• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    菟絲子飲片、水煎液和配方顆粒的HPLC 指紋圖譜相關(guān)性研究

    2022-04-26 07:53:36姚曉璇王瑜婷邱彩月何榮榮陳銘恩黎桃敏劉燎原
    關(guān)鍵詞:水煎液菟絲子綠原

    姚曉璇,王瑜婷,邱彩月,何榮榮,陳銘恩,黎桃敏,劉燎原

    (廣東一方制藥有限公司/廣東省中藥配方顆粒企業(yè)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,廣東佛山528244)

    菟絲子為旋花科植物南方菟絲子Cuscuta australisR.Br.或菟絲子Cuscuta chinensisLam.的干燥成熟種子。始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》,被列為上品。菟絲子性平,味辛、甘,具有補(bǔ)益肝腎、固精縮尿、安胎明目的功效[1?2]?,F(xiàn)代研究表明,菟絲子主要包括黃酮類、有機(jī)酸、多糖、木脂素類、氨基酸和生物堿等成分,其主要藥理作用有保肝、抗骨質(zhì)疏松、調(diào)節(jié)免疫、抗氧化、腫瘤、增強(qiáng)內(nèi)分泌系統(tǒng)功能、抑制黑色素合成等[3?4],具有良好的藥用價(jià)值。

    中藥配方顆粒是以中藥飲片為原料,經(jīng)水提、濃縮、干燥、制粒而成的可供中醫(yī)臨床調(diào)配使用的顆粒制劑[5],中藥配方顆粒是中藥湯劑的一種現(xiàn)代劑改形式,是中藥飲片的一種補(bǔ)充。中藥配方顆粒與中藥湯劑之間的差異來源于湯液濃縮、干燥過程中相關(guān)成分的物理遺失與化學(xué)變化[6]。目前,有關(guān)菟絲子藥材的化學(xué)成分測(cè)定和指紋圖譜研究較多[7?9],尚無對(duì)菟絲子及其制劑產(chǎn)品相關(guān)性研究的報(bào)道。本研究分別建立了菟絲子飲片、水煎液、配方顆粒的HPLC指紋圖譜,比較3者之間HPLC指紋圖譜的相關(guān)性和差異性,探討菟絲子配方顆粒制備過程中的化學(xué)成分轉(zhuǎn)化,確保顆粒劑與湯劑質(zhì)量的一致性,以期為菟絲子配方顆粒的質(zhì)量控制和臨床安全有效用藥提供參考。

    1 儀器與試藥

    1.1 儀器

    Waters Arc 型高效液相色譜儀(美國(guó)Waters 公司);XP26 型百萬分之一天平、ME204E 型萬分之一天平(瑞士METTLER TOLEDO 公司);Milli?Q Direct 型超純水系統(tǒng)(德國(guó)Merck 公司);SODA?12型噴霧干燥機(jī)(上海大川原干燥設(shè)備有限公司);LGS20 型干法制粒機(jī)(南京迦南科技有限公司);YRE?501 型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司);DLSB?5/20 型低溫冷卻液循環(huán)水泵(鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司);KQ?500DE 型數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。

    1.2 試藥

    綠原酸(批號(hào):110753?202018,純度96.1%)、金絲桃苷(批號(hào):111521?201809,純度94.9%)、異槲皮苷(批號(hào):111809?201804,純度97.2%)對(duì)照品均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院;隱綠原酸(批號(hào):DST210427?035,純度98.24%)對(duì)照品購(gòu)自成都樂美天醫(yī)藥科技有限公司;乙腈、甲醇為色譜純(德國(guó)Merck 公司),磷酸為色譜純(天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司),水為超純水,其余試劑均為分析純。

    16 批菟絲子藥材(樣品編號(hào)為S1-S16)經(jīng)廣東一方制藥有限公司魏梅主任藥師鑒定為正品,均為南方菟絲子Cuscuta australisR. Br.的干燥成熟種子,藥材產(chǎn)地信息見表1。16批菟絲子飲片(樣品編號(hào)為Y1-Y16)嚴(yán)格按照2020 年版《中國(guó)藥典》一部菟絲子項(xiàng)下飲片炮制規(guī)定進(jìn)行炮制[1];16 批菟絲子水煎液(樣品編號(hào)為T1-T16)嚴(yán)格按照《醫(yī)療機(jī)構(gòu)中藥煎藥室管理規(guī)范》相關(guān)要求進(jìn)行煎煮[10],取每批菟絲子的提取液,減壓濃縮,定容至100 mL,得樣品水煎液;16批菟絲子配方顆粒(樣品編號(hào)為P1-P16)由水煎液經(jīng)濃縮、干燥、制粒等步驟得到。

    表1 16批菟絲子藥材的來源信息Table 1 Source information of 16 batches of Cuscutae Semen

    2 方法與結(jié)果

    2.1 色譜條件[11]

    色譜柱:Xselect HSS T3(250 mm × 4.6 mm,5 μm);流動(dòng)相:乙腈(A)?0.1%磷酸溶液(B)梯度洗脫(0~30 min,7%~12%A;30~35 min,12%~15%A;35~55 min,15%A;55~80 min,15%~30%A;80~85 min,30%~93%A;85~90 min,93%A);流速:1.0 mL/min;柱溫:30 ℃;檢測(cè)波長(zhǎng):360 nm;進(jìn)樣量:5 μL。

    2.2 對(duì)照品溶液的制備

    分別取綠原酸、隱綠原酸、金絲桃苷、異槲皮苷對(duì)照品適量,精密稱定,加甲醇制成質(zhì)量濃度分別為78.42、62.20、58.27、56.86 μg/mL 的混合對(duì)照品溶液。

    2.3 供試品溶液的制備

    2.3.1 菟絲子飲片供試品溶液取菟絲子飲片粉末(過四號(hào)篩)約1.0 g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加入70%(體積分?jǐn)?shù),下同)甲醇50 mL,稱定質(zhì)量,加熱回流30 min,取出,放冷,再稱定質(zhì)量,用70%甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量,搖勻,濾過,取續(xù)濾液,即得飲片供試品溶液。

    2.3.2 菟絲子水煎液供試品溶液精密吸取混合均勻的菟絲子水煎液10 mL,置50 mL 量瓶中,加水5 mL,加甲醇定容至刻度,稱定質(zhì)量,超聲處理(300 W,45 kHz)30 min,取出,放冷,再稱定質(zhì)量,用70%甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量,搖勻,濾過,取續(xù)濾液,即得水煎液供試品溶液。

    2.3.2 菟絲子配方顆粒供試品溶液取菟絲子配方顆粒適量,研細(xì),取約0.2 g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加入70%甲醇25 mL,稱定質(zhì)量,超聲處理(300 W,45 kHz)30 min,取出,放冷,再稱定質(zhì)量,用70%甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量,搖勻,濾過,取續(xù)濾液,即得配方顆粒供試品溶液。

    2.4 方法學(xué)考察

    2.4.1 專屬性試驗(yàn)分別精密吸取空白溶劑、對(duì)照品溶液及供試品溶液,按“2.1”項(xiàng)色譜條件進(jìn)樣測(cè)定,結(jié)果見圖1??梢?,供試品溶液色譜在與對(duì)照品溶液色譜相應(yīng)的保留時(shí)間處具有相同的色譜峰,且空白溶劑無干擾,表明方法專屬性良好。

    圖1 專屬性試驗(yàn)HPLC色譜圖Figure 1 The HPLC chromatograms of specific test

    2.4.2 精密度試驗(yàn)精密吸取“2.2”項(xiàng)對(duì)照品溶液,按“2.1”項(xiàng)色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6 次,以5 號(hào)峰金絲桃苷為參照峰,計(jì)算得各共有峰相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積的RSD 范圍分別為0.15%~0.22%和0.23%~0.64%,表明儀器精密度良好。

    2.4.3 穩(wěn)定性試驗(yàn)取菟絲子飲片(編號(hào)Y16),精密稱定,按“2.3.1”項(xiàng)方法制備供試品溶液,分別于制備0、4、8、12、24、48 h 后按“2.1”項(xiàng)色譜條件進(jìn)樣測(cè)定,以5號(hào)峰金絲桃苷為參照峰,計(jì)算得各特征峰相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積的RSD 范圍分別為0.16%~1.21%和1.32%~2.57%,表明菟絲子飲片供試品溶液在48 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

    2.4.4 重復(fù)性試驗(yàn)取菟絲子飲片(編號(hào)Y16)6 份,精密稱定,按“2.3.1”項(xiàng)方法制備供試品溶液,按“2.1”項(xiàng)色譜條件進(jìn)樣測(cè)定。以5 號(hào)峰金絲桃苷為參照峰,計(jì)算得各特征峰相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積的RSD 范圍分別為0.10%~0.12% 和0.13%~2.20%,表明方法重復(fù)性良好。

    2.5 HPLC指紋圖譜的建立與相似度評(píng)價(jià)

    2.5.1 指紋圖譜的建立分別取16 批菟絲子飲片、水煎液和配方顆粒,按“2.3”項(xiàng)方法分別制備供試品溶液,按“2.1”項(xiàng)色譜條件進(jìn)樣測(cè)定,記錄色譜圖。采用國(guó)家藥典委員會(huì)頒布的“中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)2012 版”對(duì)色譜圖進(jìn)行匹配,確定菟絲子飲片、水煎液、配方顆粒均有8 個(gè)共有峰,如圖2-4 所示。通過與對(duì)照品圖譜對(duì)比,確定1 號(hào)峰為綠原酸,2 號(hào)峰為隱綠原酸,5 號(hào)峰為金絲桃苷,6號(hào)峰為異槲皮苷。

    圖2 16批菟絲子飲片的HPLC指紋圖譜疊加圖Figure 2 The HPLC fingerprints of 16 batches of Cuscutae Semen pieces

    2.5.2 相似度評(píng)價(jià)分別將16 批菟絲子飲片、水煎液、配方顆粒HPLC指紋圖譜導(dǎo)入“中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)2012 版”軟件,分別計(jì)算各批次菟絲子飲片、水煎液、配方顆粒HPLC指紋圖譜與其對(duì)照?qǐng)D譜的相似度,結(jié)果見表2。可見,16批菟絲子飲片、水煎液、配方顆粒HPLC指紋圖譜與其相應(yīng)對(duì)照指紋圖譜(R1、R2、R3)的相似度均大于0.900,表明不同批次菟絲子飲片、水煎液、配方顆粒的質(zhì)量較為穩(wěn)定。

    圖3 16批菟絲子水煎液的HPLC指紋圖譜疊加圖Figure 3 The HPLC fingerprints of 16 batches of Cuscutae Semen water decoction

    圖4 16批菟絲子配方顆粒的HPLC指紋圖譜疊加圖Figure 4 The HPLC fingerprints of 16 batches of Cuscutae Semen formula granules

    2.5.3 對(duì)照指紋圖譜的比較分別將16批菟絲子飲片、水煎液和配方顆粒指紋圖譜生成的對(duì)照指紋圖譜R1、R2 和R3(見圖5)導(dǎo)入“中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)2012版”軟件,結(jié)果顯示:與菟絲子飲片比較,菟絲子水煎液和配方顆粒的相似度分別為0.998 和0.997,菟絲子水煎液和配方顆粒指紋圖譜相似度為1.000,表明菟絲子飲片、水煎液與配方顆粒成分基本一致,菟絲子水煎液在提取、濃縮、干燥、制粒過程中,其成分種類無明顯變化。

    表2 16 批菟絲子飲片、水煎液和配方顆粒HPLC 指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)結(jié)果Table 2 Results of similarity analysis of 16 batches of Cuscu?tae Semen pieces,water decoction,formula granules

    圖5 菟絲子飲片對(duì)照指紋圖譜(R1)、水煎液對(duì)照指紋圖譜(R2)和配方顆粒對(duì)照指紋圖譜(R3)Figure 5 Reference fingerprints of Cuscutae Semen pieces,water decoction,formula granules by HPLC

    2.6 化學(xué)模式識(shí)別研究

    2.6.1 共有峰相關(guān)性分析采用SPSS 26.0 軟件,以16批菟絲子飲片、水煎液和配方顆粒共48個(gè)樣品各特征峰的“峰面積占比”值(各特征峰峰面積占特征峰總面積的比例)為變量進(jìn)行皮爾遜相關(guān)性分析,結(jié)果見表3??梢姡私z子飲片與水煎液或配方顆粒比較,除色譜峰峰3 外,菟絲子飲片、水煎液及其配方顆粒的7 個(gè)共有峰均具有顯著的正相關(guān)性;菟絲子水煎液與配方顆粒比較,8 個(gè)峰均具有極顯著的正相關(guān)性。

    表3 16批菟絲子飲片、水煎液、配方顆粒指紋圖譜共有峰的相關(guān)性分析結(jié)果Table 3 Correlation analysis results of common peaks of Cuscu?tae Semen pieces,water decoction and formula granules

    2.6.2 聚類分析采用SPSS 26.0 軟件,以16 批菟絲子飲片、水煎液和配方顆粒共48個(gè)樣品各特征峰面積為變量進(jìn)行聚類分析[12],結(jié)果見圖6??梢姡?dāng)距離為10 時(shí),48 批樣品可以分為4 類,Y6-Y8、T1-T16、P1-P4、P6-P16 聚為一類,Y3-Y4、Y9-Y16 聚為一類,Y2、Y5、P5 聚為一類,Y1 單獨(dú)聚為一類。表明甘肅與黑龍江產(chǎn)地與其他2個(gè)產(chǎn)地的菟絲子飲片存在差異,菟絲子水煎液與配方顆粒之間無明顯差異,可聚為一類。

    2.6.3 主成分分析(PCA) 采用SPSS 26.0 軟件,對(duì)16批菟絲子飲片、水煎液和配方顆粒共48個(gè)樣品各特征峰面積的標(biāo)準(zhǔn)化值(Xi)進(jìn)行主成分分析,主成分結(jié)果以特征值>1 為標(biāo)準(zhǔn)提取得到2 個(gè)主成分,計(jì)算得特征值和方差貢獻(xiàn)率見表4,主成分因子載荷矩陣見表5。由結(jié)果可知,前2個(gè)主成分累積貢獻(xiàn)率為78.80%,表明提取的2 個(gè)主成分能反映菟絲子指紋圖譜的大部分信息。主成分1 的特征值為3.958,方差貢獻(xiàn)率為49.48%,載荷較高的峰有綠原酸、峰4、金絲桃苷、異槲皮苷、峰7 和峰8,表明這6 個(gè)峰主要反映主成分1的信息;主成分2的特征值為2.345,方差貢獻(xiàn)率為29.32%,載荷較高的峰有隱綠原酸、峰3,表明這2個(gè)峰主要反映主成分2的信息。

    表4 菟絲子飲片、水煎液和配方顆粒主成分分析特征值及方差貢獻(xiàn)率Table 4 Characteristic value and variance contribution rate of Cuscutae Semen pieces,water decoction,formula granules

    表5 菟絲子飲片、水煎液和配方顆粒主成分因子載荷矩陣Table 5 Factors loading matrix of Cuscutae Semen pieces,water decoction,formula granules

    圖7 菟絲子飲片、水煎液和配方顆粒HPLC 指紋圖譜主成分得分圖Figure 7 PCA Score plot of principal component analysis of Cuscutae Semen pieces,water decoction,formula granules

    2.6.4 正交偏最小二乘判別分析(OPLS?DA) 采用SIMCA 14.1 軟件,以16 批菟絲子飲片、水煎液和配方顆粒共48 個(gè)樣品各特征峰峰面積為變量進(jìn)行OPLS?DA 分析,結(jié)果見圖8-9。由模型參數(shù)可知,數(shù)據(jù)矩陣的解釋率參數(shù)R2X(cum)=0.900,模型區(qū)分參數(shù)R2Y(cum)=0.702,模型預(yù)測(cè)參數(shù)Q2=0.651,均>0.500,表明該數(shù)學(xué)模型穩(wěn)定可靠[15?16]。48 個(gè)樣品可分成3 類。以VIP 值>1 為提取標(biāo)準(zhǔn),得到峰3、金絲桃苷、峰4是影響分類的主要標(biāo)志性成分。

    圖8 菟絲子飲片、水煎液和配方顆粒HPLC 指紋圖譜OPLS?DA得分圖Figure 8 OPLS?DA Score plot of Cuscutae Semen pieces,waterdecoction,formula granules

    3 討論

    中藥配方顆粒既保留了傳統(tǒng)中醫(yī)藥辨證論治、復(fù)方配伍、隨證加減的優(yōu)勢(shì)和特色,同時(shí)彌補(bǔ)了傳統(tǒng)中藥湯劑煎煮費(fèi)時(shí)、儲(chǔ)存攜帶不便等不足,相比中藥飲片具有更高的附加值,更能體現(xiàn)中藥用藥的現(xiàn)代化、規(guī)范化和標(biāo)準(zhǔn)化,是對(duì)傳統(tǒng)中藥的重要?jiǎng)?chuàng)新[17]。目前中藥配方顆粒與中藥飲片水煎液的成分對(duì)比研究,大多以單個(gè)指標(biāo)成分含量進(jìn)行比較,整體成分比較的研究較少,不能全面反映中藥質(zhì)量水平。中藥指紋圖譜是中藥整體性的化學(xué)表征,可以直觀地反映制備工藝的穩(wěn)定性和配方顆粒的質(zhì)量,是中藥配方顆粒進(jìn)行質(zhì)量控制的重要方法[18]。

    圖9 菟絲子飲片、水煎液和配方顆粒HPLC 指紋圖譜VIP值Figure 9 Result of VIP of Cuscutae Semen pieces,water decoc?tion,formula granules

    本文建立的菟絲子飲片、水煎液和配方顆粒HPLC指紋圖譜及分析方法共確定了8個(gè)共有峰,并指認(rèn)了其中4個(gè)共有峰分別為綠原酸、隱綠原酸、金絲桃苷和異槲皮苷。相似度評(píng)價(jià)結(jié)果顯示,16 批菟絲子飲片、水煎液和配方顆粒均與相應(yīng)的對(duì)照指紋圖譜的相似度較高,表明不同批次的菟絲子整體的化學(xué)成分具有較好的一致性;水煎液和配方顆粒的制備工藝穩(wěn)定。散點(diǎn)圖中點(diǎn)與點(diǎn)之間的距離代表各樣品之間存在的差異程度[19]。CA、PCA和OPLS?DA結(jié)果顯示,不同批次菟絲子飲片較為分散,不同批次水煎液、配方顆粒之間較為緊密,表明經(jīng)過水煎煮后菟絲子中各類化學(xué)成分具有較好的一致性;飲片與水煎液、配方顆粒之間的差異較大,可能是由于菟絲子中的熱敏性成分(如綠原酸)經(jīng)過煎煮后含量發(fā)生變化;水煎液和配方顆粒之間的關(guān)系較為緊密,差異較小,表明菟絲子從水煎液到配方顆粒的制備過程中各類化學(xué)成分得到了較好地保留。由皮爾遜相關(guān)性分析可得,除峰3 外,其他7 個(gè)峰均具有顯著正相關(guān)性。該方法能較好地反映三者的相關(guān)性及差異性,可為菟絲子配方顆粒的生產(chǎn)過程和質(zhì)量控制提供依據(jù)。

    猜你喜歡
    水煎液菟絲子綠原
    Las semillas de cuscuta y la lisimaquia
    蔓三七葉中分離綠原酸和異綠原酸及其抗氧化活性研究
    綠原酸對(duì)3T3-L1前脂肪細(xì)胞分化的抑制作用
    中成藥(2018年11期)2018-11-24 02:56:46
    男人的護(hù)腰好物——菟絲子茶
    補(bǔ)陽養(yǎng)陰良藥菟絲子
    玉屏風(fēng)散水煎液HPLC指紋圖譜的建立及9種成分測(cè)定
    中成藥(2017年12期)2018-01-19 02:06:43
    3種補(bǔ)骨脂炮制品水煎液中4種成分含量的比較
    中成藥(2017年9期)2017-12-19 13:34:41
    金銀花中綠原酸含量不確定度的評(píng)定
    中成藥(2017年10期)2017-11-16 00:50:42
    菟絲子在男性不育癥中的應(yīng)用
    炙甘草水煎液的HPLC-MS分析
    中成藥(2014年10期)2014-02-28 22:29:25
    国产三级在线视频| 日韩有码中文字幕| 婷婷丁香在线五月| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 麻豆成人av在线观看| 婷婷精品国产亚洲av| 国产老妇女一区| 免费在线观看影片大全网站| 欧美+亚洲+日韩+国产| 国产男靠女视频免费网站| 久久精品久久久久久噜噜老黄 | 成人亚洲精品av一区二区| 人妻久久中文字幕网| av在线老鸭窝| 国产一级毛片七仙女欲春2| 无遮挡黄片免费观看| 十八禁网站免费在线| 日韩高清综合在线| 精品久久久久久久久久免费视频| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 我的女老师完整版在线观看| 免费人成视频x8x8入口观看| 久久伊人香网站| 国产免费男女视频| 无遮挡黄片免费观看| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 国产美女午夜福利| 亚洲无线观看免费| 精品人妻视频免费看| 中文字幕熟女人妻在线| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 成年版毛片免费区| 91麻豆精品激情在线观看国产| 久久亚洲真实| 真实男女啪啪啪动态图| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 淫秽高清视频在线观看| 国产精品伦人一区二区| 网址你懂的国产日韩在线| eeuss影院久久| 国产伦人伦偷精品视频| 久久草成人影院| 一本综合久久免费| 中文字幕人成人乱码亚洲影| 中国美女看黄片| 日韩欧美在线乱码| 久久久久久久亚洲中文字幕 | 少妇被粗大猛烈的视频| 一个人免费在线观看电影| 99热这里只有是精品在线观看 | 亚洲精华国产精华精| 校园春色视频在线观看| 成年版毛片免费区| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 亚洲av熟女| 欧美成人免费av一区二区三区| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 日韩欧美精品v在线| 欧美性感艳星| 亚洲国产精品久久男人天堂| 国内精品美女久久久久久| 天堂动漫精品| 无人区码免费观看不卡| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 少妇人妻一区二区三区视频| 嫩草影院入口| 久久久精品大字幕| 久久精品人妻少妇| 日本a在线网址| 国产v大片淫在线免费观看| 国产成+人综合+亚洲专区| 亚洲欧美日韩无卡精品| 欧美成人a在线观看| 午夜福利成人在线免费观看| 免费av观看视频| 午夜福利在线在线| 最近中文字幕高清免费大全6 | 国产在视频线在精品| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 变态另类丝袜制服| 欧美黄色淫秽网站| 一级黄色大片毛片| 国产成人福利小说| 国内精品久久久久久久电影| 老司机深夜福利视频在线观看| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区 | 激情在线观看视频在线高清| 99热只有精品国产| 亚洲欧美激情综合另类| .国产精品久久| 我的女老师完整版在线观看| 一进一出抽搐动态| 免费人成视频x8x8入口观看| 中文字幕久久专区| 无遮挡黄片免费观看| 两个人视频免费观看高清| 亚洲人成网站在线播| 国产精品98久久久久久宅男小说| 亚洲熟妇熟女久久| 国产日本99.免费观看| 欧美+日韩+精品| www日本黄色视频网| 岛国在线免费视频观看| 两人在一起打扑克的视频| av专区在线播放| 国产精品影院久久| 精品久久久久久久末码| 高潮久久久久久久久久久不卡| 色哟哟哟哟哟哟| 国产一区二区激情短视频| 亚洲人成伊人成综合网2020| 少妇熟女aⅴ在线视频| 黄色女人牲交| 欧美日韩福利视频一区二区| 国产激情偷乱视频一区二区| 欧美日韩黄片免| 国产一区二区在线av高清观看| 午夜激情福利司机影院| 成人高潮视频无遮挡免费网站| av欧美777| 99riav亚洲国产免费| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 久久精品人妻少妇| 男女视频在线观看网站免费| 高潮久久久久久久久久久不卡| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 草草在线视频免费看| 性色avwww在线观看| 免费在线观看日本一区| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 免费搜索国产男女视频| 国内精品久久久久精免费| 久久精品人妻少妇| 亚洲精华国产精华精| 欧美一级a爱片免费观看看| 在线天堂最新版资源| www.色视频.com| 成年人黄色毛片网站| 赤兔流量卡办理| 日韩成人在线观看一区二区三区| 毛片女人毛片| 国产午夜精品论理片| eeuss影院久久| 久久久久九九精品影院| 久久久久免费精品人妻一区二区| 国产精品av视频在线免费观看| 国产精品久久视频播放| 极品教师在线视频| 久久精品91蜜桃| 久久精品综合一区二区三区| 99热这里只有精品一区| 身体一侧抽搐| 岛国在线免费视频观看| 美女被艹到高潮喷水动态| 亚洲乱码一区二区免费版| 丝袜美腿在线中文| 精品国内亚洲2022精品成人| 午夜福利欧美成人| 亚洲人成电影免费在线| 成年版毛片免费区| 国产精品爽爽va在线观看网站| 色综合欧美亚洲国产小说| 欧美区成人在线视频| 精品久久久久久久久av| 国产成人啪精品午夜网站| 不卡一级毛片| 观看美女的网站| 99久久成人亚洲精品观看| 悠悠久久av| 亚洲av一区综合| 久久久久精品国产欧美久久久| 国产爱豆传媒在线观看| 最近最新免费中文字幕在线| 欧美高清成人免费视频www| 男女下面进入的视频免费午夜| 日本一二三区视频观看| 日本熟妇午夜| 国产一区二区在线av高清观看| 久久草成人影院| 亚洲国产高清在线一区二区三| 欧美性猛交黑人性爽| 老司机福利观看| 精品福利观看| 亚州av有码| 两人在一起打扑克的视频| av天堂中文字幕网| 国产精品女同一区二区软件 | 国产黄片美女视频| 国产精品一区二区三区四区久久| 欧美日韩乱码在线| 亚洲人成电影免费在线| 真人一进一出gif抽搐免费| 久久久久久大精品| 免费看美女性在线毛片视频| 最后的刺客免费高清国语| 最新在线观看一区二区三区| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 国产一级毛片七仙女欲春2| 国产精品av视频在线免费观看| 久久久久久久精品吃奶| 男人和女人高潮做爰伦理| 欧美乱妇无乱码| 中出人妻视频一区二区| 天堂影院成人在线观看| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看| 国产极品精品免费视频能看的| 国产精品av视频在线免费观看| 我要搜黄色片| 亚洲欧美激情综合另类| 国产探花在线观看一区二区| .国产精品久久| 久久亚洲精品不卡| 偷拍熟女少妇极品色| 在线看三级毛片| 老师上课跳d突然被开到最大视频 久久午夜综合久久蜜桃 | 国产综合懂色| 国语自产精品视频在线第100页| 亚洲欧美日韩无卡精品| 91在线精品国自产拍蜜月| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 国产精品一区二区三区四区免费观看 | 国产伦一二天堂av在线观看| 长腿黑丝高跟| 在线播放国产精品三级| 午夜免费成人在线视频| 午夜精品久久久久久毛片777| 少妇高潮的动态图| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 成人特级av手机在线观看| 久久久国产成人精品二区| 熟女电影av网| 欧美黑人巨大hd| 午夜日韩欧美国产| 香蕉av资源在线| 热99re8久久精品国产| 国语自产精品视频在线第100页| 久久久久久大精品| 亚洲在线自拍视频| 亚洲激情在线av| 女人被狂操c到高潮| 不卡一级毛片| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 亚洲无线观看免费| 亚洲无线在线观看| 欧美最黄视频在线播放免费| 亚洲片人在线观看| 如何舔出高潮| 亚洲美女黄片视频| 亚洲欧美清纯卡通| 看片在线看免费视频| 男女下面进入的视频免费午夜| 热99re8久久精品国产| 中文亚洲av片在线观看爽| 一级毛片久久久久久久久女| 成人精品一区二区免费| 亚洲av成人av| 亚洲人成网站高清观看| 91麻豆精品激情在线观看国产| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 一区二区三区高清视频在线| 午夜免费激情av| 老司机深夜福利视频在线观看| 精品久久久久久久久av| 久久久久精品国产欧美久久久| 午夜福利18| 国产亚洲精品久久久com| 99久久九九国产精品国产免费| a级毛片免费高清观看在线播放| 欧美国产日韩亚洲一区| 久久人人精品亚洲av| 成人av在线播放网站| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| av在线天堂中文字幕| 怎么达到女性高潮| 亚洲av美国av| 最近最新中文字幕大全电影3| 精品久久久久久久久亚洲 | 免费一级毛片在线播放高清视频| 日本精品一区二区三区蜜桃| 一本精品99久久精品77| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 色视频www国产| 91久久精品电影网| 午夜精品在线福利| 日本黄色视频三级网站网址| 精品久久久久久久末码| 国产精品98久久久久久宅男小说| 免费人成视频x8x8入口观看| 黄色一级大片看看| 69人妻影院| 99久久99久久久精品蜜桃| www.999成人在线观看| 亚洲美女搞黄在线观看 | 午夜福利高清视频| 真人一进一出gif抽搐免费| 在线a可以看的网站| 欧美成人性av电影在线观看| 9191精品国产免费久久| 露出奶头的视频| 国产色婷婷99| 亚洲自偷自拍三级| av黄色大香蕉| 他把我摸到了高潮在线观看| 国产av一区在线观看免费| 亚洲成人中文字幕在线播放| 国产成人欧美在线观看| 亚洲自拍偷在线| 欧美黑人巨大hd| 麻豆一二三区av精品| 亚洲精品色激情综合| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 成人三级黄色视频| 免费在线观看成人毛片| 亚洲 国产 在线| 国产欧美日韩一区二区精品| 亚洲一区二区三区色噜噜| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 成年版毛片免费区| 性插视频无遮挡在线免费观看| 免费看光身美女| 欧美一区二区亚洲| 麻豆一二三区av精品| 亚洲av成人av| 看免费av毛片| 亚洲内射少妇av| 欧美一级a爱片免费观看看| 国产精品一及| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 国产伦精品一区二区三区视频9| 亚洲av不卡在线观看| 国产野战对白在线观看| 欧美黄色淫秽网站| 亚洲精品日韩av片在线观看| 国产单亲对白刺激| 五月伊人婷婷丁香| 男人狂女人下面高潮的视频| 精华霜和精华液先用哪个| 亚洲成a人片在线一区二区| 91午夜精品亚洲一区二区三区 | 久久伊人香网站| 日韩欧美精品v在线| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 国产精品一区二区性色av| 国产精华一区二区三区| 在线观看66精品国产| 欧美黄色片欧美黄色片| 久久性视频一级片| 高清在线国产一区| 三级国产精品欧美在线观看| 90打野战视频偷拍视频| 老司机福利观看| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 男女做爰动态图高潮gif福利片| 久久99热6这里只有精品| 一进一出抽搐gif免费好疼| 最近在线观看免费完整版| 成年女人看的毛片在线观看| 亚洲av免费高清在线观看| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 1024手机看黄色片| 成人毛片a级毛片在线播放| 麻豆国产av国片精品| 国产一级毛片七仙女欲春2| 毛片女人毛片| 亚洲成人久久性| 精品一区二区三区视频在线| 日韩免费av在线播放| 精品欧美国产一区二区三| 日韩中文字幕欧美一区二区| 好男人在线观看高清免费视频| 999久久久精品免费观看国产| 久久九九热精品免费| 久久精品91蜜桃| 国产亚洲精品久久久com| 亚洲精品在线美女| 日韩有码中文字幕| 午夜福利在线在线| 国产成人欧美在线观看| 男女下面进入的视频免费午夜| 欧美另类亚洲清纯唯美| 久久这里只有精品中国| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 我的女老师完整版在线观看| 又爽又黄无遮挡网站| 在线观看av片永久免费下载| 老司机午夜十八禁免费视频| 亚洲美女黄片视频| 欧美极品一区二区三区四区| 久久这里只有精品中国| 九色国产91popny在线| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 国产单亲对白刺激| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 亚洲av第一区精品v没综合| 99热这里只有是精品50| 精品久久久久久久久亚洲 | a在线观看视频网站| 免费av不卡在线播放| 一边摸一边抽搐一进一小说| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 99在线视频只有这里精品首页| 成人av一区二区三区在线看| 免费在线观看亚洲国产| 一级a爱片免费观看的视频| 国产单亲对白刺激| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 精品人妻一区二区三区麻豆 | 欧美日韩黄片免| 精品一区二区三区视频在线| 国产精品影院久久| 欧美成人免费av一区二区三区| 午夜a级毛片| 久久久久精品国产欧美久久久| 黄片小视频在线播放| 久久人妻av系列| 免费高清视频大片| 少妇的逼水好多| 美女xxoo啪啪120秒动态图 | 在现免费观看毛片| 大型黄色视频在线免费观看| 桃色一区二区三区在线观看| 国产一区二区在线观看日韩| 乱码一卡2卡4卡精品| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 麻豆一二三区av精品| 俄罗斯特黄特色一大片| 白带黄色成豆腐渣| 久久九九热精品免费| 一进一出抽搐gif免费好疼| x7x7x7水蜜桃| 亚洲精品成人久久久久久| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 人妻夜夜爽99麻豆av| 精品免费久久久久久久清纯| 久久久国产成人精品二区| 一区二区三区高清视频在线| 一级毛片久久久久久久久女| 国产色婷婷99| 一进一出好大好爽视频| 91麻豆av在线| 亚洲美女黄片视频| 亚洲人成伊人成综合网2020| 好男人电影高清在线观看| 日本一二三区视频观看| 亚洲av二区三区四区| 国产高清有码在线观看视频| netflix在线观看网站| 久久久久久久午夜电影| 男女那种视频在线观看| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 亚洲男人的天堂狠狠| 精华霜和精华液先用哪个| 亚洲人与动物交配视频| 国产午夜福利久久久久久| 欧美日韩乱码在线| 国产探花在线观看一区二区| 一本精品99久久精品77| 亚洲av免费在线观看| 成人美女网站在线观看视频| 国产91精品成人一区二区三区| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 99视频精品全部免费 在线| 日韩人妻高清精品专区| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 91在线观看av| 久久久久久大精品| 9191精品国产免费久久| 久久久久久久午夜电影| 午夜视频国产福利| 日韩欧美三级三区| 国产综合懂色| 免费av毛片视频| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 欧美日本亚洲视频在线播放| 久久九九热精品免费| 国产老妇女一区| 91久久精品国产一区二区成人| 国产伦在线观看视频一区| 丰满乱子伦码专区| 欧美潮喷喷水| www.999成人在线观看| 国产在线精品亚洲第一网站| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 欧美另类亚洲清纯唯美| 精华霜和精华液先用哪个| 夜夜夜夜夜久久久久| 色哟哟哟哟哟哟| 成人午夜高清在线视频| 99久久99久久久精品蜜桃| 亚洲av成人av| 日韩欧美在线二视频| 美女免费视频网站| 亚洲精品456在线播放app | 精品人妻1区二区| 国产美女午夜福利| 欧美区成人在线视频| 一个人观看的视频www高清免费观看| 在线国产一区二区在线| 亚洲熟妇熟女久久| 欧美最黄视频在线播放免费| 亚洲最大成人av| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 日韩av在线大香蕉| 亚洲经典国产精华液单 | 国语自产精品视频在线第100页| 日本a在线网址| 国产精品乱码一区二三区的特点| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 欧美高清成人免费视频www| www.色视频.com| 久久99热6这里只有精品| 久久久久久九九精品二区国产| 男人的好看免费观看在线视频| 免费无遮挡裸体视频| 成人午夜高清在线视频| 欧美精品啪啪一区二区三区| 亚洲无线在线观看| 丁香六月欧美| 九色成人免费人妻av| 成人一区二区视频在线观看| 哪里可以看免费的av片| 日日夜夜操网爽| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 国产激情偷乱视频一区二区| a级毛片免费高清观看在线播放| 看黄色毛片网站| 亚洲最大成人av| 成人永久免费在线观看视频| 欧美日韩乱码在线| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 69av精品久久久久久| 一个人看的www免费观看视频| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| av天堂中文字幕网| 桃红色精品国产亚洲av| 麻豆久久精品国产亚洲av| 成人性生交大片免费视频hd| 91字幕亚洲| 色视频www国产| 亚洲精品成人久久久久久| 亚洲人成网站在线播| 国产免费av片在线观看野外av| av黄色大香蕉| 免费电影在线观看免费观看| 老司机午夜福利在线观看视频| 美女免费视频网站| 亚洲成a人片在线一区二区| 成人国产一区最新在线观看| 国产精品嫩草影院av在线观看 | 熟女电影av网| 精品无人区乱码1区二区| 亚洲欧美日韩无卡精品| 老司机午夜福利在线观看视频| 国产三级在线视频| 日本黄色片子视频| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 51国产日韩欧美| av中文乱码字幕在线| 国产成人欧美在线观看| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 中出人妻视频一区二区| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 免费看日本二区| 91av网一区二区| 午夜福利成人在线免费观看| 少妇被粗大猛烈的视频| 精品午夜福利视频在线观看一区| 我的女老师完整版在线观看| 国产精品99久久久久久久久| 久久久国产成人免费| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 中文字幕av在线有码专区| www.www免费av| 波多野结衣高清无吗| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 欧美黑人欧美精品刺激| 精品久久久久久久久久免费视频| 18禁在线播放成人免费| 国产一区二区三区视频了| 色综合欧美亚洲国产小说| 色综合站精品国产| 在线观看免费视频日本深夜| 一级av片app| 精品久久国产蜜桃| 小说图片视频综合网站| 国产单亲对白刺激| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 日本成人三级电影网站| 最新在线观看一区二区三区| 长腿黑丝高跟| 婷婷精品国产亚洲av| 色视频www国产| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 黄色日韩在线| 最新在线观看一区二区三区| 亚洲熟妇熟女久久| 日本成人三级电影网站| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 色综合站精品国产| 久久精品91蜜桃| 精品99又大又爽又粗少妇毛片 | 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 欧美黄色片欧美黄色片| 少妇高潮的动态图| 国产日本99.免费观看| 欧美精品国产亚洲| av福利片在线观看| 国产成人欧美在线观看| 我的女老师完整版在线观看| 成人精品一区二区免费| 91在线精品国自产拍蜜月| 国产毛片a区久久久久| 一边摸一边抽搐一进一小说| 永久网站在线| 99精品久久久久人妻精品|