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    白酸湯發(fā)酵過(guò)程中微生物多樣性及有機(jī)酸動(dòng)態(tài)變化研究

    2022-05-17 14:14:06萬(wàn)寧威雷幫星李彪楊悅何勁
    食品與發(fā)酵工業(yè) 2022年9期
    關(guān)鍵詞:維氏有機(jī)酸醋酸

    萬(wàn)寧威,雷幫星,李彪,楊悅,何勁*

    1(貴陽(yáng)學(xué)院 食品與制藥工程學(xué)院,貴州 貴陽(yáng),550005)2(貴州大學(xué) 貴州省生化工程中心,貴州 貴陽(yáng),550025)

    白酸湯是以大米、糯米為原料,由醋酸菌、乳酸菌、酵母菌等微生物發(fā)酵而成的傳統(tǒng)調(diào)味品,具有酸鮮純正、清涼爽口的獨(dú)特風(fēng)味,在西南地區(qū)廣受歡迎[1],有悠久的食用歷史。白酸湯含有豐富的益生菌、有機(jī)酸、礦物質(zhì)、維生素等物質(zhì),對(duì)降低腸道pH、促進(jìn)人體利用營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、抑制致病菌生長(zhǎng)、調(diào)節(jié)腸道菌群、預(yù)防消化道疾病等有重要作用[2-5]。然而長(zhǎng)期以來(lái),白酸湯大都是小作坊生產(chǎn),為數(shù)不多的酸湯企業(yè)采用的也都是傳統(tǒng)自然發(fā)酵,生產(chǎn)規(guī)模小、發(fā)酵周期長(zhǎng)、受環(huán)境影響大、酸湯質(zhì)量不穩(wěn)定,嚴(yán)重限制了白酸湯大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)[6]。

    近幾年,關(guān)于白酸湯中微生物群落和有機(jī)酸組成的研究越來(lái)越多,但對(duì)其相關(guān)性分析的文獻(xiàn)極少。熊瑛等[7]對(duì)貴州5個(gè)不同地區(qū)酸湯中的有機(jī)酸進(jìn)行測(cè)定,發(fā)現(xiàn)乳酸占總酸70%以上,其次為乙酸、檸檬酸。石敏等[8]通過(guò)傳統(tǒng)分離、計(jì)數(shù)法發(fā)現(xiàn)凱里白酸湯中優(yōu)勢(shì)微生物有乳桿菌、明串珠菌和醋酸桿菌。隨著生物技術(shù)的迅猛發(fā)展,宏基因技術(shù)越來(lái)越多的被應(yīng)用于發(fā)酵食品中,發(fā)酵食品中復(fù)雜的微生物群落組成、變化以及功能被越來(lái)越多的學(xué)者關(guān)注[9-10]。本實(shí)驗(yàn)采用高通量測(cè)序技術(shù)對(duì)白酸湯發(fā)酵過(guò)程中微生物群落組成進(jìn)行分析,同時(shí)通過(guò)高效液相色譜法測(cè)定其有機(jī)酸含量,并采用雙向正交偏最小二乘法(orthogonal function partial least squares,O2PLS)對(duì)微生物群落變化和有機(jī)酸含量之間的相關(guān)性進(jìn)行分析,確定與有機(jī)酸含量相關(guān)性高的微生物種類。為進(jìn)一步篩選、分離白酸湯中優(yōu)勢(shì)微生物菌種,為直投式發(fā)酵劑研發(fā),實(shí)現(xiàn)白酸湯發(fā)酵過(guò)程的精準(zhǔn)調(diào)控,提高白酸湯產(chǎn)品生產(chǎn)效率與品質(zhì)提供理論依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    老酸湯,貴州亮歡寨生物科技有限公司;安琪甜酒曲,安琪酵母股份有限公司;糯米粉,市售;甲醇,安徽天地高純?nèi)軇┯邢薰?;活性炭,重慶川東化工(集團(tuán))有限公司;磷酸、乳酸、蘋果酸,天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司;乙酸,成都金山化學(xué)試劑有限公司;丁二酸,天津市大茂化學(xué)試劑廠。

    1.2 儀器設(shè)備

    LDZM-60L型立式高壓蒸汽滅菌器,上海申安醫(yī)療器械廠;SPX-150BⅢ型生化培養(yǎng)箱,天津市泰斯特儀器有限公司;LC-20A型高效液相色譜儀、SPD-M20A型二極管陣列檢測(cè)器,日本島津公司;TGL-16M型臺(tái)式高速冷凍離心機(jī),湖南平凡科技有限公司。

    1.3 試驗(yàn)方法

    1.3.1 白酸湯制作工藝流程及操作要點(diǎn)

    原料→煮沸→冷卻→液化→滅菌→冷卻→接種老酸湯→36 ℃恒溫培養(yǎng)→白酸湯

    操作要點(diǎn):原料中糯米粉和水的料液比為1∶50(g∶mL);安琪甜酒曲添加量為0.4%;老酸湯接種量為10%;每24 h取樣,-18 ℃凍存?zhèn)溆谩?/p>

    1.3.2 有機(jī)酸測(cè)定

    采用高效液相色譜法[7],稱取酸湯樣品10 g,加入活性炭0.2 g,純凈水定容至50 mL,振蕩混勻,5 000 r/min離心10 min,上清液0.22 μm水系濾膜過(guò)濾,測(cè)定乳酸、乙酸、蘋果酸和丁二酸含量。

    1.3.3 微生物多樣性測(cè)定

    將所采集樣本送往生工生物工程(上海)股份有限公司進(jìn)行測(cè)定處理。具體測(cè)定流程為:微生物總DNA提取,對(duì)細(xì)菌基因組V3~V4區(qū)使用引物338F(5′-ACTCCTACGGGAGGCAGCAG-3′)、反向引物806R(5′-GGACTACHVGGTWTCTAAT-3′)進(jìn)行擴(kuò)增,真菌ITS區(qū)使用正向引物ITS1F(5′-CTTGGTCATTTAGAGGAAGTAA-3′)、反向引物ITS2R(5′-GCTGCGTTCTTCATCGATGC-3′)進(jìn)行擴(kuò)增[11-13],將擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行回收純化,熒光定量處理,在Illumina MiSeq平臺(tái)上對(duì)其進(jìn)行測(cè)序。

    數(shù)據(jù)處理與分析:使用SMRT Link軟件,將所有的subreads進(jìn)行相互比對(duì)和質(zhì)量校正,自我糾錯(cuò)后得到高質(zhì)量的一致性序列CCS reads,根據(jù)雙端barcode標(biāo)簽序列識(shí)別并區(qū)分樣品得到各樣本數(shù)據(jù)。然后將其進(jìn)行聚類,其中相似性≥97%的序列歸為1個(gè)OTU,將OTU代表序列與Silva數(shù)據(jù)庫(kù)[14]進(jìn)行比對(duì)和物種注釋,最后對(duì)有效數(shù)據(jù)進(jìn)行OTUs豐度、Alpha和Beta多樣性等分析。

    1.3.4 數(shù)據(jù)處理

    分別采用系統(tǒng)軟件SPSS和SIMCA-p進(jìn)行顯著性和相關(guān)性分析。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 白酸湯發(fā)酵過(guò)程中有機(jī)酸含量變化

    在白酸湯發(fā)酵過(guò)程中,有機(jī)酸總量呈逐漸上升的趨勢(shì),如圖1所示,6 d后有機(jī)酸含量保持不變,說(shuō)明此時(shí)白酸湯發(fā)酵基本結(jié)束。其中乳酸和乙酸含量隨著發(fā)酵時(shí)間增加而穩(wěn)定增長(zhǎng),在第6天均達(dá)最大值,分別為5.58和1.04 mg/mL;蘋果酸含量先降后增,在第0天時(shí)為0.17 mg/mL,第3天降至0.09 mg/mL,4~6 d逐漸增長(zhǎng),最終含量為0.19 mg/mL;丁二酸在0~3 d時(shí)未檢出,4~6 d隨發(fā)酵時(shí)間呈直線上升,在第6天達(dá)到最高為0.33 mg/mL。乳酸和乙酸含量在白酸湯發(fā)酵過(guò)程中占有機(jī)酸總含量的95%以上,是白酸湯中主要有機(jī)酸。

    圖1 白酸湯發(fā)酵過(guò)程中有機(jī)酸含量變化Fig.1 Changes of organic acid content during fermentation of white acid soup

    2.2 白酸湯發(fā)酵過(guò)程中微生物變化

    2.2.1 白酸湯發(fā)酵過(guò)程中微生物的α多樣性分析

    Chao指數(shù)和Ace指數(shù)可以用來(lái)評(píng)價(jià)菌群豐富度[15],如表1所示,在白酸湯發(fā)酵過(guò)程中,細(xì)菌的物種豐富度呈先升高后降低的趨勢(shì),Ace指數(shù)在第3天時(shí)最高為111,比第0天增長(zhǎng)了81.97%,在第8天時(shí)降至0;Chao指數(shù)在第5天時(shí)最高為129,比第0天增長(zhǎng)了111.48%,在第8天時(shí)降低至63。真菌物種豐富度隨發(fā)酵時(shí)間增長(zhǎng)而持續(xù)降低,在第0天時(shí) Chao指數(shù)和Ace指數(shù)為50.07和49.75,在第8天時(shí)為38.13和37.75,分別降低了23.85%和24.12%。

    菌群多樣性通過(guò)Shannon指數(shù)和Simpson指數(shù)來(lái)評(píng)價(jià)[16]。細(xì)菌物種多樣性隨發(fā)酵時(shí)間的變化也呈現(xiàn)先增加后減小的趨勢(shì),Simpson指數(shù)變化不明顯,Shannon指數(shù)在第5天達(dá)到最大為4.73,后持續(xù)減小,第8天時(shí)降至3.81。Shannon指數(shù)顯示真菌物種多樣性在第0天時(shí)最高為1.77,后持續(xù)降低至0.87。Simpson指數(shù)顯示真菌物種多樣性在第4天時(shí)最高為0.46,比第0 天增長(zhǎng)了109.09%。

    細(xì)菌的Ace指數(shù)、Chao指數(shù)及Shannon指數(shù)均大于真菌,說(shuō)明細(xì)菌菌群豐富度和物種多樣性均大于真菌,由此可見(jiàn)細(xì)菌在白酸湯發(fā)酵過(guò)程中發(fā)揮的作用更大。石敏等[8]在研究中發(fā)現(xiàn),白酸湯在發(fā)酵1~4 d有效酸度和總酸含量持續(xù)增加,總糖含量持續(xù)降低,在第5天后趨于平緩。本實(shí)驗(yàn)中,在白酸湯發(fā)酵5 d時(shí),物種豐富度及多樣性最高,微生物大量繁殖,推測(cè)是米湯中營(yíng)養(yǎng)成分被快速消耗,后續(xù)無(wú)法滿足更多菌群的生長(zhǎng)需求,導(dǎo)致微生物生長(zhǎng)受到抑制。

    表1 發(fā)酵過(guò)程中的微生物α多樣性分析Table 1 Analysis of microbial α diversity during fermentation

    2.2.2 白酸湯發(fā)酵過(guò)程中微生物β多樣性分析

    對(duì)發(fā)酵不同時(shí)間的白酸湯進(jìn)行種水平上的層級(jí)聚類分析,探究發(fā)酵過(guò)程中微生物群落結(jié)構(gòu)變化,結(jié)果如圖2所示。

    a-細(xì)菌;b-真菌圖2 白酸湯發(fā)酵過(guò)程中種水平上的層級(jí)聚類Fig.2 Hierarchical clustering on species level in the fermentation of white sour soup

    樣品之間越接近,其種水平上的結(jié)構(gòu)就越相似,3~6 d,7~8 d 和 0~2 d 的細(xì)菌菌群分為3簇,有明顯差異性。0、4、6~8 d 的真菌菌群也分為3簇且差異性顯著。由此說(shuō)明,白酸湯發(fā)酵主要經(jīng)歷前(0~2 d)、中(3~6 d)、后(6~8 d)3個(gè)階段,且這3個(gè)階段微生物群落結(jié)構(gòu)差異顯著。發(fā)酵前期,細(xì)菌優(yōu)勢(shì)菌群為維氏乳桿菌(Lactobacillusvini)和羅旺醋桿菌(Acetobacterlovaniensis),真菌物種多樣性在此期間最高,優(yōu)勢(shì)菌群有毛榛畢赤酵母(Pichiamandshurica)、桔假絲酵母(Candidaquercitrusa)和矮小假絲酵母(Kazachstaniahumilis)。發(fā)酵中期,細(xì)菌物種多樣性最高,優(yōu)勢(shì)菌群為法式醋酸桿菌(Acetobacterfarinalis)、布氏乳桿菌(Lactobacillusbuchneri)、類谷糠乳桿菌(Lactobacillusparafarraginis)和液化葡糖酸醋酸桿菌(Gluconacetobacterliquefaciens),真菌優(yōu)勢(shì)菌群為毛榛畢赤酵母。發(fā)酵后期,細(xì)菌優(yōu)勢(shì)菌群為維氏乳桿菌和法式醋酸桿菌,真菌優(yōu)勢(shì)菌群為毛榛畢赤酵母。

    2.2.3 群落結(jié)構(gòu)組分分析

    如圖3所示,白酸湯中細(xì)菌組成在種水平上主要有維氏乳桿菌(Lactobacillusvini)、法式醋酸桿菌(Acetobacterfarinalis)、布氏乳桿菌(Lactobacillusbuchneri)、羅旺醋桿菌(Acetobacterlovaniensis)、發(fā)酵乳桿菌(Lactobacillusfermentum)、副干酪乳桿菌(Lactobacillusparacasei)、解淀粉乳桿菌(Lactobacillusamylolyticus)等12種菌種。發(fā)酵前期優(yōu)勢(shì)菌群為維氏乳桿菌和羅旺醋桿菌,其豐度分別為41.66%、23.53%,維氏乳桿菌比第0天增長(zhǎng)了314.11%。法式醋酸桿菌和布氏乳桿菌是發(fā)酵中期的優(yōu)勢(shì)菌群,其豐度分別達(dá)到25.08%和32.16%,類谷糠乳桿菌(Lactobacillusparafarraginis)和液化葡糖酸醋酸桿菌(Gluconacetobacterliquefaciens)在此期間豐度也達(dá)到最大分別為10.8%和10.5%。發(fā)酵后期維氏乳桿菌和法式醋酸桿菌的豐度達(dá)到80%,說(shuō)明在發(fā)酵后期維氏乳桿菌和法式醋酸桿菌起主導(dǎo)作用。

    白酸湯中真菌的物種多樣性比細(xì)菌少,在種水平上主要有毛榛畢赤酵母(Pichiamandshurica)、桔假絲酵母(Candidaquercitrusa)、矮小假絲酵母(Kazachstaniahumilis)、膜醭畢赤酵母(Pichiamembranifaciens)、Zygoascusmeyerae、三角酵母(Trigonopsisvariabilis)。白酸湯第0天優(yōu)勢(shì)菌群為毛榛畢赤酵母、桔假絲酵母、矮小假絲酵母,其占比分別為12.4%、20.2%、14.8%,發(fā)酵過(guò)程中,毛榛畢赤酵母迅速繁殖成為發(fā)酵中后期優(yōu)勢(shì)菌群,在第8天時(shí)豐度達(dá)到77.9%。三角酵母相對(duì)豐度也由0.04%增長(zhǎng)至1.08%。其他酵母生長(zhǎng)均被抑制。

    a-細(xì)菌;b-真菌圖3 白酸湯發(fā)酵過(guò)程中種水平細(xì)菌及真菌相對(duì)豐度變化Fig.3 Changes of relative abundance of bacteria and fungi at species level during fermentation of white sour soup

    王琪琪等[17]研究結(jié)果表明:白酸湯中優(yōu)勢(shì)細(xì)菌為哈氏乳桿菌(Lactobacillusharbinensis,43.46%)、布氏乳桿菌(Lactobacillusbuchneri,31.25%)等,優(yōu)勢(shì)真菌為膜璞畢赤酵母(Pichiamembranifaciens,88.31%)和博伊丁假絲酵母(Candidaboidinii,6.39%)。與本實(shí)驗(yàn)結(jié)果相比,在屬水平上一致,在種水平上有明顯差異,可見(jiàn)白酸湯發(fā)酵菌種的多樣性。白酸湯是以大米、糯米為原料,由醋酸菌、乳酸菌、酵母菌等微生物發(fā)酵而成,但是不同公司的白酸湯主要發(fā)酵菌種不一致,這可能是導(dǎo)致市售白酸湯風(fēng)味不統(tǒng)一的重要原因。

    2.2.4 有機(jī)酸及優(yōu)勢(shì)菌群相關(guān)性分析

    2.2.4.1 白酸湯發(fā)酵過(guò)程與有機(jī)酸相關(guān)的微生物重要性指標(biāo)分析

    利用O2PLS[18]模型對(duì)細(xì)菌和真菌相對(duì)豐度與有機(jī)酸含量進(jìn)行相關(guān)性分析,獲得菌群豐度與有機(jī)酸含量相關(guān)性的自變量重要性指標(biāo)[變量投影重要性(variable importance projection,VIP)(pred)]。如圖4所示,細(xì)菌和真菌的VIP(pred)均在0.5~1.5。大于1.4的有2個(gè)種,在1.3~1.4的有4個(gè)種,在1.2~1.3的有2個(gè)種,在1.0~1.2的有7個(gè)種。其中法式醋酸桿菌、維氏乳酸桿菌與有機(jī)酸相關(guān)重要性最高,選VIP(pred)值>1的15個(gè)種進(jìn)行與有機(jī)酸相關(guān)的分析。

    圖4 與有機(jī)酸相關(guān)的微生物VIP分析Fig.4 Microbial VIP analysis related to organic acids

    圖5 微生物與有機(jī)酸相關(guān)性系數(shù)熱圖Fig.5 Correlation coefficient heatmap of microorganisms and organic acids 注:*代表微生物與有機(jī)酸之間差異顯著(P<0.05); **代表差異極顯著(P<0.01)

    2.2.4.2 白酸湯發(fā)酵過(guò)程與有機(jī)酸相關(guān)微生物分析

    選取VIP(pred)值>1的細(xì)菌和真菌(種)與有機(jī)酸進(jìn)行相關(guān)性分析,結(jié)果如圖5所示。

    與乳酸呈正相關(guān)的有9個(gè)種,負(fù)相關(guān)9個(gè)種,維氏乳桿菌與乳酸含量極顯著正相關(guān)(P<0.01);與乙酸正相關(guān)的有10個(gè)種,負(fù)相關(guān)有8個(gè)種,法式醋酸桿菌與乙酸含量極顯著正相關(guān)(P<0.01);與蘋果酸正相關(guān)的有9個(gè)種,負(fù)相關(guān)9個(gè)種,解淀粉乳桿菌與蘋果酸含量顯著負(fù)相關(guān)(P<0.05);與丁二酸正相關(guān)的有8個(gè)種,負(fù)相關(guān)10個(gè)種,三角酵母與丁二酸含量顯著正相關(guān)(P<0.05)。本實(shí)驗(yàn)采用靜置發(fā)酵,因此:發(fā)酵初期,發(fā)酵液中可能積累了米湯液化后的糖類物質(zhì),維氏乳桿菌經(jīng)過(guò)厭氧發(fā)酵產(chǎn)生大量乳酸,因此維氏乳桿菌和乳酸極顯著正相關(guān)。隨著發(fā)酵的進(jìn)行,布氏乳桿菌經(jīng)過(guò)異型發(fā)酵將乳酸轉(zhuǎn)化乙酸和乙醇[19],因此布氏乳桿菌和乳酸顯著負(fù)相關(guān),與乙酸正相關(guān)。發(fā)酵中后期,由于乙醇的產(chǎn)生和發(fā)酵液酸度的降低等原因維氏乳桿菌、布氏乳桿菌等乳桿菌生長(zhǎng)受到抑制,法式醋酸桿菌、羅旺醋酸桿菌大量繁殖,乙酸累積,因此醋酸桿菌與乙酸顯著正相關(guān)。蘋果酸和丁二酸為三羧酸循環(huán)的產(chǎn)物,在產(chǎn)生的同時(shí)又作為其他代謝途徑的原料被消耗,所以沒(méi)有大量累積。酵母菌在發(fā)酵過(guò)程中能代謝產(chǎn)生氨基酸、酶、乙醇等物質(zhì),為其他微生物的生長(zhǎng)提供碳源和氮源[20],毛榛畢赤酵母含量和乳酸、乙酸含量呈現(xiàn)顯著正相關(guān),三角酵母和丁二酸含量也呈現(xiàn)顯著正相關(guān)(P<0.05)。

    3 討論與結(jié)論

    白酸湯產(chǎn)品在西南地區(qū)廣受歡迎,但其發(fā)酵機(jī)理和發(fā)酵工藝尚不明確,生產(chǎn)模式也尚未統(tǒng)一。因此,探索白酸湯發(fā)酵過(guò)程中微生物的多樣性及有機(jī)酸含量動(dòng)態(tài)變化規(guī)律、分離優(yōu)勢(shì)菌株、開發(fā)人工可控發(fā)酵白酸湯,具有十分重要的理論意義和實(shí)踐應(yīng)用價(jià)值。

    通過(guò)高通量測(cè)序技術(shù)和高效液相色譜法對(duì)白酸湯發(fā)酵不同時(shí)期樣品的微生物多樣性和有機(jī)酸含量進(jìn)行測(cè)定,并利用雙向正交偏最小二乘法(O2PLS)對(duì)微生物相對(duì)豐度與有機(jī)酸含量相關(guān)性進(jìn)行分析。結(jié)果表明,白酸湯發(fā)酵過(guò)程中微生物種類豐富,細(xì)菌的生物多樣性遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于真菌生物多樣性。通過(guò)在種水平分析細(xì)菌和真菌在發(fā)酵過(guò)程中的種類和豐度,并與有機(jī)酸含量相關(guān)性進(jìn)行分析推測(cè),發(fā)酵前期,維氏乳桿菌能迅速適應(yīng)新環(huán)境,大量繁殖,豐度達(dá)到41.66%,主要發(fā)酵產(chǎn)物乳酸降低了酸湯中pH,同時(shí)還參與發(fā)酵過(guò)程中氨基酸代謝[21-22],豐富了產(chǎn)品風(fēng)味。毛榛畢赤酵母和桔假絲酵母生長(zhǎng)良好,它們能夠參與碳水化合物代謝和酯類物質(zhì)形成,對(duì)產(chǎn)品的香氣和風(fēng)味有重要作用[23],桔假絲酵母可以通過(guò)Ehrlich途徑代謝產(chǎn)生氨基酸小分子,比其他酵母產(chǎn)生的風(fēng)味物質(zhì)更多[24]。發(fā)酵中期,經(jīng)過(guò)前期乳酸發(fā)酵和乙醇發(fā)酵后,酸度的降低和乙醇、乳酸的積累為法式醋酸桿菌和布氏乳桿菌的生長(zhǎng)提供了適宜的碳源和環(huán)境,其豐度分別達(dá)到 25.08%和32.16%,積累一定量的乙酸。類谷糠乳桿菌和液化葡糖酸醋酸桿菌在此期間豐度達(dá)到最大分別為10.8%和10.5%,類谷糠乳桿菌的代謝產(chǎn)物能夠抑制致病菌和腐敗酵母菌的生長(zhǎng)[25],液化葡糖酸醋酸桿菌有多種酶類,可產(chǎn)生多種影響發(fā)酵過(guò)程中抗氧化性能變化的重要化合物[26]。發(fā)酵后期,隨著發(fā)酵的進(jìn)行,白酸湯中營(yíng)養(yǎng)成分消耗以及pH值持續(xù)下降,許多不耐酸細(xì)菌和真菌受到抑制,經(jīng)過(guò)白酸湯環(huán)境的多重選擇,白酸湯中微生物趨于穩(wěn)定,維氏乳桿菌和法式醋酸桿菌的豐度達(dá)到80%,毛榛畢赤酵母豐度達(dá)到77.9%,說(shuō)明在白酸湯發(fā)酵后期維氏乳桿菌、法式醋酸桿菌和毛榛畢赤酵母起主導(dǎo)作用。

    綜上所述,本研究揭示了白酸湯發(fā)酵過(guò)程中與有機(jī)酸含量相關(guān)性較高的功能微生物為維氏乳桿菌、法式醋酸桿菌和毛榛畢赤酵母,為進(jìn)一步篩選、分離白酸湯中優(yōu)勢(shì)微生物菌種,研發(fā)直投式發(fā)酵劑,為實(shí)現(xiàn)白酸湯發(fā)酵過(guò)程的精準(zhǔn)調(diào)控,提升白酸湯品質(zhì)穩(wěn)定性提供理論依據(jù)。

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