茯磚茶中冠突散囊菌的檢測(cè)條件研究

劉靜 舒靜 秦婧

摘 要：茯磚茶是陜西地理標(biāo)志產(chǎn)品之一，其中所含的冠突散囊菌是茯磚茶的重要指標(biāo)。本文針對(duì)冠突散囊菌的檢測(cè)條件進(jìn)行研究，通過(guò)取樣方法和拍擊均質(zhì)時(shí)間的對(duì)比，發(fā)現(xiàn)中心五點(diǎn)法的取樣方式和60 s的均質(zhì)時(shí)間是較為合適的檢測(cè)條件。

關(guān)鍵詞：茯磚茶；冠突散囊菌；檢測(cè)

Study on the Detection Conditions of Eurotium cristatum in Fuzhuan Tea

LIU Jing， SHU Jing， QIN Jing

（Shaanxi Product Quality Supervision and Inspection Institute， Xian 710048， China）

Abstract： Fuzhuan tea is a geographical indicator product of Shaanxi province， the Eurotium cristatum in it is an important index of Fuzhuan tea. In this paper， the detection conditions of Eurotium cristatum in Fuzhuan tea were studied. By comparing the sampling method and the homogenization time of the stroke， it was found that the central five-point sampling method and the homogenization time of 60 s were the more suitable detection conditions.

Keywords： Fuzhuan tea; Eurotium cristatum; detection

茯磚茶隸屬中國(guó)茶葉六大分類中的黑茶，目前盛產(chǎn)于陜西省涇陽(yáng)縣和湖南省安化縣，其中涇陽(yáng)是茯磚茶的發(fā)源地，于1368年前后形成定型的涇陽(yáng)茯磚茶，如今更是陜西涇陽(yáng)縣的地理標(biāo)志產(chǎn)品[1]。

茯磚茶在發(fā)花過(guò)程中，通過(guò)控制一定的溫濕度，促進(jìn)優(yōu)勢(shì)菌種的生長(zhǎng)，產(chǎn)生大量的金黃色的閉囊殼，俗稱“金花”，“金花”的多少是鑒別茯磚茶品質(zhì)好壞的標(biāo)準(zhǔn)[2]。研究表明，“金花”在茯磚茶中繁殖時(shí)會(huì)產(chǎn)生大量的酶類，這些酶使原料中的纖維素、果膠質(zhì)、淀粉、蛋白質(zhì)、脂肪和多酚等物質(zhì)分解，對(duì)改善茯磚茶的品質(zhì)有著積極的作用[3]。多數(shù)學(xué)者都對(duì)茯磚茶發(fā)花中的優(yōu)勢(shì)菌進(jìn)行鑒定，認(rèn)為冠突散囊菌是優(yōu)勢(shì)菌[4-7]。2012年，丁婷等[8]也研究證明了陜西涇陽(yáng)茯磚茶中優(yōu)勢(shì)菌為冠突散囊菌。

檢測(cè)茯磚茶中的冠突散囊菌不僅可以評(píng)價(jià)茶葉質(zhì)量，更能促進(jìn)茯磚茶的良好發(fā)展，因此對(duì)冠突散囊菌進(jìn)行檢測(cè)至關(guān)重要?，F(xiàn)行的茯磚茶標(biāo)準(zhǔn)中提及冠突散囊菌的主要有《緊壓茶 第3部分：茯磚茶》（GB/T 9833.3—2013）[9]和《緊壓茶 第3部分：茯磚茶》（DBS 61/0006—2014）[10]，其中所指定的檢測(cè)方法均為《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 霉菌和酵母計(jì)數(shù)》（GB 4789.15—2016）[11]，這個(gè)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了食品中霉菌和酵母的計(jì)數(shù)方法，其中第一法適用于各類食品中霉菌和酵母的計(jì)數(shù)，第二法適用于番茄醬罐頭、番茄汁中霉菌的計(jì)數(shù)；對(duì)于冠突散囊菌的檢測(cè)并未作出詳細(xì)規(guī)定。本文針對(duì)GB 4789.15—2016中的第一法-平板計(jì)數(shù)法對(duì)冠突散囊菌的檢測(cè)細(xì)節(jié)條件進(jìn)行研究。

1 材料與方法

1.1 材料與設(shè)備

15份茯磚茶，購(gòu)自陜西各超市賣場(chǎng)；孟加拉紅瓊脂，購(gòu)自北京陸橋技術(shù)有限責(zé)任公司；霉菌培養(yǎng)箱；生物安全柜；拍擊式均質(zhì)器；渦旋混勻儀。

1.2 方法

1.2.1 試驗(yàn)方案

為了能夠做到均衡取樣，取樣方法選擇中心五點(diǎn)法和對(duì)角線五點(diǎn)法進(jìn)行比較研究，其中中心五點(diǎn)法是在對(duì)茯磚茶的兩條對(duì)角線作四等分，分割點(diǎn)即為取樣點(diǎn)，對(duì)角線五點(diǎn)法則是對(duì)茯磚茶的其中一條對(duì)角線進(jìn)行六等分，同樣，分割點(diǎn)即為取樣點(diǎn)；中心五點(diǎn)法[12]示例見(jiàn)圖1，對(duì)角線五點(diǎn)法示例見(jiàn)圖2。除了要考慮均衡取樣，所有樣本的均質(zhì)時(shí)間也應(yīng)當(dāng)保持一致，均質(zhì)時(shí)間選擇15 s、30 s、60 s進(jìn)行比較研究，從而選擇出既能節(jié)省試驗(yàn)時(shí)間又能充分均質(zhì)樣品的均質(zhì)時(shí)間。

1.2.2 試驗(yàn)方法

本次研究對(duì)共計(jì)15份茯磚茶樣本按照《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 霉菌和酵母計(jì)數(shù)》（GB4789.15—2016）第一法 霉菌和酵母平板計(jì)數(shù)法進(jìn)行檢驗(yàn)。秤取25 g樣品，加入225 mL無(wú)菌生理鹽水，用拍擊式均質(zhì)器均質(zhì)拍打，制成1∶10的樣品勻液。取1 mL 1∶10的樣品勻液注入一支含有9 mL的無(wú)菌生理鹽水的試管中，用渦旋混勻儀混均后制成1∶100的樣品勻液，若有需要，可重復(fù)上述步驟繼續(xù)稀釋。選擇2～3個(gè)適宜稀釋度的樣品勻液，在進(jìn)行10倍梯度稀釋的同時(shí)，每個(gè)稀釋度分別吸取1 mL樣品勻液分別加入2個(gè)無(wú)菌平皿中，同時(shí)分別吸取1 mL無(wú)菌生理鹽水加入兩個(gè)無(wú)菌平皿作為空白對(duì)照，及時(shí)將20～25 mL冷卻至46 ℃左右的孟加拉紅瓊脂傾注平皿，并轉(zhuǎn)動(dòng)平皿使其混合均勻，置于水平臺(tái)面待培養(yǎng)基完全凝固后置于培養(yǎng)箱內(nèi)（28±1）℃培養(yǎng)，觀察并記錄至第5天的結(jié)果。

2 結(jié)果與分析

2.1 取樣方法比較

對(duì)每一份樣本都稱取兩份試驗(yàn)樣本，一份按照中心五點(diǎn)法取樣，一份按照對(duì)角線五點(diǎn)法進(jìn)行取樣，每個(gè)取樣點(diǎn)取樣約5 g，總計(jì)25 g，進(jìn)行標(biāo)注后加入無(wú)菌生理鹽水進(jìn)行10倍稀釋，所有樣本均質(zhì)60 s后按照《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn)霉菌和酵母計(jì)數(shù)》（GB 4789.15—2016）第一法 霉菌和酵母平板計(jì)數(shù)法進(jìn)行檢驗(yàn)，菌落計(jì)數(shù)時(shí)，用肉眼觀察計(jì)數(shù)，冠突散囊菌在孟加拉紅瓊脂平板上生長(zhǎng)形態(tài)為圓形、邊緣白色至鵝黃色、中心呈黃褐色、絨毛狀，也有未生長(zhǎng)大的菌落為小的白色絨毛狀菌落。選擇計(jì)數(shù)結(jié)果在10～150 CFU的稀釋度，用平均數(shù)乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)即可。最終統(tǒng)計(jì)結(jié)果見(jiàn)表1。

由表1知，中心五點(diǎn)法取樣所測(cè)得的數(shù)據(jù)均比對(duì)角線五點(diǎn)法取樣所測(cè)得的數(shù)據(jù)大，原因可能是中心五點(diǎn)法的取樣點(diǎn)位置均為茯磚茶的較為中間的部位，其冠突散囊菌分布相對(duì)均勻，而對(duì)角線五點(diǎn)法取樣位置中有兩個(gè)取樣點(diǎn)比較靠近茯磚茶邊緣的部位，而邊緣部分的冠突散囊菌一般分布較少，相較而言，中心五點(diǎn)法更能代表樣品的真實(shí)情況。

2.2 均質(zhì)時(shí)間比較

對(duì)中心五點(diǎn)法的試驗(yàn)樣本先均質(zhì)15 s后按照標(biāo)準(zhǔn)要求，取出1 mL直接進(jìn)行梯度稀釋并選適宜的稀釋度進(jìn)行試驗(yàn)，剩余的樣本繼續(xù)均質(zhì)15 s后再次按照標(biāo)準(zhǔn)要求，取出1 mL直接進(jìn)行梯度稀釋并選適宜的稀釋度進(jìn)行試驗(yàn)，最后剩余樣本繼續(xù)均質(zhì)30 s后同樣按照標(biāo)準(zhǔn)要求，取出1 mL直接進(jìn)行梯度稀釋并選適宜的稀釋度進(jìn)行試驗(yàn)，最終得到的3份試驗(yàn)樣本，即均質(zhì)時(shí)間分別為15 s、30 s、60 s的試驗(yàn)樣本。對(duì)所有試驗(yàn)樣本按照標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行檢測(cè)后，觀察計(jì)數(shù)后計(jì)算結(jié)果。結(jié)果統(tǒng)計(jì)見(jiàn)表2。

由表2知，隨著拍擊時(shí)間的延長(zhǎng)，所測(cè)得的冠突散囊菌數(shù)據(jù)也越來(lái)越大。均質(zhì)15～30 s時(shí)，數(shù)據(jù)增幅較大，而30～60 s的數(shù)據(jù)增幅較為平緩，原因可能是15s拍擊時(shí)間過(guò)短，很多茶葉樣本還沒(méi)有得到充分的均質(zhì)，冠突散囊菌沒(méi)有釋放至樣品勻液中，30 s時(shí)大多數(shù)茶葉樣本得到充分均質(zhì)，從而釋放更多的冠突散囊菌至樣品均液中，60 s時(shí)拍擊時(shí)間長(zhǎng)，茶葉樣本得到充分的均質(zhì)，冠突散囊菌的釋放也逐步達(dá)到頂點(diǎn)；拍擊時(shí)間大于1 min時(shí)數(shù)據(jù)或許仍會(huì)有所增加，但考慮到總試驗(yàn)時(shí)間不能過(guò)長(zhǎng)、霉菌孢子容易擴(kuò)散等因素，拍擊時(shí)間不宜超過(guò)1 min。

3 結(jié)論

本次研究立足陜西特色產(chǎn)品的檢驗(yàn)，結(jié)合實(shí)際工作經(jīng)驗(yàn)，依據(jù)現(xiàn)有標(biāo)準(zhǔn)對(duì)陜西涇陽(yáng)茯磚茶中冠突散囊菌的檢測(cè)條件進(jìn)行研究分析，分析結(jié)果顯示中心五點(diǎn)取樣法較對(duì)角線五點(diǎn)取樣法測(cè)得的數(shù)據(jù)更大，更能代表樣本的真實(shí)情況，且隨著拍擊時(shí)間的增長(zhǎng)，所測(cè)得的數(shù)據(jù)也會(huì)增加，但最終會(huì)趨于穩(wěn)定，但考慮到總實(shí)驗(yàn)時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，孢子容易擴(kuò)散等因素，均質(zhì)時(shí)間不宜超過(guò)1 min。此次研究雖然樣本量采集遠(yuǎn)遠(yuǎn)不夠，且很多其他條件尚未摸索，但能為后續(xù)實(shí)驗(yàn)條件的選擇及研究提供一定的支撐。

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