濕熱滅菌工藝的開發(fā)與驗(yàn)證

邢軒?周亞萍?胡瑾

摘要：在目前藥品生產(chǎn)過程中，面對待滅菌物品時(shí)，如何達(dá)到滅菌效果一直都是被廣泛討論和研究的課題。尤其是在日趨嚴(yán)格的法規(guī)要求以及GMP符合性檢查下，選擇合適的滅菌工藝和驗(yàn)證該滅菌工藝，既不對待滅菌物品造成損壞，又能達(dá)到滅菌的效果，也就顯得尤為重要。本文主要介紹在面對不同物品時(shí)，應(yīng)該如何選擇合適的滅菌工藝，以及如何驗(yàn)證滅菌效果。從而在藥品生產(chǎn)過程中，達(dá)到合規(guī)的目的。

關(guān)鍵詞：濕熱滅菌 熱分布 熱穿透 生物指示劑;

【中圖分類號(hào)】 Q93-334 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】 A? ? ? 【文章編號(hào)】2107-2306（2022）08--01

1常用的滅菌方法

1.1滅菌的定義

首先，滅菌的定義在不同的法規(guī)中描述有所不同，在PDA TR01中，滅菌是指使一個(gè)產(chǎn)品達(dá)到規(guī)定微生物存活概率的工藝過程[1];在EN 285中指減少產(chǎn)品微生物數(shù)量的有效工藝[2]。雖然說國內(nèi)外關(guān)于滅菌的描述有所不同，但是核心內(nèi)容是一樣的，即確認(rèn)滅菌后的微生物不能超過規(guī)定的數(shù)量。

1.2滅菌方法的類型[3]

總的來說，目前滅菌類驗(yàn)證可以分為兩大類，一類為物理滅菌法，一類為化學(xué)滅菌法：物理滅菌法是利用蛋白質(zhì)與核算具有遇熱、射線不穩(wěn)定的特性，采用加熱、射線和過濾的方法，殺滅或除去微生物，主要包括濕熱滅菌、干熱滅菌、除菌過濾和輻射滅菌等;化學(xué)滅菌法是指用化學(xué)藥品直接作用與微生物而將其殺滅的方法。

2濕熱滅菌工藝的開發(fā)

2.1濕熱滅菌工藝的優(yōu)勢

由于蒸汽濕熱滅菌本身具備無殘留，不污染環(huán)境，不破壞產(chǎn)品表面，容易控制和重現(xiàn)性好等優(yōu)點(diǎn)，被廣泛應(yīng)用。藥品、容器、培養(yǎng)基、無菌衣、膠塞以及其他遇髙溫和潮濕不發(fā)生變化或損壞的物品，均可采用本法滅菌。此外，由于流通蒸汽不能有效殺滅細(xì)菌孢子，一般可作為不耐熱無菌產(chǎn)品的輔助滅菌手段;濕熱滅菌條件的選擇應(yīng)考慮被滅菌物品的熱穩(wěn)定性、熱穿透力、微生物污染程度等因素。

2.2濕熱滅菌工藝開發(fā)的方法

濕熱滅菌工藝的開發(fā)，一般來說，有兩種滅菌方法，過渡滅殺法和殘存概率法。在選擇具體哪一種滅菌方法之前，要了解待滅菌物品的一個(gè)關(guān)鍵參數(shù)，即細(xì)菌的耐熱性（即D值）。過度滅殺法對被滅菌品微生物初始數(shù)量和日常監(jiān)控的信息要求較少，但要求的熱能比較大，其后果是被滅菌品降解的可能性增大;殘存概率法則相反，對被滅菌品的信息要求更多，包括微生物初始數(shù)量和日常監(jiān)控微生物的耐熱性，有利于被滅菌的材料的穩(wěn)定性，可能會(huì)延長產(chǎn)品的有效期。

2.3裝載方式對濕熱滅菌工藝的影響

濕熱滅菌程序開發(fā)的另一個(gè)影響因素，裝載方式。由于濕熱滅菌是以高溫飽和的滅菌蒸汽來達(dá)到滅菌效果。那么不同的裝載方式，就會(huì)導(dǎo)致高溫蒸汽氣流流向不同，從而影響到待滅菌的物品。對于懸浮液或乳劑的滅菌，可能需要保持裝載的運(yùn)動(dòng)狀態(tài)來促進(jìn)內(nèi)部的熱循環(huán)。液體滅菌程序中，最需要關(guān)注的問題是保證裝載中最低溫度點(diǎn)獲得足夠的殺滅時(shí)間，與此同時(shí)，有保證裝載中最高溫度點(diǎn)的產(chǎn)品符合產(chǎn)品質(zhì)量要求。

3濕熱滅菌工藝的驗(yàn)證

3.1濕熱滅菌驗(yàn)證的前提條件

在確定了濕熱滅菌的方法后，需要對該方法進(jìn)行驗(yàn)證，確保可以達(dá)到滅菌效果。在滅菌工藝驗(yàn)證之前，我們需要對滅菌設(shè)備進(jìn)行確認(rèn)，確保設(shè)備的安裝情況，運(yùn)行情況滿足使用要求。保證滅菌設(shè)備的一些關(guān)鍵參數(shù)時(shí)合格的，比如說泄漏率，空氣置換能力等。其次，要對蒸汽質(zhì)量進(jìn)行測試，因?yàn)轱柡驼羝袥]有不凝性氣體。因?yàn)檫^熱現(xiàn)象，濕蒸汽、過熱蒸汽和含有不凝性氣體的蒸汽，對多孔/固體物品程序的滅菌率有潛在的不良影響。一般來說，評(píng)價(jià)蒸汽質(zhì)量有以下指標(biāo)，即不凝性氣體含量、干燥度、過熱度。之后需要確認(rèn)好待驗(yàn)證物品的每一種裝載方式，準(zhǔn)備好待驗(yàn)證物品。最后對相關(guān)人員進(jìn)行培訓(xùn)，檢查驗(yàn)證儀器的校驗(yàn)情況。

3.2物理確認(rèn)

當(dāng)一切準(zhǔn)備就緒后，便可以對滅菌工藝進(jìn)行驗(yàn)證。首先是物理確認(rèn)，需要對滅菌器進(jìn)行熱分布試驗(yàn)，空載與負(fù)載都需要進(jìn)行。主要目的是證明整個(gè)裝載區(qū)加熱介質(zhì)的分布是均勻的，測試溫度探頭應(yīng)置于裝載區(qū)，不能裝載物相接觸，應(yīng)有詳細(xì)描述具體溫度探頭的圖形。通過采集的數(shù)據(jù)，計(jì)算均勻度和波動(dòng)度，確保滅菌器內(nèi)部每個(gè)位置的溫度波動(dòng)情況也在接受范圍之內(nèi)。其次是對滅菌器進(jìn)行熱穿透試驗(yàn)，證明所需的熱量已經(jīng)轉(zhuǎn)移到物品。應(yīng)將熱穿透溫度探頭置于液體容器中的冷點(diǎn)，或經(jīng)多孔/堅(jiān)硬物品升溫最慢/最難滅菌的位置;對液體裝載而言，將整個(gè)腔室裝載區(qū)根據(jù)幾何方式來選定一些位置，并將溫度探頭放置在這些位置以及可能已明確為冷點(diǎn)或熱點(diǎn)的位置的容器中;對熱穿透特性不同的產(chǎn)品組成的多孔/堅(jiān)硬裝載，探頭應(yīng)置于每個(gè)類型中具有代表性的裝載物中，對于只有一種類型物質(zhì)組成的多孔/堅(jiān)硬裝載物，可采用與液體裝載模式相同的方法;

3.3生物確認(rèn)

除此之外，還需要進(jìn)行生物確認(rèn)。常以微生物挑戰(zhàn)測試進(jìn)行（通過生物指示劑的方式）。所謂的微生物挑戰(zhàn)，就是獲取生物指示劑的有關(guān)數(shù)據(jù)，證明所開發(fā)的滅菌程序?qū)嶋H達(dá)到了設(shè)計(jì)時(shí)確認(rèn)的滅菌生物殺滅時(shí)間。 評(píng)價(jià)滅菌程序是否達(dá)到所設(shè)計(jì)的足夠的殺滅時(shí)間，應(yīng)當(dāng)選擇恰當(dāng)?shù)纳镏甘緞┻M(jìn)行挑戰(zhàn)試驗(yàn)，以獲得有意義的結(jié)果。為此，生物指示劑的形式應(yīng)當(dāng)隨著不同的裝載形式而異，挑戰(zhàn)的規(guī)模應(yīng)符合預(yù)期的目的。

結(jié)語

濕熱滅菌在藥品生產(chǎn)過程中有著很重要的作用，滅菌效果的好壞與藥品安全和質(zhì)量也有著莫大的聯(lián)系。濕熱滅菌工藝的開發(fā)，驗(yàn)證是一個(gè)耗時(shí)且復(fù)雜的事情。既需要滿足國內(nèi)相關(guān)法律法規(guī)的要求，又需要考慮成本。根據(jù)自身情況，有效的開發(fā)滅菌工藝，選擇合適的驗(yàn)證方法，才能夠在各種GMP符合性檢查中滿足各方要求，從而實(shí)現(xiàn)企業(yè)的效益。

參考文獻(xiàn)：

[1] PDA： Validation of Moist Heat Sterilization Processes： Cycle Design Development， Qualification and Ongoing Control Technical Report N01（Revised 2007）

[2] Sterilization--Steam sterilizers--Large sterilizers. （The European Standard EN 285：2006 has the status of a British Standard）

[3] GMP附錄1 無菌藥品-CFDA