種雞禽流感抗體檢測(cè)與分析

張繼剛

（遼寧省瓦房店市動(dòng)物疫病防控中心 116300）

隨著養(yǎng)雞規(guī)?；l(fā)展，雞群飼養(yǎng)密度越來(lái)越大，對(duì)環(huán)境條件的要求越來(lái)越高，最重要的是雞群生活環(huán)境中的致病菌發(fā)生了很大變化，給疾病防控工作帶來(lái)一定難度。目前對(duì)雞群危害較嚴(yán)重的傳染性疾病是禽流感，本病由A 型流感病毒引起，在環(huán)境中非常容易出現(xiàn)變異毒株，致使雞群發(fā)病程度存在明顯差異，并且屬于一種烈性傳染病，不僅影響雞群的健康生長(zhǎng)，使雞群均勻度和飼料轉(zhuǎn)化率降低，還會(huì)引起種雞產(chǎn)蛋率突然下降，甚至造成大批次死亡現(xiàn)象，給種雞群帶來(lái)難以估量的損失。禽流感在各國(guó)種雞場(chǎng)也普遍發(fā)生，被列為A 類(lèi)傳染病。目前我國(guó)雞場(chǎng)禽流感發(fā)病率較高，再加上免疫接種疫苗存在缺陷，致使無(wú)法通過(guò)黏膜免疫盡快產(chǎn)生抗體，但生活環(huán)境中禽流感病毒普遍存在，時(shí)刻威脅雞群健康。

為了更好地預(yù)防或控制禽流感疾病的發(fā)生，避免禽流感給種雞群帶來(lái)的不良影響，確保養(yǎng)雞業(yè)健康發(fā)展。管理人員需要根據(jù)當(dāng)?shù)厍萘鞲辛餍星闆r，讓專門(mén)獸醫(yī)人員制定合理的免疫程序，根據(jù)雞群日齡選擇毒株對(duì)型的疫苗進(jìn)行接種，還必須正確掌握種雞場(chǎng)禽流感的免疫接種效果，一旦免疫效價(jià)較低要立即查找原因，如果是疫苗毒株原因，需要立即更換疫苗重新接種，如果免疫程序失誤，需立即調(diào)整免疫接種計(jì)劃，如果雞群受到外界野毒威脅，需要及時(shí)為雞群緊急接種，采取多種措施確保種雞群具有較高的抗體水平，機(jī)體自身能產(chǎn)生很好的保護(hù)力，能抵御外界的野毒攻擊。為此對(duì)5 個(gè)種雞場(chǎng)的種雞群進(jìn)行抽樣，檢測(cè)禽流感抗體水平，下面將分析檢測(cè)結(jié)果，供種雞場(chǎng)技術(shù)人員參考[1]，有利于分析本場(chǎng)制定的免疫程序是否需要更改，或者是否對(duì)雞群進(jìn)行緊急接種。

1 材料和方法

1.1 所用材料

首先選擇5 個(gè)免疫接種禽流感疫苗的種雞群，讓專門(mén)獸醫(yī)人員隨機(jī)采集138 份血清用來(lái)檢測(cè)禽流感抗體水平。其次，H5亞型禽流感抗原、H5亞型禽流感陰性血清和J5亞型禽流感陽(yáng)性血清都是從中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)研究院所購(gòu)買(mǎi)的。準(zhǔn)備好微型振蕩器、培養(yǎng)箱、離心機(jī)和V 型微量凝集板等檢測(cè)器具或設(shè)備，準(zhǔn)備在實(shí)驗(yàn)室完成禽流感抗體檢測(cè)。

1.2 檢測(cè)方法

根據(jù)我國(guó)制定的關(guān)于高致病性禽流感診斷技術(shù)的標(biāo)準(zhǔn)實(shí)施微量紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)（HA）和紅細(xì)胞凝集抑制試驗(yàn)（HI），將上述血清樣本進(jìn)行禽流感抗體檢測(cè)，同時(shí)按照試劑說(shuō)明書(shū)或要求認(rèn)真操作，保證順利完成抗體檢測(cè)任務(wù)。

1.3 免疫接種效果評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

免疫接種效果評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)按照我國(guó)農(nóng)業(yè)部制定的標(biāo)準(zhǔn)來(lái)判斷，以完全抑制4 個(gè)血凝單位抗原的血清最高稀釋倍數(shù)作為紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)滴度，如果H5亞型禽流感血凝抑制試驗(yàn)的效價(jià)低于4log2 說(shuō)明免疫效果不達(dá)標(biāo)，反之，如果H5亞型禽流感血凝抑制試驗(yàn)的效價(jià)高于4log2 說(shuō)明免疫效果達(dá)標(biāo)，一個(gè)種雞群體抗體效價(jià)達(dá)標(biāo)的比率應(yīng)在70%以上，這樣才能說(shuō)明整個(gè)種雞群免疫接種效果較理想，如果種雞群抗體效價(jià)比率低于70%，需要緊急接種或調(diào)整免疫程序[2]。

2 檢測(cè)結(jié)果分析

采取血凝和血凝抑制試驗(yàn)，隨機(jī)將5 個(gè)種雞群的138 份血清樣本進(jìn)行H5亞型禽流感免疫抗體水平檢測(cè)，結(jié)果顯示，所有血清樣本的H5亞型禽流感抗體水平差別較大，基本分布在22～30 之間，其中抗體水平在25 左右的血清樣本比較集中且數(shù)量較多。按照檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，免疫接種效果達(dá)標(biāo)的種雞群，H5亞型禽流感抗體水平必須高于24，將所有參與檢測(cè)的138 個(gè)血清樣本進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，見(jiàn)附表。這5 個(gè)種雞群的免疫效果相差較大，其中有1 個(gè)種雞群的免疫效果沒(méi)有達(dá)標(biāo)，另外4 個(gè)種雞群的平均禽流感抗體水平超過(guò)24，說(shuō)明這4 個(gè)種雞群的禽流感免疫效果達(dá)標(biāo)。

附表 15 個(gè)種雞群H5 亞型禽流感抗體水平分布和免疫接種達(dá)標(biāo)率

這樣從總體方面來(lái)看，上述5 個(gè)種雞群H5亞型禽流感疫苗免疫接種效果比較理想，雞群達(dá)標(biāo)比率達(dá)到80%以上，超過(guò)國(guó)家規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)。表明這5 個(gè)種雞群的禽流感疫病防控情況比較理想，能對(duì)環(huán)境中的禽流感病毒產(chǎn)生一定的免疫力，說(shuō)明原來(lái)制定的免疫接種程序比較合理，應(yīng)按照原有計(jì)劃給其他種雞群進(jìn)行免疫接種。通常免疫效果良好的種雞群飼養(yǎng)管理也比較完善，如種雞環(huán)境溫度、濕度適宜、空氣質(zhì)量良好，不同生長(zhǎng)階段的飼料營(yíng)養(yǎng)全價(jià)，且對(duì)種雞群衛(wèi)生消毒工作、隔離飼養(yǎng)、采取全進(jìn)全出飼養(yǎng)方式等細(xì)節(jié)都落實(shí)到位，進(jìn)而獲取了較好的疫病防控效果[3]。

H5亞型禽流感抗體水平?jīng)]有達(dá)標(biāo)的1 個(gè)種雞群雖然與國(guó)際規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)比較接近，但說(shuō)明種雞群的飼養(yǎng)管理工作還存在缺陷，尤其是免疫接種禽流感疫苗效果不理想，需逐步改善種雞群的生活條件，供給營(yíng)養(yǎng)全價(jià)的飼料和舒適的溫濕度環(huán)境，提高雞群抗病能力。同時(shí)加強(qiáng)環(huán)境衛(wèi)生消毒工作，根據(jù)實(shí)際情況制定合理的衛(wèi)生消毒程序，每周定期對(duì)雞舍消毒2～3 次，交替使用消毒藥物，以提高消毒效果，徹底殺滅環(huán)境中存活的禽流感病毒，避免種雞群受到野毒侵染。最重要的是加強(qiáng)禽流感抗體水平檢測(cè)工作，實(shí)時(shí)掌握雞群禽流感抗體水平，必要時(shí)需要進(jìn)行緊急接種，讓疫苗抗原刺激機(jī)體產(chǎn)生較高的抗體水平，能更好地對(duì)種雞群產(chǎn)生保護(hù)作用[4]。如果還一直采取粗放管理，環(huán)境溫度、濕度和通過(guò)管理不當(dāng)，或者飼料營(yíng)養(yǎng)不良，衛(wèi)生消毒不嚴(yán)，會(huì)促使機(jī)體免疫力降低，在禽流感抗體水平較低的情況下雞群極易爆發(fā)禽流感疾病。

3 小結(jié)和討論

（1）通過(guò)以上研究發(fā)現(xiàn)，種雞群的H5亞型禽流感免疫抗體水平相對(duì)較高，對(duì)雞群具有較好的保護(hù)力，能很好抵御外界野毒攻擊。同時(shí)可以說(shuō)明種雞場(chǎng)飼養(yǎng)管理水平較高，且制定的免疫程序比較合理，且大部分種雞群禽流感抗體水平的達(dá)標(biāo)率在70%以上，充分說(shuō)明種雞群的禽流感疫病防控工作比較到位，成果顯著。

但也可能有的種雞群在檢測(cè)期間正好處于產(chǎn)蛋高峰期，此時(shí)禽流感疫苗抗體水平也處于較高水平，一般產(chǎn)蛋高峰過(guò)后，種雞群接種免疫禽流感疫苗頻率降低，因此，種雞產(chǎn)蛋后期禽流感抗體水平會(huì)降低一些。所以在抗體檢測(cè)前需要正確掌握種雞群的實(shí)際周齡或免疫接種時(shí)間，以便更好地對(duì)整個(gè)檢測(cè)結(jié)果有一個(gè)更加全面的評(píng)價(jià)和判斷，有利于對(duì)種雞群采取更加全面的疾病防控措施[5]。建議在種雞產(chǎn)蛋后期也定期進(jìn)行禽流感抗體檢測(cè)工作，以便及時(shí)發(fā)現(xiàn)禽流感抗體較低情況，并立即進(jìn)行免疫接種，始終維持種雞抗體水平處于保護(hù)狀態(tài)，避免在野毒侵?jǐn)_下發(fā)生疾病。

在疫病防控工作中，管理人員一直將種雞群免疫達(dá)標(biāo)率和抗體水平作為評(píng)判免疫效果的理論依據(jù)，如果種雞接種禽流感疫苗后抗體水平高，可以說(shuō)明疫苗質(zhì)量可靠、種雞群免疫應(yīng)答和免疫力較高，種雞群可以更好地抵御外界野毒入侵，傳染性禽流感的流行和爆發(fā)幾率大大降低。相反，如果種雞群免疫禽流感疫苗后抗體水平達(dá)標(biāo)率低下，說(shuō)明雞群沒(méi)有產(chǎn)生足夠的保護(hù)能力，感染外界野毒的機(jī)會(huì)相對(duì)較高，說(shuō)明疫苗質(zhì)量較差、免疫接種程序不合理或免疫接種效果不佳等。

（2）管理人員需要充分認(rèn)識(shí)到飼養(yǎng)管理中存在的不足，其中1 個(gè)禽流感抗體水平?jīng)]有達(dá)標(biāo)的種雞群存在以下幾方面問(wèn)題，①?zèng)]有制定合理的飼喂程序，種雞群既不能形成良好的采食和休息習(xí)慣，降低食欲和飼料轉(zhuǎn)化率，又不利于維持健壯體質(zhì)，還容易處于饑餓狀態(tài)或發(fā)生營(yíng)養(yǎng)缺乏情況，長(zhǎng)期下來(lái)種雞群免疫力和抗病能力降低，增加感染疾病的風(fēng)險(xiǎn)。種雞生活環(huán)境條件較差，雞舍內(nèi)溫度差異較大、空氣污濁、濕度較高，致使機(jī)體代謝紊亂或內(nèi)分泌失調(diào)，也會(huì)明顯降低機(jī)體免疫力。②在接種免疫過(guò)程中，讓飼養(yǎng)人員自己操作，沒(méi)有技術(shù)人員親自參與和監(jiān)督，這樣就無(wú)法保證每只種雞都可以得到劑量一致的禽流感疫苗，免疫接種后的抗體水平也會(huì)存在很大差異。③雞舍衛(wèi)生條件較差，地面污濁，糞便清理不及時(shí)，雞舍頂部布滿灰塵，說(shuō)明很長(zhǎng)時(shí)間沒(méi)有進(jìn)行有效消毒，這樣環(huán)境中的病原微生物蓄積過(guò)量，增加了種雞群感染致病菌的機(jī)會(huì)，容易感染各種疾病，尤其是感染網(wǎng)狀內(nèi)皮增生癥、淋巴白血病等免疫抑制性疾病后，對(duì)機(jī)體免疫器官產(chǎn)生抑制作用，即使種雞群接種免疫禽流感疫苗后，也不會(huì)產(chǎn)生理想的免疫應(yīng)答，進(jìn)而明顯降低疫苗免疫效果[6]。

（3）針對(duì)種雞場(chǎng)存在的一些關(guān)鍵問(wèn)題，需要管理人員改善飼養(yǎng)管理水平，提高種雞體質(zhì)和抗病能力，減少環(huán)境中存活的病原微生物數(shù)量，降低雞群感染各種疾病的機(jī)會(huì)。首先，給種雞群提供合理的溫度、濕度和光照等環(huán)境條件，隨著種雞不同生長(zhǎng)階段提高營(yíng)養(yǎng)全價(jià)的飼料，滿足各個(gè)時(shí)期對(duì)飼料營(yíng)養(yǎng)的需求，并且制定合理的飼喂程序，定時(shí)定量飼喂種雞群，以便提高種雞體質(zhì)和免疫力，增強(qiáng)對(duì)外界野毒的抵抗能力。其次，完善生物安全體系，做到全進(jìn)全出式飼養(yǎng)，對(duì)進(jìn)入廠區(qū)的車(chē)輛、物品嚴(yán)格進(jìn)行消毒處理，減少將外界野毒攜帶入場(chǎng)的風(fēng)險(xiǎn)。制定科學(xué)的消毒程序，定期對(duì)種雞舍內(nèi)和舍外進(jìn)行清理和消毒，殺滅環(huán)境中的病原體，降低雞群感染發(fā)病的風(fēng)險(xiǎn)。獸醫(yī)人員在免疫接種前后適時(shí)進(jìn)行抗體檢測(cè)，確保雞群處于保護(hù)力較高的狀態(tài)，最主要的是能逐步完善種雞場(chǎng)的疾病防控工作，為養(yǎng)雞業(yè)的健康發(fā)展保駕護(hù)航。

4 結(jié)語(yǔ)

對(duì)種雞群進(jìn)行禽流感免疫抗體水平檢測(cè)工作，能及時(shí)掌控種雞群的整體禽流感抗體水平，幫助獸醫(yī)人員更加全面地分析禽流感疫苗免疫接種效果，以便及時(shí)調(diào)整免疫接種程序，或者對(duì)雞群進(jìn)行緊急接種免疫。同時(shí)定期檢測(cè)種雞群禽流感抗體水平，有效掌握機(jī)體內(nèi)禽流感抗體水平的消減規(guī)律，進(jìn)一步優(yōu)化和改進(jìn)種雞場(chǎng)禽流感疫苗免疫接種程序。同時(shí)還可以評(píng)估種雞群是否存在感染禽流感疫病的風(fēng)險(xiǎn)，搞清楚禽流感疫病在當(dāng)?shù)氐牧餍星闆r，合理評(píng)判所選禽流感疫苗質(zhì)量是否優(yōu)良，這樣可以幫助種雞場(chǎng)選擇更加優(yōu)質(zhì)和毒株對(duì)型的禽流感疫苗，避免無(wú)味增加禽流感疫苗的免疫接種次數(shù)，致使雞群產(chǎn)生免疫麻痹現(xiàn)象?？傊?，適時(shí)檢測(cè)禽流感疫苗抗體不僅可以適時(shí)進(jìn)行免疫接種，確保種雞群處于健康狀況，還能降低種雞場(chǎng)疫苗成本，提高養(yǎng)殖效益。