酶聯(lián)免疫吸附法與RT-PCR 法對血液標(biāo)本內(nèi)乙肝病毒的檢驗結(jié)果比較

陶琴芳

（南京市高淳人民醫(yī)院 南京 211300）

乙肝病毒在我國屬于常見且多發(fā)的一種傳染性疾病，其患病率很高，傳播比較廣泛，一般情況下均表現(xiàn)為持續(xù)性帶病毒的狀態(tài)，進而形成慢性感染，是目前不容忽視的公共衛(wèi)生問題。如果患者長期攜帶乙型肝炎病毒，且不加以控制，很容易出現(xiàn)肝衰竭及肝硬化的情況，進而危及患者生命安全[1]。傳統(tǒng)的臨床檢驗主要是多采取血清學(xué)標(biāo)志物，不過期間一旦發(fā)生檢測失誤就會出現(xiàn)檢測者被傳染的情況[2]。隨著臨床上抗病毒藥物的不斷廣泛應(yīng)用，HBV 變異株數(shù)量也不斷的增加，進而導(dǎo)致血清學(xué)檢查更加困難，其敏感性及準(zhǔn)確性均大大降低[3]。

近年來，生物技術(shù)得到不斷發(fā)展，對HBV 的檢測也有了很多新的突破，彌補了傳統(tǒng)技術(shù)的缺陷。為進一步探討對比ELISA（酶聯(lián)免疫吸附法）與RT-PCR（實時熒光定量-PCR）法對血液標(biāo)本內(nèi)乙肝病毒的檢驗結(jié)果，本文將我院在2019 年4 月至2020 年12 月收入的血液標(biāo)本，抽取其中的300 份乙肝病毒標(biāo)本進行研究，具體報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

以我院在2019 年4 月至2020 年12 月收入的血液標(biāo)本，抽取其中的300 份乙肝病毒標(biāo)本進行研究，對其臨床資料作回顧性分析。其中，男性160 例，女性140 例，年齡18～89 歲，平均（53.56±5.24）歲。

1.2 納入標(biāo)準(zhǔn)

（1）均經(jīng)過相關(guān)檢驗明確診斷為乙肝患者；（2）均未進行任何抗病毒治療；（3）家屬及患者均知情同意本研究，簽署相關(guān)的同意書，本研究得到我院倫理委員會批準(zhǔn)。（4）均為自愿參加本研究。

1.3 排除標(biāo)準(zhǔn)

（1）對于其他類型的肝炎患者進行排除，例如甲型、丙型等；（2）對于合并肝臟惡性腫瘤的患者進行排除；（3）對于有嚴(yán)重心腦血管疾病的患者進行排除；（4）對于中途退出本研究及不愿參加本研究的患者進行排除。

1.4 檢驗方法

抽取其中的100 份乙肝病毒標(biāo)本進行研究，分別采取酶聯(lián)免疫吸附法與RT-PCR 法進行乙肝病毒檢測。其中，酶聯(lián)免疫吸附法：在清晨空腹?fàn)顟B(tài)下，抽取患者的外周靜脈血，約5ml，放置于環(huán)境溫度為4℃的冰箱內(nèi)，保存2h，在經(jīng)過離心后取上層血清進行待檢測。

然后，以ELISA 酶聯(lián)免疫吸附法對其進行定性檢驗，檢測HBsAg、HbcAb、HbeAg、HbsAb、HbeAb，分別為乙肝表面抗原、乙肝核心抗體、乙肝e 抗原、乙肝表面抗體、乙肝E 抗體，在檢測過程中嚴(yán)格根據(jù)相關(guān)的操作標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行。

RT-PCR 法定量檢測：在清晨空腹?fàn)顟B(tài)下，抽取患者的外周靜脈血，約5ml，放置于環(huán)境溫度為4℃的冰箱內(nèi)，保存2h，在經(jīng)過離心后取上層血清進行待檢測，儀器型號為AFD4800（安潔思），然后將200μl的血清樣本與乙肝DNA 提取液450μl 進行混合，在100℃下的溫育器中進行10min 的預(yù)熱，然后以冰凍離心機進行5min 的離心，轉(zhuǎn)速為12000r/min，取20μl的上清液放置于PCR 管內(nèi)，相關(guān)流程操作嚴(yán)格根據(jù)操作說明書進行，然后弱陽性、陰性、陽性等，在反應(yīng)結(jié)束后以Ct 值做熒光曲線，根據(jù)其Ct 值對其DNA 值進行計算。

1.5 觀察指標(biāo)

分別記錄兩種檢查方式下乙肝病毒的檢驗結(jié)果，并進行對比分析。

首先，乙型肝炎病毒（HBV）與血清免疫學(xué)標(biāo)志物（HBV-M）的表現(xiàn)模式有以下5 種：（1）大三陽陽性：即HBsAg、HbcAb、HbeAg 均為“+”；（2）小三陽陽性：即HBsAg、HbeAb、HbcAb 均為“+”；（3）HBsAg 和HbeAb 均為“+”；（4）HbsAb、HbeAb、HbcAb均為“+”；（5）HbeAg、HBsAg 均為“+”；HBV-DNA水平在1×103copies/ml 以上均為表示為陽性。

其次，對于不同模式下HBV-DNA 即乙肝病毒的脫氧核糖核酸含量分布情況，有以下3 種情況，第一：高水平復(fù)制情況，即HBV-DNA 水平在1×106copies/ml以上；第二：中、低水平復(fù)制情況，即HBV-DNA 水 平 在 1 ×103copies/m l -1 ×106copies/ml；第三：結(jié)果呈陰性，即HBV-DNA 水平在1×103copies/ml以內(nèi)[4]。

1.6 統(tǒng)計學(xué)處理

應(yīng)用SPSS 26.0 軟件進行處理，計數(shù)資料比率（n，%）表示，以X2進行檢驗，計量資料以（）表示，以t 檢驗，P＜0.05 差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩種檢驗方法對HBV的檢驗陽性率對比

HBV 與HBV-M 的表現(xiàn)模式下ELISA 檢驗結(jié)果顯示，HBV-M 表現(xiàn)模式為大三陽的情況下，陽性率為96.12%，HBV-M 表現(xiàn)模式為第五種模式的情況下，其陽性率為80.95%與其他3 種模式的陽性率比較差異顯著，P＜0.05。見表1。

表1 兩種檢驗方法對乙肝病毒的檢驗陽性率對比（n，%）

2.2 對比不同HBV-M 表現(xiàn)模式下HBV-DNA的分布

HBV-M 表現(xiàn)模式的大三陽，其HBV-DNA 水平顯著高于其他，4 種模式下的HBV-DNA 水平，比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義，P＜0.05，見表2。

表2 對比不同HBV-M 表現(xiàn)模式下HBV-DNA 的分布（）

表2 對比不同HBV-M 表現(xiàn)模式下HBV-DNA 的分布（）

注：與HBsAg、HbcAb、HbeAg 均為“+”大三陽模式進行對比統(tǒng)計學(xué)差異顯著，＊P＜0.05。

HBV-M 表現(xiàn)模式 總例數(shù) HBV-DNA 水平（copies/mL）HBsAg、HbcAb、HbeAg 均為“+” 103 5.63×106±2.12×105 HBsAg、HbeAb、HbcAb 均為“+” 51 3.35×104±1.68×103★HBsAg 和HbeAb 均為“+” 113 4.19×105±1.32×104★HbsAb、HbeAb、HbcAb 均為“+” 12 4.67×103±1.34×102★HbeAg、HBsAg 均為“+” 21 3.68×106±1.56×105★

3 討論

乙型肝炎是HBV 感染導(dǎo)致的一種傳染性肝臟疾病，如果沒有及時進行診治，研究顯示[5]，有25%左右的患者病情會發(fā)展為肝炎，其中占據(jù)三分之一的患者會進展為肝硬化，嚴(yán)重危及患者的生活質(zhì)量及生命安全，是目前導(dǎo)致人們死亡的第七位疾病。對于該疾病治療的關(guān)鍵在于掌握HBV 病毒復(fù)制的情況及HBV 病毒感染的強弱程度[6]。酶聯(lián)免疫吸附法屬于一種免疫學(xué)檢測技術(shù)，可以準(zhǔn)確反應(yīng)病毒在入侵機體后免疫應(yīng)答的情況，可用于早期乙肝檢出，但是該方法對于病毒的復(fù)制，感染情況及危險性等無法準(zhǔn)確判斷。因此，其敏感性比較差，具有一定的誤診和漏診率，也可能會延誤患者早期進行治療。研究顯示[7]，實時熒光定量RT-PCR 法能夠在用于準(zhǔn)確評估患者不同模式下HBV-DNA 含量的情況，進而為患者是否出現(xiàn)乙肝感染提供可靠的依據(jù)。RT-PCR法屬于病原學(xué)檢測手段，具有血清學(xué)標(biāo)志物沒有的優(yōu)勢，例如可重復(fù)操作，特異性、敏感性及靈敏度高等，能夠自動檢出，且通過累及熒光信號做到實時監(jiān)測，能夠更加直面觀察患者乙肝病毒DNA 含量分布的情況，對臨床判斷乙肝病毒感染、病毒復(fù)制的情況及傳染性具有有利的價值。研究指出[8]，即使患者表現(xiàn)出微弱的HBV-DNA 情況也能夠?qū)⑵錂z出，因此大大降低了誤診及漏診的情況。

本研究結(jié)果顯示，HBV-M 表現(xiàn)模式為大三陽的情況下，陽性率為96.12%，HBV-M 表現(xiàn)模式為第五種模式的情況下，其陽性率為80.95%，與其他3種模式的陽性率，P＜0.05。HBV-M 表現(xiàn)模式下第一種的大三陽模式下其HBV-DNA 水平顯著高于其他4 種模式下的HBV-DNA 水平，P＜0.05。結(jié)果說明，實時熒光定量-PCR 檢驗血液標(biāo)本中的乙肝病毒更加具有敏感性及可靠性，且可以真實反應(yīng)患者機體內(nèi)對HBV 感染及復(fù)制的狀態(tài)。

綜上所述，實時熒光定量-PCR 檢驗血液標(biāo)本中的乙肝病毒可提高陽性率，利于臨床上評估病毒傳染性及感染復(fù)制狀態(tài)，對臨床上早期診療乙肝及傳染性的判斷，監(jiān)測預(yù)后等具有重要的價值。