睡蓮品種‘公牛眼’和‘泰國王’授粉后子房的發(fā)育差異研究

唐毓瑋　李佳慧　毛立彥　黃秋偉　龍凌云　於艷萍　蘇群

摘? 要：睡蓮屬（）植物是我國新興的水生花卉，其中重瓣型睡蓮的花態(tài)豐滿艷麗，一直倍受睡蓮愛好者、育種者的喜愛和關注，在水生園林景觀中的應用日漸廣泛，但在育種的過程中，育種者經(jīng)常遇到雜交不結實的現(xiàn)象，導致重瓣型睡蓮品種難以培育。為探索重瓣睡蓮難以結實的原因，以重瓣睡蓮中較具代表性的品種‘泰國王’為實驗組，以育性較好的品種‘公牛眼’為對照組，利用石蠟切片技術對其授粉后不同時期的子房進行顯微結構比較，采用掃描電鏡進一步觀察樣本的柱頭和胚珠，通過RNA-seq測序分析發(fā)育與敗育子房的基因表達差異。結果表明：2個睡蓮品種的柱頭表面均分布著多細胞單列乳突，細胞間的連接處形成一圈圈凹槽，乳突數(shù)量龐大、排列緊密，配合自身的結構能更容易捕獲外來的花粉?！Ｑ邸诜??d后子房中大部分胚珠發(fā)育成紅色種子，10?d后子房膨大成果實，種皮由紅色轉(zhuǎn)黑色，形成成熟的種子;重瓣睡蓮‘泰國王’授粉7?d后無種子形成，子房中有部分胚珠發(fā)育，其表皮變?yōu)榧t色，形態(tài)特征與‘公牛眼’授粉4 d后的紅色胚珠相似，由此推測少量胚珠可能完成了受精，但無法進一步發(fā)育，10 d后子房完全敗育。顯微結構觀察可知，授粉7?d后2個品種的胚珠發(fā)育產(chǎn)生明顯差異，‘公牛眼’的胚珠明顯增大，合子開始分裂形成胚，而‘泰國王’胚珠內(nèi)珠心萎縮，胚珠逐步敗育消解，授粉10 d后，‘公牛眼’胚珠的珠被增厚形成種皮，胚開始發(fā)育，進一步向種子形態(tài)轉(zhuǎn)變。由轉(zhuǎn)錄組測序分析可知，差異基因顯著富集在光合作用——天線蛋白、光合作用、卟啉和葉綠素代謝、核糖體、淀粉和蔗糖代謝等通路，這些通路可能是影響睡蓮子房發(fā)育的關鍵途徑，推測‘泰國王’子房敗育可能是因為自身光合作用受到抑制，進而影響了蔗糖、淀粉等營養(yǎng)物質(zhì)的生成。

關鍵詞：睡蓮;雜交授粉;子房發(fā)育;胚珠;轉(zhuǎn)錄組中圖分類號：S682.32????? 文獻標識碼：A

Differences in Ovary Development Between ‘Bull’s Eye’ and ‘King of Siam’ after Pollination

TANG YuweiLI JiahuiMAO LiyanHUANG QiuweiLONG LingyunYU YanpingSU Qun

1. Guangxi Subtropical Crop Research Institute， Nanning， Guangxi 530001， China; 2. Flower Research Institute， Guangxi Academy of Agricultural Sciences， Nanning， Guangxi 530007， China

（water lily） is an aquatic flower that has been introduced in recent years in our country. In particular， double petal water lily are very popular and full of love and attention by water lily lovers and breeders. And it has been increasingly widely used in the field of aquatic garden landscapes. But in the process of breeding， breeders often encounter the situation of failed hybridization. This makes it hard for breeders to breed double flower. In order to study on the reason that double petal water lily is difficult to set fruit， we selected the more representative cultivar ‘King of Siam’ from double petal water lily as the experimental group， and the better fertile cultivar ‘Bull’s Eye’ as the control group. Firstly， the microstructure of ovaries at different stages after pollination was compared by paraffin section technique. Secondly， the stigmas and ovules were further observed by scanning electron microscope. Finally， the differences of gene expression between developing and abortive ovary were analyzed by RNA-Seq. The results showed that multicellular uniserial papillae were distributed on the stigma surface of the two water lily varieties， and a circle of grooves were formed at the junction between single cells. The number of papillae was large and closely arranged. We think this structure can more easily capture foreign pollen. Meanwhile， after 7 days of . ‘Bull’s Eye’ pollination， most of the ovules developed into red seeds， 10 days later， the ovary expanded into fruit， and the seed coat changed from red to black to form mature seeds. On the other hand， after 7 days of pollination， no seeds were formed in . ‘King of Siam’. However， some ovules in its ovary develop， and its epidermis turns red. The morphological characteristics are similar to the red ovules after 4 days of . ‘Bull’s Eye’ pollination. Therefore， we speculate that a small number of ovules may have completed fertilization， but can not develop further. Than， the ovary was completely aborted after 10 days. Microstructural observation showed that there were significant differences in ovule development between the two varieties after 7 days of pollination. The ovules of . ‘Bull’s Eye’ increased significantly， and the zygotes began to form embryos， while the nucellus in the ovules of . ‘King of Siam’ shrank and the ovules gradually disappeared. After 10 days of pollination， the embryo of . ‘Bull’s Eye’ began to develop and further changed to seed morphology. In additional， the enrichment analysis of differential genes showed that photosynthesis antenna protein， photosynthesis， porphyrin and chlorophyll metabolism， ribosome， starch and sucrose metabolism may be the key pathways affecting the development of waterlily ovary. Consequently， we speculate that the abortion of the ovary of . ‘King of Siam’ may be due to the inhibition of its own photosynthesis， which affects the production of nutrients such as sucrose and starch.

; cross pollination; ovary development; ovule; transcriptome

10.3969/j.issn.1000-2561.2022.04.019

授粉是種子植物生殖過程中的重要階段，授粉成功的子房會進一步發(fā)育成果實，而個體間不親和的授粉會影響花粉與雌蕊的識別、受精以及胚珠的發(fā)育，進而導致子房敗育無法結實。

睡蓮是睡蓮科（Nymphaeaceae）睡蓮屬（）植物的通稱，花色豐富，形態(tài)多樣，在水生園林景觀中應用廣泛。國內(nèi)育種研究始于1999年，育種目標以花色特異性為主。截止2019年，我國已培育成新品種205個，其中國內(nèi)鑒定18個、國際登陸187個。重瓣型睡蓮的花態(tài)豐滿艷麗，一直倍受睡蓮愛好者、育種者的喜愛和關注，但在育種的過程中，育種者經(jīng)常遇到雜交不結實的現(xiàn)象，限制了重瓣型熱帶睡蓮的雜交育種研究。

‘泰國王’是重瓣型熱帶睡蓮中較具有代表性的品種，本課題組前期進行了雜交試驗，發(fā)現(xiàn)‘泰國王’授粉以后常出現(xiàn)假膨大的現(xiàn)象，子房略微膨大后衰敗，難以結實。本研究選擇睡蓮‘泰國王’品種和育性較好的‘公牛眼’品種為材料，采用組織學、轉(zhuǎn)錄組學等手段研究其授粉后子房發(fā)育的差異，探討重瓣型睡蓮授粉后子房敗育的成因，以期為睡蓮的雜交育種提供理論基礎。

?材料與方法

?材料

實驗材料為栽培多年的熱帶睡蓮品種‘公牛眼’和‘泰國王’，種植于廣西壯族自治區(qū)南寧市興寧區(qū)亞熱帶作物研究所睡蓮種質(zhì)資源圃（108°38￠E，22°87￠N），實驗地屬于亞熱帶季風氣候。課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，‘泰國王’的雄蕊完全瓣化，無法產(chǎn)生花粉，因此不能進行自交授粉，僅能作為母本材料進行雜交，經(jīng)人工雜交授粉后難以結實，而‘公牛眼’自交結實率較高。

方法

1.2.1? 人工授粉? 選擇健康的‘泰國王’和‘公牛眼’品種植株，以‘公牛眼’為父本，‘泰國王’和‘公牛眼’分別作為母本，采用睡蓮的免去雄人工雜交技術進行授粉。

1.2.2? 授粉后子房發(fā)育的組織學觀察? 收集授粉后6 h、4 d、7 d和10 d的子房，分別命名為6HAP、4DAP、7DAP和10DAP，用FAA固定液對樣本進行固定，采用二甲苯和乙醇進行梯度脫水干燥后用常規(guī)石蠟法包埋。用PAS+萘酚黃S試劑進行染色，將切片置于顯微鏡（Zeiss Primostar 3）下觀察拍照記錄。

1.2.3? 柱頭和胚珠的掃描電鏡觀察? 立即采集授粉后的柱頭以及采集授粉后7?d的子房，迅速投入電鏡固定液，轉(zhuǎn)移至4℃保存。將樣本依次于不同梯度酒精脫水后，用臨界點干燥儀進行干燥，最后將樣本噴金做導電處理，在掃描電鏡下觀察拍照。

1.2.4? RNA的提取及轉(zhuǎn)錄組測序? 授粉7 d后分別剪下母本的子房，‘公牛眼’樣本為子房發(fā)育組（ovary development， OD），‘泰國王’樣本為子房敗育組（ovary abortion， OA），立即放入液氮中速凍，在轉(zhuǎn)移至超低溫冰箱中–80℃保存，用于RNA提取。每個樣品取3個生物學重復，共6份材料。用TRIzol試劑盒法（invitrogen， CA， USA），對子房的RNA進行分離和純化，檢測RNA的純度與完整性。樣品RNA合格后，委托聯(lián)川生物技術股份有限公司構建cDNA文庫，使用illumina Novaseq6000 （LC Bio Technology CO.， Ltd. Hangzhou， China）平臺進行轉(zhuǎn)錄組測序。

1.2.5? 生物信息學分析? 轉(zhuǎn)錄組測序后得到的原始數(shù)據(jù)Raw reads，使用cutadapt軟件對原始數(shù)據(jù)進行去除接頭處理，然后對數(shù)據(jù)進行去除低質(zhì)量序列和重復序列后得到Valid reads。具體數(shù)據(jù)預處理步驟如下：（1）去除帶接頭（adaptor）的reads;（2）去除含有N（N表示無法確定堿基信息）的比率大于5%的reads;（3）去除低質(zhì)量reads （質(zhì)量值Q≤10的堿基數(shù)占整個read的20%以上）;（4）統(tǒng)計原始測序量、有效測序量、Q、Q、GC含量。使用ballgown包進行FPKM定量，F(xiàn)PKM表示在每百萬測序堿基中每千個轉(zhuǎn)錄子測序堿基中所包含的測序片斷數(shù)。使用R包edgeR對樣本之間進行顯著差異分析，將差異倍數(shù)FC>2倍或FC<0.5倍且<0.05的基因定義為差異基因，并對其進行GO和KEGG富集分析。

1.2.6? qRT-PCR驗證? 依據(jù)富集結果篩選出差異表達的基因，從中篩選4個設計特異性引物（表1），以基因為內(nèi)標參照，進行qRT-PCR驗證分析，引物由擎科生物技術有限公司合成。qRT-PCR反應體系為10?μL：2×SYBR Green Supermix 5 μL，F(xiàn)orward primer與Reverse primer各0.5?μL，cDNA模板1?μL，ddHO 3?μL。每個樣品設置3個生物學重復。利用2方法計算各個樣品的基因相對表達量。

結果與分析

?‘公牛眼’與‘泰國王’品種子房發(fā)育的形態(tài)差異

‘公牛眼’具有較好的育性，如圖1所示，授粉4?d后（4DAP）的子房略微膨大，靠近柱頭處的胚珠最先發(fā)育，形成紅色的表皮，這些可能是最先成功受精的胚珠。授粉7?d后（7DAP）子房中的大部分胚珠發(fā)育成為紅色的種子，授粉10?d后（10DAP）子房膨大呈果實（果實橫徑約3?cm），種皮由紅色轉(zhuǎn)為黑色，形成成熟的種子。‘泰國王’育性較差，難以結實，授粉后4?d（4DAP）的子房略微膨大，7?d后（7DAP）柱頭表面開始褐變，子房中有部分胚珠發(fā)育，其表皮變?yōu)榧t色，形態(tài)特征與‘公牛眼’4DAP的紅色胚珠相似?！﹪酢?HAP和4DAP的子房大小與同期‘公牛眼’的無明顯差異，直到授粉7?d后子房產(chǎn)生明顯的形態(tài)差異，‘泰國王’子房中無種子形成，10DAP的花朵完全腐爛。

?‘公牛眼’與‘泰國王’品種子房發(fā)育的組織學觀察

如圖2所示，睡蓮的胚珠在子房壁上的排列無明顯規(guī)律。授粉6 h的‘公牛眼’胚珠與‘泰國王’的胚珠發(fā)育無明顯差異。授粉后4?d，‘公牛眼’的胚珠發(fā)育成為長卵圓形，其珠心的面積也隨之增加，而‘泰國王’胚珠的珠心開始萎縮。授粉后7?d，2個品種的胚珠發(fā)生了明顯的差異，‘公牛眼’的胚珠明顯增大，此時的珠心充滿整個胚珠內(nèi)部，與珠被緊緊貼合，合子開始分裂形成胚，而‘泰國王’胚珠的珠心繼續(xù)萎縮呈“十”或“丫”字型，胚珠敗育消解。10?d后，‘公牛眼’胚珠的珠被增厚形成種皮，珠心萎縮，胚開始

授粉后立即采集的柱頭經(jīng)電鏡掃描發(fā)現(xiàn)（圖3），‘公牛眼’與‘泰國王’柱頭表面的顯微結構相似，柱頭上均分布著大量的乳突，每個乳突由一單列的單細胞組成，基部的細胞體積較大，頂部的細胞體積較小，頂部第一個細胞的表面略微凹陷。乳突上一列單細胞之間的連接處形成了一圈圈的凹槽，花粉易附著在凹槽處。乳突數(shù)量龐大、排列緊密，配合自身的結構能更容易捕獲外來的花粉。

如圖4所示，‘公牛眼’授粉7?d后，子房中正常發(fā)育的胚珠膨大成為種子，呈卵圓形，懸掛于子房壁上，珠被增厚初步發(fā)育成種皮，表面均勻分布著條紋，條紋的方向與胚珠的長軸平行。胚珠與珠柄連接處，存在一個冠狀組織蓋著胚珠的頂端。而在‘泰國王’的子房中，胚珠的發(fā)育程度參差不齊，有的呈卵圓形，有的較為狹長，也有呈近似圓形的，體積大小不一。

?‘公牛眼’與‘泰國王’品種子房的轉(zhuǎn)錄組分析

2.3.1? 轉(zhuǎn)錄組測序質(zhì)量評估及基因表達量分析? 經(jīng)轉(zhuǎn)錄組測序共獲得282?800?654條原始序列（raw reads），去除低質(zhì)量序列和重復序列后得到有效序列（valid reads）277?620?180條。從表2

可知，有效序列所占比例均大于97%，質(zhì)量值不小于20的堿基所占比例均大于99.98%，質(zhì)量值不小于30的堿基所占比例均大于97%，堿基G和C的數(shù)量總和占總堿基數(shù)量的48%～49%，說明6個樣品的測序質(zhì)量很高，可進行后續(xù)的生物學分析。

將兩組樣本的基因表達量差異倍數(shù)（fold change，F(xiàn)C）大于2或FC小于0.5，且<0.05的基因定義為子房敗育組（OA組）與子房發(fā)育組（OD組）的差異基因。從結果中可以看出，共有6033個差異基因，其中上調(diào)表達的基因3104個，下調(diào)表達的基因有2929個（圖5）。

2.3.2? 差異基因GO富集分析? Gene Ontology（簡稱GO）基因功能分類是國際化標準的分類體系之一，GO總共有3個ontology（本體），分別描述基因的分子功能（molecular function）、所處的細胞位置（cellular component）、參與的生物過程（biological process）?！﹪酢汀Ｑ邸皇诜垡院?，對子房差異表達基因（OA vs OD）進行GO功能分類，可以分為生物過程、細胞組分和分子功能3個大類，3416個小類，圖6分別展示的是生物過程、細胞組分和分子功能中基因數(shù)量前25、15、10的小類。在生物過程中，差異基因參與數(shù)量排名前五的是生物過程（biological process）、轉(zhuǎn)錄調(diào)控與DNA模板化（regulation of transcription， DNA-templated）、轉(zhuǎn)錄與DNA模板化（transcription， DNA-templated）、氧化還原過程（oxidation-reduction process）、蛋白質(zhì)磷酸化（protein phosphorylation），基因數(shù)量分別是656、359、300、248、192個。在細胞組分中，差異基因參與數(shù)量排名前五的是細胞核（nucleus）、葉綠體（chloroplast）、細胞質(zhì)（cytoplasm）、膜的組成部分（integral component of membrane）、質(zhì)膜（plasma membrane），基因數(shù)量分別為1362、800、769、755、737個。在分子功能中，差異基因參與數(shù)量排名前五的是分子功能（molecular function）、蛋白質(zhì)結合（protein binding）、DNA結合轉(zhuǎn)錄因子活性（DNA-binding transcription factor activity）、ATP結合（ATP binding）、DNA結合（DNA binding），基因數(shù)量分別為648、585、334、325、297個。

如圖7所示，在處理組OA和對照組OD中，差異基因GO富集顯著性排在前五的分類是葉綠體類囊體膜（chloroplast thylakoid membrane， rich factor = 0.45）、葉綠體（chloroplast， rich factor =0.33）、葉綠體包膜（chloroplast envelope， rich factor=0.40）、光合作用與光系統(tǒng)中的光捕獲（photosynthesis， light harvesting in photosystem I， rich factor=0.78）、葉綠素結合（chlorophyll binding， rich factor=0.71）。差異基因富集顯著的GO類目均與光合作用息息相關。

2.3.3? 差異基因KEGG富集分析? KEGG（kyoto encyclopedia of genes and genomes）全稱是京都基因和基因組百科全書，是基因組破譯方面的公共數(shù)據(jù)庫。在生物體內(nèi)，不同基因相互協(xié)調(diào)行使其生物學功能，基于Pathway的分析有助于更進一步了解基因的生物學功能。如圖8所示，在處理組OA和對照組OD中，差異基因富集顯著性-value排在前五的KEGG pathway分別為光合作用-天線蛋白（photosynthesis-antenna proteins， rich factor=0.77）、光合作用（photosynthesis， rich factor=0.50）、角質(zhì)，軟木和蠟的生物合成（cutin， suberine and wax biosynthesis，rich factor=0.49）、核糖體（ribosome， rich factor=0.37）、卟啉和葉綠素代謝（porphyrin and chlorophyll metabolism， rich factor=0.48）。在顯著富集的pathway（≤0.05）中，差異基因數(shù)量最多的3條pathway為核糖體（ribosome）、淀粉和蔗糖代謝（starch and sucrose metabolism）、苯丙烷類生物合成（phenylpropanoid biosynthesis），差異基因的數(shù)量分別為122、111和94個。在參與光合作用-天線蛋白、光合作用途徑相關的差異基因中，OA組絕大多數(shù)基因的表達量下調(diào)，僅LOC116246649、LOC116263852、LOC116266250、LOC116260662這4個基因表達量上調(diào)（圖9），可見OA樣本的光合作用受到抑制。

相關基因的表達分析

結合相關文獻資料發(fā)現(xiàn)，PRPL1、L4、L21、L35對擬南芥的胚珠發(fā)育至關重要，依據(jù)差異基因KEGG富集分析結果，選擇相關基因LOC116253844、LOC116260094、LOC116249120、LOC116266588進行驗證（表3）。在OA組中，相關基因的表達量均較低，qRT-PCR結果與轉(zhuǎn)錄組的基本一致（圖10）。

討論

花粉與柱頭間的識別作用是確保親和花粉萌發(fā)、完成受精并保持后代遺傳穩(wěn)定性的重要環(huán)節(jié)，睡蓮的柱頭呈盤狀，成熟后能分泌大量富含營養(yǎng)物質(zhì)的液體，為花粉的水合萌發(fā)提供了必要的基質(zhì)，也在花粉與柱頭的相互識別過程中起著重要作用。從花朵盛開與閉合的時間上分類，可將睡蓮分為夜間開花和白晝開花兩大生態(tài)類型，夜間開花的熱帶型睡蓮，如印度紅睡蓮、埃及白睡蓮Nymphaea rubra等柱頭表面分布著濃密的乳突組織，且每個乳突由一單列的多個細胞組成，屬于多細胞單列乳突的濕柱頭類型。本研究中，對白天開花的熱帶型睡蓮‘公牛眼’和‘泰國王’品種的柱頭表面進行電鏡觀察，得到了較一致的結果，柱頭表面分布著濃密的多細胞單列乳突，形似“葫蘆狀”，許多花粉很容易附著于多個細胞的連接處。芡實、萍蓬草等植物的水生植物柱頭上僅僅隆起單個乳突，柱頭結構可能為原始類型，而睡蓮屬的多細胞單列乳突的柱頭可能為進化類型，本文認為后者能更容易附著外來花粉。

通過對‘公牛眼’和‘泰國王’子房的形態(tài)觀察發(fā)現(xiàn)，結實率低的‘泰國王’子房中有少量胚珠發(fā)育成熟，其表型與‘公牛眼’紅色胚珠相似，由此推測少量胚珠可能完成了受精，但‘泰國王’的子房最終敗育腐爛，受精的胚珠無法進一步發(fā)育為成熟的種子。DENG等在菊花雜交中發(fā)現(xiàn)大約有75%的胚珠能完成受精，但最終只有17.2%的胚珠形成成熟的胚胎，高比例的胚胎敗育是種子產(chǎn)量低的主要原因。胚珠受精后形成胚胎，由于營養(yǎng)供給不足等原因，很容易發(fā)生胚胎和內(nèi)外胚乳組織發(fā)育異常、細胞核降解等情況，導致胚胎敗育。睡蓮子房中的胚珠多達上千粒，對于少量成功受精的胚珠，幼胚拯救是目前常用的技術方法。

本研究中，‘泰國王’和‘公牛眼’授粉后7?d的子房表型和子房內(nèi)部的胚珠發(fā)育均發(fā)生了較大差異，因此選擇授粉后7?d的子房進行轉(zhuǎn)錄組測序，構建了發(fā)育組（OD）和敗育組（OA）睡蓮子房cDNA文庫。

光合作用是植物重要的生理過程，對許多作物早期的生殖發(fā)育也起到重要的作用。榛子發(fā)育子房中光合作用相關的差異表達蛋白均顯著上調(diào)表達，表明光合作用對子房的發(fā)育有所促進。光合作用對番茄果實內(nèi)種子的發(fā)育也發(fā)揮了重要作用，LYTOVCHENKO等發(fā)現(xiàn)，葉綠素合成受到抑制的轉(zhuǎn)基因番茄無法形成健康的種子。PATTISON等也證實在番茄果實早期發(fā)育時，大量與光合作用相關的基因在番茄胎盤和隔膜中表達，同時通過淀粉染色發(fā)現(xiàn)淀粉顆粒主要集中在胎盤和隔膜中。GAO等發(fā)現(xiàn)，光合作用相關基因的啟動與擬南芥胚胎發(fā)育早期有關，貯藏、能量相關蛋白的激活與胚胎后期發(fā)育相關。光合產(chǎn)物主要以蔗糖和淀粉的形式存在，蔗糖和淀粉的有效利用對于配子體發(fā)育、受精以及子代和母體的協(xié)調(diào)發(fā)育至關重要。在玉米子房中，蔗糖為子房壁和花梗中的淀粉積累提供碳源，并且被花梗中的細胞轉(zhuǎn)化酶（CWIN）和珠心組織中的液泡轉(zhuǎn)化酶（VIN）水解，產(chǎn)生高濃度的葡萄糖流入胚囊，促進胚珠的發(fā)育。本研究中差異表達基因的GO和KEGG富集結果顯示，差異表達基因在光合作用-天線蛋白、光合作用、卟啉和葉綠素代謝、核糖體、淀粉和蔗糖代謝等通路上顯著富集，表明這些通路可能是影響睡蓮子房發(fā)育的重要途徑，‘泰國王’子房的敗育可能是因為自身光合作用受到抑制，進而影響了蔗糖、淀粉等營養(yǎng)物質(zhì)的生成。

核糖體蛋白PRPS20、L1、L4、L27和L35是維持核糖體活性所必需的，這在擬南芥胚胎發(fā)育從球形向心形階段的過渡中變得至關重要，缺乏這些PRP蛋白會導致細胞分裂模式的改變，擬南芥胚胎發(fā)育到心形階段之前就會停止。YIN等發(fā)現(xiàn)，葉綠體核糖體蛋白L21基因也是擬南芥胚胎發(fā)生所必需的。本研究選擇了4個與PRPL1、L4、L21和L35蛋白相關的基因進行驗證工作，4個基因在敗育子房中均顯著下調(diào)，由此可見，這些蛋白對睡蓮胚的發(fā)育可能也有重要的調(diào)控作用。

本研究采用形態(tài)學方法確定了子房敗育的關鍵時期，進一步利用RNA-seq測序分析初步探討導致睡蓮子房敗育的可能原因，但僅僅從基因表達層面仍然不能充分闡明睡蓮子房敗育的機理，后續(xù)研究可采用多組學聯(lián)合分析，挖掘并驗證影響子房發(fā)育的關鍵基因，以系統(tǒng)闡明睡蓮子房敗育的機制。

參考文獻

1. 黃? 巖， 邢世巖， 付兆軍， 李? 真. 葉籽銀杏授粉期胚珠的形態(tài)結構變化[J]. 園藝學報， 2013， 40（2）： 205-212.HUANG Y， XING S Y， FU Z J， LI Z. Observation on changes of morphological structure of the ovules during pollination period in L. var. [J]. Acta Horticulturae Sinica， 2013， 40（2）： 205-212. （in Chinese）
2. 齊秀娟， 徐善坤， 張威遠， 林苗苗， 方金豹. 美味獼猴桃‘徐香’與長果獼猴桃遠緣雜交親和性的解剖學研究[J]. 園藝學報， 2013， 40（10）： 1897-1904.QI X J， XU S K， ZHANG W Y， LIN M M， FANG J B. Studies on compatibility of interspecific hybridization between actinidia diliciosa ‘Xuxiang’ and by anatomy[J]. Acta Horticulturae Sinica， 2013， 40（10）： 1897- 1904. （in Chinese）
3. 王文鵬， 周莉花， 劉華紅， 包志毅， 趙宏波. 夏蠟梅與美國蠟梅屬間雜交障礙的組織學機理[J]. 園藝學報， 2013， 40（10）： 1943-1950.WANG W P， ZHOU L H， LIU H H， BAO Z Y， ZHAO H B. Histological reproductive barriers for intergeneric cross between and var. [J]. Acta Horticulturae Sinica， 2013， 40（10）： 1943-1950. （in Chinese）
4. 解瑋佳， 李世峰， 瞿素萍， 彭綠春， 張? 露， 楊秀梅， 王繼華. 常綠杜鵑不同雜種群間雜交的可育性分析[J]. 園藝學報， 2019， 46（5）： 910-922.XIE W J， LI S F， QU S P， PENG L C， ZHANG L， YANG X M， WANG J H. Cross fertility of the crosses between different hybrids groups[J]. Acta Horticulturae Sinica， 2019， 46（5）： 910-922. （in Chinese）
5. 牛紅云， 王? 臣， 薛貴彬， 胡寶忠. 四種寒帶睡蓮的雜交親合性研究[J]. 北方園藝， 2011， 233（2）： 100-102.NIU H Y， WANG C， XUE G B， HU B Z. Study on affinity of sexual hybridization in four taxa of northeast[J]. Northern Horticulture， 2011， 233（2）： 100-102. （in Chinese）
6. ISIDORA R， LUCA T， FABIO R， SIMONA M， MATHIAS P， PETER J， MARTIN K， DARIO L， PAOLO P. Versatile roles of plastid ribosomal proteins in plant growth and development[J]. The Plant Journal， 2012， 72（6）： 922-934.
7. YIN T Z， PAN G， LIU H， WU J， LI Y P， ZHAO Z X， FU T D， ZHOU Y M. The chloroplast ribosomal protein 21 gene is essential for plastid development and embryogenesis in [J]. Planta， 2012， 235（5） ： 907-921.
8. 程? 茵， 馬光耀， 趙? 瑩， 盛玉輝， 李雪青， 周? 揚， 宋希強， 王? 健. 睡蓮花露主要成分及抗氧化作用[J]. 食品研究與開發(fā)， 2019， 40（8）： 108-114.CHEN Y， MA G Y， ZHAO Y， SHEN Y H， LI X Q， ZHOU Y， SONG X Q， WANG J. The main metabolites and antioxidation effect of waterlily stigmatic exudata[J]. Food Research and Development， 2019， 40（8）： 108-114. （in Chinese）
9. DENG Y M， TENG N J， CHEN S M， CHEN F D， GUAN Z Y， SONG A P， CHANG Q S. Reproductive barriers in the intergeneric hybridization between （Ramat.） Kitam. and Poljak （Asteraceae）[J]. Euphytica， 2010， 174（1）： 41-50.
10. 孫春青， 陳發(fā)棣， 房偉民， 劉兆磊， 馬? 靜， 滕年軍， 佘琳芳. 栽培菊花‘奧運天使’與野路菊雜交生殖障礙的細胞學機理[J]. 中國農(nóng)業(yè)科學， 2009， 42（6）： 2085-2091.SUN C Q， CHEN F L， FANG W M， LIU Z L， MA J， TENG N J， SHE L F. Cellular mechanism of reproductive barrier during cross breeding between cvAoyuntianshi and [J]Scientia Agricultura Sinica， 2009， 42（6）： 2085-2091. （in Chinese）
11. GAO P， XIANG D， QUILICHINI T D， VENGLAT P， PANDEY P K， WANG E， GILLMOR C S， DATLA R. Gene expression atlas of embryo development in [J]. Springer Berlin Heidelberg， 2019， 32（1）： 93.