地塞米松對(duì)哮喘模型小鼠肺組織活性氧及線粒體基因MTCO1的影響

顏鵬 鄧育瓊 黃杏蘭 黃彩鳳 趙曉慶 劉升 程喜平 劉曉東

廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院1廣州呼吸健康研究院呼吸疾病國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，國(guó)家呼吸系統(tǒng)疾病臨床醫(yī)學(xué)研究中心，2皮膚科（廣州 510180）

哮喘是呼吸系統(tǒng)疾病中最常見的慢性非傳染性疾病之一，有研究證明外源性和內(nèi)源性活性氧（reactive oxygen species，ROS）的增高與哮喘的發(fā)病密切相關(guān)［1-2］。ROS 的增高可以引起線粒體穩(wěn)態(tài)的變化，誘發(fā)免疫炎癥，增強(qiáng)哮喘高反應(yīng)性；免疫炎癥所致線粒體損傷可持續(xù)升高ROS，形成惡性循環(huán)，改變細(xì)胞功能，破壞穩(wěn)態(tài)，因此ROS 在哮喘發(fā)病機(jī)制中作用重要［3-4］。糖皮質(zhì)激素是廣泛的抗炎、免疫調(diào)節(jié)藥物，同時(shí)副作用也十分明顯。糖皮質(zhì)激素通過其受體遷移至細(xì)胞核內(nèi)與特定序列結(jié)合，調(diào)控基因發(fā)揮抗炎作用，理論上可降低ROS。但研究顯示，糖皮質(zhì)激素在體內(nèi)可升高ROS，誘發(fā)氧化應(yīng)激，引起如冠心病、糖尿病、骨質(zhì)疏松等疾病。顯然糖皮質(zhì)激素強(qiáng)大的抗炎作用間接性降低ROS［5-7］，不能解釋糖皮質(zhì)激素應(yīng)用期間氧化應(yīng)激升高的現(xiàn)象。臨床使用糖皮質(zhì)激素治療哮喘患者時(shí)，哮喘會(huì)不定期的復(fù)發(fā)，副作用難以避免，原因復(fù)雜。筆者認(rèn)為可能與糖皮質(zhì)激素升高ROS 有關(guān)。線粒體是細(xì)胞生成ROS 的關(guān)鍵細(xì)胞器，MTCO1（mitochondrially encoded cytochrome C oxidase I）位于線粒體復(fù)合物Ⅳ，是線粒體呼吸電子傳遞鏈中細(xì)胞色素c 氧化酶中重要的限速酶。為研究糖皮質(zhì)激素升高ROS 可能的機(jī)制，本研究對(duì)糖皮質(zhì)激素干預(yù)哮喘小鼠模型后ROS 和線粒體呼吸鏈基因的變化進(jìn)行了研究。同時(shí)體外研究糖皮質(zhì)激素干預(yù)IL-5 預(yù)處理后的16HBE 細(xì)胞對(duì)線粒體ROS 和線粒體呼吸鏈基因的影響，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 動(dòng)物與處理方法21只SPF級(jí)，6～8周，體質(zhì)量約22 g的BALB/C雌性小鼠（購(gòu)買自廣東省動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心），分為地塞米松組、哮喘組、空白組三組。哮喘組于實(shí)驗(yàn)的第0、7、14 天予以10 μg 卵清蛋白+1.3 mg生理鹽水氫氧化鋁混懸液致敏，于實(shí)驗(yàn)第28、29、30天使用1%卵清蛋白滴鼻激發(fā)；地塞米松組每次激發(fā)前1 h 腹腔注射5 mg/kg 的地塞米松（dexamethasone，Dex），其他同哮喘組；空白組使用生理鹽水組，致敏、激發(fā)的劑量和時(shí)間同哮喘組（圖1）。小鼠飼養(yǎng)在呼吸疾病國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室。使用Buxco非侵入性肺功能測(cè)量?jī)x（DSI，USA）測(cè)量氣道高反應(yīng)性。

圖1 動(dòng)物模型的建立Fig.1 The method of model of animals

1.2 細(xì)胞培養(yǎng)16HBE 細(xì)胞株購(gòu)買自中科院細(xì)胞庫(kù)。使用DMEM（Gibco）+10%胎牛血清（FBS；Gibco，UT，USA）+1%（100 U/mL）青霉素和100 U/mL鏈霉素（Gibco）抗生素，在37 ℃和5%CO2的條件下培養(yǎng)。每2～3 天更換一次培養(yǎng)基，細(xì)胞培養(yǎng)基均保持的pH 7.4，37 ℃和5%CO2的條件。

1.3 細(xì)胞處理分為地塞米松組、IL-5組、空白組。使用地塞米松（濃度為0.2 mmol/L，購(gòu)自sigma）、IL-5（10 ng/mL，購(gòu)自novoprotein）對(duì)16HBE 細(xì)胞進(jìn)行干預(yù)。IL-5 組使用IL-5 干預(yù)16HBE 24 h；地塞米松組則IL-5 干預(yù)12 h 后，加入地塞米松，總干預(yù)時(shí)間為24 h；空白組不使用地塞米松和IL-5 處理。然后待細(xì)胞生長(zhǎng)到70%～80%匯合時(shí)，收集細(xì)胞提取蛋白及RNA。

1.4 Western blot 和丙二醛（malondialdehyde，MDA）的測(cè)量將肺組織提取總蛋白，用預(yù)冷卻的PBS 液將其沖洗兩次。然后快速加入細(xì)胞裂解緩沖液裂解細(xì)胞。收集蛋白質(zhì)后，用標(biāo)準(zhǔn)曲線法檢測(cè)蛋白質(zhì)濃度，定完蛋白濃度后各樣品加入5×上樣緩沖液煮沸。配好膠后進(jìn)行電泳、轉(zhuǎn)膜、封閉、孵育抗體（MT-CO1、β-actin 抗體購(gòu)置于英國(guó)Abcam 公司）的表達(dá)；提取蛋白檢測(cè)小鼠肺組織的MDA（碧云天，S0131S）表達(dá)水平。

1.5 實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)通過qPCR 檢測(cè)mRNA 的表達(dá)。使用RNA 提取試劑（Vazyme）從小鼠肺組織中和16HBE 細(xì)胞樣品提取總RNA，并使用諾唯贊試劑盒（Vazyme，HiScriptⅡQ Select RT SuperMix for qPCR）反轉(zhuǎn)錄為cDNA。使用諾唯贊ChamQ qPCR（Vazyme，ChamQ SYBR?qPCR Master Mix）進(jìn)行qPCR。反應(yīng)物的總體積為10 μL。使用Primer 5 軟件設(shè)計(jì)引物，引物序列：MT-CO1 forward 5'-TATGTTCTATCAATGGGA-3'，MTCO1 reverse 5'-GTAGTCTGAGTAGTCGGTG-3'。

1.6 線粒體ROS（mitochondrial reactive oxygen species，mtROS）和線粒體膜電位通過熒光對(duì)細(xì)胞的線粒體ROS 和線粒體膜電位進(jìn)行觀察，使用mitoSOX（ThermoFisher M36008）試劑進(jìn)行線粒體ROS 的熒光染色；使用線粒體膜電位（碧云天C2006）試劑，進(jìn)行線粒體膜電位熒光染色。根據(jù)試劑說明書進(jìn)行熒光染色，通過熒光倒置顯微鏡（Leica DMi8）進(jìn)行觀察。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法使用GraphPad prism軟件通過單因素方差分析或t檢驗(yàn)分析統(tǒng)計(jì)分析。所有數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 氣道高反應(yīng)性、炎癥細(xì)胞在地塞米松組、哮喘組和空白組中比較結(jié)果顯示，相比于空白組，哮喘組中BALF 嗜酸性粒細(xì)胞的比例、氣道高反應(yīng)性均明顯增加（圖2A、B），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；相比于哮喘組，地塞米松組中BALF 的嗜酸性粒細(xì)胞的比例、氣道高反應(yīng)性均明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。在肺組織的病理切片中可見，相對(duì)相比于空白組，哮喘組中氣道炎癥浸潤(rùn)明顯增高；對(duì)比哮喘組，地塞米松組氣道炎性明顯降低。見圖2。

圖2 氣道高反應(yīng)性和氣道炎癥細(xì)胞Fig.2 The airway hyperresponsiveness and airway inflammtion

2.2 MDA、MTCO1 基因和蛋白的表達(dá)在地塞米松組、哮喘組和空白組中比較結(jié)果顯示，相比于空白組，哮喘組中MDA 明顯增高，qPCR 可見MTCO1 表達(dá)明顯降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；相比于哮喘組，地塞米松組中MDA 明顯增高，qPCR 可見MTCO1 表達(dá)明顯降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。WB 結(jié)果同qPCR 趨勢(shì)相同。見圖3。

圖3 地塞米松組、哮喘組和空白組中MDA 的產(chǎn)生和MT-CO1 基因的表達(dá)對(duì)比Fig.3 MDA and MT-CO1 gene expression expressed among dexamethasone group，asthma group and control group

2.3 MT-CO1 基因和蛋白的表達(dá)在地塞米松組、IL-5組、空白組中的比較相對(duì)于空白對(duì)照組，IL-5組和地塞米松組MT-CO1 基因表達(dá)降低；差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），地塞米松組較IL-5 組有下降趨勢(shì)，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。WB 的結(jié)果與qPCR趨勢(shì)相同。見圖4。

圖4 MT-CO1 蛋白表達(dá)在地塞米松組、IL-5 組和空白組的比較Fig.4 MT-CO1 gene expression and protein among dexamethasone group，IL5 group and control group

2.4 線粒體ROS 和線粒體膜電位在地塞米松組、IL-5 組、空白組中的比較線粒體ROS 結(jié)果：對(duì)比空白對(duì)照組，IL-5 組和地塞米松組的mtROS 明顯增高；對(duì)比IL-5 組，地塞米松組的mtROS 有增高趨勢(shì)（圖5A）。線粒體膜電位：對(duì)比空白對(duì)照組，IL-5 組和地塞米松組可見線粒體膜電位的明顯降低（綠色），對(duì)比IL-5 組，地塞米松組線粒體膜電位有下降趨勢(shì)（圖5B）。

圖5 地塞米松誘導(dǎo)線粒體活性氧的產(chǎn)生和線粒體膜電位的變化Fig.5 Dexamethasone treatment can induce mtROS generation and change mitochondrial membrane potential in 16HBE cells

3 討論

哮喘是呼吸系統(tǒng)最常見的疾病，致病機(jī)制復(fù)雜，目前尚未完全了解清楚。哮喘的發(fā)生多與過敏原引起的適應(yīng)性免疫密切相關(guān)，研究顯示過敏原引起的免疫紊亂可以升高ROS，引起免疫炎癥，炎癥可進(jìn)一步升高ROS，形成惡性循環(huán)［8］。臨床研究也顯示，在哮喘患者特別是哮喘急性發(fā)作的患者當(dāng)中，ROS 明顯升高；ROS 升高引起的氧化應(yīng)激反應(yīng)是哮喘重要的發(fā)病機(jī)制［9-11］。

本研究結(jié)果顯示：相對(duì)于空白組，哮喘組肺組織中MDA 含量明顯增高，結(jié)果與既往哮喘ROS 研究結(jié)論相符合［9-12］，哮喘ROS 異常升高。本研究結(jié)果還顯示，對(duì)比空白組，哮喘組肺組織中的線粒體呼吸鏈基因MTCO1表達(dá)下降，提示哮喘發(fā)病過程中不僅ROS異常升高［13-14］，與ROS 生成關(guān)系密切的線粒體呼吸鏈基因也異常下降。迄今為止，ROS 和線粒體呼吸鏈基因相互惡性影響是公認(rèn)的機(jī)體重要的病理機(jī)制［15-17］，參與眾多疾病發(fā)生發(fā)展，影響衰老進(jìn)程，促進(jìn)免疫炎癥，是目前醫(yī)學(xué)研究的熱點(diǎn)之一。首次在哮喘動(dòng)物模型中證實(shí)ROS 和線粒體呼吸鏈基因異常［3，13，18］，ROS 產(chǎn)生的部位主要是線粒體，線粒體通過呼吸鏈復(fù)合體生成ATP［19］，參與各種重要的代謝過程，維持細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)態(tài)的作用，同時(shí)也產(chǎn)生ROS。有研究顯示，異常升高的ROS 可以直接損害線粒體DNA（mitochondrial DNA，mtDNA），引起線粒體呼吸鏈異常。線粒體呼吸鏈異常不可避免對(duì)線粒體功能產(chǎn)生影響，線粒體不能正常生成重要的能量分子ATP，妨礙細(xì)胞和器官組織正常生理功能發(fā)揮［20-21］。MTCO1 位于線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅳ內(nèi)，是mtDNA 編碼的線粒體呼吸電子傳遞鏈中細(xì)胞色素c 氧化酶的核心末端酶。本研究結(jié)果首次提示哮喘發(fā)病機(jī)制中同樣存在ROS 的增高伴隨著線粒體呼吸鏈基因異常下降。在衰老和機(jī)體重要疾病發(fā)病機(jī)制當(dāng)中，線粒體呼吸鏈和ROS 相互影響形成惡性循環(huán)是目前公認(rèn)的疾病發(fā)病機(jī)制、熱點(diǎn)［16］，將線粒體呼吸鏈功能異常引入哮喘研究領(lǐng)域，對(duì)哮喘發(fā)病機(jī)制和潛在影響做了有意義的補(bǔ)充。筆者認(rèn)為哮喘發(fā)生時(shí)，線粒體內(nèi)ROS 的生成增多，惡性加重免疫炎癥，造成哮喘病情進(jìn)行性加重。更為關(guān)注的是，哮喘發(fā)生時(shí)所呈現(xiàn)的線粒體ROS 和線粒體基因相互影響、惡性循環(huán)是衰老發(fā)生發(fā)展重要的病理機(jī)制，衰老可使細(xì)胞新陳代謝紊亂，對(duì)組織器官造成不可逆損害，縮短組織器官使用壽命。一直以來(lái)人們對(duì)哮喘的研究側(cè)重于病情的控制，較少關(guān)注肺組織的功能狀態(tài)，本研究明確提示哮喘發(fā)生時(shí)，ROS和線粒體呼吸鏈基因會(huì)相互影響，啟動(dòng)和促進(jìn)肺組織的衰老病理進(jìn)程，由于哮喘病因不清，病程延續(xù)，肺組織衰老會(huì)持續(xù)進(jìn)行，最終加快肺組織的衰竭，縮短肺組織的使用壽命，因此深入研究哮喘發(fā)生時(shí)線粒體呼吸鏈異常具有重要的科學(xué)價(jià)值。

糖皮質(zhì)激素是迄今為止對(duì)免疫系統(tǒng)作用最全面的藥物，由于10%～20%的人類基因均能受到糖皮質(zhì)激素核受體的調(diào)控，其抗炎作用顯著，體內(nèi)幾乎所有的細(xì)胞都對(duì)糖皮質(zhì)激素調(diào)節(jié)敏感。糖皮質(zhì)激素是最常用的抗炎及免疫調(diào)節(jié)藥物，也是哮喘治療的基礎(chǔ)性用藥。本研究結(jié)果顯示：相對(duì)于哮喘模型組，地塞米松干預(yù)組肺組織及BALF 中的炎癥明顯降低，顯示糖皮質(zhì)激素良好的抗炎作用。但是地塞米松干預(yù)組中肺組織的MDA 相對(duì)哮喘組進(jìn)一步增高，結(jié)果提示，糖皮質(zhì)激素降低免疫炎癥，不能使ROS 下降。本研究還顯示，糖皮質(zhì)激素使用后線粒體呼吸鏈基因MTCO1 較哮喘組進(jìn)一步降低。結(jié)果提示，糖皮質(zhì)激素治療期間升高ROS，可能是通過線粒體途徑調(diào)控途徑實(shí)現(xiàn)。甚至能夠突破糖皮質(zhì)激素細(xì)胞核調(diào)節(jié)途徑降低炎癥、間接降低ROS 作用的效能。既往研究顯示，在哮喘中ROS 的產(chǎn)生增加。但是關(guān)于糖皮質(zhì)激素引起線粒體功能變化，影響ROS 產(chǎn)生的研究未見相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道。本研究結(jié)果說明糖皮質(zhì)激素通過線粒體途徑，具備誘發(fā)免疫紊亂、引起免疫炎癥的作用的潛能；結(jié)果可以解釋糖皮質(zhì)激素應(yīng)用所致機(jī)體多器官、多系統(tǒng)免疫炎癥的原因。這一結(jié)果具有積極的臨床意義，認(rèn)為研究糖皮質(zhì)激素線粒體途徑的調(diào)控作用對(duì)哮喘糖皮質(zhì)激素的合理使用具有重要的意義。

研究顯示糖皮質(zhì)激素在細(xì)胞質(zhì)和糖皮質(zhì)激素受體結(jié)合后，除了轉(zhuǎn)運(yùn)至細(xì)胞核，也可以轉(zhuǎn)運(yùn)至線粒體。Scheller 應(yīng)用免疫熒光標(biāo)記和共聚焦激光掃描顯微鏡，證實(shí)肝HeLa 和Hep-2 細(xì)胞的糖皮質(zhì)激素受體特別富集于線粒體，發(fā)現(xiàn)大鼠肝細(xì)胞位于細(xì)胞色素C 氧化酶亞基Ⅰ和Ⅱ基因的d-環(huán)區(qū)內(nèi)的六個(gè)線粒體基因組序列具有和糖皮質(zhì)激素細(xì)胞核受體相同GRE 序列［22-23］。糖皮質(zhì)激素受體進(jìn)入線粒體后，促進(jìn)GR-Bcl2 相互作用，增強(qiáng)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和線粒體連通性，導(dǎo)致線粒體Ca2+大量涌入。糖皮質(zhì)激素引起線粒體Ca2+涌入，可以降低線粒體跨膜電位，線粒體跨膜電位降低，會(huì)破壞線粒體膜和膜電位的穩(wěn)定，呼吸鏈電子傳輸中的質(zhì)子側(cè)漏增加，ROS 產(chǎn)生持續(xù)增多，ATP 減少。同時(shí)通過Ca2+介導(dǎo)JNK/c-Src 信號(hào)通道引起磷酸化［22-23］，數(shù)小時(shí)內(nèi)就可耗盡非氧化谷胱甘肽，不能清除細(xì)胞過度產(chǎn)生ROS，Ca2+繼續(xù)內(nèi)流，導(dǎo)致微管失穩(wěn)，進(jìn)行性破壞線粒體膜和膜電位，最終線粒體Ca2+內(nèi)流、質(zhì)子泄漏和ROS 相互影響形成惡性循環(huán)，啟動(dòng)細(xì)胞程序性死亡和免疫炎癥［24］。

ROS 主要由線粒體產(chǎn)生，作為一種高度反應(yīng)性的化學(xué)分子，ROS 可以直接破壞脂膜、蛋白質(zhì)和核酸，高濃度的ROS 可以引起大分子發(fā)生不可逆改變，從而導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)與衰老及癌變相關(guān)的生物損傷。在氧化還原失衡的情況下，與這些生物大分子發(fā)生氧化反應(yīng)，引起生物大分子損害，導(dǎo)致細(xì)胞的正常生理活動(dòng)異常。更為重要的是線粒體內(nèi)部自身產(chǎn)生的ROS 可以直接與mtDNA 相接觸，引起mtDNA 的突變，進(jìn)而引起其編碼的基因蛋白異常，進(jìn)一步加重線粒體功能失調(diào)［22-23］。研究也顯示，在ROS 的作用下，線粒體核苷酸發(fā)生氧化反應(yīng)，致使核苷酸共價(jià)鍵發(fā)生改變，影響線粒體雙鏈DNA 的穩(wěn)定，并在轉(zhuǎn)錄過程中發(fā)生核苷酸的配對(duì)錯(cuò)誤，導(dǎo)致相關(guān)線粒體呼吸鏈基因表達(dá)下降［22-23］。本研究結(jié)果提示，線粒體呼吸鏈基因MTCO1 下降可能與ROS 對(duì)線粒體呼吸鏈基因氧化損害關(guān)系密切。

本研究結(jié)果提示，糖皮質(zhì)激素在哮喘治療中細(xì)胞核途徑的調(diào)控作用，可以控制哮喘免疫炎癥，舒緩哮喘發(fā)病，但是同時(shí)通過線粒體途徑引起ROS 升高，加重線粒體呼吸鏈基因異常，促進(jìn)肺部組織的衰老進(jìn)程。有研究顯示糖皮質(zhì)激素長(zhǎng)期應(yīng)用后，加重氧化應(yīng)激反應(yīng)可以引起機(jī)體其他重要器官疾病如冠心病、骨質(zhì)疏松、糖尿病。本研究結(jié)果首次提示，糖皮質(zhì)激素治療哮喘，糖皮質(zhì)激素的線粒體途徑調(diào)控作用具有促炎作用，不利于哮喘緩解，同時(shí)對(duì)肺組織本身也有促進(jìn)衰老作用，加速肺組織整體的功能退行性改變，縮短肺組織的壽命，值得高度關(guān)注。

IL-5 是哮喘發(fā)病重要的炎性因子，是目前治療哮喘的生物制劑主要的靶點(diǎn)，以IL-5 處理肺上皮16HBE 細(xì)胞，體外模擬哮喘發(fā)病過程中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。本研究結(jié)果顯示，IL-5 刺激后的細(xì)胞中ROS增高，MTCO1 下降。使用地塞米松對(duì)IL-5 預(yù)處理的16HBE 進(jìn)行干預(yù)，結(jié)果顯示地塞米松處理后的細(xì)胞線粒體ROS 增加，MTCO1 表達(dá)下降。這些結(jié)果都同體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果相符。這一結(jié)果提示在哮喘發(fā)病過程中，肺功能細(xì)胞在炎癥因子的作用下，可以引起線粒體呼吸鏈基因異常和ROS 增高。糖皮質(zhì)激素的應(yīng)用則通過線粒體途徑同樣可進(jìn)一步加重線粒體基因的異常改變和ROS 的增多。

線粒體在產(chǎn)生能量時(shí)會(huì)將電化學(xué)勢(shì)能儲(chǔ)存于線粒體內(nèi)膜，在內(nèi)膜兩側(cè)，使質(zhì)子及其他離子濃度的形成不對(duì)稱分布，形成線粒體膜電位。有研究發(fā)現(xiàn)多種細(xì)胞發(fā)生凋亡時(shí)早期，均伴有線粒體膜電位的下降。線粒體膜電位是動(dòng)植物細(xì)胞生成ATP 的主要能量的來(lái)源，正常的線粒體膜電位是維持線粒體進(jìn)行氧化磷酸化、產(chǎn)生ATP 的先決條件，線粒體膜電位的穩(wěn)定有利于維持細(xì)胞的正常生理功能［25］。為研究IL-5 及糖皮質(zhì)激素對(duì)線粒體的影響，分別對(duì)IL-5 刺激后和地塞米松干預(yù)IL-5預(yù)處理的人肺上皮細(xì)胞16HBE 進(jìn)行了線粒體膜電位的檢測(cè)，結(jié)果顯示，IL-5 刺激和地塞米松干預(yù)IL-5 預(yù)處理后的肺上皮細(xì)胞16HBE 線粒體膜電位均下降。本研究結(jié)果提示，炎癥因子可以引起線粒體基因的異常下降，ROS 的增多，降低線粒體膜電位，引起線粒體功能失調(diào)。而糖皮質(zhì)激素同樣可以通過線粒體途徑引起類似的改變，在炎癥因子和糖皮質(zhì)激素的雙重作用下，可以引起線粒體功能的下降，線粒體ROS 的增多，形成惡性循環(huán)，誘發(fā)一系列嚴(yán)重后果。理論上可以引起哮喘患者肺組織結(jié)構(gòu)細(xì)胞的功能障礙，加速其衰老進(jìn)程。糖皮質(zhì)激素對(duì)線粒體不良影響客觀存在，這一結(jié)果具有積極的生物意義，糖皮質(zhì)激素通過線粒體途徑對(duì)機(jī)體的影響值得進(jìn)一步深入研究。

本研究結(jié)果顯示無(wú)論哮喘發(fā)病還是糖皮質(zhì)激素線粒體途徑調(diào)控結(jié)果，ROS 均明顯增高，ROS 異常是關(guān)鍵的機(jī)制。提示干預(yù)ROS 可能具有重要意義，抗氧化不僅能緩解哮喘病情加重，也能延緩的肺組織的衰老進(jìn)行，減輕糖皮質(zhì)激素線粒體途徑調(diào)控的不良影響，對(duì)于維護(hù)哮喘肺組織生理功能，延續(xù)肺組織使用壽命均有重要意義。