哈茨木霉和葡萄座腔菌對(duì)亞甲基藍(lán)染料的脫色試驗(yàn)初報(bào)

魏鴻錦 吳林應(yīng) 尚曉靜 侯瑞

摘 要 以女貞樹樹干上分離、純化得到的哈茨木霉Trichoderma harzianum菌株（B7）和從楊樹樹干上分離、純化得到的葡萄座腔菌Botryosphaeria dothidea菌株（N38）為對(duì)象。研究了2種菌株產(chǎn)生的3種木質(zhì)素降解酶：漆酶（laccase，Lac）、木質(zhì)素過氧化物酶（lignin peroxidase，LiP）和錳過氧化物酶（manganese peroxidase，MnP）的活性。結(jié)果顯示，B7在培養(yǎng)第6 d時(shí)Lac活性最大，達(dá)到13.3 U·L-1，同時(shí)MnP活性也達(dá)到11.29 U·L-1，LiP在培養(yǎng)第8 d活性達(dá)到峰值為5.24 U·L-1;N38在培養(yǎng)第8 d時(shí)MnP活性最大，達(dá)到16.53 U·L-1，同時(shí)Lac活性也達(dá)到9.27 U·L-1，LiP在培養(yǎng)第6 d活性達(dá)到峰值為5.24 U·L-1。通過染料固體培養(yǎng)基進(jìn)行預(yù)脫色篩選，發(fā)現(xiàn)2個(gè)菌株對(duì)亞甲基藍(lán)脫色效果最佳。菌株B7對(duì)亞甲基藍(lán)的脫色優(yōu)化結(jié)果為20.0 g·L-1葡萄糖、1.0 g·L-1硝酸鈉、1.0 g·L-1硫酸鋅、pH3.0、裝液量10.0 mL;菌株N38對(duì)亞甲基藍(lán)的脫色優(yōu)化結(jié)果為20.0 g·L-1葡萄糖、1.0 g·L-1氯化銨、1.0 g·L-1硫酸鎂、pH7、裝液量30.0 mL。

關(guān)鍵詞 哈茨木霉;葡萄座腔菌;亞甲基藍(lán);脫色優(yōu)化;木質(zhì)素降解酶

中圖分類號(hào)：Q948.12+2.3 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A DOI：10.19415/j.cnki.1673-890x.2022.07.019

亞甲基藍(lán)（Methylene blue）是一種噻嗪類染料，已被廣泛應(yīng)用于紡織品和紙張的染色。其污水已被證實(shí)可引發(fā)多種疾病，如休克、黃疸、組織壞死、嘔吐、眼灼傷、惡心、頭暈等[1]。因此，如何高效處理染料廢水，已成為全世界關(guān)注的主要問題之一[2]。目前處理染料廢水的方法主要分為物理法、化學(xué)法和生物法3類[3]。其中生物法運(yùn)行成本低，綠色環(huán)保，具有較大的研究價(jià)值?，F(xiàn)有研究顯示，具有脫色染料功能的生物有細(xì)菌、真菌和藻類等[4]。楊春霖研究發(fā)現(xiàn)黃絲衣霉菌（Byssochlamys Fulva）對(duì)亞甲基藍(lán)染料廢水具有良好的脫色效果[5];張桐等人研究的一栓孔菌ZT-197（Trametes versicolor）對(duì)亞甲基藍(lán)染液的脫色率高達(dá)98%[6]。

木質(zhì)素降解酶作用是生物脫色的主要機(jī)制，木質(zhì)素降解酶包括：漆酶（laccase，Lac）、木質(zhì)素過氧化物酶（lignin peroxidase，LiP）和錳過氧化物酶（manganese peroxidase，MnP）[7]。漆酶具有較強(qiáng)的氧化還原能力，可對(duì)多種染料進(jìn)行脫色[8]，木質(zhì)素過氧化物酶和錳過氧化物酶是兩種常見的過氧化物酶，能夠有效分解木質(zhì)素和多種有機(jī)物[9]。木霉菌是目前產(chǎn)纖維素酶量最高的菌株，能夠有效降解纖維素[10-11]。有效利用纖維素酶，將纖維素轉(zhuǎn)化成人類可利用的能源十分重要[12]。

本試驗(yàn)從女貞樹樹干上分離得到菌株B7，從楊樹樹干上分離得到菌株N38，并對(duì)其進(jìn)行固體脫色篩選。菌株B7、N38對(duì)孔雀石綠、亞甲基藍(lán)的脫色效果均為明顯。在進(jìn)行固體培養(yǎng)基脫色篩選時(shí)，兩株菌株在添加孔雀石綠染料的培養(yǎng)基里生長速度明顯慢于其他染料培養(yǎng)基，因此選擇對(duì)亞甲基藍(lán)進(jìn)行脫色優(yōu)化試驗(yàn)。

1 ?材料與方法

1.1 ?材料與儀器

1.1.1 ?菌株

N38、B7菌株均來源于貴州大學(xué)校園內(nèi)楊樹、女貞樹枝干，通過真菌分離法獲得，于4 ℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.1.2 ?培養(yǎng)基

PD培養(yǎng)基：馬鈴薯200 g，蒸餾水1 000 mL;PDA培養(yǎng)基：馬鈴薯200 g、葡萄糖20 g、瓊脂18 g、一次蒸餾水1 000 mL;PDB培養(yǎng)基：馬鈴薯200 g、葡萄糖20 g、蒸餾水1 000 mL;碳源篩選培養(yǎng)基：添加可溶性淀粉、麥芽糖、葡萄糖、麥芽糖、果糖作為碳源，分別添加20 g·L-1至PD培養(yǎng)基中，pH未調(diào)節(jié);氮源篩選培養(yǎng)基：添加硝酸鈉、氯化銨、硫酸銨、蛋白胨、尿素作為氮源，分別添加1.0 g·L-1至PDB培養(yǎng)基中，pH未調(diào)節(jié);金屬源篩選培養(yǎng)基：添加硫酸鋅、硫酸鉀、硫酸鐵、硫酸鎂、硫酸錳作為金屬源，分別添加1.0 g·L-1至PDB培養(yǎng)基中，pH未調(diào)節(jié)。

1.1.3 ?染料與試劑

活性染料：活性黑、活性紅;堿性染料：孔雀石綠、亞甲基藍(lán)、剛果紅、結(jié)晶紫;酸性染料：鉻黑T。次氯酸鈉溶液、無水乙醇、75%酒精、蒸餾水。

1.2 ?方法

1.2.1 ?菌株形態(tài)學(xué)鑒定

在超凈工作臺(tái)中，用9 mm的無菌打孔器截取已活化的菌株B7、N38的菌柄至新的PDA固體培養(yǎng)基上，在28 ℃恒溫箱中避光培養(yǎng)，記錄菌落的生長情況（形態(tài)、直徑）[13]。培養(yǎng)6 d后，用光學(xué)顯微鏡進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察、鑒定，參照《真菌鑒定手冊(cè)》[14]。

1.2.2 ?菌株分子生物學(xué)鑒定

提取菌株的DNA時(shí)使用Plant Direct PCR Kit （Finnzymes，F(xiàn)inland）真菌DNA提取試劑盒，通過PCR擴(kuò)增得到引物ITS1和ITS4[15]。并送至重慶擎科興業(yè)生物技術(shù)有限公司進(jìn)行測序。同時(shí)從NCBI獲得相關(guān)可靠的結(jié)果進(jìn)行比對(duì)，利用MEGA7.0對(duì)上述分子序列進(jìn)行多序列比對(duì)，采用MEGA7.0中鄰接法（Neighbor joining，NJ）構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹，并結(jié)合菌株的形態(tài)特征證實(shí)該菌株的物種種類[16]。

1.2.3 ?菌株B7、N38漆酶、木質(zhì)素過氧化物酶和錳過氧化物酶活性測定

將70 mL PDB分別裝入250 mL的三角瓶中，高溫下用低壓的熱蒸汽在每個(gè)滅菌鍋121 ℃下，滅菌30 min后在每個(gè)新的三角瓶內(nèi)分別重新接入4片菌柄（d=9 mm）后并置于每一個(gè)新的三角瓶中，置于28 ℃下的恒溫中心后進(jìn)行一次避光滅菌培養(yǎng)，將第2 d、4 d、6 d、8 d和10 d的發(fā)酵液吸取1.0 mL，再將其進(jìn)行5 min轉(zhuǎn)速為7 000 r·min-1的離心，然后用紫外分光光度計(jì)測定其酶活性。

Lac活性測定[17-18]：將PH值為5的1.95 mL羥基檸檬酸-羥基磷酸氫二鈉緩沖液、1.0 mmol·L-1 2，2′-聯(lián)氮-雙-3-乙基苯并噻唑-6-磺酸[2，2′-azinobis-（3-ethylbenzthiazoline-6-sulphonate），ABTS]和0.05 mL的上清發(fā)酵液置于30℃的電熱水浴中3 min后，測定它在3 min內(nèi)420 nm處的強(qiáng)度吸光劑在照射下的強(qiáng)度及其值的變化改變，每個(gè)測定過程及其中的吸光處理均需要重復(fù)3次。一個(gè)氧化酶的生物活力學(xué)計(jì)量單位（U）被定義為每分鐘可以通過酶催化底物氧化1.0 μmol ABTS底物時(shí)所需酶的總數(shù)量（ABTS：ε420=3.6×104 L·mol-1·cm-1）。

MnP活性測定光劑[18-19]：0.84 mL上清濃度為0.05 mol·L-1的羥基丙二酸鈉鹽水溶液、0.05 mL上清濃度為0.01 mol·L-1的硫酸錳溶液、0.05 mL上清濃度為0.01 mol·L-1的2，6-二甲氧基乙酰苯酚（2，6-dimethoxyphenol，2，6-dmp）、0.05 mL上清濃度發(fā)酵液和0.01 mL上清濃度按照比例測量為0.01 mol·L-1的雙氧水裝入一個(gè)吸光比色皿中，測定1 min內(nèi)468 nm內(nèi)皿處的各種吸光劑在照射下的強(qiáng)度和數(shù)值的活性變化，每個(gè)比色皿中的強(qiáng)度處理均勻后可以同時(shí)重復(fù)3次。一個(gè)氧化酶的整體活力學(xué)計(jì)量單位（U）被定義為每分鐘可以通過催化底物氧化1.0 μmol 2，6-dmp底物的整體所需氧化酶量（2，6-DMP：ε468=4.68×104 L·mol-1·cm-1）。

LiP活性測定[6，18]：將混合后的溶液1.7 mL 濃度相差為0.25mol·L-1的四水合酒石酸鉀鈉溶液和0.05 mL濃度相差為0.1 mol·L-1的藜蘆醇（veratryl alcohol，VA溶液置于30 ℃的水浴中進(jìn)行預(yù)熱后，依次在鍋中加入0.05 mL上清發(fā)酵液和濃度為0.1mol·L-1的0.05 mL雙氧水，測定其在3 min內(nèi)310 nm處吸光光度值的變化，每個(gè)處理均重復(fù)3次。一個(gè)酶的活力學(xué)單位（U）被定義為每分鐘可以通過催化氧化1.0 μmol VA物所需酶量（VA：ε310=9.3×103 L·mol-1·cm-1）。

1.2.4 ?固體培養(yǎng)基脫色篩選

添加50.0 mg·L-1活性紅、活性黑、孔雀石綠、剛果紅、亞甲基藍(lán)、鉻黑T、結(jié)晶紫至PDA培養(yǎng)基中，121 ℃下高溫高壓蒸汽滅菌30 min。在超凈工作臺(tái)中將加入不同染料的PDA（20 mL）倒入直徑90 mm的培養(yǎng)皿中，用9 mm的無菌打孔器截取已活化菌株B7、N38的菌柄至不同染料的PDA固體培養(yǎng)基上，上述操作重復(fù)3次。再做一組不接菌的空白對(duì)照，每個(gè)染料作一組空白對(duì)照（7組）。在28 ℃恒溫培養(yǎng)箱避光培養(yǎng)10 d，根據(jù)接菌組的脫色圈大小及顏色變化與對(duì)照組相比較，計(jì)算菌株B7、N38對(duì)不同染料的脫色率，RD為染料脫色率，A1為脫色圈直徑，A0為對(duì)照組染料區(qū)域直徑，計(jì)算公式為：RD（%）=A1/A0×100[20]。

1.2.5 ?碳源種類對(duì)菌株B7、N38脫色亞甲基藍(lán)的影響

添加麥芽糖、葡萄糖、蔗糖、可溶性淀粉、果糖作為碳源，分別添加20 g·L-1的碳源至染料終質(zhì)量濃度50.0 mg·L-1的PD培養(yǎng)基作為碳源篩選培養(yǎng)基，在100 mL三角瓶中裝入50 mL碳源篩選培養(yǎng)基。以同樣濃度的PD染料培養(yǎng)基作為對(duì)照組。

1.2.6 ?氮源種類對(duì)菌株B7、N38脫色亞甲基藍(lán)的影響

添加硝酸鈉、氯化銨、硫酸銨、蛋白胨、尿素作為氮源，分別添加1.0 g·L-1的氮源至染料終質(zhì)量濃度50.0 mg·L-1的PDB培養(yǎng)基作為氮源篩選培養(yǎng)基，將50 mL氮源篩選培養(yǎng)基裝入100 mL三角瓶中。以同樣濃度的PDB染料培養(yǎng)基作為對(duì)照組。

1.2.7 ?金屬源種類對(duì)菌株B7、N38脫色亞甲基藍(lán)的影響

添加硫酸鋅、硫酸鉀、硫酸鐵、硫酸鎂、硫酸錳作為金屬源，分別添加1.0 g·L-1的金屬源至染料終質(zhì)量濃度50.0 mg·L-1的PDB培養(yǎng)基作為金屬源篩選培養(yǎng)基，將50 mL金屬源篩選培養(yǎng)基裝入100 mL三角瓶中。將同樣濃度的PDB染料培養(yǎng)基作為對(duì)照組。

1.2.8 ?裝液量對(duì)菌株B7、N38脫色亞甲基藍(lán)的影響

將濃度為50.0 mg·L-1 PDB染料培養(yǎng)基分裝90.0 mL、70 mL、50 mL、30 mL、10 mL于100 mL三角瓶瓶中。

1.2.9 ?pH值對(duì)菌株B7、N38脫色亞甲基藍(lán)的影響

將PDB培養(yǎng)基染料濃度調(diào)至50.0 mg·L-1，分別倒入100 mL三角瓶中，高溫高壓蒸汽滅菌30 min。在超凈工作臺(tái)中用已滅菌的過濾器過濾NaOH、HCL，用NaOH、HCL將培養(yǎng)基調(diào)整為pH3、pH5、pH7、pH9、pH11。

1.2.10 ?染料吸光值的測定、脫色率的計(jì)算及數(shù)據(jù)分析

分別取4片菌柄（d=6 mm）于上述三角瓶中，重復(fù)3次。28 ℃恒溫培養(yǎng)箱中避光培養(yǎng)10 d，每2 d在超凈工作臺(tái)中取1.8 mL染料發(fā)酵液，經(jīng)1 2000 r·min-1離心2 min，取1.0 mL上清液于紫外分光光度計(jì)波長為662 nm測量其OD值。液體染料脫色公式為RD=（C0-C1）/C0×100%[17]。C0為未接菌PDB染料培養(yǎng)基的光度值，C1為已接菌的染料發(fā)酵液，RD為液體染料脫色率。

2 ?結(jié)果與分析

2.1 ?菌株N38和B7形態(tài)學(xué)觀察、DNA的提取及ITS系統(tǒng)發(fā)育樹的構(gòu)建

菌株N38和B7于恒溫培養(yǎng)箱中，4 d即可長滿培養(yǎng)皿（見圖1）。提取菌株B7、N38的DNA后，進(jìn)行引物擴(kuò)增得到PCR產(chǎn)物送其測序，構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹（見圖2）。獲得測序結(jié)果后登錄網(wǎng)站GenBank，得到菌株N38的登錄號(hào)MZ461912.1，菌株B7的登錄號(hào)OK021633.1。

2.2 ?漆酶、木質(zhì)素過氧化物酶和錳過氧化物酶的活性變化

培養(yǎng)第2 d開始監(jiān)測菌株N38產(chǎn)酶活性，其酶活性隨時(shí)間的增長呈現(xiàn)先增長再降低的趨勢。Lac活性在第8 d時(shí)達(dá)到峰值，其酶活力為9.27 U·L-1;MnP活性也在第8 d達(dá)到最大值，為16.53U·L-1;而LiP活性在第6 d達(dá)到最大值，為7.66U·L-1（見圖3a）。

培養(yǎng)第2 d開始監(jiān)測菌株B7產(chǎn)酶活性，其酶活性隨時(shí)間的增長呈現(xiàn)先增長再降低的趨勢。Lac活性與MnP活性均在第6 d達(dá)到峰值，其酶活力分別為13.31 U·L-1、11.29 U·L-1;LiP活性在第8 d達(dá)到峰值，為5.24 U·L-1（見圖3b）。

2.3 ?菌株B7、N38對(duì)7種分屬不同類別染料脫色篩選

將菌株接種在添加孔雀石綠、剛果紅、鉻黑T、活性黑、活性紅、結(jié)晶紫、亞甲基藍(lán)的固體染料培養(yǎng)基上。觀察后發(fā)現(xiàn)，菌株B7對(duì)孔雀石綠和亞甲基藍(lán)脫色都很明顯，脫色率分別為92.78%、92.22%，對(duì)剩余染料的脫色率由高到低依次為：結(jié)晶紫（79.22%）、鉻黑T（64.44%）、活性紅（50.00%）、剛果紅（44.44%）、活性黑（41.11%）（見圖4a）;菌株N38對(duì)亞甲基藍(lán)的脫色效果最佳，脫色率為92.78%，對(duì)活性紅、結(jié)晶紫、剛果紅三種染料脫色率相同，均為88.89%，對(duì)剩余染料的脫色率由高到低依次為：孔雀石綠（82.22%）、活性黑（5.00%）、鉻黑T（3.33%）（見圖4b）。

2.4 ?菌株N38、B7脫色亞甲基藍(lán)受碳源種類的影響

脫色第10 d，添加葡萄糖作為碳源時(shí)的脫色效果最好，脫色率達(dá)84.92%;其次果糖與麥芽糖效果較為接近，脫色率分別為73.38%、70.43%;蔗糖和淀粉脫色率略低，依次是68.64%、48.13%。依結(jié)果可見淀粉作為碳源對(duì)N38脫色效果并不佳，與其他碳源差距明顯（見圖5a）。

脫色第10 d，添加葡萄糖作為碳源時(shí)的脫色效果最好，脫色率達(dá)83.01%;果糖、蔗糖與淀粉效果較為接近，脫色率分別為77.99%、70.74%、69.57%;麥芽糖脫色率最低，僅54.66%。結(jié)果顯示麥芽糖作為碳源對(duì)N38脫色效果不佳，與其他碳源差距明顯（見圖5b）。

2.5 ?菌株N38、B7脫色亞甲基藍(lán)受氮源種類的影響

五種氮源中，以氯化銨為氮源的脫色效果最佳，脫色率為93.21%;添加蛋白胨與尿素脫色效果次之，脫色率依次為74.28%、76.12%;添加硫酸銨的脫色率為65.09%;而硝酸鈉添加后脫色效果最差，脫色率為54.34%。綜上所述，添加氯化銨作為氮源對(duì)菌株N38脫色亞甲基藍(lán)效果明顯（見圖6a）。

五種氮源中，以硝酸鈉為氮源的脫色效果明顯，脫色率為80.31%;添加蛋白胨，脫色效果次之，脫色率為75.44%;添加尿素、氯化銨和硫酸銨的脫色效果明顯降低，脫色率依次為：27.17%、25.38%、15.29%。綜上所述，添加硝酸鈉作為氮源對(duì)菌株B7脫色亞甲基藍(lán)效果明顯（見圖6b）。

2.6 ?菌株N38、B7脫色亞甲基藍(lán)受金屬離子種類的影響

鎂離子的添加對(duì)菌株N38脫色亞甲基藍(lán)效果最佳，脫色率為88.80%;其余四種金屬離子脫色效果都較為接近，添加鋅離子、鐵離子、錳離子、鉀離子為金屬源對(duì)菌株N38脫色亞甲基藍(lán)效果十分接近，脫色率分別為78.47%、76.60%、76.21%、71.42%（見圖7a）。

鋅離子的添加對(duì)菌株B7脫色亞甲基藍(lán)效果最佳，脫色率為91.18%;鉀離子、鎂離子脫色效果都較為接近，其脫色率依次是：85.73%、82.78%;添加錳、鐵離子作為金屬源的脫色率較低，依次為69.93%、59.62%（見圖7b）。

2.7 ?菌株N38、B7脫色亞甲基藍(lán)受裝液量的影響

裝液量為30 mL時(shí)，脫色效果最佳，脫色率為99.11%;裝液量為10 mL時(shí)脫色效果也同樣很好，脫色率為95.75%;其余3種裝液量脫色效果隨著裝液量增加，脫色率下降，裝液量為50 mL、70 mL、90 mL時(shí)，脫色率依次為85.01%、65.41%、50.56%。當(dāng)裝液量達(dá)到90 mL時(shí)脫色率明顯低于其余4種裝液量（見圖8a）。

裝液量為10 mL時(shí)，脫色效果最佳，脫色率為90.56%;裝液量為30 mL時(shí)脫色效果略低于10 mL時(shí)，脫色率為86.86%;隨著裝液量增加脫色率不斷下降，裝液量為50 mL、70 mL和90 mL時(shí)，脫色率依次為68.59%、67.07%、31.95%。當(dāng)裝液量達(dá)到90 mL時(shí)，脫色率明顯低于其余4種裝液量（見圖8b）。

2.8 ?菌株N38、B7脫色亞甲基藍(lán)受 pH值的影響

培養(yǎng)基pH值不同，菌株的脫色能力也差異顯著。當(dāng)pH值由3.0增加至5.0時(shí)，脫色效果明顯增加，脫色率由15.88%增加為73.05%;當(dāng)pH值為7時(shí)脫色效果最佳，脫色率為77.99%;隨著pH值繼續(xù)增大時(shí)，脫色率下降趨勢明顯，pH值為9時(shí)脫色率為14.19%;pH值為11時(shí)脫色率為10.22%。綜上所述，菌株N38在極酸極堿的條件下脫色能力差（見圖9a）。

受pH值的影響，菌株的脫色能力也差異顯著。當(dāng)pH值為3.0時(shí)，脫色效果最佳，脫色率為97.30%;而pH值為5時(shí)脫色率為73.99%;當(dāng)pH值為7時(shí)脫色率也，脫色率為93.93%;但隨著pH值繼續(xù)增大時(shí)，脫色率下降趨勢明顯，pH值為9時(shí)脫色率為13.54%;pH值為11時(shí)脫色率為13.03%。綜上所述，菌株N38在極堿的條件下脫色能力差，培養(yǎng)基pH值位于3時(shí)，菌株B7脫色亞甲基藍(lán)能力最強(qiáng)（見圖9b）。

3 ?討論

本試驗(yàn)從貴州大學(xué)校園內(nèi)的女貞樹枝干上分離、純化得到菌株B7，從楊樹樹干上分離、純化得到菌株N38。根據(jù)菌株的形態(tài)學(xué)特征、ITS序列相似性比對(duì)以及進(jìn)化樹分析，鑒定B7為哈茨木霉菌Trichoderma harzianum;N38為葡萄座腔菌Botryosphaeria dothidea。哈茨木霉為半知菌亞門絲孢綱叢梗孢目科木霉屬，廣泛分布于森林生態(tài)系統(tǒng)中，其適應(yīng)性極強(qiáng)，對(duì)多種病原真菌和細(xì)菌都有拮抗作用[21]，是一類重要的生防真菌，廣泛存在于空氣、土壤以及植物體表面等生境中，具有強(qiáng)適應(yīng)力、存在范圍廣和廣譜、高效等優(yōu)點(diǎn)[22]。葡萄座腔菌是一種重要的植物內(nèi)生菌[23]。通過木質(zhì)素過氧化物酶的測定，可知兩菌株具有一定的脫色能力。B7、N38的漆酶、木質(zhì)素過氧化物酶、錳過氧化物酶的酶活峰值出現(xiàn)在6～8 d，與喬喬研究的木質(zhì)素過氧化物酶的酶活峰值為第6～8 d結(jié)果相同[24]。為了研究兩菌株在不同條件下對(duì)亞甲基藍(lán)脫色能力，本試驗(yàn)測定了不同碳源、氮源、金屬離子、pH值和裝液量條件下對(duì)菌株脫色亞甲基藍(lán)的影響。結(jié)果顯示添加葡萄糖作為碳源，菌株N38、B7脫色亞甲基藍(lán)效果最佳，推測菌株N38、B7在添加葡萄糖時(shí)，可促進(jìn)其對(duì)亞甲基藍(lán)脫色。徐紅云在一色齒毛菌的脫色試驗(yàn)中，添加葡萄糖作碳源的脫色效果也最佳[25];添加氯化銨作為氮源，菌株N38脫色效果最佳。菌株B7在添加硝酸鈉作為氮源時(shí)，脫色效果最佳。而一色齒毛菌脫色剛果紅時(shí)，添加硝酸銨作氮源效果最佳[26]，考慮是菌株不同，對(duì)氮源的需求也不同;添加硫酸鎂作為金屬源，菌株N38脫色亞甲基藍(lán)效果最佳。菌株B7在加入鋅離子作為金屬源時(shí)，脫色率高達(dá)91.18%。由此可見，金屬離子是微生物生長中不可或缺的一部分，少量的金屬離子可以促進(jìn)菌株的生長[27];培養(yǎng)基pH值為7時(shí)，菌株N38脫色亞甲基藍(lán)效果最佳。菌株B7在pH值為5的條件下，脫色效果明顯。與周菲結(jié)論相對(duì)應(yīng)，其研究的哈茨木霉脫色活性艷藍(lán)KN-R的最適培養(yǎng)條件為pH值為5.5[28]，推測pH值為5左右時(shí)，最適合哈茨木霉生長;當(dāng)裝液量為10 mL時(shí)，菌株N38、B7脫色亞甲基藍(lán)脫色率均達(dá)到90%以上。隨著裝液量的升高，脫色率逐漸降低，印證了姚英等的結(jié)論：當(dāng)裝液量為10 mL時(shí)，脫色效果最佳，但是在染液量超過菌株自身承載范圍時(shí)，脫色效果大大降低[26]。推測菌株對(duì)染料脫色有一定的能力范圍，因此當(dāng)接菌量一定時(shí)，裝液量越少脫色效果越明顯。葡萄座腔菌在脫色優(yōu)化方面暫無報(bào)道，在生態(tài)發(fā)展的時(shí)代，微生物降解染料廢液備受關(guān)注。綜合本研究結(jié)果，菌株N38、B7可脫色染料亞甲基藍(lán)，這對(duì)染料廢水的治理具有一定借鑒和指導(dǎo)價(jià)值。

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（責(zé)任編輯：敬廷桃）

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收稿日期：2021-12-16

基金項(xiàng)目：黔科合平臺(tái)人才（〔2018〕5781）;貴州大學(xué)州SRT計(jì)劃項(xiàng)目（〔2021〕213）。

作者簡介：魏鴻錦（2000—），男，貴州息烽人，在讀本科生，研究方向?yàn)榱帜静±怼-mail：903369337@qq.com。

*為通信作者，E-mail：jiayouhourui123@163.com。