50%氯硝柳胺乙醇胺鹽可濕粉劑冬季浸殺釘螺效果觀察

汪為春，詹惕，范澤涵，項(xiàng)可霞，朱應(yīng)富，段永梅，操治國(guó)

1.馬鞍山市疾病預(yù)防控制中心，安徽 馬鞍山 243000 2.安徽省血吸蟲(chóng)病防治研究所

藥物滅螺是預(yù)防控制血吸蟲(chóng)病的重要措施，氯硝柳胺是目前國(guó)內(nèi)普遍使用的滅螺藥。但氯硝柳胺對(duì)兩棲動(dòng)物和魚(yú)類等非靶生物有較大毒性[1]。隨著血防工作不斷推進(jìn)，藥物滅螺與水產(chǎn)養(yǎng)殖矛盾正在逐步加劇。由于水產(chǎn)養(yǎng)殖原本也需要利用冬季養(yǎng)殖間歇期清理池塘中的螺類和貝類[2-3]，因此利用冬季養(yǎng)殖戶清塘機(jī)會(huì)開(kāi)展浸殺滅螺是規(guī)避藥物滅螺與水產(chǎn)養(yǎng)殖矛盾的可選方案。本研究在冬季低溫條件下對(duì)50%氯硝柳胺乙醇胺鹽可濕粉劑（wettable powder of niclosamide ethanolamine salt，WPNES）浸殺釘螺的效果進(jìn)行觀察，以探索在冬季開(kāi)展藥物滅螺工作的可行性。現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 試驗(yàn)藥物 50%WPNES 由安徽恒誠(chéng)藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號(hào)為2003201，生產(chǎn)日期為2020 年3月20日。該產(chǎn)品廠家推薦浸殺濃度為制劑濃度2～6 mg/L（換算有效含量為1～3 mg/L）。

1.1.2 釘螺 采集當(dāng)涂縣湖陽(yáng)鎮(zhèn)有螺溝渠環(huán)境中的肋殼釘螺約4 000 只。取直徑35 cm 的塑料圓托盤(pán)，底部鋪墊2 cm厚的有螺環(huán)境土壤。每個(gè)托盤(pán)內(nèi)放置約200 只釘螺在8～14 ℃室內(nèi)飼養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)前，撿出釘螺置于空托盤(pán)中，在20～24 ℃室內(nèi)經(jīng)過(guò)24 h觀察，能夠爬動(dòng)的鑒定為活螺。選取7～8 旋、活力較好的成螺隨機(jī)分組，按50 只/袋裝入事先準(zhǔn)備好的尼龍網(wǎng)袋中，共準(zhǔn)備42袋釘螺備用。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 試驗(yàn)分組 試驗(yàn)分為室外觀察組和室內(nèi)對(duì)照組，2組均按照50%WPNES有效含量從高到低分別設(shè)置1.000 0、0.500 0、0.250 0、0.125 0、0.062 5 和0.031 3 mg/L 共6 個(gè)濃度的施藥組和1 個(gè)脫氯水空白對(duì)照組。

1.2.2 試驗(yàn)場(chǎng)地 室外觀察場(chǎng)地選擇通風(fēng)、采光良好且避免陽(yáng)光直射的走廊；室內(nèi)對(duì)照?qǐng)龅剡x擇溫度為19～25 ℃并保持自然光照條件的室內(nèi)環(huán)境。

1.2.3 試驗(yàn)操作 容量10 L 的塑料桶作為浸殺容器，各組浸殺藥液用量為6 L，空白對(duì)照組使用6 L脫氯水。試驗(yàn)從2021 年1 月1 日上午10：00 開(kāi)始，將釘螺按3袋/桶分別浸沒(méi)于各桶藥液中，使用尼龍線懸吊使其保持懸浮狀態(tài)。分別于浸殺開(kāi)始后的24、48 和72 h 從各濃度組和空白對(duì)照組的水桶中取出一袋釘螺觀察其死亡情況。試驗(yàn)觀察期間室外氣象條件較為穩(wěn)定，最低氣溫-2～2 ℃，最高氣溫8～10 ℃，天氣為晴到多云。

1.2.4 結(jié)果觀察 參照中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)《農(nóng)藥登記用殺釘螺劑藥效試驗(yàn)方法和評(píng)價(jià)》（NY/T 1617—2008）（簡(jiǎn)稱《行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)》），使用水養(yǎng)法和敲擊法對(duì)各組釘螺死亡情況進(jìn)行觀察。具體做法為將各組釘螺從藥液中取出后用脫氯水沖洗3次，置于鋪有3 層濾紙的培養(yǎng)皿中恢復(fù)飼養(yǎng)24 h 并用脫氯水保持濾紙的濕潤(rùn)。在恢復(fù)飼養(yǎng)期間能活動(dòng)的釘螺為活螺，不能活動(dòng)的使用敲擊法鑒別死活。敲擊法的具體操作方式為將釘螺置于厚玻璃片或硬物上，用小鐵錘輕擊使之破碎，如未見(jiàn)釘螺有收縮反應(yīng)，或未見(jiàn)軟體組織顯現(xiàn)者為死螺，反之為活螺。

1.3 數(shù)據(jù)分析

1.3.1 釘螺死亡率計(jì)算 參照《行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)》，空白對(duì)照組釘螺死亡率＜5%時(shí)，按如下公式計(jì)算釘螺死亡率：

式中P=死亡率，單位為百分率（%）；∑Ki=死亡釘螺數(shù)，單位為只；∑Ni=處理總釘螺數(shù)，單位為只。

空白對(duì)照組釘螺死亡率≥5%且＜10%時(shí)，按如下公式計(jì)算釘螺校正死亡率：

式中Pι=校正死亡率，單位為百分率（%）；Pt=處理死亡率，單位為百分率（%）；P0=空白對(duì)照死亡率，單位為百分率（%）。

1.3.2 半數(shù)致死濃度（LC50）計(jì)算 參照《行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)》，使用概率單位線性加權(quán)回歸法計(jì)算LC50。

2 結(jié) 果

2.1 釘螺死亡情況 對(duì)浸殺24、48 和72 h 后的釘螺死亡情況進(jìn)行鑒定并計(jì)算死亡率。浸殺24、48和72 h后各濃度室外觀察組釘螺死亡率均低于室內(nèi)對(duì)照組，其中在50%WPNES 濃度為1.000 0 mg/L 時(shí)，室內(nèi)對(duì)照組浸殺24 h 釘螺死亡率達(dá)到100%，而室外觀察組浸殺72 h 釘螺死亡率才達(dá)到100%。具體結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 浸殺24、48和72 h后的釘螺死亡數(shù)及死亡率

進(jìn)一步對(duì)比室外觀察組作用72 h 與室內(nèi)對(duì)照組作用24 h的滅螺效果，以釘螺死亡率的概率單位為縱坐標(biāo)，以滅螺藥有效含量濃度為橫坐標(biāo)繪制二者劑量反應(yīng)關(guān)系曲線。釘螺死亡率的概率單位與滅螺藥有效含量濃度呈對(duì)數(shù)關(guān)系，室外觀察組作用72 h與室內(nèi)對(duì)照組作用24 h的劑量反應(yīng)關(guān)系曲線在圖中基本重合，說(shuō)明兩種情況下滅螺藥的殺螺效果基本一致。見(jiàn)圖1。

2.2 半數(shù)致死濃度（LC50） 室外觀察組中50%WPNES對(duì)釘螺的LC50要明顯高于室內(nèi)對(duì)照組，其中作用時(shí)間僅為24 h 時(shí)室外觀察組的LC50尚不能達(dá)到《行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)》要求的低于1 mg/L 的標(biāo)準(zhǔn)。但隨著作用時(shí)間延長(zhǎng)，室外觀察組的LC50與室內(nèi)對(duì)照組差距逐漸縮小。見(jiàn)表2。

表2 室外觀察組和室內(nèi)對(duì)照組浸殺24、48和72 h的LC50

3 討論

目前，我國(guó)血吸蟲(chóng)病防治工作已進(jìn)入邁向消除的新時(shí)期，但是由于造成血吸蟲(chóng)病流行的自然、社會(huì)因素等沒(méi)有徹底改變，尤其是釘螺分布仍較廣泛，血防工作仍面臨著巨大挑戰(zhàn)[4]。隨著滅螺工作持續(xù)深入，壓縮釘螺面積與水產(chǎn)養(yǎng)殖之間的矛盾日益凸顯[5-7]。為解決這一矛盾，多數(shù)研究從滅螺藥物研制著手，螺威、榮寶、密達(dá)利、吡螺脲等一批對(duì)魚(yú)毒性低的滅螺藥物應(yīng)運(yùn)而生[8]，盡管如此，血防機(jī)構(gòu)使用時(shí)仍有顧慮。

在冬季，多數(shù)魚(yú)塘須進(jìn)行“清塘”，直到次年春季再重新投放魚(yú)苗。利用冬季“清塘”的窗口期開(kāi)展藥物滅螺，可以較好規(guī)避滅螺與養(yǎng)殖的矛盾。既往研究表明，氯硝柳胺在自然水體中15 d的降解率可以達(dá)到80%，在有土壤和微生物參與的條件下，其30 d的降解率更是可以超過(guò)90%[9-10]。因此，氯硝柳胺在經(jīng)過(guò)冬季“清塘”的較長(zhǎng)時(shí)間降解后，其環(huán)境殘留很低，再通過(guò)更換“塘水”，對(duì)之后的水產(chǎn)養(yǎng)殖基本不會(huì)產(chǎn)生影響。

冬季進(jìn)行藥物滅螺，首先要考慮低溫條件下藥物殺螺效果，目前該領(lǐng)域相關(guān)研究尚缺。已有研究表明，隨著溫度的降低，藥物殺螺作用有減弱的趨勢(shì)[11-12]。為盡量保證觀察結(jié)果穩(wěn)定，本次研究選擇氣溫較為穩(wěn)定的連續(xù)3天，每日最低氣溫-2～2 ℃，最高氣溫8～10 ℃，觀察期間藥液未結(jié)冰。觀察結(jié)果表明，在冬季室外低溫條件下，50%WPNES 的殺釘螺效果比室內(nèi)溫暖條件下有所下降，其作用24、48 和72 h 的浸殺效果均低于相同作用時(shí)間和濃度下的室內(nèi)對(duì)照組。當(dāng)作用時(shí)間達(dá)到72 h，室外觀察組的滅螺效果可達(dá)到與室內(nèi)對(duì)照組作用24 h 的相同水平。

化學(xué)合成滅螺藥在推薦濃度下，浸殺72 h釘螺死亡率須達(dá)到100%，且LC50須低于1 mg/L才能被認(rèn)為達(dá)到《行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)》要求。本次觀察中最高濃度組按照推薦濃度最低值設(shè)置（1.000 0 mg/L），當(dāng)浸殺時(shí)間達(dá)到72 h，室外觀察組在最低推薦濃度下釘螺死亡率達(dá)到100%，同時(shí)其LC50也低至0.153 3 mg/L，兩項(xiàng)指標(biāo)均符合《行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)》要求。

通過(guò)此次觀察，50%WPNES在冬季較低氣溫下殺螺效果雖然有所降低，但在最低推薦濃度下依然可以達(dá)到《行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)》要求，說(shuō)明冬季進(jìn)行藥物滅螺在滅螺效果上具備可行性，可再進(jìn)行重復(fù)試驗(yàn)對(duì)滅螺效果穩(wěn)定性做進(jìn)一步驗(yàn)證。此外冬季釘螺多數(shù)匿居在土層中，因此冬季開(kāi)展藥物滅螺除了要考慮低溫條件下藥物的直接殺螺效果，還要充分考慮藥物對(duì)土層內(nèi)的釘螺滅殺作用，這需要通過(guò)現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)進(jìn)一步論證。