烏梅湯對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎治療作用的初探*

武寒飛 王 旻 呂 莎

（1.吉林省中醫(yī)藥科學(xué)院第一臨床醫(yī)院普外科，吉林 長(zhǎng)春 130000；2.吉林大學(xué)第二醫(yī)院結(jié)直腸肛門(mén)外科，吉林 長(zhǎng)春 130000；3.吉林大學(xué)第二醫(yī)院皮膚科，吉林 長(zhǎng)春 130000）

潰瘍性結(jié)腸炎（UC）是一種病因尚不完全清楚的結(jié)腸與直腸慢性非特異性炎癥性病變，病變局限于黏膜及黏膜下，以潰瘍?yōu)橹?。其病程長(zhǎng)，易反復(fù)，血性腹瀉為常見(jiàn)早期癥狀，同時(shí)伴有腹痛、便血、體質(zhì)量減輕等癥狀[1]。常以腸鏡進(jìn)行診斷，治療多以臥床休息，并給予全身支持治療，常用藥物為水楊酸制劑、糖皮質(zhì)激素或免疫抑制劑，但治療效果一般，且不良反應(yīng)多，目前臨床缺少切實(shí)有效的治療方法。而中藥治療潰瘍性結(jié)腸炎的效果較為理想。在長(zhǎng)期的臨床實(shí)踐中發(fā)現(xiàn)，烏梅湯對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎具有較好的治療作用[2]。本文以50 只大鼠為研究對(duì)象，對(duì)烏梅湯在潰瘍性結(jié)腸炎中的治療作用與機(jī)制進(jìn)行初步研究，報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料 清潔及健康、成熟雄性SD（Sprague Dawley）普通級(jí)大鼠50 只，體質(zhì)量220～250 g，由長(zhǎng)春市一緣生物科技有限公司提供，許可證號(hào)：SYXK（吉）2019-0003。按照清潔級(jí)動(dòng)物飼養(yǎng)方法喂養(yǎng)，室溫20～25℃，相對(duì)濕度20%～35%，日光燈照明，持續(xù)12 h 明暗交替，自由活動(dòng)，自由飲水，飼以標(biāo)準(zhǔn)鼠食，大鼠在吉林省中醫(yī)藥科學(xué)院南苑動(dòng)物飼養(yǎng)室適應(yīng)性喂養(yǎng)1 周后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。處死方法為頸椎脫臼處死。

1.2 實(shí)驗(yàn)分組及造模 建立正常對(duì)照組、三硝基苯磺酸（TNBS）聯(lián)合乙醇誘導(dǎo)大鼠潰瘍性結(jié)腸炎模型組，取雄性SD 大鼠50 只，隨機(jī)分3 組，A 組：正常對(duì)照組10 只，B 組：UC 模型不給藥組20 只，C 組：UC 模型給藥組20只。

大鼠于清潔級(jí)實(shí)驗(yàn)室適應(yīng)性飼養(yǎng)1 周，造模前禁食不禁水24 h 并稱(chēng)重，計(jì)算給藥劑量。用水合氯醛（0.3 mL/100 g）腹腔麻醉后，將鈍頭導(dǎo)管從肛門(mén)插至距肛門(mén)8 cm 處，將5%三硝基苯磺酸（TNBS）與無(wú)水乙醇以體積1∶1 配成25 mg（TNBS）/mL（混合液），按0.4 mL/100 g 體質(zhì)量比例緩慢灌腸，誘導(dǎo)急性結(jié)腸炎。14 d 后再次按0.4 mL/100 g 體質(zhì)量比例緩慢灌腸，造成復(fù)發(fā)性結(jié)腸炎。第1 次誘導(dǎo)時(shí)大鼠快速發(fā)展成嚴(yán)重結(jié)腸炎，其典型癥狀包括腹瀉、血便、體質(zhì)量明顯下降、活動(dòng)減少。第2 周大鼠腹瀉改善，飲食增加。第2 次混合液灌腸后，上述癥狀再次出現(xiàn)。TNBS 聯(lián)合乙醇結(jié)腸炎模型的病理學(xué)改變?yōu)榻Y(jié)腸炎黏膜灶性潰瘍形成，杯狀細(xì)胞及隱窩細(xì)胞減少，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)21 d 后造模完成。造模完成后，每組隨機(jī)抽取大鼠2 只，以確認(rèn)其病理改變符合潰瘍性結(jié)腸炎。

1.3 給藥方法 造模完成后，對(duì)大鼠進(jìn)行藥物治療：A組和B 組每天予蒸餾水2 mL/只灌胃，日1 次；C 組給予烏梅湯（0.82 g/mL）2 mL 灌胃，日1 次；連續(xù)15 d。

1.4 觀察指標(biāo) （1）從造模完成后第1 天（及實(shí)驗(yàn)開(kāi)始的第22 天）開(kāi)始，直至進(jìn)行藥物治療15 d（及實(shí)驗(yàn)開(kāi)始第37 天）后，每天觀察各組大鼠一般情況、體質(zhì)量、大便性狀、血便及大便隱血情況，同時(shí)記錄各組發(fā)生例數(shù)，并依照Cooper 等評(píng)分方法進(jìn)行疾病活動(dòng)指數(shù)（Disease activity index，DAI）評(píng)分。

（2）觀察各組大鼠腸組織學(xué)變化（連續(xù)灌胃15 d 后，第16 天處死動(dòng)物留取標(biāo)本）；取結(jié)腸組織，光鏡及透射電鏡下觀察：黏膜上皮表面、腺體、固有層結(jié)構(gòu)，采用Hovdenak 評(píng)分系統(tǒng)量化評(píng)分。（包括上皮表面指標(biāo)：細(xì)胞腫脹/體積改變、細(xì)胞炎性浸潤(rùn)；腺體指標(biāo)：上皮細(xì)胞核向腺腔遷移、杯狀細(xì)胞消失、有絲分裂情況、隱窩炎、隱窩膿腫、腺體消失、腺體萎縮、腺體扭曲；固有層指標(biāo)：炎癥、水腫、血管充血）。

（3）上皮細(xì)胞增殖情況測(cè)定：免疫組織化學(xué)染色采用ABC 法，檢測(cè)增殖細(xì)胞核抗原（PCNA）。

（4）測(cè)定腸系膜淋巴結(jié)細(xì)菌移位率：提取回腸系膜淋巴結(jié)0.5 g 加l mL 無(wú)菌生理鹽水勻漿后放入胰酪大豆胨液體（TSB）內(nèi)進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)，觀察淋巴結(jié)細(xì)菌移位率。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 以SPSS 22.0 分析組間數(shù)據(jù)，計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，行х2檢驗(yàn)；計(jì)量資料以（）表示，行t 檢驗(yàn)。P ＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠一般情況以DAI 評(píng)分情況 A 組大鼠活動(dòng)、飲食正常，反應(yīng)敏捷，體質(zhì)量增長(zhǎng)，毛光色澤，其大便呈現(xiàn)顆粒狀。B 組大鼠出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的精神萎靡，毛發(fā)蓬松且無(wú)光澤，飲食減少，體質(zhì)量有明顯降低，肛門(mén)周?chē)鄯x并伴有難聞的臭味，其陰囊下垂，均有不同程度的腹瀉、膿血便等，于2 周后好轉(zhuǎn)，糞便質(zhì)稀不成型，共有2 只大鼠死亡（不計(jì)入統(tǒng)計(jì)學(xué)分析），一只因腹部脹大，但未見(jiàn)排便而亡；另一只死因不明。C 組大鼠與A 組相比，與明顯的體質(zhì)量下降、糞便松散等癥狀，但與B 組相比，其糞便松散等癥狀較輕，血便不明顯。C 組DAI（1.23± 0.12）分低于B 組（3.56± 0.32）分（t ＝33.400，P ＜0.05）。

2.2 各組大鼠的腸組織學(xué)變化與PCNA 表達(dá)指數(shù)比較 經(jīng)光鏡觀察，A 組Hovdenak 評(píng)分為0 分，B 組與C 組比較，經(jīng)治療15 d 后，C 組評(píng)分低于B 組（P ＜0.05）；A 組PCNA 染色為腸上皮細(xì)胞核染色為棕褐色，B 組為淡黃色，C 組為棕色，C 組PCNA 表達(dá)指數(shù)經(jīng)治療后高于B組（P ＜0.05），但未能回升至A 組水平，見(jiàn)表1。

表1 各組UC 模型大鼠腸組織學(xué)變化、PCNA 表達(dá)指數(shù)比較（）

表1 各組UC 模型大鼠腸組織學(xué)變化、PCNA 表達(dá)指數(shù)比較（）

注：與A 組比較，aP<0.05，與B 組比較，bP<0.05。

2.3 各組大鼠淋巴結(jié)細(xì)菌移位率比較 經(jīng)統(tǒng)計(jì)A 組淋巴結(jié)細(xì)菌移位率為0，而B(niǎo) 組與C 組均出現(xiàn)細(xì)菌移位，經(jīng)治療C 組由100%降至25%，而B(niǎo) 組由100%降至75%，C 組優(yōu)于B 組（F ＝12.32，P ＜0.05）。

3 討論

UC 為慢性非特異性腸道炎癥，病變多從直腸開(kāi)始，逆行向近端發(fā)展，可累及全結(jié)腸與末端回腸，繼而侵犯黏膜與黏膜下層，造成結(jié)腸黏膜出現(xiàn)不同程度的充血、水腫與糜爛等，主要表現(xiàn)為腹痛、腹瀉、黏液膿血便等[3]。而近年來(lái)該病癥發(fā)病率呈現(xiàn)上升趨勢(shì)，且以病程較長(zhǎng)、反復(fù)發(fā)作、纏綿難愈為特征，嚴(yán)重影響患者身體健康。目前臨床針對(duì)該病癥治療以?xún)?nèi)科治療為主，必要時(shí)可行手術(shù)治療，常用藥物有氨基水楊酸制劑、糖皮質(zhì)激素與免疫抑制劑，但不良反應(yīng)較大，易使患者產(chǎn)生依賴(lài)性，臨床治療效果不佳[4]。而近年來(lái)有研究報(bào)道中藥對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎具有較好療效，能有效緩解各種癥狀，促進(jìn)機(jī)體康復(fù)。UC 歸屬于中醫(yī)學(xué)“腸澼”“痢疾”“大瘕泄”等范疇，其核心病機(jī)實(shí)為肝脾失調(diào)，氣機(jī)不暢。而烏梅湯方中，以烏梅為主藥，蜀椒、細(xì)辛共為臣藥，取二藥辛溫止痛、散寒止痛之意；以黃連、黃柏清腸間濕熱，以附片、桂枝、干姜辛熱藥溫經(jīng)祛寒，以當(dāng)歸、人參補(bǔ)氣養(yǎng)血共為佐藥；以蜜煉之，取使藥之調(diào)和諸藥之意。縱觀全方，烏梅丸酸能澀腸止瀉，辛可祛寒溫中，苦能清熱解毒，甘能補(bǔ)益氣血，同調(diào)諸藥。針對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎，本方劑組成中的烏梅可澀腸、生津，安蛔；蜀椒主治腹內(nèi)虛冷，久冷不利；細(xì)辛可祛風(fēng)散寒，通竅止痛；黃連可清熱燥濕，瀉火解毒；黃柏可清熱燥濕，瀉火除蒸，解毒療瘡；附片可補(bǔ)火助陽(yáng)，散寒止痛；桂枝可發(fā)汗解表，溫經(jīng)通陽(yáng)；干姜可發(fā)汗解表，溫中止吐；當(dāng)歸可活血止痛，補(bǔ)血調(diào)經(jīng)，潤(rùn)腸通便；人參可大補(bǔ)元?dú)?，?fù)脈固脫，補(bǔ)脾益肺，生津；蜂蜜可補(bǔ)中緩急，潤(rùn)腸通便。諸藥聯(lián)用可有效改善患者病情，提高治療效果[5]。

本文實(shí)驗(yàn)結(jié)果中，C 組大鼠經(jīng)烏梅湯治療，其腸組織學(xué)變化、上皮細(xì)胞增殖情況、腸系膜淋巴結(jié)細(xì)菌移位率等情況均改善，可為見(jiàn)烏梅湯治療效果顯著，且無(wú)不良反應(yīng)。

總之，針對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎實(shí)施烏梅湯治療，可減少細(xì)菌移位情況，有效維持腸道黏膜結(jié)構(gòu)與功能的穩(wěn)定性及屏障作用，其應(yīng)用價(jià)值顯著。