中美現(xiàn)行藥典無菌檢查法比對

李玉立，江志杰，劉文杰，張光華

（北京市藥品檢驗研究院·北京市疫苗檢驗中心·國家藥品監(jiān)督管理局仿制藥研究與評價重點實驗室·中藥成分分析與生物評價北京市重點實驗室，北京 102206）

無菌檢查法是針對無菌工藝產(chǎn)品和最終滅菌產(chǎn)品的無菌性而建立的檢查法，1936 年版《美國藥典》第十一章開始引用單個培養(yǎng)基的直接接種法進行無菌檢查，1953年版《中國藥典》收載了“藥品的滅菌檢查法”［1］。鑒于《中國藥典》無菌檢查法與國際通用標準在檢查理念、培養(yǎng)體系、方法要求等諸多方面存在顯著差異，《中國藥典》于2015年版開始借鑒國外藥典先進技術(shù)經(jīng)驗，以新的控制理念為指導(dǎo)，在檢測范圍及環(huán)境要求、培養(yǎng)體系、方法適用性等方面作了較大修訂，逐步與國際通用標準一致［2］。2020 年版《中國藥典（四部）》參考人用藥品注冊技術(shù)要求國際協(xié)調(diào)會（ICH）協(xié)調(diào)案和相關(guān)國內(nèi)外標準，結(jié)合我國醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)實際情況和技術(shù)進步要求，進一步細化了無菌檢查法的通用性和規(guī)范性要求，明確了環(huán)境監(jiān)控的范圍，修訂了培養(yǎng)基的保存和使用時限及無菌檢查法的關(guān)鍵操作步驟等［3-4］，從而使該版《中國藥典（四部）》的無菌檢查法［5］與ICH 協(xié)調(diào)案框架下的《美國藥典》《歐洲藥典》《英國藥典》《日本藥典》進一步接軌。由于以上4 部國外藥典已通過ICH 完成協(xié)調(diào)，主要技術(shù)基本一致，因此，現(xiàn)僅以網(wǎng)絡(luò)最新（截至發(fā)稿時）版《美國藥典·國家處方集》（USP-NF2021）無菌檢查法所載內(nèi)容及要求為參考，并將2020年版《中國藥典（四部）》與之進行比對，為相關(guān)從業(yè)人員無菌操作及質(zhì)量控制等工作提供借鑒。

1 USP-NF2021 無菌檢查法主要內(nèi)容

USP-NF2021 通則<71>無菌檢查法章節(jié)及主要內(nèi)容見表1，表中注1～注14 為與2020 年版《中國藥典（四部）》存在差異的版塊，后續(xù)進行詳細比對。

表1 USP-NF2021無菌檢查法主要內(nèi)容Tab.1 Main contents of sterility test methods in USP-NF2021

2 中美現(xiàn)行藥典比對

2.1 方法的差異

2020年版《中國藥典（四部）》與USP-NF2021無菌檢查法方法的差異見表2。

表2 中美現(xiàn)行藥典無菌檢查法方法差異Tab.2 Differences of sterility test methods between Chinese Pharmacopeia and United States Pharmacopeia

續(xù)表2 中美現(xiàn)行藥典無菌檢查法方法差異Continued Tab.2 Differences of sterility test methods between Chinese Pharmacopeia and United States Pharmacopeia

2.2 要求的差異

陽性對照試驗：USP-NF2021 規(guī)定，在方法驗證時進行陽性對照試驗，常規(guī)檢驗僅求陰性對照試驗，未明確要求進行陽性對照試驗；2020 年版《中國藥典（四部）》要求每批次檢驗時均需進行陽性對照試驗。USPNF2021 認為，通過方法適用性試驗即可確認該產(chǎn)品無菌檢查方法符合要求，后續(xù)常規(guī)檢驗中無須每批次進行陽性對照確認，定期進行確認即可。2020 年版《中國藥典（四部）》則規(guī)定，應(yīng)同時進行供試品的陽性對照試驗。通過對成品每次無菌檢驗的陽性試驗的確認，其作用相當于一次現(xiàn)時的、小規(guī)模的培養(yǎng)基靈敏度檢查和方法適用性試驗［1］，更有助于確認試驗條件的符合性和檢驗結(jié)果的準確性。

方法適用性試驗：USP - NF2021 要求，對于有抑菌性的供試品，沖洗不超過5 次，試驗菌不生長即認為“不污染”，認可供試品的抑菌性對試驗菌的抑制作用。2020 年版《中國藥典（四部）》則要求，對于有抑菌性的供試品，必須通過增加沖洗次數(shù)及加入中和劑等方法去除供試品的抑菌性，使對應(yīng)試驗菌生長。USP - NF2021 認可供試品的抑菌性可抑制對應(yīng)試驗菌，2020 年版《中國藥典（四部）》則要求去除供試品的抑菌性以確保抑菌性對潛在其他敏感菌抑制，更注重全面的無菌狀態(tài)監(jiān)測。這種差異可能與國內(nèi)外醫(yī)藥工業(yè)體系的成熟度相關(guān)，2020 年版《中國藥典（四部）》的要求可以更全面地監(jiān)控產(chǎn)品真實無菌狀態(tài)。

小劑量注射劑無菌檢查［14］：USP - NF2021 不要求對小劑量注射劑進行稀釋，而是直接進行薄膜過濾培養(yǎng)。國內(nèi)對小劑量注射劑的無菌檢查均采用0.9%無菌氯化鈉溶液等進行稀釋后進行薄膜過濾培養(yǎng)。由于國外藥典常規(guī)檢驗不進行陽性對照，每批樣品沖洗到2個薄膜上進行培養(yǎng)，國內(nèi)每批樣品需進行陽性對照試驗，每批樣品需沖洗到3個薄膜上進行培養(yǎng)，為了確保每個薄膜樣品的一致性，需對小劑量注射劑進行稀釋，以使3 個薄膜上的供試品具有較好的均一性，以確保陽性對照試驗結(jié)果的可靠性。

3 藥典無菌檢查法修訂建議

USP-NF2021與2020年版《中國藥典（四部）》的無菌檢查部分均未規(guī)定沖洗時的流速，基于長期試驗操作的經(jīng)驗積累，過快的沖洗流速會損傷微生物，從而導(dǎo)致檢驗結(jié)果不能反映供試品真實的無菌狀態(tài)。因此，建議未來修訂本國藥典時，增加對沖洗流速的相關(guān)要求，以更準確地體現(xiàn)產(chǎn)品真實的無菌狀態(tài)。