水楊酸誘導鴨梨抗黑斑病效果及機理的探討

魏亞蕊，趙曙良，成曉華，閆 琦，劉 娜，張玉星

(1.河北農(nóng)業(yè)大學 園藝學院，河北省梨工程技術研究中心，河北 保定 071000；2.河北工程大學 園林與生態(tài)工程學院，河北 邯鄲 056038)

鴨梨(PyrusbretschneideriWhite Pear Group)原產(chǎn)于我國，屬白梨系統(tǒng)的傳統(tǒng)優(yōu)良品種，是全國梨三大主要栽培品種之一[1]，是我國第一大出口創(chuàng)匯品種。梨黑斑病是生產(chǎn)上主要病害之一，該病害是一種世界性病害，在日本、韓國和我國梨產(chǎn)區(qū)發(fā)病嚴重[2-3]。梨黑斑病主要危害梨樹葉片、新梢和果實，導致樹體衰弱，結果年限縮短[4]，如果防治不及時，會給梨樹生產(chǎn)造成較大危害[5]，嚴重影響梨果實的產(chǎn)量和品質(zhì)。

水楊酸(Salicylic acid，SA)是植物重要的防衛(wèi)激素，是誘導植物產(chǎn)生抗病反應的重要內(nèi)源免疫信號[6]，不僅能激活植株產(chǎn)生局部防御反應，而且能誘導植物獲得系統(tǒng)獲得性抗性(Systemic acquired resistance，SAR)[7]。外源施加SA可使植物對多種真菌、病毒及細菌引發(fā)的病害產(chǎn)生廣譜抗性，其使用方法簡單、高效，無污染，在植物抗病中發(fā)揮著重要作用[8]。研究表明，外施100 μg/mL SA可誘導蘋果(Maluspumila)抗斑點落葉病，誘抗效果達到70.9%[9]；用1.0～10.0 mmol/L SA連續(xù)噴霧處理玉米幼苗6 d，可以明顯減輕供試玉米幼苗的病害癥狀，表現(xiàn)為病斑數(shù)少、病斑面積小，其中10.0 mmol/L SA防治效果最好，誘抗效果達56%[10]。0.05 mmol/L SA可顯著降低草地早熟禾褐斑病的發(fā)病率，誘抗效果最高達53%[11]。

本研究以河北農(nóng)業(yè)大學實驗農(nóng)場梨園鴨梨葉片和果實為試材，分離、鑒定了鴨梨黑斑病病原菌的類型，檢測了經(jīng)黑斑病菌處理鴨梨離體葉片后SA信號通路相關基因的表達量及內(nèi)源SA含量的變化，研究了外源SA對鴨梨果實抗黑斑病的影響，探討了SA誘導鴨梨抗黑斑病的作用機理，旨在為研究防治鴨梨黑斑病的生物制劑和抗病育種提供理論依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 鴨梨黑斑病病原菌的分離純化及形態(tài)學觀察

2018年5月從河北農(nóng)業(yè)大學實驗農(nóng)場梨園(保定)采集鴨梨黑斑病病葉。采用常規(guī)的組織分離法[12]進行病原菌分離及純化。

將純化菌株接種在PDA培養(yǎng)基上，25 ℃黑暗培養(yǎng)7 d后，挑取菌絲放在滴有水滴的載玻片上，將菌絲打散蓋上蓋玻片，在光學顯微鏡下觀察分生孢子的形態(tài)、顏色、大小及分生孢子梗特征。根據(jù)病原菌的菌落形態(tài)及顏色特征并參考《真菌鑒定手冊》[13]對病原菌進行初步鑒定。

1.2 病原菌致病性鑒定

選擇健康幼嫩葉片，將葉片用無菌水沖洗干凈，用75% 酒精將葉片表面消毒，無菌水沖洗3次后晾干并置于水瓊脂培養(yǎng)皿內(nèi)保濕培養(yǎng)。

分生孢子懸浮液接種法：純化菌株培養(yǎng)10 d后，加入5.0 mL無菌水刮洗菌絲，將分生孢子懸浮液用3層滅菌紗布過濾，用血球計數(shù)板將分生孢子懸浮液配成1.0×106cfu/mL濃度，取20.0 μL分生孢子懸浮液針刺接種至鴨梨離體葉片。

待接種葉片發(fā)病后，依據(jù)柯赫氏法則(Koch′s Postulates)，對病原菌重新分離純化，觀察新分離物是否與接種菌相同。

1.3 病原菌分子生物學鑒定

1.3.1 病原菌基因組DNA的提取 用玻璃棒刮取培養(yǎng)10 d的菌絲，迅速加入液氮研磨成粉末，根據(jù)真菌基因組DNA快速提取試劑盒(Aidlab，中國)步驟說明提取菌株基因組DNA，并將菌株DNA樣品置于-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.2ITS、HIS、RPB2、ACT基因克隆 利用真菌ITS、HIS、RPB2、ACT多基因綜合鑒定法對分離得到的病原菌進行鑒定，引物序列如表1所示。PCR反應體系：2 × Es Taq MasterMix 10.0 μL；菌株基因組DNA 1.0 μL，引物各0.5 μL(10 μmol/L)；ddH2O 8.0 μL。PCR反應條件：94 ℃預變性2 min；94 ℃變性30 s，55 ℃退火30 s，72 ℃延伸15 s，32個循環(huán)；72 ℃ 2 min，16 ℃ 保溫。

PCR擴增產(chǎn)物經(jīng)SanPrep柱式DNA膠回收試劑盒(Sangon Biotech，中國)回收純化，利用pEASY-Blunt Zero Cloning Kit(TransGen，中國)將回收產(chǎn)物與pEASY-Blunt Zero克隆載體連接轉(zhuǎn)化，轉(zhuǎn)化子經(jīng)PCR鑒定后，選取陽性克隆菌液測序。

1.3.3 病原菌ITS、HIS、RPB2、ACT序列分析 將測序序列與GenBank中已有數(shù)據(jù)進行同源性對比，利用Mega 6.0軟件中的鄰接法(Neighbour-joining methods，NJ)構建多基因聚合的系統(tǒng)發(fā)育樹，分析該菌和同屬其他菌株的親緣關系，再結合病原菌形態(tài)、培養(yǎng)特征確定病原菌類型。

1.4 水楊酸對黑斑病菌生長的影響

將正常培養(yǎng)7 d的黑斑病菌，用打孔器在菌落邊緣均勻打取菌餅，分別置于不同濃度的SA(0，0.002，0.02，0.20，2.0，10.0，20.0 mmol/L)PDA平板中，于25 ℃黑暗培養(yǎng)5 d，觀察并記錄菌落直徑，計算抑菌率，每個濃度處理重復6次。

1.5 外源水楊酸對鴨梨果實抗黑斑病的影響

選擇大小一致的鴨梨，分別在0，0.02，0.2，2.0 mmol/L SA中室溫浸泡1 h后刺傷果皮，接種菌餅，室溫黑暗培養(yǎng)，接種7，14 d分別測量病斑直徑。每個濃度處理30個鴨梨，10個鴨梨為一次重復。

1.6 植物總RNA提取及RT-PCR

鴨梨葉片總RNA的提取，根據(jù)MiniBEST Plant RNA Extraction Kit(TaKaRa，日本)試劑盒說明步驟提取總RNA。根據(jù)FastQuant RT kit(with gDNase)(TIANGEN，中國)說明書去除基因組DNA及cDNA第一條鏈合成。實時熒光定量PCR(Real-time quantitative PCR)使用儀器為LightCycler?96 system(Roche，瑞士)，熒光染料采用TransStart Top Green qPCR SuperMix(TRANS，中國)，利用2-ΔΔCt方法計算目的基因相對表達量。采用Duncan′s test進行顯著性分析。Real-time RT-PCR所用引物序列如表1所示。

由政府主導，行業(yè)協(xié)會指導，跨境電商領軍型企業(yè)牽頭，在共享供應鏈的基礎上，以跨境物流聯(lián)盟的形式共建海外倉。針對義烏跨境電商產(chǎn)業(yè)中跨境物流成本高的問題，一方面通過引導義烏中小跨境電商出口企業(yè)在共創(chuàng)品牌提升產(chǎn)品附加值的基礎上提高海外倉的應用，加強海外倉物流信息的可視化和透明化，讓賣家更好掌控物流、運營、財務等狀況；另一方面需要加強規(guī)范化建設，主動為企業(yè)提供海外倉政策、法律、稅收等咨詢服務，提供融資、審批、資格認證等政策支持，可通過政府專項資金幫助義烏中小跨境電商出口企業(yè)體驗海外倉帶來的便利和業(yè)績提升，提升義烏小商品的產(chǎn)品附加值和競爭力。

表1 研究中所用引物序列Tab.1 List of primer sequences used in this study

1.7 水楊酸的提取與檢測

稱取0.5 g樣本放入研缽加液氮迅速研磨成粉末，加入1.0 mL預冷的90%甲醇，4 ℃浸提，過夜，8 000 r/min離心10 min，吸取上清液至離心管中；剩余殘渣用0.5 mL 90%甲醇浸提2 h，8 000 r/min離心10 min，吸取上清液，將2次上清液合并；40 ℃ 減壓蒸發(fā)有機相至剩余0.3 cm水溶液，加入20.0 μL 1.0 mg/mL三氯乙酸水溶液，振蕩混勻，加入1.0 mL環(huán)己烷與乙酸乙酯混合液(V∶V=1∶1)萃取，重復1次；將上層有機相轉(zhuǎn)移至新離心管中，氮吹吹干；加入0.5 mL甲醇溶液溶解、過濾，所得溶液即為樣本中游離態(tài)SA；在步驟3中下層水相中加入0.5 mL 2 mol/L鹽酸溶液，搖勻，密閉，80 ℃水浴1 h；加入1.0 mL環(huán)己烷與乙酸乙酯混合液(V∶V=1∶1)萃取2次，同樣將上層有機相轉(zhuǎn)移至新離心管中，氮吹吹干；加入0.5 mL甲醇溶液溶解、過濾，所得溶液為樣本中結合態(tài)SA。

HPLC液相條件：Agilent 2600高效液相色譜，反向色譜柱Kromasil C18柱(250 mm×4.6 mm，5.0 μm)。配置流動相：流動相A為65%的乙腈溶液(pH值2.8)；流動相B為甲醇。將流動相A和B按照30∶70混合進樣，柱溫25 ℃，進樣量20.0 μL，走樣時間5.0 min，流速1.0 mL/min，激發(fā)波長280.0 nm。

2 結果與分析

2.1 病原菌分離純化及形態(tài)特征觀察

從河北農(nóng)業(yè)大學實驗農(nóng)場梨園采集病葉(圖1-A、B)，將患黑斑病的鴨梨葉片進行病原菌分離獲得致病菌菌株，該菌株在PDA培養(yǎng)基上呈近圓形等徑輻射生長，菌株邊緣光滑并略顯波浪狀，其氣生菌絲較發(fā)達，初期白色，后期逐漸變?yōu)榛液谏?圖 1-C、D)。菌株培養(yǎng)7 d后產(chǎn)生大量分生孢子，在光學顯微鏡下觀察病原菌形態(tài)(圖1-E、F)，分生孢子單生或串生，淡褐色，形態(tài)多為近球形、倒棒狀或倒梨形，分生孢子表面光滑或具疵，具有3～11個橫膈膜和1～9個縱、斜隔膜，分隔處略有縊縮，分生孢子梗直立或略彎，有分隔，淡褐色，常呈分枝或不分枝的孢子鏈，有短分枝的孢子鏈，作合軸式延伸。根據(jù)這些特征，參照《中國真菌志》及《真菌鑒定手冊》初步判定此類病原菌為鏈格孢屬(Alternariasp.)真菌。

A、B.鴨梨黑斑病病葉田間癥狀；C、D.病原菌菌落形態(tài)觀察，比例尺為1 cm；E、F.病原菌分生孢子及分生孢子梗。A，B.Conidia and conidiophore of pathogen;C，D.The field symptoms of Yali black spot；E，F(xiàn).Morphological characteristics of fungal colonies，Bar is 1 cm.

2.2 病原菌的鑒定

以病原菌菌株基因組DNA為模板，利用真菌通用引物ACT、HIS、ITS、RPB2進行PCR擴增，分別得到543，440，571，985 bp的擴增產(chǎn)物(圖2-A)，將擴增產(chǎn)物回收，連接至pEASY-Blunt Zero克隆載體，PCR鑒定正確的克隆菌液送測序，獲得鴨梨黑斑病病原菌的Black spotACT、Black spotHIS、Black spotITS、Black spotRPB2基因序列。從GenBank下載鏈格孢屬真菌，鏈格孢(Alternariaalternate)、甘藍鏈格孢(Alternariabrassicicola)、胡蘿卜鏈格孢(Alternariadauci)、喬木鏈格孢(Alternariaarborescens)、細級鏈格孢(Alternariatenuissima)、茄鏈格孢(Alternariasolani)、侵染鏈格孢(Alternariainfectoria)和云薹鏈格孢(Alternariabrassicae)的ACT、HIS、ITS、RPB2基因序列與鴨梨黑斑病病原菌的Black spotACT、Black spotHIS、Black spotITS、Black spotRPB2基因序列進行多基因系統(tǒng)進化分析，構建系統(tǒng)發(fā)育樹(圖2-B)，結果表明，鴨梨黑斑病菌屬于鏈格孢菌屬真菌，同時結合病原菌形態(tài)觀察及多基因綜合鑒定結果，明確河北農(nóng)業(yè)大學實驗農(nóng)場梨園鴨梨黑斑病病原菌為鏈格孢屬鏈格孢菌。

A.梨黑斑病病原菌HIS、ACT、RPB2、ITS基因的擴增：M.Marker。 B.梨黑斑病病原菌HIS、ACT、RPB2、ITS多基因系統(tǒng)進化樹的構建：紅色字體表示7種鏈格孢菌的HIS基因，藍色字體表示的是6種鏈格孢菌的ACT基因，橙色字體代表8種鏈格孢菌的RPB2基因，粉紅色字體代表8種鏈格孢菌的ITS基因；黑色字體梨黑斑Black spot HIS，梨黑斑Black spot ACT，梨黑斑Black spot RPB2，梨黑斑Black spot ITS分別代表鴨梨黑斑病病原菌的HIS，ACT，RPB2，ITS基因。

2.3 病原菌的致病性檢測

鴨梨離體葉片接種黑斑病菌分生孢子懸浮液，分別觀察0，6，12，24，48，72，96，120 h葉片病斑的發(fā)展進程，并取樣。圖 3-A、B結果顯示，離體葉片接種黑斑病菌48 h開始出現(xiàn)病斑，72 h病斑上開始出現(xiàn)白色菌絲，隨著時間增長，菌絲逐漸增多，但病斑大小無明顯變化，清水處理為對照組，無病癥產(chǎn)生。發(fā)病葉片病斑組織鏡檢觀察該分生孢子和菌絲與接種菌株的形態(tài)一致。對發(fā)病組織重新進行病原菌分離，獲得與病原菌形態(tài)一致的菌株，完成柯赫氏法則的致病性驗證，同時，再次驗證了本試驗接種所用的鏈格孢菌菌株是引起鴨梨黑斑病的病原菌。

A.鴨梨離體葉片接種黑斑病菌后不同時間的病斑表型(比例尺為1.0 cm)。B.對鴨梨接黑斑病菌0，24～120 h共6個時間點病斑部位的放大。A.The disease spot phenotype of Yali leaves after inoculation at different times(Bar is 1 cm).B.Amplification of disease spots at 6 time points at 0，24-120 h after inoculation.

2.4 鴨梨葉片接種黑斑病菌對其水楊酸含量的影響

圖3結果表明，鴨梨離體葉片接種黑斑病菌分生孢子懸浮液后48 h開始出現(xiàn)病斑，72 h病斑面積達到最大，病斑表面開始出現(xiàn)菌絲，隨著接種時間的延長病斑表面的菌絲逐漸增多。為了進一步明確黑斑病菌的侵染對鴨梨內(nèi)源SA的影響，通過HPLC檢測了接種0，72 h鴨梨葉片內(nèi)SA的含量，接種72 h鴨梨葉片內(nèi)游離態(tài)SA含量由0 mg/g增至0.02 mg/g，結合態(tài)SA含量由0.47 mg/g增至1.55 mg/g(圖4)。結果表明，鴨梨葉片接種黑斑病菌誘導葉片內(nèi)源SA含量增加。

樣本間各小寫字母表示不同時間點差異顯著(P<0.05)。 Various letters among samples indicate significant difference at different time points(P<0.05).

2.5 黑斑病菌侵染鴨梨離體葉片對SA信號通路相關基因的影響

NPR1是SA信號通路中關鍵的調(diào)控因子，NPR1、NPR3、NPR4作為SA的受體，在植物抗病反應中發(fā)揮著重要作用[14]。為了進一步明確黑斑病菌的侵染對鴨梨SA信號通路相關基因的影響，通過RT-PCR分析表明，鴨梨離體葉片接種黑斑病菌96 h與接種0 h相比，Pbrgene12425(PbrNPR1-like)、(Pbrgene6286(PbrNPR3-like)表達分別上調(diào)5.48，4.66倍(圖5)。PR1是系統(tǒng)獲得抗病性的標記基因，Pbrgene8895(PbrNPR4-like)、Pbrgene43605(PbrPR1-like)在黑斑病菌接種120 h與接種0 h相比，其表達量上調(diào)7.90,10.0倍左右。清水對照試驗中，Pbrgene12425、Pbrgene8895、Pbrgene6286、Pbrgene43605相比處理組表達量變化不明顯。結果表明，SA信號通路中關鍵基因Pbrgene12425、Pbrgene6286、Pbrgene8895及Pbrgene43605基因在鴨梨抗黑斑病過程中被誘導上調(diào)表達，參與鴨梨抗病過程。

圖5 黑斑病菌侵染鴨梨葉片SA信號通路相關基因的表達Fig.5 The expression of the related genes in SA signaling in inoculated Yali leaves

2.6 外源水楊酸對鴨梨果實抗黑斑病的影響

2.6.1 水楊酸對黑斑病菌菌絲生長的影響 為明確外源SA對黑斑病菌菌絲生長的影響，將黑斑病菌接種至含不同濃度SA的PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)。當添加的外源SA濃度≤0.2 mmol/L時，5 d后黑斑病菌菌絲生長與對照相比受到輕微抑制，抑菌率均低于10%；當SA濃度>0.2 mmol/L時，黑斑病菌菌絲生長開始受到明顯抑制，當SA濃度增至10.0 mmol/L及更高濃度時，菌絲直徑明顯變小，抑菌率達29.39%(表2)。結果表明，外源SA濃度≤0.2 mmol/L濃度對黑斑病菌輕微抑制作用，10.0 mmol/L及以上濃度的SA對黑斑病菌的生長有明顯的抑制作用。

2.6.2 外源水楊酸對鴨梨果實抗黑斑病的影響 為闡明外源SA影響黑斑病菌侵染鴨梨的作用效果，以不同濃度SA浸泡鴨梨后接種黑斑病菌，觀察接種第7，14天的表型，0.2 mmol/L SA處理過的鴨梨產(chǎn)生的病斑明顯小于其他濃度處理(圖6)。結果表明，0.2 mmol/L SA處理明顯提高了鴨梨對黑斑病菌的抗性。

表2 外源不同濃度水楊酸對黑斑病菌菌絲生長的影響Tab.2 The effect of different concentrations of SA on the growth of A.alternate

A.不同濃度SA處理鴨梨接種黑斑病菌7 d的表型。B.不同濃度SA處理鴨梨接種黑斑病菌7，14 d病斑直徑統(tǒng)計。比例尺為1 cm。樣本間不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)。A.The phenotype of pear fruits were treated with different concentration of SA after inoculation of A.alternate at 7 d.B.Data statistics of spot diameter of pear fruits treated with SA after inoculation with A.alternate at 7 and 14 d，respectively.Bar is 1 cm.Various letters indicate significant difference among samples (P<0.05).

3 討論與結論

黑斑病由半知菌亞門絲孢綱絲孢目鏈格孢屬真菌引起，可通過種子、園間植株病殘體等途徑傳播[15]。黑斑病在梨樹上普遍發(fā)生，危害嚴重。自張志銘等[3]報道河北省鴨梨的黑斑病病原菌鑒定為鏈格孢菌后，王宏等[16]、楊曉平等[17]、周求根等[18]、宋博等[19]、朱紅艷等[20]報道了不同品種梨黑斑病的病原菌均為半知菌亞門鏈格孢屬真菌。本研究利用組織分離法從河北農(nóng)業(yè)大學實驗農(nóng)場梨園鴨梨患病葉片中分離得到黑斑病病原菌，通過光學顯微鏡進行形態(tài)觀察，對該病原菌ITS、HIS、RPB2、ACT4個基因進行克隆并構建其系統(tǒng)進化樹，最后確定鴨梨黑斑病病原菌為鏈格孢屬鏈格孢菌。

植物與黑斑病菌互作機制較為復雜，既包括在寄主形態(tài)、細胞、生理生化還有分子水平方面的變化過程，還包括各種信號傳遞過程。張培嶺等[21]在甜瓜采后病害研究中，6 mmol/L SA處理甜瓜果實后可顯著提高果實的CAT、PAL、GLU、CHT、POD、SOD活性，有效提高了甜瓜果實的抗病性。Liu等[22]利用RNA-Seq研究發(fā)現(xiàn)，菊花在黑斑病菌侵染過程中，SA信號通路相關基因、SA生物合成、JA信號通路相關基因、PTI和防御相關基因參與這一抗病過程。本試驗研究表明，鴨梨葉片在自然狀態(tài)下植物本身游離態(tài)SA含量較低，而接種黑斑病菌后，72 h游離態(tài)SA含量明顯增加，符合植物與病原菌互作過程中SA作為重要信號分子的特征。

植物體內(nèi)SA是以結合態(tài)SA與游離態(tài)SA這2種形式存在，梁柳[23]報道了植物體內(nèi)游離態(tài)SA與結合態(tài)SA相互轉(zhuǎn)化模式，游離態(tài)SA含量積累是源于結合態(tài)SA向游離態(tài)SA的轉(zhuǎn)化，而An等[24]研究表明，游離態(tài)SA增加有一部分是來源于SA的生物合成途徑。本研究中鴨梨離體葉片接種黑斑病菌后，游離態(tài)SA含量明顯增加，結合態(tài)SA含量同時增加，游離態(tài)SA含量的增加不僅來自結合態(tài)SA的轉(zhuǎn)化，有可能病原菌激活了植物體內(nèi)SA合成途徑，在SA信號傳導途徑上游可能存在重要的調(diào)節(jié)機制，但還需要進一步試驗驗證。NPR1是植物防衛(wèi)反應中關鍵的轉(zhuǎn)錄調(diào)控輔助因子，位于SA信號通路下游，NPR1的同源基因NPR3、NPR4作為SA受體[14]，在SA信號傳導過程中有重要作用。鴨梨離體葉片接種黑斑病菌分生孢子懸浮液后，Pbrgene12425(PbrNPR1-like)、Pbrgene6286(PbrNPR3-like)在96 h基因表達量上調(diào)達最大值，Pbrgene8895(PbrNPR4-like)、Pbrgene43605(PbrPR1-like)基因120 h基因表達量達最大值，鴨梨在受黑斑病菌侵染后引起植物內(nèi)源性SA含量升高，NPRs基因表達上調(diào)，進一步引起PR1-like基因表達量增加，從而增強植物抗病性，證明SA參與了鴨梨對黑斑病菌侵染的響應。

SA作為抗病誘導劑，在最適濃度范圍內(nèi)發(fā)揮最佳誘抗效果[25]。本研究結果表明，當SA濃度≤0.2 mmol/L時，對黑斑病菌菌絲的生長沒有明顯抑制作用，當SA濃度高于10.0 mmol/L時，明顯抑制黑斑病菌菌絲的生長。在張衍榮等[26]在SA誘導對豇豆抗枯萎菌的研究中有類似的研究結果，在1.0～10.0 mmol/L內(nèi)，SA濃度越大對菌絲抑制作用越強，在不影響豇豆感病品種的幼苗正常生長情況下，以5.0 mmol/L SA效果最佳。本試驗中，當培養(yǎng)基中SA濃度高于0.2 mmol/L時，黑斑病菌菌絲生長受到抑制，主要是因為SA以NaSA形式加入PDA培養(yǎng)基中，隨著培養(yǎng)基中SA濃度增加，由于鹽濃度不斷增大從而抑制了病原菌生長，其本質(zhì)可能是由于高鹽環(huán)境抑制了病原菌生長，當SA濃度為10.0 mmol/L時遠高于適宜病原菌生長的臨界值，對病原菌生長有明顯的抑制作用。本研究中，0.2 mmol/L SA處理的鴨梨果實對黑斑病菌的抗性明顯增強，誘抗效果明顯，超過這一濃度范圍，反而對病斑的抑制作用不明顯，該研究結果與王永博[27]外源施加SA對黃金梨抗黑斑病的有效誘導濃度的研究結論一致，因此，0.2 mmol/L SA可作為外源SA誘導鴨梨抗黑斑病的最適濃度。

本研究根據(jù)病原菌的形態(tài)鑒定并結合病原菌多基因序列的系統(tǒng)進化分析，確定河北農(nóng)業(yè)大學實驗農(nóng)場梨園中鴨梨黑斑病的致病菌是鏈格孢屬鏈格孢菌；鴨梨離體葉片接種黑斑病菌分生孢子懸浮液后，葉片內(nèi)游離態(tài)SA含量明顯增加，SA信號通路中的關鍵基因被誘導表達量顯著升高，參與了鴨梨對黑斑病菌侵染的響應；外源施加0.2 mmol/L SA具有顯著的誘抗效果，增強了鴨梨對黑斑病菌的抗病性，在鴨梨黑斑病的防治中具有很好的應用前景。