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    云南地方品種小黃姜快繁技術(shù)研究

    2022-05-18 10:25:04楊清松韋獻(xiàn)雅楊青王應(yīng)梅陶永宏
    熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué) 2022年4期
    關(guān)鍵詞:生長

    楊清松 韋獻(xiàn)雅 楊青 王應(yīng)梅 陶永宏

    (1.云南省文山壯族苗族自治州農(nóng)業(yè)科學(xué)院 云南文山 663099;2.成都農(nóng)業(yè)科技職業(yè)學(xué)院 四川成都 610000)

    生姜(Zingiber officinaleRoscoe.)為姜科多年生草本植物,又稱生姜、黃姜等,我國中部、東南部至西南部各省區(qū)廣為栽培,亞洲熱帶地區(qū)亦常見栽培。生姜是藥用、食用、加工等多用途經(jīng)濟作物,是我國重要的外貿(mào)產(chǎn)品,具有市場需求大、產(chǎn)量高、經(jīng)濟效益好等特點,中國是世界上生姜栽培面積最大且生產(chǎn)總量最多的國家[1-4]。生姜一般不開花,很難進(jìn)行有性繁殖,生產(chǎn)上主要進(jìn)行無性繁殖。無性繁殖的生姜容易受到多種病毒的侵染,造成品種嚴(yán)重退化、產(chǎn)量下降、種質(zhì)資源變劣,一般減產(chǎn)30%~50%,嚴(yán)重制約了生姜的生產(chǎn)發(fā)展[5]。云南地方生姜品種是當(dāng)?shù)刂匾?jīng)濟作物,主要靠農(nóng)戶自己留種種植,多年種植后種性退化嚴(yán)重,生姜產(chǎn)量和品質(zhì)受到很大影響,亟需快繁技術(shù)進(jìn)行品種提純復(fù)壯。國內(nèi)外目前尚無高抗病毒的生姜品種和高效殺滅病毒藥劑,因此采用莖尖組織培養(yǎng)脫毒生姜苗,成為防治病毒提高生姜產(chǎn)量和品質(zhì)的首選方法[6]。本研究利用熱處理和莖尖脫毒相結(jié)合的方法進(jìn)行催芽鈍化病毒、表面消毒、莖尖分生組織剝?nèi)?,對無菌苗誘導(dǎo)培養(yǎng)(基本培養(yǎng)基為 MS附加不同比例的激素)、繼代誘導(dǎo)培養(yǎng)、生根誘導(dǎo)等一系列實驗操作及培養(yǎng)基配方進(jìn)行優(yōu)化,旨在建立文山地方品種生姜快繁體系,為姜種的快速繁殖提供技術(shù)保障,同時為其生產(chǎn)應(yīng)用提供技術(shù)支撐。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    實驗材料為文山地方生姜品種小黃姜,2018年9月收獲,2019年2月份芽點萌發(fā),待用。

    1.2 方法

    1.2.1 無菌苗誘導(dǎo)培養(yǎng)

    1.2.1 .1 選材及熱處理選取優(yōu)良單株作莖尖剝離材料,采用熱處理結(jié)合莖尖脫毒技術(shù)。放置在光照培養(yǎng)箱中以長光照高溫?zé)崽幚恚?6 h光照,38~41℃;8 h 黑暗,30~32℃)一周。

    1.2.1 .2 誘導(dǎo)培養(yǎng)基的制備MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.1 mg/L+瓊脂 7 g/L+蔗糖30 g/L;MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L+瓊脂7 g/L+蔗糖30 g/L;MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L+瓊脂 7 g/L+蔗糖 30 g/L,熬制好后分裝入瓶。在 0.12 Mpa/cm2壓力下滅菌20~ 23 min,冷卻備用。

    1.2.1 .3 莖尖剝離接種將生姜 2~3 cm 的嫩芽放入紗布袋,加 1~2滴洗潔精,用自來水沖洗 1 h后,倒掉水,置于超凈工作臺中,在75%酒精中浸泡 20~30 s,再用 2%次氯酸鈉溶液消毒 12~18 min;取出用無菌水沖洗 3~5次,用滅菌濾紙吸干材料表面水分,在體視解剖鏡下用手術(shù)刀等工具輕、準(zhǔn)、快速地剝?nèi)ビ兹~,切取帶2~4個葉原基(1.0 mm左右)的生長點,放入裝有培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中,每瓶放1個生長點并注明品種、莖尖號、接種日期。培養(yǎng)條件:置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng),日溫 21~25℃,夜溫15~18℃,光照時數(shù) l2~14 h/d,光照強度 2 000~3 000 1x。

    1.2.2 繼代培養(yǎng)待誘導(dǎo)出芽后,在超凈工作臺中用剪刀將生姜小芽(不帶葉片)切下來接種到繼代培養(yǎng)基中,培養(yǎng)基配方:MS+6-BA 0.5 mg/L+瓊脂 7 g/L+蔗糖 30 g/L;MS+瓊脂 7 g/L+蔗糖30 g/L;1/2 MS+瓊脂7 g/L+蔗糖30 g/L。培養(yǎng)條件同1.2.1。

    1.2.3 生根培養(yǎng)待誘導(dǎo)出芽后,在超凈工作臺中用剪刀將生姜小芽(不帶葉片)切下來接種到生根培養(yǎng)基中,培養(yǎng)基配方:1/2 MS+NAA 0.1 mg/L+卡拉膠7 g/L+蔗糖30 g/L;1/2 MS+NAA 0.5 mg/L+卡拉膠7 g/L+蔗糖30 g/L;1/2 MS+卡拉膠7 g/L+蔗糖30 g/L。培養(yǎng)條件同1.2.1。

    1.2.4 馴化移栽基質(zhì)配方:蛭石∶珍珠巖=1∶1(m∶m,下同)(CK);蛭石∶椰糠=2∶1;蛭石∶椰糠=1∶1;椰糠;營養(yǎng)土;營養(yǎng)土∶椰糠=1∶1。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 不同消毒方式對莖尖的影響

    從表1可以看出,最佳消毒方法是75%酒精20 s+2%次氯酸鈉15 min,這種消毒方法污染率僅為5%,未污染的莖尖顏色正常,沒有出現(xiàn)壞死現(xiàn)象。酒精的消毒時間過長容易導(dǎo)致外植體邊緣褐化變色,次氯酸鈉消毒時間過程容易導(dǎo)致外植體出現(xiàn)壞死現(xiàn)象,培養(yǎng)一段時間后莖尖死亡。因此,合適的消毒方式不僅要考慮污染率,還要看后期的生長狀況。

    2.2 不同培養(yǎng)基對莖尖誘導(dǎo)的影響

    從表2可以看出,在培養(yǎng)基1中,莖尖長勢弱,生長緩慢,芽分蘗慢;培養(yǎng)基2中,莖尖長勢較快,芽分蘗側(cè)芽速度快;培養(yǎng)基3中,前期長勢較快,但是長了很多根毛,后期長勢緩慢??赡苁巧獙?6-BA濃度敏感度低,較高濃度有利于莖尖分蘗,但對 NAA濃度非常敏感,容易長根毛[7-8]。誘導(dǎo)生長40 d的莖尖見圖1。

    圖1 誘導(dǎo)生長40 d的莖尖

    表2 不同培養(yǎng)基對莖尖誘導(dǎo)的影響

    2.3 不同培養(yǎng)基對繼代培養(yǎng)的影響

    使用3種不同配方培養(yǎng)基進(jìn)行繼代培養(yǎng),結(jié)果(表3)發(fā)現(xiàn),培養(yǎng)基 2的增殖系數(shù)較高,達(dá)到 5,并且組培苗長勢正常,這可能是由于生姜本身內(nèi)源激素充足,足夠組培苗生長,不需要單獨添加外源激素。培養(yǎng)基 3增殖系數(shù)僅為 3,組培苗長勢比較弱,生長緩慢。培養(yǎng)基1增殖系數(shù)最高,達(dá)到了 7,但是發(fā)出的芽非常弱小,后期部分死亡。

    表3 不同培養(yǎng)基對繼代培養(yǎng)的影響

    2.4 不同培養(yǎng)基對生根培養(yǎng)的影響

    從表4可以看出,培養(yǎng)基1的生根率為100%,根系3~5根,根系粗短,為較適宜的生根培養(yǎng)基;培養(yǎng)基2生根率100%,但是根系多,根系細(xì)長;培養(yǎng)基3生根率80%,根系多,細(xì)小,容易折斷。生根階段使用卡拉膠,移栽時根部培養(yǎng)基易清洗,減少根部損傷,增加移栽成活率。培養(yǎng)基1生長情況見圖2。

    圖2 培養(yǎng)基1生姜生長情況

    表4 不同培養(yǎng)基對生根培養(yǎng)的影響

    2.5 不同材料配制栽培基質(zhì)對生姜種姜繁育的影響

    基質(zhì)栽培是用自身不含營養(yǎng)成分的珍珠巖、蛭石、河沙等代替土壤作為基質(zhì),高密度栽植試管苗,在部分或全部人工控制溫、光、水、肥及生長調(diào)節(jié)劑等條件下,快速繁育種姜獲得下代姜種[9-10]。本試驗將資源豐富的營養(yǎng)土(屬于優(yōu)質(zhì)低位泥炭土)、椰糠(椰子外殼纖維粉末)運用到生姜種姜的生產(chǎn)中,試驗效果良好。以小黃姜為材料,經(jīng)栽培基質(zhì)配制試驗可知,在相同栽培條件和管理措施下,不同材料配制栽培基質(zhì)中,最優(yōu)栽培基質(zhì)為“營養(yǎng)土∶椰糠=1∶1”(表5),比傳統(tǒng)對照采用“蛭石+珍珠巖=2∶1”的基質(zhì),產(chǎn)量提高50%,經(jīng)濟效益明顯增加。處理6生姜移栽生長情況見圖3。

    表5 不同材料配制栽培基質(zhì)對生姜種姜繁育的影響

    圖3 處理6生姜移栽生長情況

    3 討論與結(jié)論

    姜種的快速繁殖可提供技術(shù)保障,為生產(chǎn)應(yīng)用提供支撐。生姜有許多個品種,在具體的組培快繁中應(yīng)根據(jù)生姜品種選擇合適的培養(yǎng)基、激素配比及培養(yǎng)條件,以完善生姜的組培快繁技術(shù)。根據(jù)文獻(xiàn)報道,6-BA能促進(jìn)生姜愈傷組織誘導(dǎo)與分化,但不同生姜品種在組織培養(yǎng)中對6-BA和NAA的濃度配比要求不同,這可能與生姜不同品種的基因型和培養(yǎng)條件等因素有關(guān)。過高的NAA 濃度也會抑制生姜幼苗不定芽的形成,適宜的較低濃度的 NAA能和 6-BA起到協(xié)同增益的作用,既能促進(jìn)生姜幼苗不定芽的發(fā)生,又能促進(jìn)生姜組培苗生長[5,11]。葛勝娟[12]研究認(rèn)為,添加6-BA和NAA的培養(yǎng)基更能促進(jìn)生姜幼芽的分化和增殖。本實驗表明,在誘導(dǎo)階段,NAA濃度同為0.1 mg/L時,6-BA濃度為1.0 mg/L時,誘導(dǎo)效果最好;NAA濃度增加到 0.5 mg/L,誘導(dǎo)效果降低。呂金麗等[13]的研究結(jié)果也表明,當(dāng) 6-BA濃度相同,NAA濃度過大時,會抑制愈傷的形成。此外,本實驗表明,最佳繼代培養(yǎng)基為MS+瓊脂7 g/L+蔗糖30 g/L,當(dāng)加入6-BA后,發(fā)出的芽非常弱小,后期部分死亡,這與呂金麗等[13]和王少銘等[14]研究得出的最佳繼代培養(yǎng)基都加入了 6-BA和 NAA的結(jié)果不一致,這可能是地域及地方品種的不一致所造成的差異。本研究結(jié)果可為云南文山當(dāng)?shù)厣獌?yōu)良種苗的快速繁殖提供技術(shù)支撐,同時為文山種質(zhì)資源保存、組培擴繁、品種改良、育種等研究奠定基礎(chǔ),促進(jìn)文山州及周邊地區(qū)生姜產(chǎn)業(yè)持續(xù)健康發(fā)展。

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