164例HIV-1感染者梅毒RPR出現(xiàn)生物學(xué)假陽性情況分析*

劉 意,馮 霞,劉 安,魏虹娟,李 宇

首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京佑安醫(yī)院臨檢中心，北京 100069

目前，我國艾滋病進(jìn)入快速增長期，艾滋病的傳播方式也逐漸由高危人群向一般人群蔓延。至2018年我國新報告人類免疫缺陷病毒(HIV)感染者和艾滋病患者14.8萬例，估計當(dāng)年新發(fā)感染8.1萬例[1-2]。隨著HIV感染者的增加，梅毒快速血漿反應(yīng)素試驗(RPR)出現(xiàn)生物學(xué)假陽性(BFP)也隨之增加，HIV感染和BFP反應(yīng)是否具有相關(guān)性尚需進(jìn)一步研究。本研究通過對2019年6-12月本院性病門診就診的HIV-1感染者血清進(jìn)行梅毒特異性抗體、RPR檢測，同時檢測HIV病毒載量及CD4+T細(xì)胞計數(shù)，并進(jìn)行隨訪檢測，分析HIV-1感染者RPR出現(xiàn)BFP與病毒載量的相關(guān)性?，F(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 收集2019年6-12月本院感染中心性病門診就診者6 218例，男6 010例，年齡18～75歲，平均31歲；女208例，年齡21～62歲，平均36歲。臨床診斷主要為高危行為接觸、咨詢及尿道炎、生殖器皰疹等。所有樣本均進(jìn)行HIV抗體、梅毒抗體及RPR檢測，HIV-1抗體篩查試驗有反應(yīng)樣本需進(jìn)行HIV-1確證試驗進(jìn)行最終確認(rèn)并，根據(jù)《艾滋病和艾滋病病毒感染診斷：WS293-2019》[3]確診HIV感染者。所有受試者及家屬均對本研究知情同意并簽署知情同意書。

1.2儀器與試劑 梅毒特異性抗體檢測：熒光螺旋體IgG抗體吸收試驗(FTA-ABS-IgG)檢測采用德國歐蒙醫(yī)學(xué)診斷股份有限公司生產(chǎn)的梅毒熒光免疫吸附FTA-ABS-IgG試劑盒；非特異性抗體RPR采用上?？迫A生物工程股份有限公司生產(chǎn)的梅毒快速血漿反應(yīng)素試劑盒；HIV-1病毒載量采用瑞士ROCHE公司生產(chǎn)試劑盒；采用美國BDCD/4CD8/CD3/CD45四色熒光標(biāo)記抗體，BDFACSCali-bur流式細(xì)胞儀檢測CD4+T細(xì)胞計數(shù)。

1.3方法

1.3.1標(biāo)本采集 所有患者門診就診時用非抗凝分離膠采血管采集靜脈血5 mL離心后備用，乙二胺四乙酸三鉀鹽(EDTA-K3)抗凝10 mL備用。

1.3.2實驗室檢測 對篩選出的HIV-1感染者采用FTA-ABS-IgG、RPR進(jìn)行檢測，對RPR出現(xiàn)BFP的HIV-1感染者，根據(jù)抗病毒治療情況分成已治療和未治療兩組，檢測病毒載量及CD4+T細(xì)胞檢測并進(jìn)行比對，觀察抗病毒治療情況對RPR出現(xiàn)BFP有無影響，1年后隨訪檢測RPR，分析RPR出現(xiàn)BFP者的臨床轉(zhuǎn)歸情況。

1.3.3陽性判斷標(biāo)準(zhǔn) FTA-ABS-IgG結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)：梅毒螺旋體抗體在涂片反應(yīng)區(qū)域上產(chǎn)生特異性的熒光，陽性反應(yīng)的熒光模式必須和陽性對照的一致。每個反應(yīng)區(qū)中的螺旋體都必須清晰可辨，如果只有幾個螺旋體出現(xiàn)熒光，則不考慮判陽性，陰性反應(yīng)不出現(xiàn)熒光。RPR陽性結(jié)果判定：可見中等或較大的黑色凝塊判為陽性并進(jìn)行環(huán)狀連續(xù)倍比稀釋，以記錄最終稀釋滴度。病毒載量檢測判斷標(biāo)準(zhǔn)：標(biāo)本分別為200 μL，采用EasyQ方法，最低檢測限為50 copies/mL。

1.4RPR出現(xiàn)BFP判定標(biāo)準(zhǔn) 需排除技術(shù)性假陽性，即將同一份標(biāo)本重復(fù)實驗后結(jié)果仍為FTA-ABS-IgG陰性、RPR陽性。

1.5統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS24.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計分析，非正態(tài)分布的計量資料以M(P25，P75)表示，組間比較采用非參數(shù)檢驗；計數(shù)資料以頻數(shù)或百分率表示，組間比較采用χ2檢驗。采用Prism 6軟件對未治療HIV-1感染者病毒載量水平與RPR出現(xiàn)BFP進(jìn)行相關(guān)性分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1梅毒檢測結(jié)果 2 146例HIV-1感染者中，164例RPR出現(xiàn)BFP；4 072例HIV抗體陰性者中，22例RPR出現(xiàn)BFP。HIV-1感染者與HIV抗體陰性者BFP發(fā)生率比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。HIV-1感染者RPR滴度最高可至1∶16，HIV抗體陰性者RPR滴度以1∶2分布最多，見表1。

表1 出現(xiàn)BFP的不同人群RPR滴度分布情況[%(n/n)]

2.2病毒載量及CD4+細(xì)胞計數(shù)結(jié)果 HIV-1感染者中，164例RPR出現(xiàn)BFP患者中未進(jìn)行抗病毒治療的有140例，病毒載量基線HIV RNA 3.50(1.48～6.15)lg copies/mL，CD4+T細(xì)胞計數(shù)344.50(239.75～480.25)mm3；已進(jìn)行抗病毒治療24例，檢測不到HIV RNA目標(biāo)基因，CD4+T細(xì)胞計數(shù)420.00(289.25～611.75)mm3，已治療和未治療兩組CD4+T細(xì)胞計數(shù)比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。未治療組中，病毒載量為1.00～2.00 lg copies/mL的有17例(12.14%)，>2.00～3.00 lg copies/mL的有9例(6.43%)，>3.00～4.00 lg copies/mL的有47例(33.57%)，>4.00～5.00 lg copies/mL的有43例(30.71%)，>5.00 lg copies/mL的有24例(17.14%)，病毒載量水平與RPR出現(xiàn)BFP無相關(guān)性(P>0.05)。

2.3164例RPR出現(xiàn)BFP的HIV-1感染者隨訪檢測結(jié)果 1年后隨訪檢測FTA-ABS-IgG和RPR，其中FTA-ABS-IgG陰性、RPR轉(zhuǎn)為陰性109例，F(xiàn)TA-ABS-IgG陰性、RPR繼續(xù)陽性31例，F(xiàn)TA-ABS-IgG轉(zhuǎn)為陽性、RPR陽性24例。

3 討 論

目前，對于人體感染梅毒后產(chǎn)生心磷脂抗體的機(jī)制還不是完全明確。有學(xué)者認(rèn)為，梅毒螺旋體感染人體造成宿主細(xì)胞組織的破壞，宿主細(xì)胞的線粒體釋放出心磷脂，從而刺激機(jī)體產(chǎn)生心磷脂抗體[4]。但是近年來也有研究發(fā)現(xiàn)，梅毒螺旋體菌體細(xì)胞溶解物中含有大量心磷脂，因此認(rèn)為亦有可能是梅毒螺旋體本身釋放了心磷脂抗體[5]。

由梅毒螺旋體以外的其他生物致病因子或其他疾病因素引起的RPR陽性但梅毒螺旋體抗體陰性稱BFP[6]。目前，梅毒非特異性抗體血清學(xué)試驗通常有RPR、甲胺苯紅不加熱血清反應(yīng)素試驗及性病研究實驗室試驗等[7]，RPR主要采取心磷脂、卵磷脂、膽固醇作為抗原[8],用于檢測血清中非特異性抗體，特點是操作簡單、快捷、試驗用時少，主要用于梅毒臨床療效觀察,作為判定是否治愈、復(fù)發(fā)或再感染的觀測指標(biāo)。非特異性梅毒血清學(xué)試驗的特點是靈敏度較高，但在某些疾病狀態(tài)下可出現(xiàn)BFP[9]。導(dǎo)致RPR出現(xiàn)BFP的主要原因有某些自身免疫疾病、非梅毒螺旋體感染、靜脈吸毒，且該現(xiàn)象也偶見于健康人群。

本研究中，HIV-1感染者RPR出現(xiàn)BFP的比例明顯高于HIV抗體陰性者，與國外報道的研究顯示HIV抗體陽性組RPR出現(xiàn)BFP的比例高于HIV抗體陰性組觀點一致[10]。我國HIV感染人群主要為男男同性戀人群，國外HIV感染者以靜脈吸毒為主要感染途徑，雖國內(nèi)外HIV感染群體不同，但RPR出現(xiàn)BFP的比例均高于HIV陰性者，報道分析這可能與HIV感染者高γ球蛋白血癥及心磷脂抗體的形成有關(guān)[11]，具體發(fā)生原因還需做下一步研究。本研究中，出現(xiàn)BFP的HIV-1感染者的RPR滴度最高可達(dá)1∶16，而出現(xiàn)BFP的HIV抗體陰性人群的RPR滴度為1∶2的比例最高，與國外報道的相一致[4]，筆者認(rèn)為出現(xiàn)BFP的HIV抗體陰性人群的RPR滴度都較低,多小于1∶8，這可能與生成抗β2-糖蛋白I抗體和狼瘡抗凝物質(zhì)等的干擾有關(guān)，且可能導(dǎo)致動靜脈血栓形成、反復(fù)發(fā)生的流產(chǎn)及血小板減少等。HIV感染與多種機(jī)制引起的進(jìn)行性CD4+T細(xì)胞丟失和免疫功能障礙有關(guān)[12]，CD4+T細(xì)胞計數(shù)是反映HIV感染者免疫缺陷程度的重要指標(biāo)之一[13]。郭宏雄等[14]研究發(fā)現(xiàn)，梅毒可使HIV感染者體內(nèi)的病毒載量增加，CD4+T細(xì)胞計數(shù)降低，該研究對象為已確診梅毒和HIV共同感染的人群，與本研究對象是非梅毒的HIV感染者不同。本研究結(jié)果顯示，未進(jìn)行抗病毒治療的HIV-1感染者病毒載量水平與RPR出現(xiàn)BFP無相關(guān)性，但已進(jìn)行抗病毒治療及進(jìn)行抗病毒治療的HIV-1感染者CD4+T細(xì)胞計數(shù)比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，提示CD4+T細(xì)胞計數(shù)可能與RPR出現(xiàn)BFP有關(guān)。因此，若未進(jìn)行抗病毒治療的HIV-1感染者RPR出現(xiàn)BFP，臨床需要結(jié)合CD4+T細(xì)胞計數(shù)和其他檢測結(jié)果綜合分析，并加強(qiáng)隨訪管理。

本研究1年隨訪檢測RPR有109例轉(zhuǎn)為陰性，與GWANZURA等[15]報道的某些非梅毒螺旋體性感染，如HIV感染、病毒性肝炎、某些急性感染性發(fā)熱性疾病，BFP持續(xù)時間較短，常在6個月內(nèi)轉(zhuǎn)陰的結(jié)論一致。而24例FTA-ABS-IgG陽轉(zhuǎn)，提示初次FTA-ABS-IgG檢測陰性，可能與HIV感染抑制了FTA-ABS-IgG的敏感性，使其出現(xiàn)假陰性結(jié)果相關(guān)[4]。目前有國內(nèi)文獻(xiàn)報道，一些慢性疾病可使RPR出現(xiàn)BFP，且可能持續(xù)數(shù)年或終身[16]，但相關(guān)機(jī)制尚無成熟研究結(jié)果，本研究有31例RPR持續(xù)陽性者，還需進(jìn)一步追蹤隨訪研究其發(fā)展方向。本研究不足之處在于未進(jìn)一步探討HIV-1感染者RPR出現(xiàn)BFP和未出現(xiàn)BFP兩組之間的情況，以及其與病毒載量及CD4+T細(xì)胞計數(shù)的相關(guān)性，今后將進(jìn)一步進(jìn)行收集完善研究。

臨床上發(fā)現(xiàn)RPR出現(xiàn)BFP時，一方面要注意多方查找其潛在病因,另一方面也需考慮RPR檢測全程手工完成，檢測儀器是否定期校準(zhǔn)、移液器是否精確、人工操作是否規(guī)范等人為誤差因素可能造成RPR出現(xiàn)BFP的情況[17]。任何一種梅毒螺旋體抗體血清試驗都難以達(dá)到100%的準(zhǔn)確性，若發(fā)現(xiàn)BFP的情況可以進(jìn)行多種試驗，如酶聯(lián)免疫吸附試驗、梅毒螺旋體明膠凝集試驗(TPPA)、FTA-ABS、免疫印跡法等進(jìn)行驗證[18]。對于HIV-1感染者RPR出現(xiàn)BFP的情況，建議6個月后隨訪監(jiān)測RPR滴度，觀察其動態(tài)變化，若發(fā)現(xiàn)梅毒抗體呈陽性，需積極治療，杜絕傳播，同時也需要做好咨詢溝通以免引起過度恐慌。