果樹(shù)木屑對(duì)食用菌菌絲生長(zhǎng)和原基分化的影響

任軍凱，周曉勇，曾智勇，姚祥坦，陳銀根

（1.新昌縣種植業(yè)技術(shù)推廣中心，浙江，312599；2.新昌縣農(nóng)村經(jīng)營(yíng)管理站；3.嘉興市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院）

傳統(tǒng)食用菌栽培以闊葉木屑為主要栽培基質(zhì)，但菇木林資源不足，菌林矛盾突出，因此，新型培養(yǎng)料的探索是確保食用菌產(chǎn)業(yè)可持續(xù)發(fā)展的重要措施[1]。果樹(shù)木體積大且經(jīng)濟(jì)價(jià)值低，傳統(tǒng)處理方式是用作廉價(jià)燃料或長(zhǎng)期堆疊放置，而果樹(shù)木中含有大量的木質(zhì)素、纖維素等營(yíng)養(yǎng)成分，可用于栽培食用菌[2]。本研究利用桃樹(shù)、梨樹(shù)、葡萄和無(wú)花果木屑栽培玉木耳和灰樹(shù)花2種珍稀食用菌，探究4種果樹(shù)木屑對(duì)菌絲生長(zhǎng)和原基形成的影響，初步篩選適合作為玉木耳和灰樹(shù)花的果樹(shù)木屑培養(yǎng)料，為進(jìn)一步利用果樹(shù)木屑奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

①供試材料 果樹(shù)木屑包括桃樹(shù)、梨樹(shù)、葡萄、無(wú)花果，在新昌當(dāng)?shù)厥占?。木屑從安徽?gòu)入，為食用菌栽培常用的闊葉木屑。將當(dāng)年采集的4個(gè)樹(shù)種木條曬干，經(jīng)網(wǎng)孔為8 mm的粉碎機(jī)粉碎成木屑備用。

②供試菌種 玉木耳[3]，由麗水市農(nóng)業(yè)科學(xué)院提供；灰樹(shù)花品種慶灰151，購(gòu)于麗水慶元。

③母種和原種配方 將菌絲從菌種中分離，保存至試管中作為母種，母種培養(yǎng)基配方為馬鈴薯200 g、葡萄糖20 g、瓊脂18 g，配制成1 L。將母種轉(zhuǎn)接為原種，原種培養(yǎng)基配方為木屑78%、麩皮21%、石膏1%，含水量60%。

④試驗(yàn)設(shè)計(jì) 試驗(yàn)于2019年10月至2020年4月在嘉興市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行。

a.木屑浸出液試驗(yàn)。木屑浸出液的制備：稱(chēng)取20.0 g各類(lèi)木屑，加入1 L水，煮沸20 min，用紗布過(guò)濾掉木屑，收集濾液并加熱濃縮至100 mL備用。

木屑浸出液培養(yǎng)基的制備：設(shè)置4個(gè)木屑浸出液梯度處理，125 mL PDA培養(yǎng)基中分別含有0（對(duì)照）、5、20、35 mL木屑浸出液。取12 mL培養(yǎng)基放入90 mm培養(yǎng)皿中備用。

菌齡一致的菌絲塊：從母種中取菌絲塊，接種至裝有PDA培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中央，培養(yǎng)至菌絲剛長(zhǎng)滿(mǎn)培養(yǎng)皿，用打孔器在菌落最外圍取直徑8 mm的菌絲塊。

接種及菌絲培養(yǎng)：取菌齡一致的菌絲塊接種至裝有木屑浸出液培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中央。使用恒溫培養(yǎng)箱在25℃下培養(yǎng)菌絲，每個(gè)處理重復(fù)5次，1個(gè)培養(yǎng)皿作為1次重復(fù)，每個(gè)培養(yǎng)皿1塊菌絲塊。

b.培養(yǎng)料配方試驗(yàn)。木屑培養(yǎng)料配方及菌包的制備：試驗(yàn)設(shè)置5個(gè)處理，使用葡萄木屑、無(wú)花果木屑、梨樹(shù)木屑、桃樹(shù)木屑和闊葉木屑（對(duì)照）配制培養(yǎng)料，培養(yǎng)料配方為木屑78%、麩皮21%、石膏1%，含水量60%。使用15 cm×30 cm的菌袋裝培養(yǎng)料，每袋培養(yǎng)料質(zhì)量600 g。

1.2 接種及菌絲培養(yǎng)

玉木耳于2019年10月9日接種，灰樹(shù)花于2019年12月4日接種，取玉木耳和灰樹(shù)花母種接至PDA培養(yǎng)基中活化菌絲，用打孔器取菌齡一致的菌絲塊5塊接種至菌棒中，放于25℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，每個(gè)處理重復(fù)5次，1個(gè)菌棒作為1次重復(fù)。試驗(yàn)方法如下。

①培養(yǎng)基菌絲生長(zhǎng)速度測(cè)量 用打孔器取菌齡一致的菌絲塊接種至裝有木屑浸出液培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中央，接種后根據(jù)菌絲生長(zhǎng)速度在相同時(shí)間點(diǎn)分2次測(cè)量菌絲直徑，2次間隔天數(shù)根據(jù)菌絲生長(zhǎng)速度調(diào)節(jié)，間隔3～5 d，菌絲生長(zhǎng)速度計(jì)算公式：菌絲生長(zhǎng)速度（cm/d）=（第2次測(cè)量直徑－第1次測(cè)量直徑）/（生長(zhǎng)天數(shù)×2）。

②培養(yǎng)料菌絲生長(zhǎng)指標(biāo)測(cè)定 菌棒接種后10 d開(kāi)始測(cè)定菌絲生長(zhǎng)速度，用油性筆在菌袋上標(biāo)明菌絲邊緣，間隔10 d再用油性筆標(biāo)明菌絲邊緣，用直尺測(cè)量10 d的菌絲生長(zhǎng)量，菌絲生長(zhǎng)速度計(jì)算公式：菌絲生長(zhǎng)速度（cm/d）=（第2次劃線(xiàn)長(zhǎng)度-與第1次劃線(xiàn)長(zhǎng)度）/生長(zhǎng)天數(shù)。

③菌絲長(zhǎng)勢(shì)的測(cè)定 將不同處理的培養(yǎng)皿和菌棒放置在一起，菌絲長(zhǎng)勢(shì)測(cè)定參考宋盼盼等[4]的方法。

④原基數(shù)量和現(xiàn)蕾率測(cè)定待菌絲長(zhǎng)滿(mǎn)后將菌包移出恒溫培養(yǎng)箱，放置在常溫下，使其自然產(chǎn)生子實(shí)體原基，統(tǒng)計(jì)各處理原基數(shù)量，玉木耳于2019年11月29日開(kāi)始統(tǒng)計(jì)原基數(shù)量和現(xiàn)蕾率，灰樹(shù)花菌絲長(zhǎng)滿(mǎn)后溫度不適宜出菇，因此于2020年4月20日統(tǒng)計(jì)原基數(shù)量和現(xiàn)蕾率，現(xiàn)蕾率計(jì)算公式：現(xiàn)蕾率（%）=現(xiàn)蕾菌棒數(shù)/菌棒總數(shù)×100。

⑤化學(xué)指標(biāo)測(cè)定 將供試木屑及麩皮烘干后經(jīng)粉碎機(jī)粉碎，過(guò)100目篩，混合均勻，各培養(yǎng)料碳氮比按照配方比例計(jì)算獲得。

總碳含量用重鉻酸鉀氧化法測(cè)定[5]；總氮含量采用全自動(dòng)凱氏定氮儀測(cè)定。

1.3 數(shù)據(jù)處理

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行處理，各組間數(shù)據(jù)采用Duncan's新復(fù)極差法進(jìn)行多重比較（P＜0.05）。采用Personal相關(guān)系數(shù)進(jìn)行相關(guān)性分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 果樹(shù)木屑浸出液對(duì)菌絲生長(zhǎng)速度的影響

如表1所示，隨著葡萄和無(wú)花果木屑浸出液含量的增加，玉木耳菌絲生長(zhǎng)速度逐漸提高，至含量到達(dá)35 mL時(shí)，玉木耳菌絲生長(zhǎng)速度分別較對(duì)照（0 mL）提高35.3%和17.3%；玉木耳菌絲在桃樹(shù)木屑浸出液培養(yǎng)基中生長(zhǎng)速度先加快后減弱，20 mL處理較35 mL處理菌絲生長(zhǎng)速度減慢12.5%；不同含量的梨樹(shù)木屑和闊葉木屑浸出液對(duì)玉木耳菌絲生長(zhǎng)速度沒(méi)有顯著影響。

表1 果樹(shù)木屑浸出液對(duì)菌絲生長(zhǎng)速度的影響

不同含量的桃樹(shù)木屑浸出液會(huì)顯著降低灰樹(shù)花菌絲生長(zhǎng)速度；高含量（20 mL和35 mL）的葡萄、梨樹(shù)木屑浸出液同樣顯著降低灰樹(shù)花菌絲生長(zhǎng)速度；不同含量的無(wú)花果木屑浸出液和闊葉木屑浸出液處理下灰樹(shù)花菌絲生長(zhǎng)速度與對(duì)照差異不顯著。

2.2 果樹(shù)木屑浸出液對(duì)菌絲長(zhǎng)勢(shì)的影響

各類(lèi)木屑浸出液對(duì)菌絲長(zhǎng)勢(shì)有一定影響，由表2可見(jiàn)，隨著木屑浸出液含量的增加，玉木耳菌絲長(zhǎng)勢(shì)在桃樹(shù)、梨樹(shù)和闊葉木屑浸出液的培養(yǎng)基中變強(qiáng)，在無(wú)花果木屑浸出液的培養(yǎng)基中變?nèi)?，在葡萄木屑浸出液中長(zhǎng)勢(shì)無(wú)明顯變化。

表2 果樹(shù)木屑浸出液對(duì)菌絲長(zhǎng)勢(shì)的影響

隨著木屑浸出液含量的增加，灰樹(shù)花菌絲在葡萄、無(wú)花果和闊葉木屑浸出液的培養(yǎng)基中長(zhǎng)勢(shì)變強(qiáng)，在梨樹(shù)、桃樹(shù)木屑浸出液中無(wú)明顯變化。

2.3 果樹(shù)木屑培養(yǎng)料對(duì)菌絲生長(zhǎng)和長(zhǎng)勢(shì)的影響

如表3所示，將各類(lèi)木屑配制成培養(yǎng)料，以闊葉木屑配方的碳氮比最高，達(dá)到40.88，梨樹(shù)木屑配方碳氮比最低，僅25.35。玉木耳在闊葉木屑培養(yǎng)料中生長(zhǎng)速度最快，在無(wú)花果木屑培養(yǎng)料中不生長(zhǎng)；灰樹(shù)花在闊葉木屑培養(yǎng)料中生長(zhǎng)速度最快，在無(wú)花果木屑培養(yǎng)料中生長(zhǎng)速度最慢。不同培養(yǎng)料對(duì)灰樹(shù)花菌絲長(zhǎng)勢(shì)的影響較小，而葡萄木屑和桃樹(shù)木屑的會(huì)減弱玉木耳菌絲長(zhǎng)勢(shì)。

表3 果樹(shù)木屑培養(yǎng)料對(duì)菌絲生長(zhǎng)速度和長(zhǎng)勢(shì)的影響

2.4 果樹(shù)木屑培養(yǎng)料對(duì)現(xiàn)蕾率原基發(fā)生的影響

由表4可知，梨樹(shù)木屑培養(yǎng)料和闊葉木屑培養(yǎng)料下的玉木耳現(xiàn)蕾率為100%，但梨樹(shù)木屑培養(yǎng)料下的原基數(shù)量較少；葡萄木屑培養(yǎng)料下的玉木耳現(xiàn)蕾率較低，為20%，原基數(shù)量較少；而無(wú)花果木屑培養(yǎng)料和桃樹(shù)木屑培養(yǎng)料下的玉木耳現(xiàn)蕾率為0。使用葡萄、桃樹(shù)和梨樹(shù)木屑培養(yǎng)料下的灰樹(shù)花現(xiàn)蕾率較高，分別是80%、80%和100%，較闊葉木屑培養(yǎng)料的現(xiàn)蕾率高，但梨樹(shù)木屑培養(yǎng)料中灰樹(shù)花原基顏色呈白色，桃樹(shù)木屑因?yàn)槭菑耐獾刭?gòu)入，成本相對(duì)較高，葡萄木屑相對(duì)更適宜作為灰樹(shù)花的培養(yǎng)料。

表4 果樹(shù)木屑培養(yǎng)料對(duì)現(xiàn)蕾率和原基發(fā)生的影響

3 討論與結(jié)論

研究表明，菌絲生長(zhǎng)速度與菌絲呼吸消耗呈正相關(guān)[6]，而培養(yǎng)料的碳氮比也影響菌絲生長(zhǎng)速度[7]，灰樹(shù)花菌絲生長(zhǎng)最佳培養(yǎng)基碳氮比為30∶1[8]，而玉木耳菌絲生長(zhǎng)的最佳碳氮比尚未有研究。葡萄木屑浸出液對(duì)灰樹(shù)花菌絲生長(zhǎng)有抑制作用，但葡萄木屑制作成培養(yǎng)料后的碳氮比較合適灰樹(shù)花，這可能是灰樹(shù)花菌絲在葡萄木屑培養(yǎng)料中的生長(zhǎng)速度稍快于其他木屑培養(yǎng)料的原因。

本試驗(yàn)在菌絲培養(yǎng)過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，使用闊葉木屑栽培的玉木耳菌絲最早出現(xiàn)原基分化，然后是梨樹(shù)木屑。葡萄和桃樹(shù)木屑培養(yǎng)的玉木耳菌絲僅在接種口附近出現(xiàn)原基，其原基出現(xiàn)位置還需進(jìn)一步研究；灰樹(shù)花原基均出現(xiàn)在接種口，葡萄、桃樹(shù)和梨樹(shù)培養(yǎng)料的原基出現(xiàn)時(shí)間均早于闊葉木屑培養(yǎng)料，梨樹(shù)木屑培養(yǎng)料中灰樹(shù)花子實(shí)體原基為白色，無(wú)花果木屑培養(yǎng)料內(nèi)菌絲顏色變黃，并且無(wú)原基出現(xiàn)，目前尚未有對(duì)子實(shí)體原基顏色進(jìn)行研究的文獻(xiàn)，果樹(shù)木屑對(duì)灰樹(shù)花子實(shí)體原基顏色的影響還需進(jìn)一步驗(yàn)證。

玉木耳菌絲在無(wú)花果木屑浸出液中生長(zhǎng)良好，但在無(wú)花果木屑培養(yǎng)料中無(wú)法生長(zhǎng)，可能是由于無(wú)花果樹(shù)汁液中含有許多藥用成分，例如黃酮類(lèi)物質(zhì)[9]，它在植物抗菌防病等方面起著重要的作用[10]，而黃酮類(lèi)物質(zhì)難溶于水，導(dǎo)致菌絲在木屑浸出液培養(yǎng)基中生長(zhǎng)良好，而將花果樹(shù)木屑制作為培養(yǎng)料后菌絲生長(zhǎng)受到抑制。

本研究結(jié)果表明，葡萄、無(wú)花果木屑浸出液能加快玉木耳菌絲生長(zhǎng)速度，梨樹(shù)和桃樹(shù)木屑浸出液能增強(qiáng)玉木耳菌絲長(zhǎng)勢(shì)。葡萄、梨樹(shù)、桃樹(shù)木屑浸出液則會(huì)減慢灰樹(shù)花的菌絲生長(zhǎng)速度，葡萄和無(wú)花果木屑浸出液對(duì)菌絲長(zhǎng)勢(shì)有促進(jìn)作用。果樹(shù)木屑作為培養(yǎng)料會(huì)減慢2種食用菌的菌絲生長(zhǎng)速度，玉木耳菌絲在梨樹(shù)木屑培養(yǎng)料中生長(zhǎng)速度較快，灰樹(shù)花菌絲在葡萄木屑培養(yǎng)料中生長(zhǎng)速度較快。2種食用菌在梨樹(shù)木屑培養(yǎng)料中的現(xiàn)蕾率較高。

綜合多項(xiàng)因素，下一步研究可嘗試使用梨樹(shù)木屑栽培玉木耳，使用葡萄木屑栽培灰樹(shù)花。