紅壤區(qū)杉木根際高效解磷菌的篩選、鑒定及培養(yǎng)條件優(yōu)化

趙 君，饒惠玲，王耘籽，黃 偉，吳承禎，李 鍵*

(1.福建農(nóng)林大學(xué)林學(xué)院，福建省高校森林生態(tài)系統(tǒng)過程與經(jīng)營重點實驗室,福建 福州 350002；2.武夷學(xué)院生態(tài)與資源工程學(xué)院,福建 南平 354300)

磷是植物生長發(fā)育、結(jié)構(gòu)組成和生理生化過程的關(guān)鍵元素之一，在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上常通過大量施用磷肥來滿足作物對磷元素的需求，但磷肥極易與金屬離子形成不溶性磷酸鹽進而對磷素起到固定作用[1]，這極大限制了肥料的利用效率[2-3].因此，如何活化土壤中難溶態(tài)磷并提高其轉(zhuǎn)化利用效率成為當前土壤化學(xué)的研究熱點之一[4].

我國南方林區(qū)土壤的有效磷含量極低[5]，95%～99%的磷以難溶態(tài)存在[6]，嚴重制約著南方重要用材樹種杉木(Cunninghamialanceolata)人工林的可持續(xù)經(jīng)營[7-9].針對杉木人工林經(jīng)營中面臨的低磷脅迫，諸多學(xué)者從施肥[10]、樹種共生[11]、硅肥配施[12]等方面做了大量有益嘗試，雖取得了一些成效，但依舊無法有效、低成本地改善杉木人工林下土壤速效磷短缺的情況.針對南方林區(qū)杉木林地的磷素受限問題，如何有效提升杉木對磷的利用效率，對杉木人工林的可持續(xù)經(jīng)營具有重要的現(xiàn)實意義.

活躍在植物-土壤接觸面上的微生物群落對于維持植物生長發(fā)育和植物健康起著重要作用[13].現(xiàn)有研究認為根際微生物是農(nóng)作物根際的核心，在改善土壤理化性質(zhì)方面發(fā)揮了極大的作用[14-16].利用根際微生物改善林木對營養(yǎng)元素的吸收狀況已有諸多嘗試，前期研究從紅樹林(mangrove)[17]、巨尾桉(Eucalyptusgrandis)[18]、馬尾松(Pinusmassoniana)[19]、楓香(Liquidambarformosana)[20]、降香黃檀(Dalbergiaodorifera)[21]等植物根際篩選出了一批具有顯著解磷效果的根際微生物[22-23]，這為提升杉木在困難立地條件下的養(yǎng)分吸收效率提供了新思路.吳則焰等[24]提出杉木連栽導(dǎo)致土壤養(yǎng)分逐代降低，進而表現(xiàn)為不同林齡杉木的根際微生物群落存在較大差異.杉木根際磷素含量隨著林齡的增加而降低[25]，中幼齡杉木人工林下的土壤微生物數(shù)量顯著高于其他林齡[26]，且中幼林對養(yǎng)分需求量大.因此，本研究以不同林齡杉木人工林為研究對象，以杉木根際土壤為供試土壤，通過平板定性與搖瓶定量篩選出高效解磷菌，鑒定高效解磷菌株類型.在此基礎(chǔ)上，通過單因素實驗與正交試驗優(yōu)化高效解磷菌生長條件，以期獲得具有較高解磷能力和生長量的菌株，為利用根際微生物提升杉木人工林對根際無效磷的吸收利用效率奠定實驗基礎(chǔ)，亦可探索利用解磷菌改善杉木人工林地力衰退問題的可行性.

1 材料與方法

1.1 實驗材料

供試土壤樣品采集于福建省南平市建陽區(qū)溪東國有林場(118°08′～120°31′ E，26°40′～27°20′ N)，地處武夷山脈南側(cè)，屬于典型的中亞熱帶季風(fēng)氣候，冬溫夏熱，四季分明，季風(fēng)發(fā)達，年均降水量1 700 mm，年蒸發(fā)量1 500 mm，年均溫大于18 ℃，十分有利于杉木的生長發(fā)育.林場前身為低產(chǎn)低效馬尾松人工林，2008—2010年逐年砍伐后營造杉桐混交林[27]，林下植被種類主要有苦竹(Pleioblastusamarus)、芒萁(Dicranopterisdichotoma)、觀音座蓮(Strobilanthescyclus)、黃瑞木(Adinandramillettii)等.

1.1.1 土壤樣品采集及理化性質(zhì)測定

本實驗選取中幼林齡(2，4，10，15 a)杉木人工林，各取3塊具有代表性的20 m×20 m樣地，每塊樣地采用五點取樣法，鏟去表土后深挖10～20 cm，選取具有完整根系的土體，采用抖落法采集根際土壤，同一樣地各取樣點土壤均勻混合并標號處理，同時采集非根際土壤進行標號處理，將土樣裝入冰盒帶回至冰箱(4 ℃)保存.其中新鮮根際土樣用于菌株篩選，非根際土樣待風(fēng)干過篩后進行理化性質(zhì)測定(表1)，土壤類型均為紅壤，其他理化性質(zhì)采取常規(guī)測定方式：全磷測定采用鉬銻抗比色法，有效磷測定采用鹽酸-硫酸浸提法，有機質(zhì)測定采用重鉻酸鉀-外加熱法，全氮測定采用半微量凱氏法，水解氮測定采用堿解-擴散法，全鉀測定采用堿熔-火焰光度法，速效鉀測定采用乙酸銨浸提-火焰光度法，pH測定采用電位法[28].

表1 杉木人工林土壤的基本理化性質(zhì)

1.1.2 培養(yǎng)基

李豆豆等[29]指出以磷酸三鈣為磷源時，菌株解磷量顯著高于其他磷源類型，因此采用磷酸三鈣無機磷培養(yǎng)基(葡萄糖10.0 g，硫酸銨0.5 g，硫酸鎂0.3 g，氯化鈉0.3 g，氯化鉀0.3 g，硫酸亞鐵0.03 g，硫酸錳0.03 g，磷酸三鈣5.0 g，瓊脂18.0 g，蒸餾水1 L，pH 7.0～7.5)來分離解無機磷菌株.采用蒙金娜有機磷培養(yǎng)基(葡萄糖10.0 g，硫酸銨0.5 g，硫酸鎂0.3 g，氯化鈉0.3 g，氯化鉀0.3 g，硫酸亞鐵0.03 g，硫酸錳0.03 g，卵磷脂0.2 g，碳酸鈣5.0 g，瓊脂18.0 g，蒸餾水1 L，pH 7.0～7.5)來分離解有機磷菌株[30].發(fā)酵基礎(chǔ)培養(yǎng)基選用LB液體培養(yǎng)基(胰蛋白胨10.0 g，酵母浸出粉5.0 g，氯化鈉0.5 g，pH 7.0～7.2)[31].

1.2 解磷菌的篩選、鑒定及培養(yǎng)條件優(yōu)化

1.2.1 解磷菌分離與純化

取搖床震蕩后的土壤溶液上清液成倍數(shù)(10-3，10-4，10-5)稀釋，涂于磷酸三鈣無機磷培養(yǎng)基和蒙金娜有機磷平板培養(yǎng)基上，每個梯度設(shè)置3組重復(fù)，置于28 ℃恒溫培養(yǎng)箱中(解有機磷菌培養(yǎng)3 d,解無機磷菌培養(yǎng)7 d)[32-33]，記錄含溶磷圈菌落數(shù).菌落的純化采用劃線法并培養(yǎng)3～7 d，純化后將單菌落轉(zhuǎn)移至牛肉膏蛋白胨斜面培養(yǎng)基上，保存于4 ℃冰箱備用[34].

1.2.2 解磷菌篩選

解磷菌篩選采用平板初篩與搖瓶復(fù)篩.平板初篩需記錄各菌株的溶磷圈直徑、菌落直徑及二者比值，各菌株設(shè)5組重復(fù),取平均值.搖瓶復(fù)篩需將初篩得到的菌株接種到液體培養(yǎng)基中，搖床培養(yǎng)7 d(28 ℃，160 r/min)，對培養(yǎng)好的菌株進行離心處理(4 ℃，10 000 r/min，10 min)，利用鉬銻抗比色法檢測上清液中的溶磷量，判斷各菌株的溶磷能力.

1.2.316SrDNA測序鑒定

利用16SrDNA通用引物序列F27和R1492對篩選得到的細菌進行擴增，純化后送往上海邁浦生物科技有限公司進行測序，將測序結(jié)果提交至RDP(http:∥rdp.cme.msu.edu/)及NCBI(http:∥www.ncbi.nlm.nih.gov/)數(shù)據(jù)庫中進行序列比對分析，選取與GenBank中同源性最高的序列，初步鑒定菌株.

1.2.4 培養(yǎng)優(yōu)化

培養(yǎng)基組分優(yōu)化：采用不同碳源(葡萄糖、蔗糖、乳糖、可溶性淀粉、麥芽糖、甘露醇)代替基礎(chǔ)培養(yǎng)基中的碳源，根據(jù)菌液在600 nm下的吸光度(A600)確定最佳碳源.改變最佳碳源質(zhì)量分數(shù)(0.5%，1.0%，1.5%)進行菌株培養(yǎng)以確定最佳濃度.最佳氮源(硫酸銨、氯化銨、硝酸鉀、蛋白胨、酵母粉、尿素)及其最適質(zhì)量分數(shù)(0.5%，0.8%，1.0%，1.3%，1.5%)的確定采取相同方式.

培養(yǎng)條件優(yōu)化：在其他條件不變的情況，分別改變菌株發(fā)酵液的pH(5.0，6.0，6.5，7.0，7.2，7.5，8.0，9.0)、裝液量(10，20，30，40，60 mL，于100 mL發(fā)酵瓶)、接種量(1%，3%，5%，7%，9%，均為體積分數(shù))、培養(yǎng)溫度(20，25，28，30，35，40 ℃)，測量對應(yīng)的A600，確定對應(yīng)的最適值.

正交試驗：根據(jù)單因素實驗結(jié)果，設(shè)計四因素三水平正交試驗，基于初始pH值(A)、裝液量(B)、接種量(C)、培養(yǎng)溫度(D)以及不同水平的培養(yǎng)條件進行優(yōu)化，每個處理設(shè)3個重復(fù).

1.3 數(shù)據(jù)處理

采用Exce1 2010軟件進行原始數(shù)據(jù)的整理、分析及圖像繪制，運用SPSS 19.0軟件進行單因素方差分析(顯著水平0.05)和最小顯著差數(shù)(LSD)法多重比較，采用Pearson相關(guān)系數(shù)法確定pH與溶磷量之間的相關(guān)關(guān)系，運用正交設(shè)計助手Ⅱ v3.1處理正交試驗數(shù)據(jù).

2 結(jié)果與分析

2.1 解磷菌的篩選結(jié)果

對分離出的菌落進行形態(tài)特征判斷，經(jīng)福建省林業(yè)科學(xué)研究院形態(tài)學(xué)鑒定分析其培養(yǎng)形態(tài)，發(fā)現(xiàn)4種不同林齡的杉木根際土壤解磷菌形態(tài)各異.所篩選出的解磷菌以不透明的白色、乳白色、淺黃色為主，菌落呈圓形、不規(guī)則形，邊緣基本整齊，中間以凸起為主，菌株表面大多光滑.不同菌株的生長速度不一致，絕大多數(shù)菌株的生長速度較快，可在24 h內(nèi)生長為菌落成型；但亦存在解磷真菌在48 h后才長勢較好，生長速度較緩慢.

不同林齡杉木根際解磷菌數(shù)量及種類亦存在差異(表2).從數(shù)量來看，杉木人工林下根際解無機磷菌的數(shù)量范圍為2.12×105～3.64×105cfu/g(cfu為菌落形成單位)，解有機磷菌的數(shù)量范圍為1.31×105～2.14×105cfu/g.其中，15 a杉木根際土壤的解無機磷菌數(shù)量和解有機磷菌數(shù)量均顯著高于其他林齡(p<0.05)，且類型數(shù)最多，而解有機磷菌類型數(shù)為9，與4 a 杉木的類型數(shù)相同.

表2 不同林齡杉木土壤解磷菌的數(shù)量特征

從以上解磷菌中挑選解磷效果具有顯著優(yōu)勢的菌株進行溶磷實驗，對高效解磷菌進行16SrDNA測序鑒定.通過對杉木根際解磷菌進行平板初篩，無機磷培養(yǎng)基和有機磷培養(yǎng)基中均出現(xiàn)較明顯的透明圈，表明根際解磷微生物能夠溶解無機磷和有機磷并轉(zhuǎn)化至可被植物或自身吸收利用的有效磷素.本研究共篩選得到具有較明顯作用的25株解無機磷菌株和20株解有機磷菌株.對以上菌株進行搖瓶復(fù)篩后發(fā)現(xiàn)，在固體培養(yǎng)基中溶磷圈直徑與菌落直徑比值大的菌株，在液體培養(yǎng)基中的解磷能力并不一定顯著突出，這與黃鵬飛等[35]關(guān)于解磷菌在固體平板和液體培養(yǎng)兩種方式下的解磷效果并不存在線性關(guān)系的研究結(jié)果一致.

圖中數(shù)據(jù)字母不同表示差異顯著(p<0.05)，下同.

解磷菌常通過分泌有機酸來溶解難溶性磷，發(fā)酵液的pH降低，從側(cè)面可反映出菌株溶磷能力的高低[36-37].本研究在探究解無機磷菌株的溶磷能力時，對菌株培養(yǎng)液的pH進行測定，所測值均低于對照組，這一結(jié)果進一步驗證了上述結(jié)論.發(fā)酵液的無機磷溶解量與pH呈極顯著負相關(guān)性(p<0.01，R2=0.749 7，r=-0.865 9)，解磷能力強的菌株培養(yǎng)液pH較低，反之pH較高，只有個別菌株呈現(xiàn)差異(圖1).有機磷溶解量與pH的相關(guān)關(guān)系并不顯著(p>0.05)，解有機磷菌株的溶液pH主要集中于6.58～7.42之間，僅菌株Y3溶液的pH為1.89，呈現(xiàn)出強酸性，與其他菌株差異較大，究其原因，可能是由于大部分解磷菌以酶解為主[38]，而Y3以分泌有機酸來發(fā)揮溶磷作用[39-40].

圖1 無機磷溶解量與培養(yǎng)液pH的關(guān)系

通過復(fù)篩，采用單因素方差分析各菌株的無機磷溶解量.無機磷溶解量較空白對照組(CK)均有增加(圖2)，增量范圍為4.01～235.88 μg/mL，溶磷量范圍為6.31～238.08 μg/mL.W1的解磷效果顯著高于其他菌株(p<0.05)，溶磷量達238.08 μg/mL；溶解無機磷效果最差的是W15，溶磷量僅為6.31 μg/mL.W1溶磷量是W15溶磷量的37.73倍.

有機磷溶解量較空白對照組均有增加(圖3)，增量范圍為1.07～11.33 μg/mL，溶磷量范圍為4.78～15.04 μg/mL.Y9的解磷效果顯著高于其他菌株(p<0.05)，溶磷量達15.04 μg/mL；解磷效果最差的是Y10，溶磷量僅為4.78 μg/mL.Y9溶磷量為Y10溶磷量的3.15倍.

圖3 解有機磷菌株的溶磷量

2.2 菌株鑒定結(jié)果

經(jīng)PCR擴增后的16SrDNA基因序列(附錄(http:∥jxmu.xmu.edu.cn/upload/html/20220115.html)圖S1和S2)通過核酸BLAST序列比對后，得到相似菌株的登錄號與相似度.經(jīng)鑒定，W1為不動桿菌屬(Acinetobactersp.，登錄號MZ145066.1)(圖4)，Y9為克雷伯氏菌屬(Klebsiellasp.，登錄號MZ145064.1)(圖5).

圖4 菌株W1的系統(tǒng)發(fā)育樹

圖5 菌株Y9的系統(tǒng)發(fā)育樹

2.3 解磷菌培養(yǎng)條件優(yōu)化

綜合上述實驗結(jié)果，選用解無機磷效果最好的W1與解有機磷效果最好的Y9進行培養(yǎng)基組分優(yōu)化和培養(yǎng)條件優(yōu)化.

2.3.1 單因素實驗篩選

菌株生長量對于不同碳源、氮源、初始pH、裝液量、接種量、溫度的響應(yīng)有顯著差異(圖6).

GL.葡萄糖；SU.蔗糖；MA.麥芽糖；LA.乳糖；MAN.甘露醇；SS.可溶性淀粉；AS.硫酸銨；AC.氯化銨；PN.硝酸鉀；PE.蛋白胨；YE.酵母粉；UR.尿素.

碳源是微生物進行新陳代謝等活動的主要能量來源[41].6種不同碳源(葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、乳糖、甘露醇和可溶性淀粉)對W1和Y9的生長量的影響差異顯著，W1和Y9以葡萄糖為碳源時的A600值均顯著高于其他碳源時，菌株生長效果最好(圖6(a))，其次為甘露醇、麥芽糖、乳糖、可溶性淀粉、蔗糖.故改變最適碳源葡萄糖的質(zhì)量分數(shù)(圖6(b))，W1在1.0%時生長量顯著大于其他質(zhì)量分數(shù)時，而Y9在0.5%時生長量最大.

氮源也是微生物生長發(fā)育的重要元素之一.當以酵母粉為唯一氮源時，W1和Y9的生長量顯著大于其他氮源時(圖6(c))，其次為蛋白胨，且酵母粉和蛋白胨對菌株生長量的影響顯著大于其他4種氮源.故設(shè)置含不同質(zhì)量分數(shù)酵母粉的培養(yǎng)基，結(jié)果表明W1在1.50% 時生長量顯著大于其他處理，而Y9在1.25%時生長量最大(圖6(d))，且質(zhì)量分數(shù)升高時菌株的A600值變化差異并不明顯，表明該菌株對高濃度酵母粉氮源變化并不敏感.

pH 8.0處理下W1生長量最大，但pH 7.0和 7.5 處理下差異性并不顯著，故后續(xù)正交試驗采取上述3種初始pH處理;而Y9生長量主要在pH 5.0～6.0之間呈上升趨勢，后續(xù)A600值隨著pH增加而降低(圖6(e)).不同裝液量下，菌株生長量顯著不同，W1與Y9的最適裝液量均為30 mL(圖6(f)).不同接種量下，3%，5%，7%接種量的W1菌液A600值差異不顯著，而Y9在9%接種量時生長量顯著大于其他處理.溫度過高或過低也不利于菌株的生長，35 ℃處理下W1生長量顯著大于其他處理，而Y9生長量在28，30和35 ℃處理下的差異不顯著，因此設(shè)計正交試驗進一步確定最適溫度.

2.3.2 正交試驗

設(shè)計正交試驗，選擇4個因素(初始pH值、裝液量、接種量和溫度)及每個因素設(shè)定3個水平.W1的因素A為初始pH值(7.0，7.5和8.0)，因素B為裝液量(20，30和40 mL)，因素C為接種量(3%，5%和7%)、因素D為溫度(30，35和40 ℃).其中，因素A對W1生長量影響最大，因素C和D次之，W1的最佳培養(yǎng)條件為A2B2C1D3，即初始pH 7.5、裝液量30 mL、接種量3%、溫度40 ℃(表3).

表3 菌株W1培養(yǎng)條件的正交試驗結(jié)果

Y9的因素A為初始pH值(5.0，6.0和6.5)，因素B為裝液量(20，30和40 mL)，因素C為接種量(5%，7%和9%)、因素D為溫度(28，30和35 ℃).由于RD>RB>RC>RA，4個因素對菌株生長的影響程度為溫度>裝液量>接種量>初始pH，則Y9的最佳培養(yǎng)條件為A2B1C3D1，即初始pH為 6.0、裝液量20 mL、接種量9%、溫度28 ℃(表4).

表4 菌株Y9培養(yǎng)條件的正交試驗結(jié)果

正交試驗結(jié)果與單因素實驗結(jié)果存在差異，表明各因素之間存在交互作用，而正交試驗結(jié)果更具備準確性.

3 討論與結(jié)論

逆境情況下，植物受環(huán)境影響會激發(fā)自身的應(yīng)激性.鄒顯花等[42]提出杉木根系通過大量增生來應(yīng)對低磷脅迫,加快向地生長以應(yīng)對高磷環(huán)境.當土壤有效磷含量豐富時，林木通過自身調(diào)節(jié)便可獲取足夠的營養(yǎng)元素，但處于低磷脅迫條件下的林木除自身的應(yīng)激性外，還需要解磷微生物來推動土壤中無效磷元素的轉(zhuǎn)化以保證供給.

南方地區(qū)杉木人工林下土壤有效磷在固定作用的影響下含量降低，根際解磷微生物的應(yīng)用能夠有效緩解低磷壓力[43].本研究在杉木根際篩選出的解無機磷菌W1的溶磷量高達238.08 μg/mL，解有機磷菌Y9的溶磷量達15.04 μg/mL.Y9菌株的有機磷溶解量大于范丙全等[44]在杉木根際篩選出的烏博內(nèi)氏伯克霍爾德菌(Burkholderiaubonensis)的解磷菌P5(溶磷量為195.61 mg/L)，這可能是因為不同種類的微生物代謝機制具有多樣性，進而導(dǎo)致分泌物種類和數(shù)量的不同，影響解磷微生物的解磷能力[45]；但也有研究指出，微生物、土壤的空間異質(zhì)性[46]以及生存環(huán)境[47]的差異均會對微生物與植物互作產(chǎn)生影響.

對兩株菌株基因序列進行Blast對比得到W1為不動桿菌屬，Y9為克雷伯氏菌屬.李文等[48]提出不動桿菌可以在農(nóng)業(yè)中應(yīng)用以提高磷素的溶解量，他所篩選出的JL-1菌株溶磷量為118.04 mg/L，解磷效果顯著弱于W1.李夢嬌等[49]研究得出克雷伯氏菌屬(K.pneumoniae)對于增強植物的溶磷能力具有重要作用，本研究的結(jié)果驗證了高效解磷菌的溶磷作用顯著.莊馥璐等[46]將篩選出的不動桿菌屬PsbM8菌株回接擬南芥(Arabidopsisthaliana)后，根系附近有明顯的溶磷圈出現(xiàn)，進一步得出不動桿菌屬在解磷微生物的篩選與鑒定研究中應(yīng)用較廣泛的結(jié)論.目前常見報道的解磷菌主要有固氮菌屬(Azotobacter)、假單胞菌屬(Pseudomonas)、芽孢桿菌屬(Bacillus)、歐文氏菌屬(Erwinia)、根瘤菌屬(Bradyrhizobium)、青霉屬(Penicillium)、根霉屬(Rhizopus)和鏈霉菌屬(Streptomyces)[9,34,46].下一步亦可針對不同種屬解磷菌的解磷效果差異進行探索.

選用高效菌株進行培養(yǎng)基組分和培養(yǎng)條件優(yōu)化，明晰菌株的最適宜生存環(huán)境，促進其發(fā)揮最大功效，為日后田間根際大規(guī)模應(yīng)用奠定基礎(chǔ).培養(yǎng)基優(yōu)化實驗結(jié)果表明：W1菌株與Y9菌株分別以1.0%和0.5% 的葡萄糖為最佳碳源，這與李文等[50]提出的不動桿菌的最佳碳源為葡萄糖的結(jié)論一致；氮源的最佳選擇分別為1.50%和1.25%的酵母粉.南方紅壤區(qū)多呈酸性，Y9菌株偏向酸性環(huán)境，適宜應(yīng)用于南方杉木根際；而W1菌株偏向堿性環(huán)境，可在實際應(yīng)用過程中加以調(diào)節(jié)土壤酸堿度，為其生長創(chuàng)造最適環(huán)境.韋宜慧等[51]在杉木根際篩選出烏博內(nèi)氏伯克霍爾德菌的P5菌株生長的pH最適范圍為5～6，最適溫度為25～30 ℃.目前發(fā)現(xiàn)的解磷菌的最優(yōu)培養(yǎng)條件偏向高溫環(huán)境，解磷菌的功效可能與溫度密切相關(guān)，針對杉木主產(chǎn)區(qū)土溫較低的情況，有效降低目前現(xiàn)有優(yōu)勢解磷菌的最優(yōu)培養(yǎng)溫度是值得探索的方向.

隨著微生物與植物互作機制研究的日趨完善，根際微生物在解決林木根際營養(yǎng)元素脅迫問題領(lǐng)域中的應(yīng)用前景將更加廣闊.現(xiàn)有研究主要探討解磷菌的篩選、鑒定、培養(yǎng)條件優(yōu)化及其作用機制，以期獲得菌株最大生長量，發(fā)揮高效解磷菌的最大效用.王志康等[52]提出土壤有機質(zhì)含量、碳氮比等是解磷微生物發(fā)揮作用的限制因子.為了更好地將解磷微生物應(yīng)用于實際生產(chǎn)，在下一步研究中應(yīng)深入探討解磷菌與植物的互作機制，可通過適當調(diào)控環(huán)境因子，提升為解磷微生物生存、生長所能提供的最大資源供應(yīng)量，以滿足接種解磷菌的繁殖與生長需求，從而為利用微生物改善低磷脅迫環(huán)境提供最優(yōu)的菌種資源支持.