基于消腫定痛功效的三七粉質(zhì)量標(biāo)志物研究＊

韓彥琪，李 新，王德勤，徐 旭，郭海彪，許 浚，4，張鐵軍，4＊＊，李楚源＊＊

（1.天津藥物研究院/天津市中藥質(zhì)量標(biāo)志物重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 天津 300301；2.天津藥物研究院/中藥現(xiàn)代制劑與質(zhì)量控制技術(shù)國家地方聯(lián)合工程實(shí)驗(yàn)室 天津 300301；3.廣州白云山和記黃埔中藥有限公司 廣州 510515；4.天津藥物研究院/釋藥技術(shù)與藥代動(dòng)力學(xué)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 天津 300301）

三七來源于五加科植物Panaxnotoginseng(Burk.)F.H.Chen 的干燥根和根莖，又名田七，是我國傳統(tǒng)名貴中藥材，歷代本草和各版《中華人民共和國藥典》中均收載此中藥，其性溫，味甘、微苦，歸肝、胃經(jīng)，具有散瘀止血，消腫定痛的功效，主要用于咯血，吐血，衄血，便血，崩漏，外傷出血，胸腹刺痛，跌撲腫痛[1]。《本草綱目》中記載：“三七近時(shí)始出，南人軍中用為金瘡要藥，云有奇功”，《本草綱目拾遺》中記載：“人參補(bǔ)氣第一，三七補(bǔ)血第一，味同而功亦等，故稱人參三七，為中藥中之最珍貴者”。現(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)，三七有效成分為三七總皂苷類成分，如三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Rd、人參皂苷Re 等，以及三七素、黃酮類成分、揮發(fā)油成分等，其具有活血化瘀、止血、抗血栓等多種功效，目前已廣泛應(yīng)用于心腦血管系統(tǒng)、血液系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)以及免疫系統(tǒng)等臨床治療中[2-5]。

除治療內(nèi)傷出血、瘀血外，三七還擅治療跌打、金刃等外傷引起的瘀血腫痛，具有消腫、散瘀、止痛的功效，是中醫(yī)傷科藥物中的首選，為治療跌打損傷的常用藥[6]，著名的“云南白藥”，即以之為主藥。有研究者運(yùn)用角叉菜膠、巴豆油、蛋清等各種致炎劑對(duì)小鼠和大鼠分別進(jìn)行耳廓致炎處理和足部腫脹處理，通過三七干預(yù)后，發(fā)現(xiàn)其對(duì)各種致炎劑均有顯著抗炎功效[7]。另外，三七中的三七總皂苷能有效抑制磷酸組胺、角叉菜膠誘導(dǎo)的大鼠踝關(guān)節(jié)腫脹，抑制炎細(xì)胞增多和蛋白滲出，對(duì)急性炎癥引起的毛細(xì)血管通透性升高、炎性滲出和組織水腫以及炎癥后期肉芽組織增生也均有抑制作用[8]。其作用機(jī)制可能與三七總皂苷阻止炎細(xì)胞內(nèi)游離鈣水平的升高，抑制灌流液中磷脂酶A2的活性，減少地諾前列酮的釋放有關(guān)[9]。另有報(bào)道，三七總皂苷可以激動(dòng)阿片肽樣受體，對(duì)化學(xué)和熱刺激引起的疼痛有一定的鎮(zhèn)痛作用，且沒有成癮性[10]。

雖然目前對(duì)三七抗炎鎮(zhèn)痛藥效有較多的報(bào)道，但對(duì)其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)的研究依舊比較欠缺，對(duì)其消腫定痛功效的質(zhì)量標(biāo)志物研究更是未見報(bào)道。因此本研究首先通過小鼠醋酸扭體實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)三七粉及三七總皂苷的鎮(zhèn)痛藥效，進(jìn)一步采用LPS 誘導(dǎo)的小鼠腹腔巨噬細(xì)胞RAW264.7 炎癥模型，探討三七粉中的三七總皂苷及14個(gè)代表性單體成分的抗炎作用，初步解析三七粉消腫定痛藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，明確質(zhì)量標(biāo)志物。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及細(xì)胞

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：ICR 雄性小鼠，體質(zhì)量18-22 g，斯貝福（北京）生物技術(shù)有限公司提供，許可證號(hào)SCXK（京）2019-0010。

RAW264.7 小鼠腹腔巨噬細(xì)胞系購于上海生科院。用含1%雙抗和10%FBS 的DMEM 高糖培養(yǎng)基培養(yǎng)于37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中，1-2天傳代一次。

1.2 實(shí)驗(yàn)藥物及試劑

三七粉由廣州白云山和記黃埔提供，三七總皂苷（PNS）由實(shí)驗(yàn)室自制。14 個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品人參皂苷Rb1、人參皂苷Rb2、人參皂苷Rb3、人參皂苷Rd、人參皂苷F2、人參皂苷Rg3、人參皂苷Rk1、三七皂苷R1、人參皂苷Re、人參皂苷Rh1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rg2、三七素、槲皮素購自上海源葉生物科技有限公司，純度HPLC≥98%。阿司匹腸溶片林購自拜耳醫(yī)藥；羧甲基纖維素鈉（CMC-Na）購自天津市凱信化學(xué)工業(yè)有限公司；脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）、地塞米松購自美國Sigma 公司；一氧化氮試劑盒購于上海碧云天生物技術(shù)有限公司；腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factorα，TNF-α）、白介素-6（interleukin-6，IL-6）試劑盒購自上海西唐生物科技有限公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)主要儀器

倒置顯微鏡（日本Olympus 公司），酶標(biāo)儀（德國Berthold公司），細(xì)胞培養(yǎng)箱（日本Olympus公司）。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1 三七粉及三七總皂苷對(duì)小鼠扭體法鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn)的影響

ICR 小鼠80只，隨機(jī)分為8組，對(duì)照組，三七粉低、中、高劑量組，三七總皂苷低、中、高劑量組，陽性藥阿司匹林組。對(duì)照組給予0.5% CMC-Na 懸液，三七粉低、中、高三個(gè)劑量組分別灌胃給予三七粉混懸液1.1 g·kg-1、2.2 g·kg-1、4.4 g·kg-1，三七總皂苷低、中、高劑量組分別灌胃給予三七總皂苷0.25、0.5、1 g·kg-1，相當(dāng)于1.1、2.2、4.4g生藥·kg-1，陽性藥組給予阿司匹林0.12 g·kg-1，給藥體積20 mL·kg-1，每日給藥1 次，連續(xù)給藥3天。第3 天給藥后1 h，小鼠腹腔注射1%醋酸溶液按0.2 mL/只，室溫保持在28°C左右。

注射5 min 后觀察15 min 內(nèi)小鼠體態(tài)變化情況及發(fā)生扭體反應(yīng)的次數(shù)，以腹部凹陷、臀部歪扭、身體扭曲、或抽胯為扭體一次的標(biāo)準(zhǔn)。記錄扭體次數(shù)，統(tǒng)計(jì)分析各組差異。

1.4.2 三七總皂苷及化合物對(duì)RAW264.7細(xì)胞增值的影響

取對(duì)數(shù)生長期細(xì)胞，調(diào)整密度為2×105個(gè)/mL，接均勻種于96 孔板，37.5℃、5% CO2培養(yǎng)過夜。按實(shí)驗(yàn)分組，空白對(duì)照組（Control）每孔加100 μL 基礎(chǔ)培養(yǎng)基，三七總皂苷給藥組每孔加100 μL 終濃度分別為0.8 μg·mL-1、4 μg·mL-1、20 μg·mL-1、100 μg·mL-1、500 μg·mL-1的溶液，三七皂苷R1、人參皂苷Re、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rg2、人參皂苷Rh1、人參皂苷Rd、人參皂苷Rg3、人參皂苷Rb1、人參皂苷Rb2、人參皂苷Rb3、人參皂苷F2、人參皂苷Rk1、槲皮素、三七素給藥組每孔加入100 μL 終濃度為1 μmol·L-1、10 μmol·L-1、50 μmol·L-1、100 μmol·L-1的溶液，每組設(shè)3 個(gè)復(fù)孔，DMSO 濃度為1‰。給藥后于37.5℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h，棄上清，每孔加入120 μL MTS（每100 μL培養(yǎng)基加20 μL MTS），37℃，5%CO2的環(huán)境下孵育1 h后490nm 下讀取吸光值，檢測不同濃度三七總皂苷及單體化合物對(duì)細(xì)胞增殖的影響。

1.4.3 三七總皂苷及單體化合物對(duì)LPS 誘導(dǎo)RAW264.7細(xì)胞炎癥反應(yīng)的影響

取對(duì)數(shù)生長期細(xì)胞，以2×105個(gè)/mL均勻接種于96孔板，培養(yǎng)于37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱，過夜。實(shí)驗(yàn)分空白組（control）、模型組、陽性藥地塞米松組（Dex）、三七總皂苷給藥組，空白組每孔加入100 μL 含2%血清的DMEM，模型組每孔加入100 μL 終濃度為0.1 μg·mL-1的LPS，陽性藥組每孔加入終濃度為100 μmol·L-1地塞米松和0.1 μg·mL-1LPS 的混合溶液100 μL，三七總皂苷給藥組每孔加入終濃度為0.2 μg·mL-1、2 μg·mL-1、20 μg·mL-1三七總皂苷及0.1 μg·mL-1LPS 的混合溶液100μL，每組設(shè)3個(gè)復(fù)孔。

人參皂苷Rd、人參皂苷Rg3、人參皂苷F2、人參皂苷Rk1、槲皮素在100 μmol·L-1給藥濃度下對(duì)細(xì)胞存活率有一定的影響，而在100 μmol·L-1對(duì)細(xì)胞無毒性，因此以上5 個(gè)單體化合物給藥組每組加入100 μL 終濃度為10 μmol·L-1、1 μmol·L-1、0.1 μmol·L-1樣品和0.1 μg·mL-1的LPS 混合溶液。MTS 預(yù)實(shí)驗(yàn)中，三七皂苷R1、人參皂苷Re、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rg2、人參皂苷Rh1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Rb2、人參皂苷Rb3、三七素在100 μmol·L-1給藥濃度下對(duì)細(xì)胞無毒性，因此以上9 個(gè)化合物給藥濃度設(shè)為100 μmol·L-1、10 μmol·L-1、1 μmol·L-1，每組3 復(fù)孔，培養(yǎng)24 h 后用ELISA 方法對(duì)細(xì)胞上清液中的NO、TNF-α、IL-6 含量進(jìn)行檢測，步驟詳見試劑盒說明書。

1.4.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

所有數(shù)據(jù)均使用GraphPad Prism 5 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理，用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析（one-way analysis of variance, one-way ANOVA），P＜0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1 三七粉及三七總皂苷對(duì)小鼠醋酸扭體的影響

2.1.1 小鼠體態(tài)變化情況

小鼠腹腔注射1%醋酸溶液后，均出現(xiàn)不同程度的體態(tài)變化。對(duì)照組小鼠腹痛癥狀最為嚴(yán)重。三七粉及三七總皂苷高劑量組小鼠表現(xiàn)為腹部連續(xù)抽搐、內(nèi)凹，行動(dòng)遲緩、蠕行，向后蹬腿，腹痛癥狀較輕。三七粉及三七總皂苷低劑量組小鼠的表現(xiàn)為抽搐劇烈，急躁不安，有閉眼現(xiàn)象，腹痛癥狀較為嚴(yán)重。由此推測，三七粉及三七總皂苷對(duì)醋酸引起的腹痛起到了一定的緩解作用。

2.1.2 小鼠扭體次數(shù)結(jié)果

由表1 可知，陽性藥阿司匹林組小鼠的扭體次數(shù)顯著低于對(duì)照組（P＜0.01）。小鼠灌胃給予三七粉3天，能夠不同程度地減少小鼠扭體次數(shù)，與對(duì)照組比較，2.2 g·kg-1劑量組、4.4 g·kg-1劑量組作用顯著（P＜0.05，P＜0.01）；給予三七總皂苷3 天，亦能夠不同程度地減少小鼠扭體次數(shù)，與對(duì)照組比較，0.5 g·kg-1劑量組、1 g·kg-1劑量組作用顯著（P＜0.05，P＜0.01）。結(jié)果表明，高、中劑量的三七粉及三七總皂苷對(duì)醋酸所致的小鼠扭體反應(yīng)有顯著抑制作用，鎮(zhèn)痛作用明顯，且具有一定量效關(guān)系（圖1）。

表1 三七粉及三七總皂苷對(duì)醋酸誘導(dǎo)小鼠扭體次數(shù)的影響（±s，n = 10）

表1 三七粉及三七總皂苷對(duì)醋酸誘導(dǎo)小鼠扭體次數(shù)的影響（±s，n = 10）

注：與對(duì)照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。

組別三七粉三七總皂苷陽性藥組對(duì)照組劑量（g·kg-1）1.1 2.2 4.4 0.25 0.5 1.0 0.12-扭體次數(shù)41.10±10.39 32.10±8.74*25.40±7.88**38.20±7.50 33.40±7.69*30.50±7.93**17.50±7.49**43.80±11.18

圖1 三七粉及三七總皂苷對(duì)醋酸誘導(dǎo)小鼠扭體次數(shù)的影響

2.2 三七總皂苷及單體化合物對(duì)LPS 誘導(dǎo)RAW264.7細(xì)胞炎癥反應(yīng)的影響

2.2.1 三七總皂苷及14個(gè)化合物對(duì)細(xì)胞增值的影響

如圖2 所示，不同濃度三七總皂苷（PNS，0.8 μg·mL-1、4 μg·mL-1、20 μg·mL-1、100 μg·mL-1、500 μg·mL-1）刺激RAW264.7 細(xì)胞24 h 后，100 μg·mL-1和500 μg·mL-1給藥組的細(xì)胞增殖率與空白對(duì)照組相比具有顯著性差異（P＜0.001），說明給藥濃度過高，對(duì)細(xì)胞增殖具有抑制作用，其余濃度無顯著差異。故選取0.2 μg·mL-1、2 μg·mL-1、20 μg·mL-1為后續(xù)三七總皂苷的給藥濃度。

圖2 不同濃度三七總皂苷給藥24h后對(duì)細(xì)胞增殖的影響

如圖3 所示，當(dāng)不同濃度（1 μmol·mL-1、10 μmol·mL-1、50 μmol·mL-1、100 μmol·mL-1）的 三 七 皂 苷R1（N-R1）、人參皂苷Re（G-Re）、人參皂苷Rg1（GRg1）、人參皂苷Rg2（G-Rg2）、人參皂苷Rh1（G-Rh1）、人參皂苷Rb1（G-Rb1）、人參皂苷Rb2（G-Rb2）、人參皂 苷Rb3（G-Rb3）、三 七 素（Dencichine）刺 激RAW264.7 細(xì)胞24 h 后，各濃度組細(xì)胞增值率均大于90%且與空白對(duì)照組比較均無顯著性差異（P＜0.05），說明以上9 個(gè)單體化合物在1-100 μmol·mL-1給藥濃度范圍內(nèi)對(duì)細(xì)胞增殖無影響，屬于安全給藥范圍。而人參皂苷Rd（G-Rd，P＜0.05）、人參皂苷Rg3（G-Rg3，P＜0.01）、人 參 皂 苷F2（G-F2，P＜0.001）、槲 皮 素（Quercetin，P＜0.01）的100 μmol·mL-1給藥組及人參皂苷Rk1（G-Rk1，P＜0.001）的50 和100μmol·mL-1給藥組細(xì)胞增值率與空白對(duì)照組比較顯著降低，因此以上5 個(gè)化合物在后續(xù)實(shí)驗(yàn)中的最高給藥濃度設(shè)為10 μmol·mL-1。

圖3 不同濃度單體化合物給藥24 h后對(duì)細(xì)胞增殖的影響

2.2.2 三七總皂苷對(duì)細(xì)胞NO、TNF-α 和IL-6 釋放量的影響

三七總皂苷對(duì)RAW264.7 細(xì)胞上清液中NO、TNF-α、IL-6釋放量的影響（圖4），由圖可知，LPS刺激細(xì)胞后，細(xì)胞上清液中的NO、TNF-α、IL-6 表達(dá)量與空白對(duì)照組比較顯著增強(qiáng)（P＜0.001），說明LPS 誘導(dǎo)RAW264.7 炎癥模型建立成功。陽性對(duì)照地塞米松組（100 μmol·mL-1）細(xì)胞上清液中NO、TNF-α、IL-6 的含量與空白組比較有顯著性降低（P＜0.001，P＜0.001，P＜0.01）。三七總皂苷高、中濃度組與模型對(duì)照組比較，能顯著降低細(xì)胞上清液中的NO、TNF-α、IL-6 含量（P＜0.05，P＜0.01），且表現(xiàn)出一定的濃度依賴性。

圖4 三七總皂苷與LPS共孵育24h對(duì)Raw264.7細(xì)胞培養(yǎng)上清液中NO（A）、TNF-α（B）、IL-6（C）釋放量的影響

2.2.3 14 個(gè)單體化合物對(duì)細(xì)胞NO、TNF-α 和IL-6 釋放量的影響

如圖5 所示，LPS 刺激細(xì)胞后，與空白對(duì)照組比較，細(xì)胞上清液中的NO、TNF-α、IL-6 分泌量著性增加（P＜0.001），說明LPS 誘導(dǎo)RAW264.7 炎癥模型建立成功。陽性藥地塞米松組（100 μmol·L-1）細(xì)胞上清液中NO、TNF-α、IL-6 的 含 量 顯 著 低 于LPS 組（P＜0.001）。

圖5 單體化合物與LPS共孵育24h對(duì)Raw264.7細(xì)胞培養(yǎng)上清液中NO（A、B）、TNF-α（C、D）、IL-6（E、F）釋放量的影響

與模型組比較，G-Rd、G-Rg3、G-Rk1 高濃度（10 μmol·L-1）以及G-Rg1、G-Rg2、G-Rb2、G-Rb3、三七素高濃度（100 μmol·L-1）對(duì)NO 有顯著抑制作用（P＜0.05）；G-F2 和槲皮素在中（1 μmol·L-1）、高（10 μmol·L-1）濃度以及N-R1、G-Re、G-Rh1、G-Rb1 在高（100 μmol·L-1）、中（10 μmol·L-1）濃度對(duì)NO 均有顯著抑制活性（P＜0.05）。與模型組比較，G-Rd、G-F2、G-Rk1、G-Rg1、G-Rg2、G-Rb2、G-Rb3、三七素僅在高濃度給藥組對(duì)細(xì)胞上清中TNF-α的含量有顯著抑制作用（P＜0.05），其它化合物在高、中濃度給藥組對(duì)TNF-α的釋放均有抑制作用。G-Rd、G-Rg3、G-Rk1、槲皮素、GRg2、G-Rb2、G-Rb3 在高濃度給藥組對(duì)IL-6 的釋放有顯著抑制作用（P＜0.05），其它化合物在高、中濃度給藥組對(duì)IL-6的釋放均有抑制作用。

3 討論

在基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究中篩選鎮(zhèn)痛藥的常用致痛方法有物理法（熱、電、機(jī)械）和化學(xué)法。化學(xué)法中采用腹腔注射乙酸可引起腹腔臟器出現(xiàn)化學(xué)性炎癥，產(chǎn)生內(nèi)臟痛，行為學(xué)表現(xiàn)為：腹部凹陷、后肢外伸。扭體實(shí)驗(yàn)操作簡單，不需使用麻醉劑，行為學(xué)明顯，且重復(fù)性好。因此本實(shí)驗(yàn)采用此模型評(píng)價(jià)三七粉和三七總皂苷的鎮(zhèn)痛效果。已有研究發(fā)現(xiàn)[11]，三七總皂苷對(duì)化學(xué)性和熱刺激性引起的疼痛均有明顯的對(duì)抗作用，且三七總皂苷是一種阿片肽樣受體激動(dòng)劑、不具有成癮的副作用；還可以顯著抑制星形膠質(zhì)細(xì)胞活化，減少其釋放的促炎性因子和神經(jīng)營養(yǎng)因子的釋放，抑制痛覺過敏和中樞敏化。本實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，三七粉可劑量依賴性的降低醋酸誘導(dǎo)的小鼠疼痛反應(yīng)，表現(xiàn)在降低小鼠的扭體產(chǎn)生次數(shù)。三七總皂苷為三七中富含皂苷成分的提取物，也可以劑量依賴性的降低小鼠扭體次數(shù)，表明三七總皂苷為三七鎮(zhèn)痛的有效部位。

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為，軟組織損傷的最初反應(yīng)是炎癥，消除炎性介質(zhì)在抗炎過程中起到很重要的作用，而消除損傷伴隨的疼痛也是臨床治療的重要方面[12]。巨噬細(xì)胞生成于骨髓，為人體免疫系統(tǒng)主要反應(yīng)細(xì)胞，可作為中心細(xì)胞啟動(dòng)炎癥介質(zhì)的產(chǎn)生，其具有吞噬外來物質(zhì)、抗原呈遞和免疫調(diào)節(jié)的作用[13-14]。軟組織損傷后，大量的炎性細(xì)胞如巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞等浸潤到損傷的局部組織，并產(chǎn)生導(dǎo)致持久炎癥和參與疼痛傳輸?shù)拇罅垦仔约?xì)胞因子，如腫瘤壞死因子α（TNFα）、IL-6及PGE2等[15-16]。TNF-α具有很強(qiáng)的炎癥損傷作用，具有對(duì)IL-1β、IL-6 等的協(xié)調(diào)和調(diào)節(jié)作用；IL-6是由TNF-α、IL-1β 刺激后產(chǎn)生，主要由T、B 細(xì)胞與單核巨噬細(xì)胞分泌，能促進(jìn)中性粒細(xì)胞活化和聚集，血清中IL-6 水平可反映組織損傷的程度。所以通過控制TNF-α、IL-6 等的產(chǎn)生，可以有效抑制炎癥的發(fā)展[17-19]。NO 是介導(dǎo)炎癥反應(yīng)的關(guān)鍵因子，可殺滅侵入機(jī)體的病原微生物，維持機(jī)體正常的免疫防御功能。少量的NO 是維持正常細(xì)胞功能必不可少的物質(zhì)，然而研究表明LPS、細(xì)胞因子等刺激因子能誘導(dǎo)單核巨噬細(xì)胞高表達(dá)一氧化氮合成酶（iNOS）從而合成過量的NO，造成細(xì)胞毒性和組織損傷等一系列炎癥反應(yīng)[20-23]。因此，本實(shí)驗(yàn)以LPS 誘導(dǎo)的小鼠腹腔巨噬細(xì)胞RAW264.7 炎癥模型對(duì)三七總皂苷及14 個(gè)關(guān)鍵化學(xué)成分（包括原人參三醇型：三七皂苷R1、人參皂苷Re、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rg2、人參皂苷Rh1；原人參二醇型：人參皂苷Rd、人參皂苷Rg3、人參皂苷Rb1、人參皂苷Rb2、人參皂苷Rb3、人參皂苷F2、人參皂苷Rk1；黃酮類：槲皮素以及氨基酸類：三七素）進(jìn)行了體外抗炎活性評(píng)價(jià)。結(jié)果表明，三七總皂苷及14個(gè)化合物能顯著降低LPS 誘導(dǎo)的RAW264.7 細(xì)胞上清液中NO、TNF-α 和IL-6 的含量，顯示較好的抗炎效果，推測以上14個(gè)化合物（結(jié)構(gòu)式見圖6）可能為三七粉發(fā)揮消腫定痛作用的關(guān)鍵藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，可作為三七粉消腫定痛功效的質(zhì)量標(biāo)志物。

圖6 14個(gè)化合物結(jié)構(gòu)式