2019年河南新鄉(xiāng)某規(guī)?；i場(chǎng)豬偽狂犬病抗體水平檢測(cè)分析

饒丹

（信陽(yáng)農(nóng)林學(xué)院牧醫(yī)工程學(xué)院，河南信陽(yáng) 464000）

豬偽狂犬?。╬orcine pseudorabies,PR）是由偽狂犬病病毒感染引起的以發(fā)熱、流產(chǎn)、死胎等主要臨床癥狀表現(xiàn)的一種急性傳染病[1]。豬偽狂犬病病毒（Pseudorabies virus,PRV）屬于皰疹病毒科（Herpesviridae）、α-皰疹病毒亞科[2]。豬被偽狂犬病病毒感染后會(huì)引起不同的臨床癥狀，包括種豬的繁殖障礙、產(chǎn)死胎、木乃伊胎、弱胎等，主要表現(xiàn)癥狀有共濟(jì)失調(diào)、抽搐，嚴(yán)重的還可能會(huì)突然死亡[3]。保育豬感染豬偽狂犬病病毒會(huì)有幾種主要的臨床表現(xiàn)，典型的有神經(jīng)癥狀、食欲不振、嘔吐不止、高溫發(fā)熱等[4]。其他動(dòng)物也能夠感染PRV，其中豬是偽狂犬病病毒的儲(chǔ)存宿主，健康豬接觸后會(huì)感染此病。自然狀態(tài)下該病的傳播不受季節(jié)影響，一年四季都會(huì)出現(xiàn)，一般養(yǎng)殖場(chǎng)感染豬偽狂犬病病毒會(huì)出現(xiàn)在產(chǎn)仔高峰期，除了豬可以感染外，其他多種禽類也會(huì)感染，嚴(yán)重的甚至可能會(huì)傳播給人。在養(yǎng)殖場(chǎng)病豬、帶毒豬和各種鼠類是主要傳染源[5]。懷孕母豬感染豬偽狂犬病毒后，產(chǎn)生的病毒會(huì)通過(guò)胎盤垂直傳播給仔豬，哺乳期母豬感染病毒1周后會(huì)產(chǎn)生大量帶病毒的乳汁，導(dǎo)致仔豬哺乳時(shí)被感染，最終導(dǎo)致死亡。15日齡內(nèi)的初生仔豬若感染病毒，其發(fā)病率可達(dá)98%，致死率則達(dá)100%[6]。

豬偽狂犬病的傳播速度快、傳染范圍廣，對(duì)養(yǎng)豬行業(yè)造成了巨大的影響，并且危害著豬群的健康成長(zhǎng)，給養(yǎng)豬業(yè)帶來(lái)了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。為了有效的控制該病，需要對(duì)病豬的臨床癥狀及病理學(xué)特征進(jìn)行科學(xué)的分析，并且采取相應(yīng)的措施，針對(duì)性防治。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

血清全部來(lái)自河南新鄉(xiāng)某規(guī)模化豬場(chǎng)的豬群，該豬場(chǎng)應(yīng)用的疫苗為豬偽狂犬疫苗。母豬接種gE缺失弱毒疫苗，免疫程序?yàn)?月份、8月份肌肉注射，5月份、11月份肌肉注射弱毒疫苗＋滅活疫苗，2 mL/頭份。育肥豬在56日齡肌肉注射gE缺失弱毒疫苗，1頭份，84日齡肌注接種gE缺失弱毒疫苗，1頭份，112日齡肌注接種滅活疫苗，1頭份。分別在豬免疫豬偽狂犬病疫苗21 d后從豬的前腔靜脈采集血樣，檢測(cè)抗體。

1.2 試驗(yàn)方法

試驗(yàn)采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)對(duì)受免豬群的抗體水平進(jìn)行評(píng)估，檢測(cè)試劑盒為北京愛(ài)德士元亨生物科技有限公司的HerdChek PRV-gE檢測(cè)試劑盒。所有試劑在使用前一律恢復(fù)至室溫。不同試劑盒中的試劑不得混用。試劑使用前應(yīng)先搖勻，使用后冷藏。具體檢測(cè)操作步驟如下。

⑴試驗(yàn)前所有試劑應(yīng)回溫至室溫18～25℃。給每個(gè)微量條貼標(biāo)簽編碼。

⑵分別設(shè)2孔陰性對(duì)照、2孔陽(yáng)性對(duì)照，包被有PRV抗原的孔內(nèi)分別加入100 μL陽(yáng)性對(duì)照血清（試劑A）和100 μL陰性對(duì)照血清（試劑B），陰性孔標(biāo)記為A1A、B1A；陽(yáng)性孔標(biāo)記為C1A、D1A。

⑶于選定的包被有PRV抗原的孔內(nèi)加入100 μL未稀釋的血清樣本，重復(fù)試驗(yàn)。

⑷將微量板（條）密封后，置于37℃條件下孵育1h。

⑸以PBS-Tween緩沖液將微量板（條）洗滌3次。每次洗滌應(yīng)將孔充滿、瀝干水分，叩板以除去全部液體。

⑹每孔中加入100 μL交聯(lián)物溶液，將微量板密封后于37℃條件下孵育30 min。并重復(fù)第（5）步。

⑺每孔中加入100 μL底物溶液，并于室溫條件下（18～25℃）孵育15 min。第1孔加入后開(kāi)始計(jì)時(shí)。

⑻每孔中加入50 μL終止液，混合均勻，終止反應(yīng)。終止液加入的順序應(yīng)按第（7）步加入底物溶液的順序。

⑼于酶標(biāo)儀讀取對(duì)照試劑和試驗(yàn)樣本的光密度值（OD450nm），空氣作空白對(duì)照。在加入終止液后15 min內(nèi)讀取OD值，避免OD值的波動(dòng)。

2 結(jié)果與分析

2.1 妊娠期母豬偽狂犬gE抗體檢測(cè)結(jié)果與分析

由表1可知，在母豬妊娠前期，其豬偽狂犬gE病毒抗體的陽(yáng)性率為90%，妊娠中期和后期陽(yáng)性率為100%。gE抗體陽(yáng)性率、gE抽檢率均達(dá)90%以上，說(shuō)明豬場(chǎng)妊娠母豬野毒感染嚴(yán)重。

表1 妊娠母豬偽狂犬病毒gE抗體抽檢情況

2.2 哺乳期仔豬偽狂犬病毒gE抗體檢測(cè)結(jié)果與分析

由表2可知，新生仔豬和斷奶仔豬的豬偽狂犬病毒gE抗體陽(yáng)性率均為100%，很可能是母源抗體通過(guò)胎盤進(jìn)行了垂直傳播。

表2 初生仔豬偽狂犬gE抗體抽檢情況

2.3 保育期和育肥期豬偽狂犬病毒gE抗體檢測(cè)結(jié)果與分析

由3可知，5～6周齡保育豬豬偽狂犬病毒gE抗體的陽(yáng)性率為70%，7～8周保育豬的陽(yáng)性率為50%，9～10周育肥豬的陽(yáng)性率為40%。說(shuō)明隨著仔豬日齡的增長(zhǎng)，豬偽狂犬病毒抗體陽(yáng)性率逐漸降低，最低降至陽(yáng)性率40%。豬偽狂犬病毒gE抗體下降的原因主要有2個(gè)：一是母源gE抗體在100 d后開(kāi)始減少；二是野毒感染確實(shí)得到有效控制，首免效果較好。

表3 育肥豬偽狂犬gE抗體抽檢情況

3 討論

豬偽狂犬病仍然是我國(guó)規(guī)?；i場(chǎng)當(dāng)前的主要疫病之一，豬一旦感染PRV就會(huì)終身帶毒，且給豬場(chǎng)帶來(lái)疫病隱患[7]?？茖W(xué)地引種是豬偽狂犬病防控的關(guān)鍵，引種同時(shí)也要綜合考慮種豬的健康情況、質(zhì)量等因素。同時(shí)，在引種時(shí)一定要做好生物安全防控，防止致病菌通過(guò)飼料、人員、生產(chǎn)運(yùn)送等環(huán)節(jié)進(jìn)入豬場(chǎng)[8]。豬偽狂犬病沒(méi)有有效的治療藥物，主要防治手段是注射豬偽狂犬病毒基因缺失苗。給健康豬注射豬偽狂犬病毒基因缺失苗后不會(huì)產(chǎn)生缺失蛋白抗體，因此，可以使用缺失蛋白的特性建立相對(duì)血清學(xué)檢測(cè)，以達(dá)到將野毒感染豬只和基因缺失苗免疫豬群區(qū)分開(kāi)來(lái)[9]。目前，我國(guó)使用的豬偽狂犬疫苗主要是gE基因缺失苗，應(yīng)用gE基因缺失苗免疫，僅通過(guò)血清學(xué)檢測(cè)就可以淘汰帶毒豬，進(jìn)而達(dá)到凈化豬場(chǎng)的目的，該方法有利于規(guī)模化豬場(chǎng)開(kāi)展豬偽狂犬病的凈化工作[10]。

對(duì)河南新鄉(xiāng)規(guī)模化豬場(chǎng)豬偽狂犬疫苗接種情況進(jìn)行分析，PRV-gE抗體檢測(cè)結(jié)果顯示，母豬妊娠中期和后期、仔豬哺乳期的豬偽狂犬病野毒感染最為嚴(yán)重，達(dá)到了100%，該階段豬可能由于感染外界病毒導(dǎo)致群體發(fā)病。豬保育期和育肥期偽狂犬病毒抗體水平下降，表明隨著豬日齡的增長(zhǎng)、抗病力不斷增強(qiáng)，豬偽狂犬野毒感染逐漸降低。疫苗在一定程度上可以降低豬群的臨床發(fā)病，但無(wú)法徹底消除隱性感染。因此，在做好免疫工作的同時(shí)，也要培育豬偽狂犬陰性母豬群。此外，還應(yīng)結(jié)合gE抗體檢測(cè)和PRV病原學(xué)檢測(cè)，加強(qiáng)對(duì)妊娠母豬和哺乳仔豬的監(jiān)測(cè)，發(fā)現(xiàn)感染豬只要及時(shí)淘汰處理。加大生物安全力度，提高生物安全管理的水平，為偽狂犬病的凈化工作提供保障[11]。

4 小結(jié)

綜上所述，河南新鄉(xiāng)規(guī)模豬場(chǎng)妊娠期母豬和哺乳期母豬感染豬偽狂犬病毒較嚴(yán)重，保育期豬只疫情逐漸減少，育肥期疫情得到有效控制。建議長(zhǎng)期監(jiān)測(cè)抗體，逐步淘汰陽(yáng)性母豬，哺乳仔豬在出生1日齡通過(guò)滴鼻方式接種疫苗，培養(yǎng)陰性后備豬群。