自發(fā)性腦出血患者血清microRNA-130a、microRNA-210表達(dá)水平及與早期神經(jīng)功能惡化的關(guān)系*

李光波，王新港，張旭偉

（連云港市中醫(yī)院神經(jīng)外科，江蘇連云港 221000）

自發(fā)性腦出血（spontaneous cerebral hemorrhage,ICH）為非外傷情況下各種原因引起的腦大、小動(dòng)脈，以及靜脈、毛細(xì)血管自發(fā)性破裂導(dǎo)致的腦內(nèi)出血，是腦卒中的一種亞型，占腦卒中總數(shù)的15%左右，具有高致殘率、高病死率的特點(diǎn)[1-2]。早期神經(jīng)功能惡化（early neurological deterioration, END）是ICH早期常見并發(fā)癥，提示ICH 患者預(yù)后不良[3]，尋找特異性高的END 預(yù)測因子，對改善患者生活質(zhì)量，減輕家庭及社會(huì)負(fù)擔(dān)具有重要意義。

MicroRNA（miRNA）由21～25 個(gè)核苷酸組成，參與細(xì)胞增殖、分化等多個(gè)生物學(xué)過程。多數(shù)miRNA表達(dá)水平與血氧含量密切相關(guān)，還可逆向反映血氧供應(yīng)狀況。有研究表明，血清microRNA-130a（miR-130a）、microRNA-210（miR-210）表達(dá)水平與腦血管疾病的發(fā)生、發(fā)展關(guān)系密切，但兩者與ICH 患者發(fā)生END 的關(guān)系尚不明確[4-5]。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018年7月—2021年6月連云港市中醫(yī)院收治的ICH 患者82 例作為ICH 組，另取同期本院60 例健康體檢者作為對照組。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)同意[No：2020-倫理審查（KY）-29]，患者或家屬均簽署知情同意書。

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1 納入標(biāo)準(zhǔn)①ICH 組患者符合ICH 診斷標(biāo)準(zhǔn)[6]，并經(jīng)頭顱CT 確診；②發(fā)病至入院時(shí)間＜12 h；③年齡≥18 歲。

1.2.2 排除標(biāo)準(zhǔn)①繼發(fā)于創(chuàng)傷的ICH；②48 h轉(zhuǎn)科、轉(zhuǎn)院或出院者；③重要臟器功能嚴(yán)重障礙或衰竭者；④顱內(nèi)腫瘤或合并其他惡性腫瘤者；⑤腦血管異常者；⑥顱內(nèi)靜脈竇血栓形成或凝血功能異常者；⑦合并血液系統(tǒng)疾病者；⑧缺血性腦卒中出血性轉(zhuǎn)換者。

1.3 逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)檢測血清miR-130a、miR-210

入院當(dāng)天（對照組于體檢當(dāng)天）用抗凝采血管（抗凝劑乙二胺四乙酸-2k）采集所有研究對象外周靜脈血5 mL，3 500 r/min 離心5 min，取血清-20℃保存待測。采用miRNA 提取試劑盒（杭州諾揚(yáng)生物技術(shù)有限公司）提取血漿miRNA，并檢測miRNA 的質(zhì)量和濃度，將miRNAs 逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。總反應(yīng)體系：2×SYBR Mix 10 μL，10×cDNA 模板1 μL，正反向引物各1 μL，H20 8 μL。反應(yīng)條件：95℃預(yù)變性3 min，95℃變性10 s、60℃退火32 s，75℃延伸2 min，共36 個(gè)循環(huán)，72℃繼續(xù)延伸8 min。在逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（reverse transcription polymerase chain reaction, RT-PCR）儀（型號：ABI7500，美國應(yīng)用生物系統(tǒng)公司）上進(jìn)行反應(yīng)，以U6 作為內(nèi)參，采用2-ΔΔCt法計(jì)算基因相對定量。

表1 RT-PCR引物序列

1.4 END判定及分組

END 判定標(biāo)準(zhǔn)[7]：ICH 患者入院1 h 內(nèi)采用美國國立衛(wèi)生研究院卒中量表（National Institutes of Health Stroke Scale Score, NIHSS）評分對其神經(jīng)功能缺損情況進(jìn)行評分，患者入院3 d 內(nèi)進(jìn)行多次NIHSS復(fù)評（均由同一位神經(jīng)內(nèi)科專家完成），若24 h 內(nèi)NIHSS 總分增加≥2 分或運(yùn)動(dòng)功能評分增加≥1 分則判定為END，并依據(jù)ICH 患者是否發(fā)生END 分為END 組和非END 組。

1.5 資料收集

收集影響ICH 患者END 發(fā)生的臨床資料，主要包括括性別、年齡、體質(zhì)量指數(shù)（body mass index,BMI）、是否合并基礎(chǔ)疾?。ㄌ悄虿　⒏哐獕?、高脂血癥、冠心?。?、吸煙史、飲酒史、入院收縮壓（systolic blood pressure, SBP）、入院舒張壓（diastolic blood pressure, DBP）、腦卒中史、入院格拉斯哥昏迷評分（Glasgow coma score,GCS）[8]、入院NIHSS 評分[9]、是否為腦萎縮、血腫體積、血腫是否破入腦室、白細(xì)胞計(jì)數(shù)、血小板計(jì)數(shù)、血紅蛋白、纖維蛋白原、血清miR-130a、miR-210。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)分析采用SPSS 25.0 統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，比較用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以構(gòu)成比或率（%）表示，比較用χ2檢驗(yàn)。繪制受試者工作特征（receiver operating characteristic,ROC）曲線；影響因素的分析用一般多因素Logistic 回歸模型。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 ICH組與對照組的臨床資料

ICH 組與對照組性別、年齡、BMI 比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。兩組血清miR-130a、miR-210 比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），ICH 組血清miR-130a、miR-210 高于對照組。見表2。

表2 ICH組與對照組臨床資料比較

2.2 END組與非END組患者的臨床資料

本研究中ICH患者END發(fā)生率為20.73%（17/82）。兩組患者入院SBP、入院GCS 評分、入院NIHSS評分、血腫體積、血腫破入腦室占比、miR-130a、miR-210 比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），END 組入院SBP、入院NIHSS評分、血腫破入腦室占比、miR-130a、miR-210 高于非END 組，入院血腫體積大于入院非END 組，GCS評分低于非END 組。兩組患者性別、年齡、BMI、是否合并基礎(chǔ)疾病（糖尿病、高血壓、高脂血癥、冠心?。⑽鼰熓?、飲酒史、入院DBP、腦卒中史、是否腦萎縮、白細(xì)胞計(jì)數(shù)、血小板計(jì)數(shù)、血紅蛋白、纖維蛋白原比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表3。

表3 END組與非END組患者臨床資料比較

2.3 影響ICH患者發(fā)生END的多因素分析

以入院SBP、入院GCS 評分、入院NIHSS 評分、血腫體積、miR-130a、miR-210（均為連續(xù)變量）、血腫破入腦室（否=0，是=1）為自變量，ICH 患者是否發(fā)生END 為因變量（發(fā)生=1，未發(fā)生=0），進(jìn)行一般多因素Logistic 回歸分析，結(jié)果顯示：血腫體積[=2.846（95%CI：1.253，6.784）]、血腫破入腦室[=2.787（95%CI：1.877，5.862）]、miR-130a [=3.347（95% CI：2.475，8.275）]及miR-210[=3.086（95%CI：2.051，7.436）]為ICH患者發(fā)生END的影響因素（P＜0.05）。見表4。

表4 ICH患者發(fā)生END的一般多因素Logistic回歸分析參數(shù)

2.4 血清miR-130a、miR-210 對ICH 患者發(fā)生END的預(yù)測效能

ROC 曲線結(jié)果顯示，血清miR-130a、miR-210 預(yù)測ICH 患者發(fā)生END 的最佳截?cái)嘀捣謩e為3.65、1.57，敏感性分別為82.35%（95% CI：0.768，0.894）、76.47%（95%CI：0.702，0.815）；特異性分別為80.00%（95% CI：0.753，0.836）、86.15%（95% CI：0.808，0.925），曲線下面積（area under curve, AUC）分別為0.824（95% CI：0.724，0.899）、0.868（95% CI：0.776，0.933）。見表5和圖1。

圖1 血清miR-130a、miR-210預(yù)測ICH患者發(fā)生END的ROC曲線

表5 血清miR-130a、miR-210預(yù)測ICH患者發(fā)生END的相關(guān)參數(shù)

3 討論

ICH 是由環(huán)境、遺傳等多種因素引起的一種腦實(shí)質(zhì)內(nèi)出血，發(fā)病突然，進(jìn)展迅速[10]。有研究表明，部分ICH 患者即使積極治療，但神經(jīng)功能仍持續(xù)惡化，最終導(dǎo)致END 的發(fā)生，嚴(yán)重影響患者預(yù)后[11]。相關(guān)研究報(bào)道，血清miR-130a、miR-210 表達(dá)與神經(jīng)系統(tǒng)疾病發(fā)生、發(fā)展關(guān)系密切[12-13]。

miRNA 為單鏈、內(nèi)源性、非編碼RNA，廣泛參與細(xì)胞增殖、分化等病理過程，既往對miRNA 的研究多集中在腫瘤學(xué)領(lǐng)域。近年來，有研究發(fā)現(xiàn)miRNA與神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育及功能密切相關(guān)，多種miRNA 參與腦血管疾病的發(fā)病及進(jìn)展[14-16]。董雨等[17]研究報(bào)道，miR-340-5p 能夠通過抑制水通道蛋白的表達(dá)，擴(kuò)大局部腦水腫體積，其表達(dá)水平與高血壓性腦出血患者預(yù)后有關(guān)。

本研究結(jié)果提示，與健康者比較，ICH 患者血清miR-130a、miR-210 高表達(dá)。有研究報(bào)道，顱腦損傷患者外周血miR-130a 高表達(dá)，且與血腫周邊水腫體積呈正相關(guān)，并指出miR-130a 可通過小凹蛋白-1/基質(zhì)金屬蛋白-2 通路影響血腦屏障的通透性[18]。miR-210 為缺氧特異性miRNA，被認(rèn)為是缺氧相關(guān)性miRNA 的重要因子之一。WANG 等[19]研究表明，在體外缺氧環(huán)境下，miR-210 可通過抑制靶基因EphrinA3，促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞形成血管。本研究中ICH 患者END 發(fā)生率為20.73%，稍高于既往孫婷婷等[20]報(bào)道的15.45%，可能與研究對象的年齡、合并基礎(chǔ)疾病存在一定的差異有關(guān)。本研究中，END 組入院SBP、入院NIHSS 評分、血腫破入腦室占比、miR-130a、miR-210 高于非END 組，入院血腫體積大于入院非END 組，入院GCS 評分低于非END 組；一般多因素Logistic 分析結(jié)果顯示，血腫體積、血腫破入腦室、miR-130a 及miR-210 是ICH 患者發(fā)生END的影響因素，臨床上需逐一控制以上因素對ICH 患者的影響，以降低END 的發(fā)生率。血腫體積較大可能會(huì)導(dǎo)致缺血再灌注損傷，從而促使ICH 患者發(fā)生END[21]。血腫破入腦室可能會(huì)加重顱內(nèi)壓力，此外血流刺激腦室系統(tǒng)上皮細(xì)胞產(chǎn)生的炎癥反應(yīng)，以及對下丘腦的沖擊均可導(dǎo)致意識狀況變差，從而增加END 的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)[22]。miR-130a 可能參與急性腦出血患者早期病情變化，通過抑制其表達(dá)可有效改善血腦屏障通透性，降低腦組織水腫程度，改善預(yù)后[23]。miR-210 被證實(shí)在體外缺氧環(huán)境下，其表達(dá)穩(wěn)定上調(diào)，可促進(jìn)血管生成，并通過多種途徑參與心血管疾病的發(fā)生、發(fā)展過程[24]。胡兆婷等[25]研究表明，血清miR-210 表達(dá)水平與急性腦梗死患者早期神經(jīng)功能改善相關(guān)，其表達(dá)水平越高，越不利于早期神經(jīng)功能改善。ROC 曲線結(jié)果顯示，血清miR-130a、miR-210 預(yù)測ICH 患者發(fā)生END 的最佳截?cái)嘀捣謩e為3.65、1.57，敏感性分別為82.35%、76.47%；特異性分別為80.00%、86.15%，AUC 分別為0.824、0.868，提示血清miR-130a、miR-210 對ICH 患者發(fā)生END 的預(yù)測效能較高，可作為評估ICH 患者發(fā)生END 的重要參考指標(biāo)。

綜上所述，血清miR-130a、miR-210 在ICH 患者中高表達(dá)，可影響END 的發(fā)生，可作為評估ICH 患者發(fā)生END 的重要參考指標(biāo)。建議入院時(shí)檢測ICH患者血清miR-130a、miR-210，若表達(dá)水平異常偏高，需及時(shí)采取有效措施進(jìn)行調(diào)控，以降低END 的發(fā)生率。本研究存在的不足之處在于為單中心小樣本研究，可能存在一定偏差；此外，血清miR-130a、miR-210 參與END 發(fā)生的具體生物學(xué)機(jī)制尚未明確，有待進(jìn)一步研究證實(shí)。