基于活血作用的三七粉質(zhì)量標(biāo)志物研究＊

李 新，徐 旭，許 浚，郭海彪，李曉霞，林 娟，張鐵軍＊＊，劉 旻＊＊

（1.天津藥物研究院/天津市中藥質(zhì)量標(biāo)志物重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 天津 300301；2.天津藥物研究院 中藥現(xiàn)代制劑與質(zhì)量控制技術(shù)國家地方聯(lián)合工程實(shí)驗(yàn)室 天津 300301；3.廣州白云山和記黃埔中藥有限公司 廣州 510515；4.華北理工大學(xué)研究生院 唐山 063200）

中藥質(zhì)量是決定其臨床安全有效的基礎(chǔ)，由于中藥具有化學(xué)成分復(fù)雜、作用機(jī)制不清楚等特點(diǎn)，與現(xiàn)代藥品質(zhì)量控制體系的有機(jī)結(jié)合還存在一定困難，現(xiàn)有中藥質(zhì)量控制模式仍存在諸多問題，難以客觀評價和有效控制中藥質(zhì)量。為解決上述問題，2016 年劉昌孝院士提出了中藥質(zhì)量標(biāo)志物（quality marker，QMarker）這一核心質(zhì)量概念。該概念關(guān)聯(lián)安全性和有效性，著眼于全過程的物質(zhì)基礎(chǔ)特有、差異、動態(tài)變化和質(zhì)量的傳遞性、溯源性，并且具有整體、多元質(zhì)控的特點(diǎn)，對建立中藥全過程質(zhì)量控制及質(zhì)量溯源體系，規(guī)范中藥質(zhì)量研究和標(biāo)準(zhǔn)建立具有很好的引領(lǐng)作用[1-2]。中藥的整體質(zhì)量與化藥不同，不是單一成分效果的簡單相加；而是由多層次成分、多環(huán)節(jié)靶點(diǎn)、多維度作用的非線性/線性的協(xié)同。因此，首先要對影響中藥質(zhì)量的藥效成分群與生物活性的相互作用進(jìn)行分析，針對中藥功效的多靶點(diǎn)進(jìn)行物質(zhì)基礎(chǔ)研究，明確藥效物質(zhì)群，然后以藥效物質(zhì)群為基礎(chǔ)向上下游延伸，更好地建立中藥整體質(zhì)量評價體系[3]。

中藥三七是五加科植物三七Panaxnotoginseng(Burk.) F.H.Chen 的干燥根和根莖，產(chǎn)于云南、廣西等地區(qū)。三七粉是三七洗凈，干燥，碾成的細(xì)粉，性溫，味甘、微苦，歸肝、胃經(jīng)，功效為散瘀止血、消腫定痛，主要用于治療外傷出血、胸腹刺痛、跌撲腫痛等[4-5]。其主要特點(diǎn)為即有活血作用又有止血作用。《醫(yī)學(xué)衷中參西錄》載：“三七，善化瘀血……化瘀血而不傷新血，允為理血妙品?！比叻刍钛饔脧V泛用于治療各種瘀血證，如冠心病心絞痛、慢性胃炎胃脘痛、崩漏、血痹等病證[6]。從三七粉中分離得到的化學(xué)成分主要有皂苷類、黃酮類、糖類、多醇類、聚炔醇類、揮發(fā)油類、氨基酸類及有機(jī)酸類等，其中皂苷類為三七粉的主要化學(xué)成分。以三七總皂苷（Panax Notoginseng Saponins, PNS）為原料藥的中藥制劑，如血塞通注射液、三七總皂苷膠囊等，已經(jīng)成為目前中藥制劑中年銷售額最大的品種之一[7]。

2020 版藥典記載三七含量測定以人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1和三七皂苷R1為指標(biāo)[8]。研究發(fā)現(xiàn)三七粉中除人參皂苷Rg1[9]、人參皂苷Rb1[10]和三七皂苷R1[11]具有活血作用外，也有其他成分具有活血作用，如人參皂苷Rg3可延長活化部分凝血活酶時間（Activated Partial Thromboplastin Time, APTT），抑制二磷酸腺苷（Adenosine Diphosphate, ADP）誘導(dǎo)的血小板聚集[12]；槲皮素可延長全血凝血時間，具有抗凝作用，對已成型血栓可降低其質(zhì)量，促進(jìn)血栓溶解[13]。目前，針對三七粉活血作用的物質(zhì)基礎(chǔ)研究還比較分散，有必要進(jìn)一步開展系統(tǒng)地研究工作，明確其活血作用的質(zhì)量標(biāo)志物。本研究在前期網(wǎng)絡(luò)藥理和入血成分研究基礎(chǔ)上，對三七粉中十多種成分的活血作用進(jìn)行考察，探索三七粉基于活血作用的質(zhì)量標(biāo)志物。

1 實(shí)驗(yàn)材料

三七總皂苷（PNS）：天津藥物研究院制備，主要成分為人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1，純度＞70%。三七粉主要成分：人參皂苷Rh1（批號：R26N9F75983）、人參皂苷Re（批號：B04D9S76499）、槲皮素（批號：C09S8Y43412）、人參皂苷F2（批號：Z10A9X58128）、人參皂苷Rg1（批號：G16S10Y97436）、人參皂苷Rg3（批號：Z14J10X90607）、人參皂苷Rd（批號：Z09A9X67397）、人參皂苷Rb2（批號：P15O10F9498 3）、人參皂苷Rb1（批號：P19S10U98130）、人參皂苷Rb3（批 號：P05M10F87444）、人 參 皂 苷Rk1（批 號：B27J8S39859）、三七皂苷R1（批號：G22D9Y77958）、人參皂苷Rg2（批號：M07N10S102243）（批號：R05N10F10 2244）等實(shí)驗(yàn)樣品，均購自上海源葉生物科技有限公司。

試劑盒：凝血酶時間（Thrombin Time, TT）試劑盒（批號：031906A）、活化部分凝血活酶時間（APTT）試劑盒（批號：021908A）、凝血酶原時間（Prothrombin Time, PT）試劑盒（批號：011901B）、纖維蛋白原（Fibrinogen,FIB）試劑盒（批號：041908B），美德太平洋（天津）生物科技股份有限公司產(chǎn)品。

試劑：二磷酸腺苷（ADP）（批號：SLCB5611）、去氧腎 上腺 素（phenylephrine，PE）(批 號：MTBXK-CP)，sigma公司產(chǎn)品。

儀器：凝血因子分析儀（LG-Paker 1），北京普利生儀器有限公司；血小板聚集儀（型號：540VS），美國Chrono-log 公司；JZ301 型微張力換能器，北京新航興業(yè)科貿(mào)有限公司；MP-150 多導(dǎo)生理信號記錄儀、DA100C 通用放大器，Biopac 公司；HSS-1B 型離體器官恒溫裝置，成都儀器廠；低溫高速離心機(jī)，Thermo公司。

動物：家兔，品系為日本大耳白兔，普通級，日齡100-150 日，體質(zhì)量2.0-2.5 kg，購自北京隆安實(shí)驗(yàn)動物養(yǎng)殖中心，生產(chǎn)許可證號：SYXK（京）2019-0009。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 對凝血指標(biāo)的影響

凝血機(jī)制包括凝血和抗凝兩個方面，兩者間的動態(tài)平衡是正常機(jī)體維持體內(nèi)血液流動狀態(tài)和防止血液丟失的關(guān)鍵?？鼓龣C(jī)制減弱引起血栓形成是心腦血管發(fā)病的重要原因之一。凝血四項(xiàng)包括凝血酶時間（TT）、活化部分凝血活酶時間（APTT）、凝血酶原時間（PT）、纖維蛋白原（FIB），是監(jiān)控凝血系統(tǒng)的重要指標(biāo)。

實(shí)驗(yàn)取健康日本大耳白家兔6只，雄性，適應(yīng)性喂養(yǎng)7 天后，禁食過夜，頸總動脈取血，3.8%枸櫞酸鈉抗凝，全血與抗凝劑之比為9:1，3000 rmp 4℃離心10 min制備血漿。將兔血漿分為2 大組，第一大組分為空白對照組、水溶劑對照組和6個劑量的PNS組（蒸餾水溶解，終濃度為0.1、1、10、100、1000、5000 mg·L-1），共8個小組。第二大組分空白對照組、5%DMSO 溶劑對照組和13 個三七化學(xué)成分組，即人參皂苷Re 組、人參皂苷Rh1組、槲皮素組、人參皂苷Rg1組、人參皂苷F2組、人參皂苷Rg3組、人參皂苷Rb2組、人參皂苷Rd 組、人參皂苷Rb1組、人參皂苷Rk1組、人參皂苷Rb3組、三七皂苷R1組、人參皂苷Rg2組，每個化學(xué)成分組分別再設(shè)5個劑量組（每個化學(xué)成分樣品以5%DMSO溶解，終濃度分別為0.05，0.5，5，50，100μM），共67小組。

在兔血漿中分別加入實(shí)驗(yàn)樣品，溶劑對照組分別加入等體積蒸餾水或5%DMSO，空白對照組不做任何添加，37℃孵育15 min；采用凝固法，分別測定凝血酶時間（TT）、活化部分凝血活酶時間（APTT）、凝血酶原時間（PT）、纖維蛋白原（FIB）。

TT主要反映纖維蛋白原轉(zhuǎn)為纖維蛋白的時間，測定方法：取待測血漿200μL，37℃預(yù)溫3 min，加入TT試劑200μL，記錄凝固時間，即凝血酶時間（TT）。APTT 主要反映內(nèi)源性凝血系統(tǒng)狀況，測定方法：取待測血漿100μL，加入APTT 試劑100μL，37℃孵育5 min，再加入已預(yù)溫至37℃的氯化鈣（CaCl2）溶液100μL，記錄凝固時間，即活化部分凝血活酶時間（APTT）。PT 主要反映外源性凝血系統(tǒng)狀況，測定方法：取待測血漿100μL，37℃預(yù)溫3 min，加入已預(yù)溫至37℃的PT 試劑200μL，記錄凝固時間，即凝血酶原時間（TT）。纖維蛋白原（FIB）主要反映纖維蛋白原的含量，測定方法：取不同稀釋度定標(biāo)血漿各200μL，37℃預(yù)溫3 min，分別加入凝血酶溶液100μL，記錄凝固時間，制成標(biāo)準(zhǔn)曲線；待測血漿檢測操作同上，F(xiàn)IB 含量根據(jù)凝固時間由儀器在標(biāo)準(zhǔn)曲線上自動讀出。

2.2 對血小板聚集率的影響

血小板聚集是活化的血小板相互作用聚集成團(tuán)的特性。當(dāng)血流產(chǎn)生異常的剪切力時可以誘導(dǎo)血小板活化聚集，進(jìn)而促發(fā)血栓發(fā)生發(fā)展[14]；在創(chuàng)傷發(fā)生時，血小板迅速粘附于血管破損處，并聚集成團(tuán)形成止血栓子，發(fā)揮有益的止血作用；在高血壓、脂質(zhì)過氧化物損傷血管內(nèi)皮時，血小板聚集參與形成動脈粥樣硬化，因此，抗血小板治療成為腦血管病的常規(guī)治療[15]。

實(shí)驗(yàn)取健康日本大耳白家兔6只，雄性，適應(yīng)性喂養(yǎng)7 天后，禁食過夜，頸總動脈取血，3.8%枸櫞酸鈉抗凝，全血與抗凝劑之比為9:1，1000 rmp 4℃離心10min制備富含血小板血漿（PRP），3000rmp 4℃離心10min制備貧血小板血漿（PPP），以PPP 調(diào)PRP，使其血小板計(jì)數(shù)保持在1.8～2.2×106個/ml。分別取250 μL PRP加入不同比色杯中，分別加入PNS（終濃度為0.1、1、10、100、1000 mg·L-1）和人參皂苷Re、人參皂苷Rh1、槲皮素、人參皂苷Rg1、人參皂苷F2、人參皂苷Rg3、人參皂苷Rb2、人參皂苷Rd、人參皂苷Rb1、人參皂苷Rk1、人參皂苷Rb3、三七皂苷R1、人參皂苷Rg2實(shí)驗(yàn)樣品，每種實(shí) 驗(yàn)樣 品設(shè)5 個濃 度，分別 為0.05，0.5，5，50，100μM；2 個溶劑對照組分別加入等體積蒸餾水、5%DMSO。

按比濁法測定血小板聚集性，依次取上述比色杯，置于血小板聚集儀待測區(qū)37℃溫孵10 min。然后置于檢測區(qū)進(jìn)行檢測：以PPP調(diào)100%，PRP調(diào)零，在連續(xù)自動攪拌下加入誘導(dǎo)劑ADP，終濃度約為6μM，根據(jù)血小板聚集后對透光率的變化，儀器自動記錄血小板聚集率。

2.3 對血管平滑肌的影響

冠心病或缺血性腦病的一個重要發(fā)病原因和危險因素是冠狀動脈狹窄或腦血管狹窄。心腦血管狹窄可使經(jīng)過心腦血管的血流減少，進(jìn)而造成心肌細(xì)胞或腦細(xì)胞缺血死亡。常見的導(dǎo)致血管狹窄的病變包括血管壁有動脈硬化的斑塊或者血管壁增厚，又或者是血管壁里有夾層，導(dǎo)致血管壁總體變厚，而引起心腦血管變窄。擴(kuò)張血管是改善心腦供血的主要治療手段之一。

實(shí)驗(yàn)取健康日本大耳白家兔6只，雄性，適應(yīng)性喂養(yǎng)7 天后，禁食過夜，戊巴比妥鈉麻醉，頸總動脈放血后，迅速開胸取胸主動脈，置于預(yù)冷生理鹽水中剝離血管表面筋膜，用小眼科剪將主動脈剪成若干螺旋條，置于組織灌流系統(tǒng)37oC 恒溫水浴槽中，被37oC Krebs-Henseleit 營養(yǎng)液完全浸沒，營養(yǎng)液成分包括NaCl 119 mM，KCl 4.7 nM，MgCl21.2 mM，NaH2CO312.0 mM，葡萄糖11 mM，CaCl22.5mM；并給予95%O2及5%CO2飽和混合氣體；動脈條下端固定，上端鏈接張力換能器，由計(jì)算機(jī)采集張力變化曲線。

營養(yǎng)液中加入去氧腎上腺素，終濃度為0.5 mg·L-1，使動脈條收縮并保持收縮穩(wěn)定狀態(tài)后，分別加入人參皂苷Rh1、人參皂苷Re、槲皮素、人參皂苷Rg1、人參皂苷F2、人參皂苷Rg3、人參皂苷Rb1、人參皂苷Rd、人參皂苷Rb3、三七皂苷R1、人參皂苷Rk1、人參皂苷Rg2實(shí)驗(yàn)樣品，每種樣品先以DMSO 儲備液溶解，再以蒸餾水稀釋，配成3劑量的藥液，在營養(yǎng)液中的終濃度分別為1，5，25 μM；溶劑對照組為終濃度0.2%的DMSO；待曲線穩(wěn)定后，測量加藥前后曲線變化值，即張力變化值。正值代表血管收縮，而負(fù)值代表血管舒張。

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

所有數(shù)據(jù)均使用GraphPad Prism 5 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理，用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析（one-way analysis of variance, one-way ANOVA）Tukey法，P＜0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 對凝血因子的影響

3.1.1 對TT的影響

水溶劑組與空白對照組比較，對TT的作用無顯著差異（P＞0.05）。5%DMSO 溶劑組與空白對照組比較，可顯著延長TT（P＜0.01），結(jié)果見圖1（A）和（B）。以蒸餾水溶解的PNS 組與水溶劑組比較，在5×103mg·L-1濃度時可顯著延長TT（P＜0.01），結(jié)果見圖1（A）；以5%DMSO 溶解的單體成分實(shí)驗(yàn)藥物組與5%DMSO 溶劑對照組進(jìn)行比較，人參皂苷Rb2在50、100 μM，人參皂苷F2在50 μM，人參皂苷Rb3在100 μM，三七皂苷R1在5.0 μM，人參皂苷Rk1在50、100 μM，人參皂苷Rg2在50、100 μM 時可顯著延長TT（P＜0.05，），結(jié)果見圖1（B）。

圖1 PNS及各單體成分對TT 的影響。（A）PNS對TT的影響；（B）人參皂苷Rh1、人參皂苷Re、槲皮素等單體對TT的影響。

3.1.2 對APTT的影響

水溶劑組與空白對照組比較，對APTT 的作用無顯著差異（P＞0.05）。5%DMSO 溶劑組與空白對照組比較，可顯著延長APTT（P＜0.01），結(jié)果見圖2（A）和（B）。以蒸餾水溶解的PNS 組與水溶劑組比較，在1×103-5×103mg·L-1濃度時可顯著延長APTT（P＜0.05），結(jié)果見圖2（A）；以5%DMSO 溶解的單體成分實(shí)驗(yàn)藥物組與5%DMSO 溶劑對照組進(jìn)行比較，槲皮素在0.05、0.5 μM，人參皂苷F2在50、100 μM，人參皂苷Rd在100 μM，人參皂苷Rb2在50 μM，人參皂苷Rb1在0.05 μM，人參皂苷Rg2在5.0 μM 時可顯著延長APTT（P＜0.05），結(jié)果見圖2（B）。

圖2 PNS及各單體成分對APTT的影響。（A）PNS對APTT的影響；（B）人參皂苷Rh1、人參皂苷Re、槲皮素等單體對APTT的影響。

3.1.3 對PT的影響

水溶劑組與空白對照組比較，對PT的作用無顯著差異（P＞0.05）。5%DMSO 溶劑組與空白對照組比較，對PT 的作用亦無顯著差異（P＞0.05），結(jié)果見圖3（A）和（B）。以蒸餾水溶解的三七總皂苷組與水溶劑組比較，在5×103mg·L-1濃度時可顯著延長PT 凝固時間（P＜0.01），結(jié)果見圖3（A）。以5%DMSO 溶解的單體成分實(shí)驗(yàn)藥物組與5%DMSO 溶劑對照組比較，人參皂苷Re 在50μM，槲皮素在5.0μM，人參皂苷F2在0.05、0.5μM，人參皂苷Rb3在5.0μM 時可顯著延長PT（P＜0.05），結(jié)果見圖3（B）。

圖3 PNS及各單體成分對PT的影響.（A）PNS對PT的影響；（B）人參皂苷Rh1、人參皂苷Re、槲皮素等單體對PT的影響。

3.1.4 對FIB的影響

水溶劑組與空白對照組比較，可顯著增加FIB 的含量（P＜0.05）。5%DMSO 溶劑組與空白對照組比較，可顯著降低體系中FIB 的含量（P＜0.01），結(jié)果見圖4（A）和（B）。以蒸餾水溶解的三七總皂苷組與水溶劑組比較，可不同程度的降低FIB 含量，呈現(xiàn)劑量依賴性，1×103和5×103mg·L-1兩個劑量效果顯著（P＜0.05和P＜0.01），結(jié)果見圖4（A）。以5%DMSO 溶解的單體成分實(shí)驗(yàn)藥物組與5% DMSO 溶劑對照組比較，槲皮素在0.05 μM，人參皂苷Rg1在0.05 μM，人參皂苷F2在50 μM，人參皂苷Rg3在0.5 μM，人參皂苷Rb1在0.05 μM，人參皂苷Rb2在100 μM，人參皂苷Rb3在50、100 μM，人參皂苷Rg2在100 μM，三七皂苷R1在0.5、5.0 μM 時可顯著降低血漿FIB 含量（P＜0.05），結(jié)果見圖4（B）。

圖4 PNS和各單體成分對FIB的影響。（A）PNS對FIB的影響；（B）人參皂苷Rh1、人參皂苷Re、槲皮素等單體對FIB的影響。

3.2 對血小板聚集率的影響

觀察不同配藥溶劑對血小板聚集率的影響，發(fā)現(xiàn)水溶劑對照組血小板聚集率（%）為40.08±7.53，5%DMSO 溶劑對照組血小板聚集率（%）為35.00±10.16，兩者無顯著差異（P＞0.05），結(jié)果見圖5（A）和（B）。以蒸餾水溶解的三七總皂苷組與水溶劑組比較，1×103mg·L-1劑量時顯著降低ADP誘導(dǎo)的血小板聚集率（P＜0.01），結(jié)果見圖5（A）。以5%DMSO 溶解的單體成分實(shí)驗(yàn)藥物組與5% DMSO 溶劑組比較，人參皂苷Rh1在50、100 μM，人參皂苷F2在0.05 μM，人參皂苷Rg1在0.05-50 μM，人參皂苷Rg3在0.05、100 μM，人參皂苷Rd 在50 μM，人參皂苷Rb2在5.0-100 μM，人參皂苷Rb1在50、100 μM，人參皂苷Rg2在50 μM，三七皂苷R1在5.0-100 μM時血小板聚集率顯著降低（p＜0.05），結(jié)果見圖5（B）、（C）。

圖5 三七總皂苷和各單體成分對ADP誘導(dǎo)家兔血小板聚集的影響。（A）PNS對ADP誘導(dǎo)家兔血小板聚集的影響；（B）和（C）人參皂苷Rh1、人參皂苷Re、槲皮素等單體對ADP誘導(dǎo)家兔血小板聚集的影響。

3.3 對血管平滑肌的影響

與DMSO 溶劑對照組比較，人參皂苷Rh1在5、25μM 時可顯著舒張動脈血管條（P＜0.05，P＜0.01）；人參皂苷Rg3在25μM 時可顯著舒張動脈血管條（P＜0.05）；人參皂苷Rd 在1、5、25 μM 時可顯著舒張動脈血管條（P＜0.05）。人參皂苷Rk1在1、5、25 μM 時可顯著舒張動脈血管條（P＜0.05，P＜0.01）；三七皂苷R1在1、25μM 時可顯著舒張動脈血管條（P＜0.05）；人參皂苷Rg2在25 μM 時，可顯著舒張動脈血管條（P＜0.05），結(jié)果見圖6。

圖6 各單體成分對PE誘導(dǎo)離體家兔主動脈環(huán)收縮的影響

4 討論

三七粉活血作用廣泛應(yīng)用于各種血栓性疾病的治療中。李晨曦等觀察活血祛瘀湯（以當(dāng)歸、三七超微粉等為主要成分）與低分子肝素鈣聯(lián)合使用觀察對骨盆骨折術(shù)后凝血指標(biāo)的影響，選擇氣滯血瘀證型的骨盆骨折病例60例，依據(jù)隨機(jī)的原則將病例分為治療組和對照組各30例，在圍術(shù)期內(nèi)所有患者均給予相同的下肢深靜脈血栓（DVT）基礎(chǔ)預(yù)防干預(yù)，治療組在術(shù)后加服活血祛瘀湯，分別記錄術(shù)前、術(shù)后1 天、術(shù)后1周和2周的凝血指標(biāo)變化。結(jié)果發(fā)現(xiàn)活血祛瘀湯與低分子肝素鈣聯(lián)合使用干預(yù)骨盆骨折術(shù)后患者的凝血狀態(tài)，能夠延長（TT）、活化部分凝血活酶時間（APTT）、凝血酶原時間（PT），降低纖維蛋白原（FIB）含量，改善骨盆骨折術(shù)后早期凝血功能，聯(lián)用使用比單獨(dú)使用低分子肝素抗凝效果更好[16]。

三七粉化學(xué)成分類型多樣，主要有皂苷類、黃酮類、多糖類、氨基酸類等[17]。皂苷類化合物是三七粉主要的化學(xué)成分和有效成分[4]。劉雷等研究發(fā)現(xiàn)主要有效成分為三七總皂苷的注射用血栓通能夠?qū)δ?、二磷酸腺苷（ADP）以及膠原誘導(dǎo)的血小板聚集具有明顯的抑制作用，其作用機(jī)制可能與抑制血小板機(jī)械力離子通道Piezo1蛋白的活化并抑制Ca2+內(nèi)流相關(guān)[14,17]。

三七粉中皂苷類成分可分為原人參二醇型皂苷（protopanaxadiol） 、 原 人 參 三 醇 型 皂 苷（protopanaxatriol）、側(cè)鏈變化型皂苷及其他類型皂苷。王靖等將123 例患者隨機(jī)分為腦蛋白水解物組、三七通舒膠囊（主要成分人參三醇皂苷）組、聯(lián)合用藥組，每組41 例，分別給予相應(yīng)藥物，療程2 周。三七通舒膠囊組雙側(cè)腦血流速度中左側(cè)椎動脈（LVA）、左側(cè)椎動脈（RVA）、椎-基底動脈度（BA）升高（P＜0.05），血液流變學(xué)指標(biāo)中全血黏度（WBV）、血漿黏度（PV）水平降低（P＜0.05），內(nèi)皮素-1（ET-1）水平降低（P＜0.05），降鈣素基因相關(guān)肽（CGRP）升高（P＜0.05），說明三七通舒膠囊能擴(kuò)張血管，通暢血流，改善血管內(nèi)皮功能和血液流變學(xué)[18]。

除有效部位外，三七粉中的單體成分也有很多研究。陳重華等研究發(fā)現(xiàn)三七皂苷R1能顯著促進(jìn)或改善小鼠耳廓的微循環(huán)，亦可延長血漿復(fù)鈣時間[11]。方芳等研究發(fā)現(xiàn)三七皂苷R1可抑制AngⅡ誘導(dǎo)的血管平滑肌細(xì)胞增殖、遷移，可能是三七皂苷R1預(yù)防和治療動脈粥樣硬化及血管再狹窄等血管增生性疾病的作用機(jī)制之一[19]。尚不確定三七皂苷R1是否具有直接擴(kuò)血管作用。蔡婷等研究發(fā)現(xiàn)低濃度（40 μmol·L-1）三七皂苷R1可促進(jìn)血小板衍生生長因子BB（PDGF-BB）誘導(dǎo)血管平滑肌細(xì)胞（VSMC）增殖，高濃度（80 μmol·L-1和160 μmol·L-1）三七皂苷R1能抑制VSMC 增殖并誘導(dǎo)VSMC 發(fā)生凋亡。未見三七皂苷R1直接抑制血小板聚集的報道。本研究采用體外組織灌流方法發(fā)現(xiàn)三七皂苷R1能夠直接舒張動脈條，采用體外ADP誘導(dǎo)血小板聚集的方法發(fā)現(xiàn)三七皂苷R1具有抗血小板聚集的作用。

研究發(fā)現(xiàn)人參皂苷Rd 也能顯著促進(jìn)或改善小鼠耳廓的微循環(huán)，延長血漿復(fù)鈣時間[11]，未見人參皂苷Rd 抗血小板聚集的報道。Zhang Baobao 等研究發(fā)現(xiàn)口服人參皂苷Rd 能過逆轉(zhuǎn)尼古丁引起的血清一氧化氮（NO）減少和血管緊張素II（AngII）生成增強(qiáng)，HE 染色顯示主動脈內(nèi)皮細(xì)胞受到保護(hù)[21]。人參皂苷Rd 是否具有直接擴(kuò)血管作用尚需進(jìn)一步驗(yàn)證。本研究采用體外組織灌流方法發(fā)現(xiàn)人參皂苷Rd 具有直接擴(kuò)血管的作用，體外血小板聚集實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)三七皂苷Rd 具有抗血小板聚集的作用。人參皂苷Rb2的研究多集中在抗炎和抗氧化方面。Cho Woo Hyun 等研究發(fā)現(xiàn)人參皂苷Rb2能夠抑制大鼠呼吸機(jī)誘導(dǎo)肺損傷（VILI）產(chǎn)生的炎癥和氧化應(yīng)激反應(yīng)[22]。未見人參皂苷Rb2抗凝和抗血小板聚集的報道。本研究發(fā)現(xiàn)人參皂苷Rb2能夠延長TT、APTT，減少FIB含量，抑制血小板聚集。張然等研究發(fā)現(xiàn)人參皂苷Rbl可通過保護(hù)肝竇內(nèi)皮細(xì)胞，逆轉(zhuǎn)組織因子（TF）、組織型纖維蛋白酶原活化劑抑制物（PAI-1）的高表達(dá)及肝竇微環(huán)境的高凝及低纖溶狀態(tài)，有效預(yù)防肝竇靜脈阻塞綜合癥（HSOS）的發(fā)生[10]。表現(xiàn)出一定的纖溶作用，未見抗凝和抗血小板作用的報道。本研究發(fā)現(xiàn)人參皂苷Rb1能夠延長APTT，減少FIB含量，抑制血小板聚集。

C.T.Li 等研究發(fā)現(xiàn)人參皂苷Rg2均能顯著延長活化部分凝血活酶、凝血酶原和凝血酶時間[9]。未見人參皂苷Rg2擴(kuò)血管作用的報道。本研究通過體外離體實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)Rg2能夠直接舒張家兔動脈血管條。石耀輝研究發(fā)現(xiàn)人參皂苷Rb3能明顯降低心肌缺血再灌注損傷大鼠血漿前列環(huán)素（PGI2）含量，升高血漿PGI2含量及前列環(huán)素（PGI2）/血栓素（TXA2）比值（P＜0.05 或P＜0.01）[23]，具有抗血栓作用，但對凝血四項(xiàng)指標(biāo)的作用尚不明確。本研究發(fā)現(xiàn)人參皂苷Rb3可延長TT、PT，減少FIB 含量。周靜等研究發(fā)現(xiàn)人參皂苷F2可抑制3T3-L1前脂肪細(xì)胞增殖分化，可能通過在分化前期調(diào)控C/EBPβ 表達(dá)并抑制PPARγ、C/EBPα 表達(dá)水平而減少脂質(zhì)積累[24]。劉迪等研究發(fā)現(xiàn)人參皂苷F2預(yù)處理后能夠減少H2O2誘導(dǎo)凋亡細(xì)胞的LDH 釋放率、升高凋亡細(xì)胞的線粒體膜電位、保護(hù)線粒體膜免受損傷[25]。未見人參皂苷F2活血作用的報道，本研究發(fā)現(xiàn)人參皂苷F2可延長TT、APTT、PT，抗血小板聚集、擴(kuò)張血管。

本課題通過對三七粉中單體成分的研究新發(fā)現(xiàn)：人參皂苷Rb3可延長TT、PT，減少FIB 含量；人參皂苷Rd 可延長APTT，抑制血小板聚集；人參皂苷Rb1能夠延長APTT，減少FIB 含量，抑制血小板聚集；人參皂苷Rb2能夠延長TT、APTT，減少FIB 含量，抑制血小板聚集；人參皂苷F2能夠延長TT、APTT、PT，抗血小板聚集、舒張動脈條；三七皂苷R1能夠抗血小板聚集、舒張動脈條；人參皂苷Rg2、人參皂苷Rd 能夠舒張動脈條。本研究結(jié)果有助于更加系統(tǒng)地了解三七粉活血作用的物質(zhì)基礎(chǔ)。

綜上所述，三七粉活血作用表現(xiàn)在抗凝、抗血小板聚集、擴(kuò)血管等方面，人參皂苷F2、人參皂苷Rg2、人參皂苷Rg3、三七皂苷R1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Rb2、人參皂苷Rb3、人參皂苷Rd、人參皂苷Rg1、槲皮素等可能為三七活血作用的物質(zhì)基礎(chǔ)，可作為潛在的質(zhì)量標(biāo)志物。