lncRNA MALAT1在頭頸部鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)和化療對(duì)其影響分析

徐穎 肖紅梅

[摘要] 目的 探討lncRNA MALAT1在頭頸部鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)和化療對(duì)其影響。 方法 收集2018年6月至2020年12月遵義醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院確診的頭頸部鱗狀細(xì)胞癌患者45例及同期化療患者30例。分析腫瘤組織中l(wèi)ncRNA MALAT1的表達(dá)及在不同臨床病理特征的表達(dá)情況，并分析化療對(duì)lncRNA MALAT表達(dá)的影響。 結(jié)果 lncRNA MALAT1在頭頸部鱗狀細(xì)胞癌腫瘤組織中表達(dá)顯著增加（P<0.05），且腫瘤>2 cm、TNM Ⅲ～Ⅳ期、組織分化差以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者中的lncRNA MALAT表達(dá)增加（P<0.05）?；熀罂娠@著降低lncRNA MALAT1在頭頸部鱗狀細(xì)胞癌腫瘤組織中表達(dá)（P<0.05）。結(jié)論 lncRNA MALAT1在頭頸部鱗狀細(xì)胞癌腫瘤組織中表達(dá)顯著增加，且在不同臨床病理特征中表達(dá)不同，預(yù)示較差臨床預(yù)后;化療可降低其表達(dá)。

[關(guān)鍵詞] lncRNA;MALAT1;頭頸部鱗狀細(xì)胞癌;化療;TNM分期

[中圖分類號(hào)] R739.91? ? ? ? ? [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A? ? ? ? ? [文章編號(hào)] 1673-9701（2022）09-0012-04

Expression of lncRNA MALAT1 in head and neck squamous cell carcinoma and analysis of the effect of chemotherapy on it

XU Ying? ?XIAO Hongmei

Department of Head and Neck Oncology， the Second Affiliated Hospital of Zunyi Medical University， Zunyi? ?563000， China

[Abstract] Objective To investigate the expression of lncRNA MALAT1 in head and neck squamous cell carcinoma and the effect of chemotherapy on it. Methods A total of 45 patients with head and neck squamous cell carcinoma diagnosed in the Second Affiliated Hospital of Zunyi Medical University and 30 patients treated with chemotherapy from June 2018 to December 2020 were collected. The expression of lncRNA MALAT1 in tumor tissue and different clinicopathological characteristics as well as the effect of chemotherapy on the expression of lncRNA MALAT was analyzed. Results The expression of lncRNA MALAT1 significantly increased in head and neck squamous cell carcinoma tumor tissue （P<0.05）， and the tumor increased in volume， with TNM staging Ⅲ-Ⅳ， poor tissue differentiation. The expression of lncRNA MALAT in patients with lymph node metastasis increased （P<0.05）. The expression of lncRNA MALAT1 in head and neck squamous cell carcinoma significantly decreased after chemotherapy （P<0.05）. Conclusion The expression of lncRNA MALAT1 significantly increases in head and neck squamous cell carcinoma tumor tissues， and varies in different clinicopathological features， which predicts poor clinical prognosis. Chemotherapy is able to reduce the expression.

[Key words] lncRNA; MALAT1; Head and neck squamous cell carcinoma; Chemotherapy; TNM staging

頭頸部鱗狀細(xì)胞癌（head and neck squamous cell carcinoma，HNSCC）是頭頸部表皮最常見(jiàn)的惡性腫瘤，每年報(bào)告超過(guò)60萬(wàn)例新病例[1]。HNSCC是異質(zhì)性、實(shí)體性和惡性腫瘤，患者總體生存率較低，主要原因是診斷晚、治療反應(yīng)率低、復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移率高[2-3]。因此，闡明與HNSCC相關(guān)的遺傳和表觀遺傳分子改變對(duì)于改善HNSCC患者的診斷、適當(dāng)治療和預(yù)后至關(guān)重要。各種研究表明，HNSCC的發(fā)生和發(fā)展與長(zhǎng)鏈非編碼RNA（long non-coding RNA，lncRNAs）密切相關(guān)[4]。lncRNAs（>200 nt長(zhǎng)度，無(wú)蛋白質(zhì)編碼功能）通過(guò)在轉(zhuǎn)錄、轉(zhuǎn)錄后和翻譯后水平參與基因調(diào)控，作為關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子，并影響許多生物過(guò)程[5-6]。lncRNAs在HNSCC的發(fā)展中具有復(fù)雜和廣泛的功能，包括與腫瘤生長(zhǎng)、復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移相關(guān)的功能，因?yàn)槠湓贖NSCC中的不規(guī)則和特異性表達(dá)模式[7]。盡管lncRNAs與HNSCC之間的關(guān)系尚不清楚，但有報(bào)道稱一些lncRNAs異常表達(dá)，并有助于HNSCC的發(fā)生和發(fā)展。lncRNA MALAT1在多種腫瘤中表達(dá)異常[8]。本研究擬分析lncRNA MALAT1在頭頸部鱗狀細(xì)胞中的表達(dá)和化療對(duì)其影響，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2018年6月至2020年12月遵義醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院確診頭頸部鱗狀細(xì)胞癌患者45例。根據(jù)2002年國(guó)際癌癥控制聯(lián)盟（UICC）制訂的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分級(jí)。在手術(shù)過(guò)程中收集腫瘤組織和正常鄰近組織（距腫瘤邊緣>1 cm），其中正常鄰近組織作為癌旁組。將切除的組織立即保存在手術(shù)室中的冰箱（-20℃）。納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)病理檢查為頭頸部鱗狀細(xì)胞癌者;②首次接受手術(shù)治療者;③術(shù)前未接受放療或化療等抗腫瘤治療;④臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：①臨床和病理信息，如性別、年齡、腫瘤分期、治療效果和復(fù)發(fā)相關(guān)的信息不完整者;②同時(shí)合并其他類型腫瘤者;③既往接受手術(shù)、放療或化療治療者;④入院時(shí)患者合并其他疾病，如感染性疾病、嚴(yán)重糖尿病等器官衰竭性疾病、全身免疫性疾病以及惡性腫瘤并發(fā)癥等。本研究納入的45例患者作為未化療組，另外選取30例術(shù)前接受化療的頭頸部鱗狀細(xì)胞癌患者作為化療組進(jìn)行比較研究。本研究獲得醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)，患者或其家屬均知情同意。

1.2 頭頸部鱗狀細(xì)胞癌患者資料收集

分別記錄頭頸部鱗狀細(xì)胞癌患者的性別、年齡、病程等一般資料以及腫瘤大小、組織分化、TNM分期、有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的臨床病理特征資料。見(jiàn)表1。

1.3 Real time PCR分析

按照Trizol試劑盒說(shuō)明從組織中提取總RNA，并在紫外分光光度計(jì)上檢查其濃度和純度。通過(guò)第一鏈cDNA逆轉(zhuǎn)錄試劑盒將RNA反向轉(zhuǎn)錄成cDNA。RT-PCR試劑盒用于擴(kuò)增cDNA，95℃持續(xù)5 min，95℃ 10 s，40個(gè)循環(huán);60℃循環(huán)45 s。應(yīng)用的PCR反應(yīng)系統(tǒng)（20 μl）：2.0 μl cDNA、0.4 μl上游引物（10 μmol/L）、0.4 μl下游引物（10 μmol/L）、10.0 μl SYBR和7.2 μl雙蒸水。MALAT-1（正義鏈：5′-CAGACCACAGTTACAG-3′，反義鏈：5′-AGACACATCCAATGCTTCA-3′）和GAPDH（正義鏈：5′-TGACACACACAGGCCACA-3′，反義鏈：5′-CACCCTGTGCTAGCAAA-3′）引物由上?；蛴邢薰咎峁?。以GAPDH作為內(nèi)參，通過(guò)2-ΔΔCT法計(jì)算MALAT-1的表達(dá)水平。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，采用t檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料以[n（%）]表示，采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 MALAT1在頭頸部鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)

Real time PCR分析lncRNA MALAT1在頭頸部鱗狀細(xì)胞癌腫瘤組織中表達(dá)情況，結(jié)果顯示MALAT1表達(dá)顯著增加（P<0.05），提示其可能在頭頸部鱗狀細(xì)胞癌發(fā)揮促癌因子作用。見(jiàn)圖1。

2.2 頭頸部鱗狀細(xì)胞癌不同臨床特征患者中MALAT1表達(dá)情況

根據(jù)MALAT1表達(dá)情況，將頭頸部鱗狀細(xì)胞癌患者進(jìn)一步分為MALAT1高表達(dá)組（>MALAT1表達(dá)中值，n=31）和MALAT1低表達(dá)組（≤MALAT1表達(dá)中值，n=14）。MALAT1在不同腫瘤大?。ā? cm、>2 cm）、有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、不同組織分化情況（良好、差）以及不同TNM分期（Ⅰ～Ⅱ、Ⅲ～Ⅳ）的表達(dá)比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），腫瘤>2 cm、TNM分期Ⅲ～Ⅳ期、組織分化差以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者中l(wèi)ncRNA MALAT表達(dá)增加。見(jiàn)表2。

2.3 化療對(duì)頭頸部鱗狀細(xì)胞癌中MALAT1表達(dá)的影響

化療組頭頸部鱗狀細(xì)胞癌中MALAT1表達(dá)顯著降低，與未接受化療的患者比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)表3。

3 討論

大量研究表明，lncRNA的異常表達(dá)與多種癌癥的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。此外，lncRNA被視為癌癥診斷和預(yù)后的重要標(biāo)志物，也是癌癥治療的治療靶點(diǎn)[7]。MA- LAT1在哺乳動(dòng)物中高度保守，在正常人體組織和細(xì)胞中廣泛表達(dá)，并具有明顯的組織特異性和時(shí)間表達(dá)模式，具有很強(qiáng)的組織特異性，其表達(dá)水平和功能在不同細(xì)胞類型之間可能存在很大差異[8]。MALAT1最初在人類非小細(xì)胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）中被證實(shí)大量存在，其與肺癌轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)、與預(yù)后呈負(fù)相關(guān)。隨后發(fā)現(xiàn)，MALAT1在多種腫瘤組織中的表達(dá)顯著高于正常組織，且與腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)[9-10]。

MALAT1可以調(diào)節(jié)多種惡性腫瘤的發(fā)生和發(fā)展，也在轉(zhuǎn)錄、細(xì)胞周期調(diào)節(jié)、表觀遺傳學(xué)和腫瘤轉(zhuǎn)移中發(fā)揮作用[11]。近年來(lái)，關(guān)于MALAT1對(duì)多種腫瘤的惡性進(jìn)展作用的研究越來(lái)越多，凸顯出MALAT1對(duì)腫瘤診斷、預(yù)后評(píng)估和靶向治療的重要性。頭頸部鱗狀細(xì)胞癌是世界上排名居前的主要癌癥類型，由于區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、隨后復(fù)發(fā)的趨勢(shì)和對(duì)治療的抵抗，導(dǎo)致頭頸部鱗狀細(xì)胞癌死亡率很高[12]。多項(xiàng)研究表明，不同非編碼RNA的去調(diào)控對(duì)HNSCC病理學(xué)有重要影響，其可以作為個(gè)體化藥物中的特異性生物標(biāo)記物以改善治療[13]。因此，MALAT1具有廣泛而重要的臨床應(yīng)用前景，值得進(jìn)一步研究。但是MALAT1在頭頸部鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)和臨床意義尚未闡明。本研究證實(shí)MALAT1在頭頸部鱗狀細(xì)胞癌中表達(dá)增加，且MALAT1的高表達(dá)與頭頸部鱗狀細(xì)胞癌患者臨床特征顯著相關(guān)，包括腫瘤大小（>2 cm）、組織分化差，晚期TNM分期（Ⅲ～Ⅳ）和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，提示其可能作為癌基因發(fā)揮作用，可能通過(guò)調(diào)節(jié)頭頸部鱗狀細(xì)胞癌的生長(zhǎng)、凋亡、侵襲和轉(zhuǎn)移，并與不良預(yù)后相關(guān)。因此，MALAT1有望成為早期腫瘤診斷和預(yù)后的標(biāo)志物。

本研究進(jìn)一步研究化療對(duì)MALAT1表達(dá)的影響，結(jié)果證實(shí)在接受紫杉醇和順鉑等化療藥物治療后，頭頸部鱗狀細(xì)胞癌患者中發(fā)現(xiàn)MALAT1表達(dá)下降，提示MALAT1與頭頸部鱗狀細(xì)胞癌藥物敏感性相關(guān)。MALAT1是研究較為廣泛的與多種人類癌癥相關(guān)的lncRNAs之一[14]。相關(guān)研究認(rèn)為，MALAT1失活可抑制基因表達(dá)調(diào)節(jié)因子，這些調(diào)節(jié)因子可改變腫瘤的特征，阻斷MALAT1表達(dá)可抑制腫瘤的進(jìn)展[15]。lncRNA MAL- AT1可通過(guò)促進(jìn)腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移和抑制凋亡觸發(fā)腫瘤對(duì)化療藥物的耐藥性。MALAT1基因敲除通過(guò)靶向miRNA抑制腫瘤的惡性生物行為，MALAT1有望成為頭頸部鱗狀細(xì)胞癌新的治療靶點(diǎn)，并有利于為化療的療效和預(yù)后進(jìn)行評(píng)估[16]。目前本研究的患者例數(shù)收集較少，需擴(kuò)大樣本量，并深入補(bǔ)充體外實(shí)驗(yàn)進(jìn)行相關(guān)作用機(jī)制研究，從而支撐MALAT1在頭頸部鱗狀細(xì)胞癌的靶點(diǎn)作用的研究。

綜上所述，lncRNA MALAT1在頭頸部鱗狀細(xì)胞癌腫瘤組織中表達(dá)顯著增加，且與臨床病理特征相關(guān)，化療可降低其表達(dá)，為頭頸部鱗狀細(xì)胞癌臨床治療和機(jī)制研究提供相關(guān)思路。

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（收稿日期：2021-12-01）