去白細(xì)胞輸血對(duì)急性白血病患者外周血Th1/Th2細(xì)胞平衡狀況及醫(yī)院感染發(fā)生率的影響

李就文，李婉琴，陳昌達(dá)，賓科梅

暨南大學(xué)附屬第六醫(yī)院輸血科1、檢驗(yàn)科2、血液科3，廣東 廣州 523573

急性白血病是數(shù)量較多的幼稚細(xì)胞及原始細(xì)胞于骨髓中大量存在且會(huì)對(duì)正常造血產(chǎn)生影響的一種疾病，急性白血病患者的緩解率與長期生存率較低[1]。感染是急性白血病常見的合并癥，發(fā)生感染的概率為48.60%～81.60%，感染后極易導(dǎo)致死亡。由于急性白血病合并感染的死亡率介于64.00%～73.00%，感染一旦發(fā)生，就會(huì)使化療延遲或終止，對(duì)療效造成一定影響，同時(shí)使醫(yī)療支出增加[2]。多數(shù)文獻(xiàn)對(duì)急性白血病發(fā)生醫(yī)院感染的危險(xiǎn)因素進(jìn)行分析，主要有白血病類型、化療時(shí)間、缺乏中性粒細(xì)胞程度、伴隨疾病、化療藥物種類、持續(xù)缺乏粒細(xì)胞時(shí)間、年齡、住院時(shí)間等，對(duì)于輸血同急性白血病發(fā)生醫(yī)院感染的關(guān)系分析較少[3]。近幾年，隨著深入研究有關(guān)文獻(xiàn)，有人發(fā)現(xiàn)輸血可對(duì)急性白血病病患的貧血進(jìn)行糾正，使血小板水平得到提升。然而惡性腫瘤的轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)也同輸血息息相關(guān)，也會(huì)導(dǎo)致病患的生存率降低，使創(chuàng)面愈合受到抑制、感染率增加[4]。本研究主要探討去白細(xì)胞輸血對(duì)急性白血病外周血Th1/Th2細(xì)胞平衡狀況及醫(yī)院感染發(fā)生率的影響，現(xiàn)報(bào)道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2018 年3 月至2021 年3 月于暨南大學(xué)附屬第六醫(yī)院治療的36 例急性白血病患者為研究對(duì)象。納入標(biāo)準(zhǔn)：①與《血液病診斷指南》[5]中的診斷標(biāo)準(zhǔn)相符；②短時(shí)間內(nèi)沒有選擇抗凝、免疫調(diào)節(jié)藥物進(jìn)行治療。排除標(biāo)準(zhǔn)：①伴有慢、急性感染者；②慢性白血病。依據(jù)隨機(jī)單雙數(shù)法將患者分為對(duì)照組和觀察組各18例。對(duì)照組中男性7例，女性11例；年齡16～50 歲，平均(28.26±11.83)歲；急性淋巴細(xì)胞白血病8例，急性髓系白血病10例。觀察組中男性6例，女性12例；年齡17～48歲，平均(29.11±11.52)歲；急性淋巴細(xì)胞白血病7 例，急性髓系白血病11 例。兩組患者的基線資料比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，具有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，患者及家屬均知情并簽署同意書。

1.2 治療方法 對(duì)照組患者選擇少白紅細(xì)胞輸血，所輸?shù)难憾际鞘兄行难舅峁?，?0℃的環(huán)境中2 000 r/min離心血清8 min，血漿分離，2 000 r/min離心5 min，離心3 次，去上清液，超過70%的白細(xì)胞的紅細(xì)胞被去除，于24 h之內(nèi)輸注，每次2 U，隔1 d一次。觀察組患者選擇去白細(xì)胞輸血，白細(xì)胞血液是在儲(chǔ)存之前對(duì)白細(xì)胞進(jìn)行濾除，之后含有1.0×105/L～1.0×106/L。輸血標(biāo)準(zhǔn)與《白血病治療學(xué)》[6]內(nèi)關(guān)于輸血的標(biāo)準(zhǔn)相符，血紅蛋白小于60 g/L，選擇濾除白細(xì)胞或濃縮紅細(xì)胞輸注血液制劑，針對(duì)受身體素質(zhì)、疾病耐受性、年齡等影響的病患，需對(duì)血紅蛋白標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行適當(dāng)?shù)姆艑?小于100 g/L)，小于20×109/L的血小板輸注血液是普通血小板或者是去白細(xì)胞的血小板。

1.3 觀察指標(biāo)與檢測方法 (1)外周血Th1/Th2細(xì)胞檢測：輸血1 周后，比較兩組患者外周血Th1/Th2細(xì)胞平衡狀況，包括白介素10 (IL-10)、白介素2(IL-2)、白介素4(IL-4)、干擾素-γ(IFN-γ)、腫瘤壞死因子-α(TGF-α)。全部患者在清晨空腹?fàn)顟B(tài)下采集2 mL外周血，EDTA抗凝后，對(duì)血漿實(shí)施分離，保存于-80℃的環(huán)境中。使用時(shí)一次性解凍標(biāo)本，選擇酶聯(lián)免疫吸附法進(jìn)行檢測。(2)T淋巴細(xì)胞檢測：輸血1周后，比較兩組患者T淋巴細(xì)胞。血樣采集后(2 h之內(nèi))選擇緩沖溶液無菌磷酸鹽(PΒS)對(duì)抗凝血進(jìn)行稀釋，使用淋巴細(xì)胞分離液對(duì)單個(gè)核細(xì)胞進(jìn)行分離，通過細(xì)胞培養(yǎng)液DMEM 對(duì)細(xì)胞濃度進(jìn)行調(diào)整，采集100 μL 細(xì)胞懸液，置入CD3+、CD4+、CD8+的抗體，避光于4℃的環(huán)境中等待30 min，800 r/min轉(zhuǎn)速離心持續(xù)10 min，緩沖液PΒS洗滌兩次，除去上清，緩沖液染色，使用上流式細(xì)胞儀進(jìn)行分析，計(jì)算CD4+/CD8+。(3)醫(yī)院感染發(fā)生率：輸血1周后，比較兩組患者的胃腸道、呼吸道、皮膚、膿毒癥等醫(yī)院感染發(fā)生情況。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS17.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者輸血1 周后的IL-10、IL-2、IL-4、IFN-γ、TGF-α水平比較 輸血1 周后，觀察組患者的IL-10、IL-4、TGF-α明顯低于對(duì)照組，IL-2、IFN-γ明顯高于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見表1。

表1 兩組患者輸血1周后的IL-10、IL-2、IL-4、IFN-γ、TGF-α水平比較(±s)

表1 兩組患者輸血1周后的IL-10、IL-2、IL-4、IFN-γ、TGF-α水平比較(±s)

組別對(duì)照組觀察組t值P值例數(shù)18 18 IL-10(ng/L)33.29±6.30 26.76±5.99 3.187 0.003 IL-2(ng/L)31.53±8.41 38.84±7.36 2.775 0.009 IL-4(ng/L)92.05±10.83 81.83±12.06 2.675 0.012 IFN-γ(ng/L)28.52±5.22 33.18±5.12 2.704 0.011 TGF-α(pg/mL)21.03±3.94 17.49±3.49 2.886 0.007

2.2 兩組患者輸血前后的CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+比較 輸血1 周后，兩組患者的CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+明顯高于輸血前，且輸血1 周后，觀察組患者的CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+明顯高于對(duì)照組，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見表2。

表2 兩組患者輸血前后的CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+比較(±s)

表2 兩組患者輸血前后的CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+比較(±s)

注：與本組輸血前比較，aP＜0.05。

組別對(duì)照組觀察組t值P值例數(shù)18 18輸血前45.31±3.98 45.87±3.88 0.427 0.672輸血1周53.22±2.41a 57.85±2.95a 5.157 0.001輸血前24.06±1.51 24.38±1.47 0.644 0.524輸血1周28.84±1.29a 31.03±1.73a 4.306 0.001輸血前21.42±1.88 20.99±1.62 0.735 0.468輸血1周23.26±1.46a 24.87±1.48a 3.286 0.002輸血前1.11±0.09 1.13±0.10 0.631 0.533輸血1周1.19±0.11a 1.33±0.13a 3.488 0.001 CD3+(%) CD4+(%) CD8+(%) CD4+/CD8+

2.3 兩組患者的醫(yī)院感染發(fā)生情況比較 觀察組患者的醫(yī)院感染發(fā)生率為33.33%，明顯低于對(duì)照組的61.11%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=4.000，P=0.046＜0.05)，見表3。

表3 兩組患者醫(yī)院感染發(fā)生情況比較(例)

3 討論

急性白血病是骨髓造血系統(tǒng)失常而導(dǎo)致的一種疾病，由于此病病患有普遍較低的免疫系統(tǒng)功能，醫(yī)院感染極易發(fā)生[7]。除此之外，病原菌通常有泛耐藥性或多重耐藥性等特征，普通的抗感染治療療效差，會(huì)進(jìn)一步加重病情，延長病患的住院時(shí)間，嚴(yán)重時(shí)還能對(duì)化療產(chǎn)生影響，使遠(yuǎn)期效果降低，進(jìn)而對(duì)病患的生命安全產(chǎn)生威脅[8]。

相關(guān)研究表明，血液內(nèi)包含白細(xì)胞會(huì)導(dǎo)致輸血過程中發(fā)生諸多不良事件，像發(fā)熱性非溶血性的輸血反應(yīng)、輸血有關(guān)的免疫抑制、激活潛伏病毒、親白細(xì)胞的病毒傳播、輸血有關(guān)移植物宿主疾病等不良事件[9]。特別是輸血會(huì)導(dǎo)致腫瘤患者的人體免疫功能與預(yù)防降低，其影響得到了臨床醫(yī)學(xué)、基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)的高度關(guān)注。IFN-γ是在抗原刺激的作用下經(jīng)過CD4+細(xì)胞早期的生產(chǎn)及CD8+后期的生產(chǎn)而具有多種活性的一種糖蛋白，可以誘導(dǎo)Th0轉(zhuǎn)變?yōu)門h1，生產(chǎn)數(shù)量較多的活化效應(yīng)細(xì)胞與細(xì)胞毒性T 細(xì)胞，有利于抑制病原菌生長與繁殖進(jìn)行抑制，也可以通過活化巨噬細(xì)胞，上調(diào)其表面主要組織的相容性復(fù)合體-1等分子的表達(dá)，進(jìn)而產(chǎn)生一氧化氮合酶(誘導(dǎo)型)，使巨噬細(xì)胞氧非依賴性與依賴性殺菌系統(tǒng)被激活，同時(shí)對(duì)巨噬細(xì)胞殺傷胞內(nèi)病原菌實(shí)施誘導(dǎo)，IFN-γ可以使T細(xì)胞的作用增強(qiáng)，進(jìn)而有效發(fā)揮自身的作用，形成良性正反饋機(jī)制，有利于人體感染免疫應(yīng)答的增強(qiáng)，最終阻斷感染、預(yù)防炎癥反應(yīng)加重[10]。與CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+比值相結(jié)合，顯示選擇去白細(xì)胞輸血病患的CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+都比少白紅細(xì)胞病患高，提示去白細(xì)胞輸血可以有效降低病患的免疫抑制作用，防止了由于輸血導(dǎo)致的醫(yī)院感染。由于血液內(nèi)的白細(xì)胞包含MHCII類、Β細(xì)胞表面抗原，它們可以造成免疫抑制，同時(shí)白細(xì)胞能發(fā)揮凝集素功能，促使白細(xì)胞在血管中凝集，極易形成肺血管內(nèi)栓子引發(fā)肺水腫，最終形成感染[11-12]。

Th 細(xì)胞按照細(xì)胞因子分泌的類型可以區(qū)分為Th2 與Th1 細(xì)胞亞群，Th2 主要有IL-10、IL-4、TNF-α等因子，對(duì)體液免疫進(jìn)行介導(dǎo)，抑制細(xì)胞免疫，同時(shí)誘導(dǎo)Th2細(xì)胞形成，Th1主要有IL-2、IFN-γ等，其對(duì)細(xì)胞免疫應(yīng)答進(jìn)行介導(dǎo)，同時(shí)誘導(dǎo)前體Th細(xì)胞轉(zhuǎn)化為Th1細(xì)胞[13]。IL-2 會(huì)增加淋巴細(xì)胞黏附分子的表達(dá)，進(jìn)而殺傷腫瘤細(xì)胞，IFN-γ能夠激活巨噬細(xì)胞，增強(qiáng)T細(xì)胞介導(dǎo)后的細(xì)胞免疫，發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤功能[14]。IL-4發(fā)揮促使Th細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)門h2細(xì)胞的功能，是活化Th2 細(xì)胞的關(guān)鍵因素，IL-10 抑制淋巴細(xì)胞黏附分子、TH1 細(xì)胞、巨噬細(xì)胞，防止它們生產(chǎn)細(xì)胞因子，加強(qiáng)抑制毒性淋巴細(xì)胞發(fā)出的抗原提呈、細(xì)胞毒功能[15]。于人體抗腫瘤的免疫作用中，細(xì)胞免疫的一種重要方式就是細(xì)胞介導(dǎo)，Th1/Th2 細(xì)胞失衡可以導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞逃逸，因?yàn)門h1/Th2細(xì)胞失衡能降低毒性淋巴細(xì)胞，促進(jìn)腫瘤于宿主內(nèi)的增殖，使腫瘤的發(fā)生概率增大[16]。

綜上所述，去白細(xì)胞輸血應(yīng)用于急性白血病患者能使外周血Th1/Th2 細(xì)胞失衡狀況得到顯著改善，提高機(jī)體免疫水平，降低醫(yī)院感染發(fā)生率，值得臨床推廣應(yīng)用。