規(guī)模豬場(chǎng)非洲豬瘟監(jiān)測(cè)凈化技術(shù)的研究與應(yīng)用

許崇友 韓勇

(1，山東省日照市東港區(qū)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心 276800；2，山東省日照市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心 276800）

非洲豬瘟（African Swine fever,ASF）是由非洲豬瘟病毒（African Swine fever virus,ASFV）感染家豬和野豬引起的一種出血性病毒病[1]。ASFV 感染豬的臨診表現(xiàn)為呼吸障礙、皮膚及臟器廣泛出血等，對(duì)養(yǎng)豬業(yè)危害嚴(yán)重，被納入世界動(dòng)物衛(wèi)生組織(OIE) 通報(bào)性疾病名錄中[2]。非洲豬瘟于1921 年被肯尼亞首次報(bào)道，并在幾十年的時(shí)間里陸續(xù)傳播到葡萄牙、南美洲、高加索、俄羅斯等29 個(gè)國(guó)家，是一種被世界各國(guó)重視的疫病，也被世界動(dòng)物衛(wèi)生組織規(guī)定需將疫病問(wèn)題及時(shí)上報(bào)[3]。自2018年8 月中國(guó)發(fā)生第一例非洲豬瘟疫情以來(lái)，給我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。

自2014 年以來(lái)，為推動(dòng)我國(guó)豬凈化工作，提高動(dòng)物疫病防控條件和管理水平，中國(guó)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心印發(fā)了《規(guī)?；N豬場(chǎng)主要?jiǎng)游镆卟艋夹g(shù)指南》，要求在全國(guó)范圍內(nèi)開(kāi)展“規(guī)模化養(yǎng)殖場(chǎng)主要?jiǎng)游镆卟艋痉秷?chǎng)”“規(guī)?；B(yǎng)殖場(chǎng)動(dòng)物疫病凈化創(chuàng)建場(chǎng)”評(píng)估認(rèn)證工作。2021 年8 月，山東省畜牧獸醫(yī)局印發(fā)《山東省重點(diǎn)動(dòng)物疫病監(jiān)測(cè)凈化工作方案（2021 版）》，要求開(kāi)展非洲豬瘟等主要豬病監(jiān)測(cè)凈化工作，推動(dòng)動(dòng)物疫病防控從穩(wěn)定控制到凈化。

為做好規(guī)模場(chǎng)非洲豬瘟防控工作，課題組選取日照原種豬場(chǎng)、五蓮新好農(nóng)牧有限公司（新希望集團(tuán)子公司）、莒縣雙胞胎畜牧有限公司等大型規(guī)模豬場(chǎng)，開(kāi)展非洲豬瘟監(jiān)測(cè)凈化技術(shù)研究。本課題通過(guò)對(duì)非洲豬瘟采樣方法、檢測(cè)儀器和試劑、獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室布局等進(jìn)行研究，探索適合日照市的非洲豬瘟規(guī)模場(chǎng)監(jiān)測(cè)凈化方法。本方法應(yīng)用于日照原種豬場(chǎng)、五蓮新好農(nóng)牧有限公司（新希望集團(tuán)子公司）、莒縣雙胞胎畜牧有限公司等規(guī)模場(chǎng)非洲豬瘟凈化場(chǎng)的創(chuàng)建，成效顯著。

1 規(guī)模豬場(chǎng)非洲豬瘟監(jiān)測(cè)凈化技術(shù)研究

1.1 技術(shù)總路線

本研究建立了一套完整的規(guī)模豬場(chǎng)生物安全監(jiān)測(cè)凈化體系。主要技術(shù)路線是建設(shè)適合規(guī)模場(chǎng)的獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室，建立相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理體系，篩選檢測(cè)設(shè)備和試劑，開(kāi)展場(chǎng)外場(chǎng)內(nèi)采樣方法研究，通過(guò)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)及時(shí)發(fā)現(xiàn)陽(yáng)性進(jìn)行預(yù)警。

1.2 采樣方法

根據(jù)規(guī)模場(chǎng)風(fēng)險(xiǎn)因素分析，建立采樣方案，將采樣對(duì)象分為場(chǎng)外采樣、場(chǎng)內(nèi)采樣。

1.2.1 場(chǎng)外采樣

分析規(guī)模場(chǎng)外風(fēng)險(xiǎn)因素，確定需要監(jiān)測(cè)的對(duì)象，主要包括車(chē)輛、物資、食材、藥品、消毒站、無(wú)害化處理點(diǎn)、外部隔離點(diǎn)7 大類(lèi)，對(duì)采樣內(nèi)容、數(shù)量、頻率和檢測(cè)要求進(jìn)行研究，建立規(guī)模場(chǎng)場(chǎng)外采樣方法（表1）。

表1 規(guī)模場(chǎng)場(chǎng)外采樣方法

1.2.2 場(chǎng)內(nèi)采樣

分析規(guī)模場(chǎng)內(nèi)風(fēng)險(xiǎn)安全風(fēng)險(xiǎn)因素，確定需要監(jiān)測(cè)采樣的對(duì)象，主要包括進(jìn)場(chǎng)人員、豬場(chǎng)區(qū)舍內(nèi)、飼料點(diǎn)、污水、水樣、場(chǎng)內(nèi)車(chē)、豬群6 大類(lèi)，對(duì)采樣內(nèi)容、數(shù)量、頻率和檢測(cè)要求進(jìn)行研究，建立規(guī)模場(chǎng)場(chǎng)內(nèi)采樣方法（表2）。

表2 規(guī)模場(chǎng)場(chǎng)內(nèi)采樣方法

1.3 采樣處理

1.3.1 環(huán)境采樣

可在屋子四周的4 個(gè)點(diǎn)和中間采集，相同點(diǎn)位的樣品合樣為1 個(gè)。

1.3.2 飼料采樣

每天生產(chǎn)結(jié)束和裝料結(jié)束后，在混合機(jī)下料流管和散裝倉(cāng)下料口內(nèi)壁，同一位置多個(gè)取樣點(diǎn)做好編號(hào)。

1.3.3 進(jìn)場(chǎng)車(chē)輛

輪胎、車(chē)體、車(chē)底、駕駛室、原料車(chē)廂內(nèi)部。采集外表車(chē)廂5 個(gè)位點(diǎn)、底盤(pán)3 個(gè)位點(diǎn)、輪胎2 個(gè)位點(diǎn)、駕駛室2 個(gè)位點(diǎn)，合為1 個(gè)樣檢測(cè)。

1.3.4 外來(lái)人員

在換衣間外采樣，員工在入場(chǎng)后更換工作服后采樣，采集面部皮膚、手部皮膚、頭發(fā)、衣物、鞋底，為1 個(gè)樣品。

1.3.5 物資采樣

去除外包裝，放入物資消毒間后，每批次物資隨機(jī)選取5個(gè)位點(diǎn)采樣，采樣放到離心管，為1 個(gè)樣品。

1.4 檢測(cè)儀器和試劑

針對(duì)日照市規(guī)模場(chǎng)實(shí)際，結(jié)合當(dāng)前非洲豬瘟病原學(xué)和血清檢測(cè)儀器，日照市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心開(kāi)展了屠宰場(chǎng)和部分規(guī)模豬場(chǎng)非洲豬瘟檢測(cè)能力比對(duì)試驗(yàn)，對(duì)非洲豬瘟檢測(cè)儀器和試劑準(zhǔn)確性、穩(wěn)定性、特異性進(jìn)行研究，篩選出適合的檢測(cè)儀器和試劑（表3 和4）。

表3 非洲豬瘟檢測(cè)儀器

表4 非洲豬瘟檢測(cè)試劑

1.5 檢測(cè)方法

對(duì)豬全血、眼鼻拭子、肛拭子、扁桃體、淋巴結(jié)、脾臟、環(huán)境樣品等采用熒光實(shí)時(shí)PCR 方法檢測(cè)非洲豬瘟病原?？贵w監(jiān)測(cè)檢測(cè)采用ELISA 方法。

1.6 規(guī)模場(chǎng)獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室布局和工作質(zhì)量控制

非洲豬瘟分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室設(shè)置配液室、核酸提取室和熒光PCR 擴(kuò)增區(qū)3 個(gè)功能室。另外，配置接樣室、樣品保存室、血清室、無(wú)害處理室等功能操作室，做好生物安全措施。

獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室要建立《質(zhì)量手冊(cè)》 《生物安全管理手冊(cè)》《規(guī)章制度》 《程序文件》 等體系文件，參照農(nóng)業(yè)農(nóng)村部《獸醫(yī)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室考核管理辦法》 規(guī)定的考核細(xì)則，購(gòu)置實(shí)驗(yàn)室設(shè)施設(shè)備，完善各類(lèi)檔案建立。

2 應(yīng)用

自2018 年以來(lái)，日照市聯(lián)合區(qū)縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)聯(lián)合開(kāi)展技術(shù)研究，并將技術(shù)在日照原種豬場(chǎng)、五蓮新好農(nóng)牧有限公司（新希望集團(tuán)子公司）、莒縣雙胞胎畜牧有限公司等規(guī)模場(chǎng)應(yīng)用，較好的防控了非洲豬瘟等豬病，取得了顯著的成效。2020 年日照原種豬場(chǎng)通過(guò)省級(jí)“偽狂犬病、豬瘟和豬藍(lán)耳病凈化創(chuàng)建場(chǎng)”驗(yàn)收，2021 年9 月，上述3 家企業(yè)已申報(bào)非洲豬瘟凈化創(chuàng)建場(chǎng)。

3 討論與分析

（1）抽樣方法的選擇對(duì)非洲豬瘟監(jiān)測(cè)非常重要。對(duì)豬群進(jìn)行抽樣，流行病學(xué)采樣方式是按照群內(nèi)陽(yáng)性率，置信水平和試驗(yàn)敏感性進(jìn)行抽樣。本研究按照每個(gè)單元5 頭進(jìn)行采樣，未按照流行病學(xué)采樣方式，不能最大限度地反映豬場(chǎng)非洲豬瘟感染情況。下一步要繼續(xù)完善抽樣方式、盡最大限度反應(yīng)豬群的健康狀況。

（2）非洲豬瘟防控是一個(gè)綜合、系統(tǒng)的生物安全體系，而日常監(jiān)測(cè)與監(jiān)控對(duì)生產(chǎn)具有關(guān)鍵性的指導(dǎo)作用，監(jiān)測(cè)是否準(zhǔn)確是非瘟防控的重點(diǎn)環(huán)節(jié)，但大規(guī)模、高頻率的采樣監(jiān)測(cè)增加了豬群應(yīng)激和感染風(fēng)險(xiǎn)。因此，非洲豬瘟防控尤其要把握好豬場(chǎng)進(jìn)出口及周邊環(huán)境監(jiān)測(cè)，同時(shí)提升監(jiān)測(cè)技術(shù)的靈敏度和特異性。每個(gè)豬場(chǎng)需要根據(jù)自身疫病壓力和條件制定合理的監(jiān)測(cè)體系[4]。

（3）加強(qiáng)豬場(chǎng)生物安全綜合防控，單靠監(jiān)測(cè)來(lái)防控豬瘟有一定的困難。由于非洲豬瘟沒(méi)有特效疫苗和特效藥，切斷傳播途徑是防控非洲豬瘟的關(guān)鍵，因此，建立豬場(chǎng)生物安全體系尤為重要。非洲豬瘟防控的關(guān)鍵措施是要加強(qiáng)生物安全體系建設(shè)，加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，定期進(jìn)行消毒，選擇敏感消毒藥，制定科學(xué)的消毒程序。對(duì)病豬進(jìn)行嚴(yán)格的隔離和淘汰，對(duì)死亡生豬做好無(wú)害化處理。

（4）推動(dòng)動(dòng)物疫病防控從穩(wěn)定控制到凈化。本課題研究了非洲豬瘟凈化技術(shù)，探索適合日照地區(qū)的凈化路線，以凈化創(chuàng)建場(chǎng)為抓手，以點(diǎn)帶面，以點(diǎn)促面，推進(jìn)非洲豬瘟凈化向無(wú)疫小區(qū)和無(wú)疫區(qū)發(fā)展。