miR-125b、miR-29a、miR-425-5p在子宮內(nèi)膜癌患者血清中表達(dá)水平變化及臨床意義

邱 菊,嚴(yán) 婭,龔凈嫻,田春艷

1.電子科技大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬綿陽醫(yī)院/綿陽市中心醫(yī)院婦產(chǎn)科，四川綿陽 621000;2.四川大學(xué)華西醫(yī)院消化內(nèi)科/四川大學(xué)華西護(hù)理學(xué)院，四川成都 610000

子宮內(nèi)膜癌為婦科常見疾病之一，發(fā)病原因目前尚未完全明確，但如未及時診斷及干預(yù)可促使病情發(fā)生進(jìn)展，難以進(jìn)行根治性治療，影響患者生命安全及生命質(zhì)量。子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生和發(fā)展與多種分子生物學(xué)指標(biāo)的變化密切相關(guān)，微小核糖核苷酸(miRNA)是一種重要的非編碼RNA，長度為19～24 nt，可參與基因水平調(diào)控、細(xì)胞的增殖及死亡等多種過程，誘導(dǎo)抑癌基因及癌基因的表達(dá)失常，最終導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生。其中miR-125b的前體分別位于11號和21號染色體，可通過調(diào)節(jié)上游及下游多個靶標(biāo)活性，進(jìn)而促進(jìn)或抑制腫瘤的發(fā)生和發(fā)展；miR-29a位于7號染色體，可通過調(diào)控脫氧核糖核苷酸(DNA)甲基化、細(xì)胞凋亡控制參與腫瘤細(xì)胞的周期調(diào)節(jié)；miR-425-5p位于染色體的1p13.3，可調(diào)節(jié)多種生物學(xué)過程，在多種疾病的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮作用，但目前miR-125b、miR-29a、miR-425-5p在子宮內(nèi)膜癌發(fā)生及發(fā)展中的意義尚未完全明確[1-3]。本研究旨在探究miR-125b、miR-29a、miR-425-5p在子宮內(nèi)膜癌患者血清中相對表達(dá)水平變化及臨床意義，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 收集2019年5月至2021年3月綿陽市中心醫(yī)院收治的124例子宮內(nèi)膜癌患者作為子宮內(nèi)膜癌組，另選擇同期體檢的124例健康女性作為健康對照組。子宮內(nèi)膜癌組年齡23～74歲，平均(50.11±7.23)歲；體質(zhì)量指數(shù)(BMI)21～28 kg/m2，平均(24.25±1.43)kg/m2。健康對照組年齡22～77歲，平均(49.68±7.75)歲；BMI 20～28 kg/m2，平均(24.12±1.52)kg/m2。兩組年齡、BMI等一般資料比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)子宮內(nèi)膜癌診斷符合《子宮內(nèi)膜癌診斷與治療指南(第4版)》[4]中相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)；(2)臨床資料完整；(3)此前未接受腫瘤相關(guān)治療；(4)簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)合并子宮內(nèi)膜結(jié)核、宮腔積液、內(nèi)分泌功能失調(diào)者；(2)妊娠期及哺乳期女性；(3)合并其他惡性腫瘤、肝腎功能不全者；(4)合并嚴(yán)重感染、風(fēng)濕性免疫疾病者。本研究經(jīng)本院醫(yī)學(xué)研究倫理委員會審核通過。

1.2方法

1.2.1檢測指標(biāo) 觀察并比較兩組血清miR-125b、miR-29a、miR-425-5p相對表達(dá)水平，采用Pearson相關(guān)分析其與腫瘤臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系。根據(jù)FIGO標(biāo)準(zhǔn)[5]將子宮內(nèi)膜癌患者分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期，根據(jù)患者組織分化程度分為低、中、高分化，分析不同腫瘤臨床分期(Ⅰ～Ⅱ期、Ⅲ～Ⅳ期)、分化程度(中高分化、低分化)血清miR-125b、miR-29a、miR-425-5p相對表達(dá)水平。觀察子宮內(nèi)膜癌患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、肌層浸潤情況，分析不同淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、肌層浸潤情況患者血清miR-125b、miR-29a、miR-425-5p相對表達(dá)水平。采用Pearson相關(guān)分析了解miR-125b、miR-29a、miR-425-5p的相關(guān)性。

1.2.2檢測miR-125b、miR-29a、miR-425-5p方法 應(yīng)用實時熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)檢測兩組血清miR-125b、miR-29a、miR-425-5p相對表達(dá)水平。取研究者空腹靜脈血5 mL，離心(3 500 r/min，10 min)取上清液備用，按總RNA試劑盒(德國QIAGEN公司)操作說明書提取血清總RNA，以miRNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒(日本TaKaRa公司)將2 μL純凈無降解總RNA反轉(zhuǎn)錄為互補(bǔ)脫氧核糖核酸(cDNA)，按照SYBR Green PCR Mastermix試劑(日本TaKaRa公司)說明加配反應(yīng)體系，引物由生工生物工程(上海)股份有限公司合成。體系加配完成后放入CFX96實時熒光定量PCR儀(美國BIO-RAD公司)反應(yīng)，收集數(shù)據(jù)，采用2-ΔΔCt計算血清miR-125b、miR-29a、miR-425-5p相對表達(dá)水平，以U6作為內(nèi)參基因；miR-125b正向引物5′-3′TCC CTG AGA CCC TAA CTT GT，反向引物5′-3′CAA GTT AGG GTC TCA GGG A；miR-29a正向引物5′-3′CTG AGT TTC TAT TTA GAC ACT ACA ACA，反向引物5′-3′ACA ATT TGA CAT GTG GCA TTA ACG；miR-425-5p正向引物5′-3′GGG GAG TTA GGA TTA GGT C，反向引物5′-3′TGC GTG TCG TGG AGT C；U6正向引物5′-3′ CTG GCT TCG GCA GCA CA，反向引物5′-3′ AAC GCT TCA CGA ATT TGC GT。

2 結(jié) 果

2.1兩組血清miR-125b、miR-29a、miR-425-5p相對表達(dá)水平比較 子宮內(nèi)膜癌組miR-425-5p相對表達(dá)水平明顯高于健康對照組，miR-125b、miR-29a相對表達(dá)水平明顯低于健康對照組(P<0.05)。見表1。

表1 兩組血清miR-125b、miR-29a、miR-425-5p相對表達(dá)水平

2.2不同腫瘤臨床分期、分化程度患者血清miR-125b、miR-29a、miR-425-5p相對表達(dá)水平比較 Ⅰ～Ⅱ期子宮內(nèi)膜癌患者miR-125b、miR-29a相對表達(dá)水平高于Ⅲ～Ⅳ期患者，miR-425-5p相對表達(dá)水平低于Ⅲ～Ⅳ期患者(P<0.05)；中高分化子宮內(nèi)膜癌患者miR-125b、miR-29a相對表達(dá)水平高于低分化患者，miR-425-5p相對表達(dá)水平低于低分化患者(P<0.05)。見表2。

表2 不同腫瘤臨床分期、分化程度患者血清miR-125b、miR-29a、miR-425-5p相對表達(dá)水平比較

2.3不同淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、肌層浸潤患者血清miR-125b、miR-29a、miR-425-5p相對表達(dá)水平比較 淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的子宮內(nèi)膜癌患者miR-125b、miR-29a相對表達(dá)水平高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者，miR-425-5p相對表達(dá)水平低于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者(P<0.05)；淺肌層浸潤的子宮內(nèi)膜癌患者miR-125b、miR-29a相對表達(dá)水平高于深肌層浸潤患者，miR-425-5p相對表達(dá)水平低于深肌層浸潤患者(P<0.05)。見表3。

表3 不同淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、肌層浸潤患者血清miR-125b、miR-29a、miR-425-5p相對表達(dá)水平比較

2.4子宮內(nèi)膜癌患者血清miR-425-5p與miR-125b、miR-29a的相關(guān)性分析 Pearson相關(guān)分析結(jié)果顯示，子宮內(nèi)膜癌患者miR-425-5p與miR-125b、miR-29a均呈負(fù)相關(guān)(r=-0.419、-0.436，P<0.05)。

3 討 論

有研究表明，我國子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病率、病死率均呈上升趨勢，5年生存率低于30%，且患者的整體發(fā)病年齡趨向年輕化，分析子宮內(nèi)膜癌發(fā)病機(jī)制、尋找疾病診斷及治療的新靶點對改善患者預(yù)后具有重要意義[6]。miRNA可在轉(zhuǎn)錄后發(fā)揮對靶基因的調(diào)控作用，影響相關(guān)蛋白表達(dá)，進(jìn)而參與疾病的發(fā)生及發(fā)展。目前，子宮內(nèi)膜癌患者miRNA的差異性表達(dá)，以及其功能變化為臨床研究的重點和熱點。

miR-425-5p廣泛表達(dá)于人體的多個組織，靶基因功能包括蛋白去磷酸化、神經(jīng)元分化信號轉(zhuǎn)導(dǎo)負(fù)調(diào)控、調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)移酶活性、控制氮化合物反應(yīng)等生物學(xué)過程，可能與CTNNA3 3′非翻譯區(qū)結(jié)合，進(jìn)而降低其對Akt信號通路的抑制作用，最終使細(xì)胞周期抑制劑p21的表達(dá)降低，難以發(fā)揮抑癌作用[7]。GU等[8]研究結(jié)果顯示，miR-425-5p/RIP1軸可介導(dǎo)細(xì)胞凋亡及炎癥信號級聯(lián)反應(yīng)；XIAO等[9]研究表明，miR-425-5p/可能通過介導(dǎo)PTEN表達(dá)，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖和遷移，并參與乳腺癌組織的發(fā)展，可能作為其預(yù)后判斷指標(biāo)。本研究結(jié)果顯示，子宮內(nèi)膜癌組miR-425-5p相對表達(dá)水平明顯高于健康對照組，Ⅰ～Ⅱ期子宮內(nèi)膜癌患者miR-425-5p相對表達(dá)水平低于Ⅲ～Ⅳ期患者，中高分化子宮內(nèi)膜癌患者miR-425-5p相對表達(dá)水平低于低分化患者，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及深肌層浸潤的子宮內(nèi)膜癌患者miR-425-5p相對表達(dá)水平均較無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及淺肌層浸潤患者的子宮內(nèi)膜癌患者更高，提示miR-425-5p可能作為提示子宮內(nèi)膜癌發(fā)生及發(fā)展的靶因子，其水平升高與疾病進(jìn)展密切相關(guān)。LU等[10]研究結(jié)果顯示，胰腺癌組織中miR-425-5p的表達(dá)水平與白細(xì)胞介素-23水平呈正相關(guān)，且胰腺癌患者腫瘤組織中miR-425-5p的表達(dá)水平與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期、分化程度相關(guān)，提示miR-425-5p的過表達(dá)與胰腺癌的發(fā)生與發(fā)展密切相關(guān)，與本研究結(jié)果相互印證。

有研究表明，miR-125b可下調(diào)BAK1的表達(dá)，從而抑制癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移與增殖[11]。LIU等[12]研究顯示，miR-125b對PI3K/AKT通路有抑制作用，可誘導(dǎo)膀胱癌細(xì)胞凋亡，miR-125b可發(fā)揮抑癌基因作用。CHEN等[13]研究也證實，miR-125b的低表達(dá)與上皮性卵巢癌的發(fā)生、進(jìn)展和轉(zhuǎn)移有關(guān)，還可降低化療的敏感性。本研究結(jié)果顯示，子宮內(nèi)膜癌組miR-125b相對表達(dá)水平明顯低于健康對照組，Ⅰ～Ⅱ期子宮內(nèi)膜癌患者miR-125b相對表達(dá)水平高于Ⅲ～Ⅳ期患者，中高分化子宮內(nèi)膜癌患者miR-125b相對表達(dá)水平高于低分化患者，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的子宮內(nèi)膜癌患者miR-125b相對表達(dá)水平高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者，深肌層浸潤的子宮內(nèi)膜癌患者miR-125b相對表達(dá)水平高于深肌層浸潤患者，與上述研究結(jié)果類似。有研究結(jié)果顯示，miR-29a在腫瘤的發(fā)生與發(fā)展中具有雙重作用[14-15]。本研究中子宮內(nèi)膜癌組miR-29a相對表達(dá)水平明顯低于健康對照組，Ⅰ～Ⅱ期、中高分化子、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、深肌層浸潤的子宮內(nèi)膜癌患者miR-29a相對表達(dá)水平較Ⅲ～Ⅳ期、低分化、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、淺肌層浸潤的子宮內(nèi)膜癌患者更高，提示miR-29a低表達(dá)可促進(jìn)子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生。miR-29a能與DNA甲基轉(zhuǎn)移酶3A中結(jié)構(gòu)互補(bǔ)，進(jìn)而控制遺傳基因的復(fù)制，miR-29a對基因組的異常甲基化具有調(diào)節(jié)作用，可增強(qiáng)抑癌基因的表達(dá)，miR-29a還可抑制磷脂酰肌醇激酶調(diào)節(jié)亞基p85a活性，從而促進(jìn)細(xì)胞凋亡，并控制細(xì)胞周期蛋白E減少，使細(xì)胞周期停滯，最終直接發(fā)揮抑癌作用[16-18]。此外，本研究中Pearson相關(guān)分析結(jié)果顯示，子宮內(nèi)膜癌患者miR-425-5p與miR-125b、miR-29a均呈負(fù)相關(guān)，提示miR-125b、miR-29a、miR-425-5p表達(dá)可能存在一定聯(lián)系，miR-425-5p表達(dá)上調(diào)、miR-125b及miR-29a表達(dá)下調(diào)可能具有類似的上游調(diào)節(jié)因素，或三者表達(dá)存在直接相互促進(jìn)或抑制作用，尚待進(jìn)一步研究予以證明。

miR-425-5p在子宮內(nèi)膜癌患者血清中相對表達(dá)水平升高，miR-125b、miR-29a在子宮內(nèi)膜癌患者血清中相對表達(dá)水平降低，miR-425-5p與miR-125b、miR-29a呈負(fù)相關(guān)，且三者水平與臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，可能作為子宮內(nèi)膜癌診斷、治療的新型靶點，值得臨床進(jìn)一步研究應(yīng)用。