電針通過Toll樣受體信號(hào)通路調(diào)控細(xì)胞因子減輕膿毒癥免疫抑制的作用及其機(jī)制

孫芳園，耿 歡，盧 明，周嘉奕，雷 鳴

(上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬第七人民醫(yī)院，上海 200137)

膿毒癥是由感染誘導(dǎo)的全身炎癥反應(yīng)綜合征，是患者進(jìn)入重癥監(jiān)護(hù)室的重要病因。及時(shí)控制感染、減輕患者機(jī)體高強(qiáng)度炎癥反應(yīng)，糾正酸堿失衡循環(huán)障礙等是挽救患者生命的關(guān)鍵內(nèi)容[1]。雖然現(xiàn)代醫(yī)學(xué)已經(jīng)取得了很大進(jìn)展，但膿毒癥的發(fā)病率仍然在上升，嚴(yán)重的膿毒癥和膿毒休克是目前危重病患者死亡的主要原因，其死亡率高達(dá)28%～50%[2]?，F(xiàn)已證實(shí)膿毒癥的發(fā)生發(fā)展與免疫功能紊亂有關(guān)，并可進(jìn)一步引起機(jī)體器官功能衰竭；而膽堿能抗炎途徑是近年來發(fā)現(xiàn)的一種膽堿能神經(jīng)及其遞質(zhì)調(diào)節(jié)或?qū)谷硌装Y反應(yīng)的途徑[3]。相關(guān)研究結(jié)果表明，迷走神經(jīng)興奮膽堿能抗炎途徑可明顯抑制由內(nèi)毒素和失血引起的促炎因子的釋放及全身炎癥反應(yīng)，因此，該途徑對(duì)于膿毒癥的治療意義重大[4]。伴隨著中醫(yī)技術(shù)的不斷發(fā)展，傳統(tǒng)的中醫(yī)療法也逐漸被用于治療膿毒癥，中醫(yī)針刺對(duì)機(jī)體免疫具有雙向調(diào)節(jié)作用，對(duì)提高機(jī)體免疫功能、防止感染和過敏性疾病、抗腫瘤等有很大的應(yīng)用價(jià)值，但是臨床上認(rèn)為電針治療膿毒癥的機(jī)制可能是通過抗炎、調(diào)節(jié)免疫功能和保護(hù)臟腑功能實(shí)現(xiàn)的。Toll樣受體(Toll—like receptors，TLRs)家族能有效地識(shí)別病原體，參與機(jī)體免疫反應(yīng)，有研究表明[5]，TLRs信號(hào)通路異常激活是膿毒癥發(fā)生和發(fā)展的重要原因[6]。TLR4能識(shí)別多種類型的微生物，涉及到革蘭陰性菌、陽性菌、分枝桿菌、螺旋體以及某些病毒的免疫應(yīng)答。其中，脂多糖是革蘭陰性桿菌細(xì)胞壁的主要成分，它能被免疫系統(tǒng)的模式識(shí)別受體所識(shí)別，并能刺激多種炎性介質(zhì)的釋放，導(dǎo)致全身性炎癥反應(yīng)綜合征[7]。相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，機(jī)體在感染革蘭陰性桿菌后，粗面脂多糖先結(jié)合到血清脂多糖結(jié)合蛋白上，再結(jié)合到細(xì)胞表面的CD14分子上，將TLR4/MD2與脂多糖結(jié)合蛋白-CD14三體復(fù)合物傳遞給TLR4/MD2，最終活化TLR4信號(hào)傳導(dǎo)；而光面脂多糖則與TLR4直接相互作用，激活信號(hào)傳導(dǎo)，提示TLR4對(duì)膿毒癥的發(fā)病起著重要作用[8-9]。為探究針灸是否能通過TLRs信號(hào)通路調(diào)節(jié)膿毒癥病情，本研究開展如下研究。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)大鼠 由上海中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。56只SPF級(jí)SD雄性大鼠，10周齡，體質(zhì)量(200±20)g。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK(蘇)2015～0001。

1.1.2 主要儀器 美國(guó)BD公司流式細(xì)胞儀;德國(guó)Eppendorf公司RS232C型核酸測(cè)定儀;上海安亭科學(xué)儀器DDL-5冷凍離心機(jī);德國(guó)Eppendorf公司5804R型低溫超速離心機(jī);血細(xì)胞分析儀。

1.1.3 主要試劑 Total RNA提取試劑(No.D312)、RT-PCR試劑盒購(gòu)自Thermo公司;RNase-free引物均購(gòu)自RaKaRa公司；免抗鼠TLR4及NF-κΒ多克隆抗體為美國(guó)Santa Cruz公司提供;腫瘤壞死因子-α(Tumor Necrosis Factor-α,TNF-α)ELISA試劑盒、白介素-6(interleukin-6,IL-6)ELISA試劑盒均購(gòu)自上海西塘試劑公司。

1.2 膿毒癥大鼠模型建立

選擇成年雄性SD大鼠，體質(zhì)量250 g左右，任意選取8只不做任何處理，正常飼養(yǎng)，作為空白對(duì)照組，48只大鼠采用盲腸結(jié)扎穿孔術(shù)(Cecal ligation and puncture，CLP)制備膿毒癥模型。具體制備方式：采用20 g/L戊巴比妥鈉麻醉試驗(yàn)大鼠，麻醉滿意后，沿大鼠腹正中線作一1.5 cm長(zhǎng)切口，盲腸根部結(jié)扎盲腸，18號(hào)針反復(fù)3次穿通盲腸，形成盲腸漏，留置橡皮引流條用以貫通盲腸，以防針孔閉合。處理完畢后，將盲腸放置回腹腔，逐層縫合腹壁切口。

1.3 實(shí)驗(yàn)大鼠干預(yù)方法

采用隨機(jī)數(shù)字表法將48只膿毒癥模型大鼠均分為電針組與假電針組。其中電針組大鼠按照《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》《大鼠穴位圖譜的研制》中所提供的方法找到大鼠雙側(cè)足三里穴及關(guān)元穴，進(jìn)行電針刺激治療。大鼠雙側(cè)足三里穴定位于膝關(guān)節(jié)外后側(cè)，腓骨小頭下5 mm處，關(guān)元穴位于大鼠腹部臍下約25 mm處，臍平雙髂脊連線中點(diǎn)。找準(zhǔn)穴位后適當(dāng)標(biāo)注，直刺5～7 mm，電刺激頻率為4～20 Hz，脈沖密度0.5 ms、強(qiáng)度1 mA，連續(xù)刺激30 min，1次/d。連續(xù)干預(yù)3 d。假電針組大鼠進(jìn)行非經(jīng)非穴刺激，選擇足三里穴外側(cè)旁開0.5 cm處及關(guān)元穴外開0.5 cm處，給予相同頻率及強(qiáng)度的電刺激，連續(xù)干預(yù)3 d。

1.4 觀察指標(biāo)

1.4.1 各組大鼠外周血單核細(xì)胞內(nèi)TLR4及NK-κΒ表達(dá) ①采用淋巴細(xì)胞分離液分離外周血單核細(xì)胞(Peripheral blood mononuclear cell，PBMC)，加入1 mL Trizol靜置10 min裂解，然后加200 μL氯仿，上下顛倒混勻15 s，室溫靜置5 min，12 000 rpm離心5 min，然后取上層水相中的液體于無RNA酶EP管中(勿取下層紅色液體)，加入預(yù)冷異丙醇500 μL，上下顛倒混勻，-20 ℃放置1 h，再存放于4 ℃，12 000 rpm離心15 min，棄上清液，加入1 mL預(yù)冷的75 %乙醇洗滌，4 ℃，12 000 rpm，離心15 min，去上清液，重復(fù)兩次，待出現(xiàn)白色RNA時(shí)加10 μL DEPC水，放于58 ℃助溶5 min，將已提取出的RNA取1 μL用Nanodrop 2000進(jìn)行濃度和純度檢測(cè)，然后放于-80 ℃保存待用；②利用Thermo Fermentas反轉(zhuǎn)錄試劑盒的說明書操作步驟進(jìn)行RNA反轉(zhuǎn)錄，分別取RNA 2 μg，Oligo(dT)1 μL，DEPC 8 μL；在PCR儀進(jìn)行65 ℃ 5 min，4 ℃ 5 min反應(yīng)，最終得到產(chǎn)物即為目的cDNA，放于-20 ℃保存待用；③TLR4及NF-κΒ(Nuclear factor kappa binding,NF-κΒ)mRNA相對(duì)表達(dá)量。通過核酸蛋白檢測(cè)確定總RNA純度與濃度，若純度比值在1.8～2.0間認(rèn)為純度適合。其中引物序列：TLR4：5′-TGCTCAGACATGGCAGTTTC-3′，5′-TCAAGGCTTTTCCATCCAAC-3′;NF-κΒ：5′-AGTTGAGGGGACTTTCCCAGGC-3′，3′-TCAACTCCCCTGAAAGGGTCCG-5′。取總cDNA、上游和下游引物各1 μL，加入試劑盒其他成分。反應(yīng)條件為：95 ℃保持5 min，94 ℃保持30 s，55～65 ℃保持30 s，72 ℃保持1 min，40個(gè)循環(huán)擴(kuò)增；在延伸過程中收集熒光。

1.4.2 各組大鼠外周血T淋巴細(xì)胞亞群占比 采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)外周血T淋巴亞群CD3+、CD4+及CD8+表達(dá)水平。取大鼠尾靜脈血液2 mL，放于EDTA-K2抗凝真空采血管內(nèi)，然后取兩個(gè)流式專用管，其中一個(gè)裝入待測(cè)標(biāo)本，另一個(gè)加入CD4-FITC/CD8-PE/CD3-APC，再加入全血100 μL，混勻。放置在室溫下，避光孵育15 min，加入FACSL血液2 mL，放置在室溫，避光孵育10 min，300 g離心5 min，棄上清液。PBS洗滌細(xì)胞兩次，300 g離心5 min，棄上清液。最后上機(jī)檢測(cè)，分析結(jié)果。

1.4.3 各組大鼠外周血炎癥因子水平 參照ELISA試劑盒說明書，用包被緩沖液稀釋血清抗原至最適濃度，取100 μL加于微反應(yīng)板孔中，4 ℃過夜或37 ℃水浴2～3 h。移去包被液，板孔用洗滌緩沖液洗3次，5 min/次。每孔加入100 μL一定稀釋倍數(shù)的被檢血清，37 ℃作用1～2 h加入待檢樣品及后續(xù)試劑。洗滌去掉游離未結(jié)合反應(yīng)物，每孔加入稀釋緩沖液稀釋的酶結(jié)合物100 μL，37 ℃作用1～2 h。加入酶檢測(cè)底物50 μL，溫育30 min后洗滌，再先后加入顯色劑A 50 μL、顯色劑B 50 μL，輕輕震蕩混勻，37 ℃避光顯色15 min。每孔加入100 μL生物素化的抗人TNF-α、IL-6抗體，終止反應(yīng)(藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)后15 min內(nèi)以空白孔調(diào)零，用酶標(biāo)比色計(jì)(芬蘭雷勃公司)450 nm測(cè)定吸光度(OD)，計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)曲線檢測(cè)TNF-α、IL-6濃度。

1.4.4 各組大鼠中性粒細(xì)胞與淋巴細(xì)胞比值(Neutrophils lymphocytes ratio,NLR) 血球分析儀進(jìn)行血常規(guī)檢查，應(yīng)用電阻法和激光計(jì)數(shù)法的原理，對(duì)白細(xì)胞進(jìn)行分類計(jì)數(shù)，計(jì)算NLR。取一小滴(米粒大小)大鼠靜脈血置于干凈玻片上的一端；用干凈推玻片的一端放在血滴前方，將推玻片略微向后移動(dòng)，使其與血滴接觸，讓血滴在載玻片的夾角之間平均分散，然后用30 °～45 °角不加壓力，平穩(wěn)地推至另一端，制成均勻的血膜薄片；將血片干后，滴上瑞氏染液，使蓋滿整個(gè)血膜片，約半分鐘后再加一倍蒸餾水，輕搖玻片，待5～10 min后，用凈水緩洗去染液，洗凈后用玻片上的染玻片，洗去染邊溢出，以免染邊溢出。先在低倍鏡下觀察染好晾干的血片的細(xì)胞染色和分布情況，然后用油鏡進(jìn)行分類，分類時(shí)要按一定的順序；將所見的細(xì)胞分別記下，直至總數(shù)100個(gè)，計(jì)算各類細(xì)胞所占的百分比。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 3組大鼠外周血PBMC表面TLR4表達(dá)水平

對(duì)比3組大鼠外周血PBMC表面TLR4表達(dá)水平，發(fā)現(xiàn)電針組及假電針組大鼠外周血TLR4表達(dá)水平均顯著高于空白對(duì)照組大鼠，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，且電針組大鼠外周血TLR4水平顯著低于假電針組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 3組大鼠外周血PBMC表面TLR4表達(dá)水平

2.2 3組大鼠TLR4表面NK-κΒ mRNA相對(duì)表達(dá)量比較

對(duì)比3組大鼠TLR4表面NK-κΒ mRNA相對(duì)表達(dá)量，發(fā)現(xiàn)電針組及假電針組大鼠外周血TLR4表面NK-κΒ mRNA相對(duì)表達(dá)量均顯著高于空白對(duì)照組大鼠，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，但電針組大鼠外周血TLR4表面NK-κΒ mRNA相對(duì)表達(dá)量顯著低于假電針組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見圖1、表2。

表2 3組大鼠TLR4表面NK-κΒ mRNA相對(duì)表達(dá)量比較

2.3 3組大鼠外周血T淋巴細(xì)胞亞群比較

對(duì)比3組大鼠外周血T淋巴細(xì)胞亞群，發(fā)現(xiàn)電針組及假電針組大鼠外周血CD3+、CD4+及CD4+/CD8+水平均顯著低于空白對(duì)照組大鼠，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，3組CD8+水平無顯著性差異(P>0.05)，但電針組大鼠外周血CD3+、CD4+及CD4+/CD8+水平均顯著高于假電針組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表3。

表3 3組大鼠外周血T淋巴細(xì)胞亞群比較

2.4 3組大鼠外周血炎癥因子及NLR水平比較

對(duì)比3組大鼠外周血炎癥因子及NLR水平，發(fā)現(xiàn)電針組及假電針組大鼠外周血TNF-α、IL-6及NLR水平均顯著高于空白對(duì)照組大鼠，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，但電針組大鼠外周血TNF-α、IL-6及NLR顯著低于假電針組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表4。

表4 3組大鼠外周血炎癥因子及NLR水平比較

3 討論

膿毒癥大多由于宿主自身對(duì)外界感染造成的一種失控免疫反應(yīng)，導(dǎo)致器官出現(xiàn)功能性障礙，其作為前急危重癥病人死亡的主要誘因，也是目前威脅人類生命的最主要的問題之一[10]。根據(jù)流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果，膿毒性休克患者病死率達(dá)40 %以上，其致死機(jī)制多種多樣，心肌抑制是引起機(jī)體血流動(dòng)力學(xué)惡化的重要原因，而膿毒癥能夠誘發(fā)心肌損傷、心肌抑制，最終造成死亡[11]。

Toll樣受體屬于Ⅰ型跨膜受體家族，是機(jī)體的固有免疫受體，TLR4是該家族中最重要的模式識(shí)別受體，TLR4能識(shí)別多種微生物，參與多種病原菌的免疫反應(yīng)。孫姍姍等[12]研究發(fā)現(xiàn)，TLR4及c-Jun氨基末端(JNK)信號(hào)通路被激活后可導(dǎo)致炎癥反應(yīng)及細(xì)胞凋亡，證實(shí)TLR4相關(guān)信號(hào)通路參與膿毒癥心肌損傷。孫雪東等[13]研究發(fā)現(xiàn)，抑制TLR4相關(guān)信號(hào)通路可緩解膿毒癥所致的大鼠肺損傷，并減少相關(guān)炎癥因子的釋放，進(jìn)而緩解膿毒癥大鼠病情。大量研究亦證實(shí)，TLR4能通過髓樣分化蛋白88(Myeloid differentiation factor88,MyD-88)依耐性反應(yīng)通路及非MyD-88依耐性反應(yīng)通路，激活淋巴細(xì)胞，促進(jìn)促炎性因子釋放，上調(diào)刺激信號(hào)因子，進(jìn)而參與膿毒癥的發(fā)生及發(fā)展[14-15]。以上研究均證實(shí)，TLR4相關(guān)信號(hào)通路是膿毒癥發(fā)生與發(fā)展的重要通路。

臨床上膿毒癥以革蘭陰性桿菌感染為主，TLR4作為革蘭陰性桿菌及其產(chǎn)物識(shí)別的關(guān)鍵因子，也是連接內(nèi)在免疫和獲得性免疫的橋梁。當(dāng)發(fā)生膿毒癥時(shí)，所釋放的毒素和發(fā)炎介質(zhì)都能作用于機(jī)體的免疫系統(tǒng)，從而激活TLR4的信號(hào)傳導(dǎo)功能，引起一系列的信號(hào)傳遞，如TNF-α、IL-6及IL-8等促炎細(xì)胞因子的釋放，這些毒素和發(fā)炎介質(zhì)再一次激活機(jī)體的免疫系統(tǒng)，兩者互為因果，導(dǎo)致炎癥介質(zhì)過度釋放，最終導(dǎo)致膿毒癥。所以，如何影響TLR4的表達(dá)以及下游信號(hào)通路的傳導(dǎo)成為膿毒癥治療的關(guān)鍵[16]。當(dāng)前，有關(guān)TLR4與膿毒癥免疫抑制相關(guān)的研究主要是通過各種干預(yù)措施來切斷膿毒癥的反應(yīng)鏈，從而減輕膿毒癥引起的機(jī)體損傷，改善預(yù)后[17]。張烈等[18]亦發(fā)現(xiàn)經(jīng)血液濾過治療后，膿毒癥患者的血中炎性因子水平和外周血單核細(xì)胞TLR4 mRNA、TLR4miRNA-146a表達(dá)發(fā)生了顯著變化，與治療前相比，外周血單核細(xì)胞TLR4miRNA-146a表達(dá)水平明顯降低，且預(yù)后良好。陳欣等[19]通過分析烏司他丁對(duì)膿毒癥大鼠Toll樣受體4表達(dá)的影響及其機(jī)制，結(jié)果發(fā)現(xiàn)與對(duì)照組比較，烏司他丁作用下的膿毒癥大鼠的TLR4和NF-KB水平明顯下降，且心肌損傷程度明顯改善。Kim SJ等[20]觀察干燥花蕾提取物HS-23對(duì)膿毒癥大鼠肝臟、肺組織中TLR4蛋白、TLR4 mRNA的表達(dá)的影響，結(jié)果表明，HS-23對(duì)TLR4 mRNA的表達(dá)有抑制作用，血清中各種炎性細(xì)胞因子水平下降，膿毒癥小鼠膿毒癥小鼠的細(xì)菌清除率提高，膿毒癥引起MODS增加。上述試驗(yàn)進(jìn)一步證實(shí)TLR4參與膿毒癥的形成和發(fā)展。降低TLR4的表達(dá)，阻斷TLR4在細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)傳導(dǎo)，可以降低毒素和炎性介質(zhì)的釋放，從而阻斷炎癥反應(yīng)鏈，改善預(yù)后。

隨著臨床醫(yī)療技術(shù)的不斷提高，膿毒癥患者感染控制情況及最終存活率較以往得到明顯提高，但依舊有一部分膿毒癥患者經(jīng)常規(guī)治療干預(yù)后無效。為響應(yīng)國(guó)家號(hào)召，中醫(yī)學(xué)近年來逐漸應(yīng)用于臨床多種疾病的治療，脾胃是中焦,為全身臟腑功能的樞紐，在現(xiàn)代研究中，脾胃功能失調(diào)與膿毒癥有密切的關(guān)系。足三里與足陽明胃經(jīng)合穴，是調(diào)整胃腸功能的穴位，該穴位有調(diào)節(jié)脾胃清濁、氣機(jī)升降和陰陽調(diào)和的作用，使大便自通，毒邪隨之而去[21]。由于免疫功能紊亂是膿毒癥致病機(jī)制中重要的組成部分，通過電針刺激與免疫相關(guān)的足三里穴與關(guān)元穴可能在促進(jìn)膿毒癥康復(fù)中具有積極意義。此外，電針是神經(jīng)電刺激與中醫(yī)針灸的結(jié)合，電針療法在中醫(yī)毫針的基礎(chǔ)上，使用脈沖發(fā)生器，通過毫針對(duì)應(yīng)穴位進(jìn)行持續(xù)穩(wěn)定、精確且可控的電刺激治療[22]。

本研究采用盲腸結(jié)扎穿孔術(shù)制備膿毒癥大鼠模型后將其均分為兩組，并分別對(duì)兩組膿毒癥大鼠進(jìn)行電針刺激足三里穴及關(guān)元穴治療及假電針刺激，干預(yù)3 d后，采集實(shí)驗(yàn)大鼠外周血，檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，與空白對(duì)照組大鼠相比，膿毒癥模型大鼠外周血PBMC表面TLR4表達(dá)水平及NK-κΒ mRNA相對(duì)表達(dá)量均明顯上升，且膿毒癥模型大鼠炎癥因子TNF-α、IL-6等炎癥因子也大量釋放，提示膿毒癥大鼠TLRs/NK-κΒ信號(hào)途徑異?；罨?，該途徑通過釋放大量炎癥細(xì)胞因子促進(jìn)膿毒癥的發(fā)生及發(fā)展。這可能是因?yàn)樽闳镅ㄊ亲汴柮魑附?jīng)合穴，刺激該穴位能治虛勞證，而關(guān)元穴為人體元?dú)庵荆碳ぴ撗苷駣^腎氣，調(diào)節(jié)機(jī)體免疫網(wǎng)絡(luò)[23]。早期臨床研究發(fā)現(xiàn)電針足三里可改善膿毒癥病人早期出現(xiàn)目標(biāo)性腸道通應(yīng)。通過膽堿能途徑，可闡釋電針足三里抑制炎癥反應(yīng)及保護(hù)臟器的作用機(jī)制，即興奮副交感膽堿能神經(jīng)，抑制交感膽堿能神經(jīng)。用電針刺激足三里穴可顯著降低膿毒癥大鼠促炎因子的水平，二胺氧化酶活性可減輕腸組織水腫及功能損害，而對(duì)抗炎因子的水平無明顯影響，而用電針前切斷雙側(cè)迷走神經(jīng)干可顯著降低電針的抗炎及保護(hù)作用[24]。與此同時(shí)，膿毒癥模型大鼠外周血T淋巴細(xì)胞亞群占比也發(fā)生了明顯的改變，其CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平明顯降低，提示機(jī)體免疫力明顯降低，存在免疫抑制現(xiàn)象。但研究表示，與假電針治療組的膿毒癥大鼠相比，經(jīng)電針刺激足三里穴及關(guān)元穴的膿毒癥模型大鼠外周血TLR4、NK-κΒ mRNA相對(duì)表達(dá)量及細(xì)胞炎癥因子水平均明顯下降，NLR水平也明顯降低，其中NLR是一種檢測(cè)便捷的炎癥指標(biāo)。此外，T淋巴細(xì)胞亞群CD3+、CD4+及CD4+/CD8+水平較假電針組明顯上升，以上研究結(jié)果提示，電刺激治療可能通過調(diào)整TLR4/NK-κΒ信號(hào)通路、減少炎癥因子的釋放和減輕機(jī)體免疫抑制，幫助膿毒癥康復(fù)。但膿毒癥致病機(jī)制復(fù)雜，其相關(guān)的信號(hào)通路較多，本研究受限于實(shí)驗(yàn)條件，僅對(duì)電針療法對(duì)TLR4/NK-κΒ信號(hào)通路的影響進(jìn)行了研究，雖最終證實(shí)電針療法可通過TLR4/NK-κΒ信號(hào)通路調(diào)節(jié)膿毒癥模型大鼠機(jī)體炎癥反應(yīng)及免疫功能，但這可能不是電針治療膿毒癥的唯一作用機(jī)制。

綜上所述，電針刺激足三里穴與關(guān)元穴可能通過TLR4/NK-κΒ信號(hào)通路減少炎癥因子的釋放并減少免疫抑制，促進(jìn)膿毒癥康復(fù)。