.19(1H,d,J =12.0 Hz,H-7),5.99(1H,d,J =12.6 Hz,H-8),4.93 (1H,d,J =7.2 Hz,H-1′),3.38-3.51(4H,m,H-2′,H-3′,H-4′,H-5′),3.70 (1H,dd,J =4.8,12.0 Hz,H-6′),3.87 (1H,dd,J =1.8,12.0 Hz,H-6′);13C NMR (150 MHz,CD3OD)δC 127.3 (C-1),156.7 (C-2),116.6 (C-3),131.1 (C-4),123.0 (C-5),131.6 (C-6)，65.1 (C-7),105.4 (C-1′),75.7 (C-2′),77.8 (C-3′),71.3 (C-4′),78.3 (C-5′),62.5 (C-6′),136.4 (C-7),123.6 (C-8),172.7 (C-9),102.8 (C-1′),75.1 (C-2′),78.3 (C-3′),71.5 (C-4′),78.4 (C-5′),62.7 (C-6′)。將以上研究數(shù)據(jù)與相關(guān)參考文獻(xiàn)[8]中的數(shù)據(jù)對照結(jié)果基本一致，故最終可以鑒定分析出該有機(jī)化合物為2-O-β-D-吡喃葡萄糖基順式肉桂酸。

化合物4：白色粉末。1H-NMR (500 MHz,CD3OD)δH 8.18 (1H,s,H-2),8.31(1H,s,H-8),5.97 (1H,d,J =6.6 Hz,H-1′),4.74 (1H,dd,J =5.4,6.6 Hz,H-2′),4.33 (1H,dd,J =2.4,4.8 Hz,H-3′),4.17 (1H,q,J =2.4 Hz,H-4′),3.89 (1H,dd,J =2.4,12.6 Hz,H-5′),3.75 (1H,dd,J =2.4,12.6 Hz,H-5′);13C NMR (150 MHz,CD3OD)δC 153.7 (C-2),150.2 (C-4),121.2 (C-5),157.8 (C-6),142.2 (C-8)，91.4 (C-1′),75.7 (C-2′),72.9 (C-3′),88.4 (C-4′),63.7 (C-5′)。將以上研究數(shù)據(jù)與相關(guān)參考文獻(xiàn)[9]中的數(shù)據(jù)對照結(jié)果基本一致，故最終可以鑒定分析出該有機(jī)化合物為腺苷。

化合物5：白色粉末。1H-NMR (500 MHz,CD3OD)δH 8.19(1H,s,H-2),8.34(1H,s,H-8),6.06 (1H,d,J =6.0 Hz,H-1′),4.43 (1H,dd,J =5.0,6.0 Hz,H-2′),4.49 (1H,dd,J =3.0,5.0 Hz,H-3′),4.16 (1H,q,J =2.5 Hz,H-4′),3.89 (1H,dd,J =3.0,13.0 Hz,H-5′),3.75 (1H,dd,J =2.4,12.6 Hz,H-5′),3.42(3H,s,2-OCH3);13C NMR (150 MHz,CD3OD)δC 153.8 (C-2),150.2 (C-4),121.1 (C-5),157.8 (C-6),142.0 (C-8)，89.4(C-1′),84.8(C-2′),71.0 (C-3′),88.6 (C-4′),63.4 (C-5′),59.0(2-OCH3)。將以上研究數(shù)據(jù)與相關(guān)參考文獻(xiàn)[10]中的數(shù)據(jù)對照結(jié)果基本一致，故最終可以鑒定分析出該有機(jī)化合物為2′-O-甲基腺苷。

化合物6:無色針晶。1H-NMR (500 MHz,CD3OD)δH 7.82 (1H,d,J =0.6 Hz,H-2),6.28 (1H,t,J =7.2 Hz,H-1′),2.23 (2H,m,H-2′),4.40 (1H,m,H-3′),3.91 (1H,dd,J =3.0,6.6 Hz,H-4′),3.80 (1H,dd,J =3.0,12.0 Hz,H-5′),3.73 (1H,dd,J =3.6,12.0 Hz,H-5′),1.88 (3H,d,J =1.2 Hz,5-CH3);13C NMR (150 MHz,CD3OD)δC 152.6 (C-2),138.4 (C-4),111.7 (C-5),166.7 (C-6),86.4 (C-1′),41.4 (C-2′),72.4 (C-3′),89.0 (C-4′),63.0 (C-5′),12.75 (5-CH3)。將以上研究數(shù)據(jù)與相關(guān)參考文獻(xiàn)[11]中的數(shù)據(jù)對照結(jié)果基本一致，故最終可以鑒定分析出該有機(jī)化合物為胸腺嘧啶脫氧核苷。

4 結(jié)語

本實(shí)驗(yàn)利用了多種色譜分離方法，以此對打箭菊的乙醇提取物進(jìn)行了進(jìn)一步的分離純化最終得到了6個化合物。其中包含3個苯丙酸類化合物和3個生物堿類化合物，分別鑒定為2-苯乙基-O-β -D-吡喃葡萄糖苷(1)，3,5-dimethoxyl-4-hydroxybenzylalcohol-4-O-β-D-glucoside(2)，2-O-β-D-吡喃葡萄糖基順式肉桂酸(3)，腺苷(4)，2′-O-甲基腺苷(5)，胸腺嘧啶脫氧核苷(6),為進(jìn)一步研究和開發(fā)藏藥打箭菊提供了一定的理論依據(jù)。