lncRNA對口腔鱗狀細(xì)胞癌診斷價值的系統(tǒng)評價

劉茂華，劉旭倩，雍明媛，聶敏海

1.西南醫(yī)科大學(xué)附屬口腔醫(yī)院牙周黏膜病科（瀘州 646000）；2.口頜面修復(fù)重建和再生瀘州市重點實驗室（瀘州 646000）；3.河北省疾控中心科培處（石家莊 050000）

口腔鱗狀細(xì)胞癌（oral squamous cell carcinoma，OS?CC）是口腔癌中最常見的、可發(fā)生早期遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的一種惡性腫瘤[1]。盡管近年來醫(yī)療技術(shù)在癌癥的治療上取得了不小的突破，但由于OSCC具有早期診斷的困難性及術(shù)后的易復(fù)發(fā)性等特點[2]，國際癌癥研究機(jī)構(gòu)2020年發(fā)布的數(shù)據(jù)表明口腔癌仍存在新發(fā)病例多和死亡率高的問題[3]，因此對其早期診斷是高效治療及改善預(yù)后的關(guān)鍵。

長鏈非編碼RNA（Long non-coding RNA，lncRNA）是一種無法進(jìn)行蛋白及多肽編碼的長鏈RNA分子，它是一個功能單位，其亞細(xì)胞的定位對靶向治療有重要意義[4]。lncRNA作為細(xì)胞增殖和死亡的關(guān)鍵調(diào)控因子，與多種腫瘤細(xì)胞的生長發(fā)育、凋亡等生物學(xué)過程都密切相關(guān)[5-6]。研究表明lncRNA 可作為競爭內(nèi)源性RNA（competitive endogenous RNA，ceRNA）在OSCC的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)歸中發(fā)揮一定的作用[7]。本研究采用meta分析的方法，通過計算出評價診斷效能的數(shù)據(jù)，如合并靈敏度、合并特異度等，對lncRNA診斷OSCC的價值進(jìn)行定量評價，以期為臨床診斷、治療、預(yù)后和實驗研究提供更高質(zhì)量的參考依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 文獻(xiàn)檢索策略

通過Pubmed、EMbase、CNKI、WanFang Data、VIP、Cochrane Library數(shù)據(jù)庫檢索建庫以來至2022年2月國內(nèi)外公開發(fā)表的關(guān)于lncRNA 表達(dá)量與口腔鱗狀細(xì)胞癌診斷價值相關(guān)的中英文文獻(xiàn)。使用以下中文檢索詞為“長鏈非編碼RNA”、“口腔鱗狀細(xì)胞癌”、“口腔癌”、“競爭性內(nèi)源性RNA”、“診斷”，英文檢索詞為“Long non-coding RNA”、“Oral Squamous Cell Carcinoma”、“Squamous Cell Carcinoma of the Mouth”、“Oral Can?cer”、“Competitive endogenous RNA”、“Diagnosis”。

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

需同時滿足以下6 項標(biāo)準(zhǔn)則可納入：①lncRNA 的表達(dá)與口腔鱗狀細(xì)胞癌診斷價值具有相關(guān)性的病例對照研究；②病例組為經(jīng)組織病理學(xué)診斷為OSCC的組織標(biāo)本或血液標(biāo)本，患者的年齡、性別、種族均不限，對照組選擇為診斷為OSCC 患者的癌旁正?？谇火つそM織標(biāo)本或健康人群的正常口腔黏膜組織標(biāo)本或血液標(biāo)本；③OSCC 標(biāo)本均需在患者手術(shù)、放化療及使用抗腫瘤藥物之前采集；④每篇文獻(xiàn)OSCC樣本例數(shù)及對照組樣本例數(shù)均不少于20 例；⑤文獻(xiàn)臨床數(shù)據(jù)資料完整，可直接提取診斷相關(guān)的四格表的指標(biāo)或可通過靈敏度、特異度計算出四格表指標(biāo)；⑥文獻(xiàn)語言為中文或英文。具有以下1項標(biāo)準(zhǔn)者則予排除：①具有重復(fù)臨床數(shù)據(jù)的文獻(xiàn)；②無法獲取全文或數(shù)據(jù)不完整、有誤的文獻(xiàn)；③OSCC 樣本例數(shù)及對照組樣本例數(shù)少于20 例的文獻(xiàn)；④講座、綜述等文獻(xiàn)。

1.3 資料提取及偏倚風(fēng)險評估

由2 名作者分別獨立進(jìn)行文獻(xiàn)檢索，閱讀標(biāo)題及摘要初篩符合研究主題的文獻(xiàn)。然后按標(biāo)準(zhǔn)篩選文獻(xiàn)，提取文獻(xiàn)的相關(guān)內(nèi)容，內(nèi)容包括納入文獻(xiàn)基本信息如作者信息、文獻(xiàn)發(fā)表年份，研究對象lncRNA類型、對照組來源、樣本來源、lncRNA 表達(dá)量檢測方法等及可直接或間接獲取四格表指標(biāo)的數(shù)據(jù)，對比及核對提取的信息及數(shù)據(jù)，若納入意見存在分歧時則研究討論決定文獻(xiàn)是否可納入。兩名作者采用診斷性研究的質(zhì)量表評價工具QUADAS-2從病例的選擇、待評價試驗、金標(biāo)準(zhǔn)、病例流程和進(jìn)度情況四個方向，共14 個條目根據(jù)所納入文獻(xiàn)信息進(jìn)行“是”、“否”、“不確定”的回答，進(jìn)而根據(jù)回答占比來評估文獻(xiàn)偏倚風(fēng)險[8]。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理

首先通過計算Spearman相關(guān)系數(shù)來評估是否存在閾值效應(yīng)，然后使用STATA 15.0 繪制雙變量箱式圖來評估是否存在異質(zhì)性，通過Q檢驗及I2值來分析所納入的研究是否存在非閾值效應(yīng)。若存在統(tǒng)計學(xué)異質(zhì)性，采用隨機(jī)效應(yīng)模型合并效應(yīng)量，計算合并靈敏度、合并特異度、陽性似然比（positive likelihood ratio，PLR）、陰性似然比（negative likelihood ratio，NLR）、診斷比值比（di?agnostic odds ratio，DOR）等數(shù)據(jù)，繪制匯總受試者工作特 征 曲 線（summary receiver operating characteristic，SROC）并計算曲線下面積（area under curve，AUC）等相關(guān)評估數(shù)據(jù)來評估lncRNA診斷的OSCC價值。反之，則采用固定效應(yīng)模型。通過觀察漏斗圖中納入的研究在回歸線兩側(cè)分布情況及進(jìn)行秩和相關(guān)檢驗來分析評估研究是否存在發(fā)表偏倚。

2 結(jié)果

2.1 文獻(xiàn)檢索結(jié)果

按檢索策略初步檢索獲得641 篇相關(guān)文獻(xiàn)，閱讀標(biāo)題及摘要后初步篩選得到468 篇相關(guān)文獻(xiàn)，然后通讀全文，按制定的要求最終共納入了9篇文獻(xiàn)，累計病例組828例，對照組589例。

2.2 納入文獻(xiàn)特征

納入文獻(xiàn)的基本特征見表1，納入的9篇研究均為病例-對照研究，且病例組均經(jīng)組織病理學(xué)診斷為OS?CC，研究均采用RT-qPCR 或ISH 檢測了lncRNA 的表達(dá)量。納入的文獻(xiàn)中1篇研究偏倚風(fēng)險為不清楚，其余為低風(fēng)險。

表1 納入研究資料的基本特征Table 1 Basic features of included research data

2.3 異質(zhì)性檢驗及亞組分析

首先利用納入研究的9篇文獻(xiàn)的數(shù)據(jù)對靈敏度對數(shù)和（1-特異度）對數(shù)進(jìn)行Spearman分析探究有無閾值效應(yīng)，Spearman相關(guān)系數(shù)是0.267，P=0.488（P＞0.05），這提示納入的研究不存在閾值效應(yīng)導(dǎo)致異質(zhì)性的可能性。繪制雙變量箱式圖，有3 組數(shù)據(jù)落于箱式圖圈外，這提示納入的研究間存在異質(zhì)性，見圖1。然后，使用STATA 15.0 軟件分析時顯示Q 值為23.440（P<0.05），I2＞75%，因此可認(rèn)為本研究納入的9 篇文獻(xiàn)間由非閾值效應(yīng)導(dǎo)致的異質(zhì)性較顯著。本研究針對對照組來源于健康人群或OSCC正常組織、檢測樣本來源于血液或組織及檢測方法是RT-PCR 或ISH 的不同分組進(jìn)行亞組分析來探究異質(zhì)性的主要來源，分析結(jié)果見表2，對照組來源為健康人群與0SCC 患者癌旁正常黏膜組織的合并靈敏度為（0.81vs0.72）；檢驗樣本來源結(jié)果顯示血液來源合并靈敏度為0.81，組織來源合并靈敏度為0.72；RT-qPCR 檢測方法的靈敏度可能優(yōu)于ISH（0.80vs0.60），以上結(jié)果發(fā)現(xiàn)可能用RT-qPCR 方法檢測0SCC患者lncRNA表達(dá)水平可能更靈敏。

圖1 雙變量箱式圖Figure 1 Bivariate box diagram

2.4 Meta分析結(jié)果

meta 分析結(jié)果顯示合并靈敏度、合并特異度、PLR、NLR、DOR 分別為0.76（95%CI：0.67，0.83）、0.77（95%CI：0.70，0.83）、3.4（95%CI：2.5，4.5）、0.31（95%CI：0.22，0.43）、11（95%CI：6，19），繪制匯總受試者工作特征曲線（SROC）并計算AUC 為0.83（95%CI：0.80，0.86），這些結(jié)果表明lncRNA對OSCC具有一定程度的診斷價值（見圖2～5）。

圖2 lncRNA診斷口腔鱗狀細(xì)胞癌的靈敏度和特異度Figure 2 Sensitivity and specificity of lncRNA in the diagnosis of OSCC

圖3 lncRNA診斷口腔鱗狀細(xì)胞癌的陽性和陰性似然比Figure 3 Positive and negative likelihood ratio of lncRNA in the diagnosis of OSCC

圖4 lncRNA診斷口腔鱗狀細(xì)胞癌的診斷分?jǐn)?shù)和診斷比值比Figure 4 Diagnostic score and diagnostic odds ratio of lncRNA in the diagnosis of OSCC

圖5 lncRNA診斷口腔鱗狀細(xì)胞癌的SROC曲線Figure 5 SROC curve of lncRNA in diagnosis of OSCC

2.5 發(fā)表偏倚

通過Deek’s 漏斗圖評估納入的文獻(xiàn)時，發(fā)現(xiàn)納入的9項研究在回歸線兩側(cè)分布較對稱，秩相關(guān)檢驗P＝0.33（P＞0.05），提示該研究納入的9 篇文獻(xiàn)不存在發(fā)表偏倚（圖6）。

圖6 Deek’s漏斗圖Figure 6 Deek's funnel diagram

3 討論

口腔鱗狀細(xì)胞癌在口腔癌中占的比例超過90%，由于其發(fā)病率及死亡率均較高，因此探究如何提高診斷率和如何改善治療的方法是目前醫(yī)學(xué)領(lǐng)域研究的熱點[18]。在國內(nèi)外的許多研究中均發(fā)現(xiàn)多種腫瘤如肺癌、膀胱癌、口腔癌等的癌組織中的lncRNA表達(dá)水平與其癌旁正常組織相比存在一定程度上的差異性[19-21]。這種差異表達(dá)可能在轉(zhuǎn)錄水平，轉(zhuǎn)錄后水平及表觀遺傳水平等多個方面發(fā)揮作用進(jìn)而影響腫瘤的細(xì)胞周期及細(xì)胞學(xué)行為，并以此來調(diào)控腫瘤細(xì)胞的增殖、侵襲和遷移，從而影響腫瘤的發(fā)展[22]。分析lncRNA 在癌癥及其癌旁組織中的差異表達(dá)，對于發(fā)現(xiàn)新的癌癥診斷指標(biāo)及改善治療方法具有重要意義[23]。如有研究表明OSCC組織中l(wèi)ncRNA MALAT1 的表達(dá)水平明顯高于其癌旁正常組織，與此同時，研究發(fā)現(xiàn)siRNA抑制MALAT1的表達(dá)可導(dǎo)致SCC4 細(xì)胞凋亡增加，增殖及遷移受到抑制。這提示高表達(dá)的MALAT1 可促進(jìn)癌細(xì)胞的分化增殖、侵襲轉(zhuǎn)移等生物學(xué)行為，而在癌細(xì)胞凋亡方面發(fā)揮著抑制作用[24]，有研究通過分析乳腺癌血漿外泌體MALAT1表達(dá)量，證實了MALAT-1可能成為診斷乳腺癌的一個潛在性生物學(xué)標(biāo)志物[25]。目前不少研究發(fā)現(xiàn)，lncRNA 作為競爭性RNA（ceRNA），可與miRNA 及mRNA 構(gòu)成網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)，并在靶基因的調(diào)控上發(fā)揮著重要作用，lncRNA在腫瘤的各種生物學(xué)行為過程中都扮演著至關(guān)重要的角色[26-27]。在OSCC 中l(wèi)ncRNA CASC9，lncRNA CASC9 可通過下調(diào)miR-545-3p，上調(diào)LAMC2表達(dá)，促進(jìn)OSCC 細(xì)胞增殖及遷移[28]。在OSCC 中l(wèi)n?cRNA可作為ceRNA參與調(diào)控9條重要的轉(zhuǎn)錄通路，比如可通過趨化因子信號通路、MAPK 信號通路等調(diào)控OSCC 腫瘤的進(jìn)展[29]。lncRNA CCAT1、FTH1P3 等在OS?CC 細(xì)胞中均高表達(dá)，并且均可通過激活癌組織中WNT/β-catenin通路促進(jìn)癌細(xì)胞增殖、遷移和侵襲[30-31]；lncRNA BANCR 在OSCC 細(xì)胞中高表達(dá)，研究發(fā)現(xiàn)BANCR 可調(diào)控MAPK 信號通路在OSCC 細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲上發(fā)揮促進(jìn)作用[32]。以上研究表明通過調(diào)控組織中l(wèi)ncRNA 的表達(dá)水平及在lncRNA/ceRNA/miRNA網(wǎng)絡(luò)中尋找合適的免疫治療靶點對于治療OS?CC具有一定的價值。

為了深入探討lncRNA 在OSCC 中的診斷價值，本研究應(yīng)用meta分析進(jìn)行了定量評價，結(jié)果顯示lncRNA診斷OSCC 的合并靈敏度、合并特異度、PLR、NLR、DOR分別為0.76、0.77……提示基于lncRNA具有診斷OSCC的潛在價值；AUC為0.83，說明lncRNA用于診斷OSCC 具有較高的準(zhǔn)確性。然而，本研究仍存在一定的局限性，如本次研究按照納入及排除標(biāo)準(zhǔn)，最終納入文獻(xiàn)數(shù)量較少，并且樣本量也不大，在一定程度上會降低結(jié)果的可靠性，并且缺少關(guān)于各種lncRNA 對OSCC 診斷價值高低的比較。

4 結(jié)論

lncRNA對OSCC診斷價值評定顯示出較高的靈敏度和特異度，因此在臨床工作中，檢測和調(diào)控患者ln?cRNA 的表達(dá)情況對于診斷和治療OSCC 可能具有一定的臨床意義。然而，lncRNA 在OSCC 的診斷、治療及預(yù)后等方面若要達(dá)到更大的突破及廣泛的應(yīng)用，還需要醫(yī)學(xué)科研者更加深入、全面系統(tǒng)的進(jìn)行實驗研究，從而提供更多高質(zhì)量的數(shù)據(jù)和可靠的結(jié)果來進(jìn)行補(bǔ)充和完善。

（利益沖突：無）