白石湯對(duì)腹瀉型腸易激綜合征大鼠5-羥色胺轉(zhuǎn)運(yùn)體（SERT）和腸道菌群的影響

王倩倩，田盼盼，徐陸周

（南京中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，江蘇 南京 210029）

腹瀉型腸易激綜合征（diarrhea-predominant irritable bowel syndrome，IBS-D）以腹痛、腹瀉為主要臨床癥狀，是最常見的腸易激綜合征（irritable bowel syndrome，IBS）亞型［1］。大量研究顯示，IBS-D是由多種病因和發(fā)病機(jī)制共同作用的結(jié)果［2-3］，其中腦-腸-微生物軸功能異常和內(nèi)臟高敏感性是IBS-D的主要發(fā)病機(jī)制。腸道微生物和腦腸軸雙向交流，稱為“腦-腸-微生物軸”（brain-gut-microbiome axis，BGMA）［4-7］。5-羥色胺（5-hydroxytryptamine，5-HT）作為神經(jīng)遞質(zhì)，在腦-腸-微生物軸的信號(hào)通路中可引起腸道運(yùn)動(dòng)性改變和內(nèi)臟高敏感性，導(dǎo)致IBS-D的發(fā)生。5-羥色胺轉(zhuǎn)運(yùn)體（serotonin transporter，SERT）通過(guò)將5-HT從固有層的間隙空間清除到負(fù)責(zé)分解代謝的腸黏膜細(xì)胞和突觸前神經(jīng)元中，在5-HT 失活中發(fā)揮著不可替代的作用［8］。研究顯示，IBS-D 患者和健康對(duì)照組之間SERT 的表達(dá)差異提示SERT 在IBS-D 的發(fā)病中起重要作用［9］。腸道菌群通過(guò)神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫網(wǎng)絡(luò)（neuro-endocrine-immune，NEI）調(diào)控方式整合到腦-腸-微生物軸互動(dòng)框架中，而且腸道菌群失調(diào)是IBS發(fā)病機(jī)制之一，因此，腸道菌群改變誘發(fā)IBS-D的作用機(jī)制受到了廣泛關(guān)注。

前期臨床研究和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明，白石湯對(duì)于IBS-D 有明顯的治療作用［10-11］，本研究基于BGMA，從SERT 和腸道菌群變化的角度探討白石湯治療IBS-D的作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

雄性SD大鼠40只，體質(zhì)量（180±20）g，購(gòu)自遼寧長(zhǎng)生生物技術(shù)股份有限公司，合格證號(hào)：SCXK（遼）2020-0001。大鼠飼養(yǎng)于江蘇省中醫(yī)院藥理實(shí)驗(yàn)室，清潔級(jí)環(huán)境動(dòng)物籠具中，每2 d 清洗、消毒籠具1 次并更換墊料，室溫20～25 ℃。本實(shí)驗(yàn)已通過(guò)南京中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究倫理審查，倫理編號(hào)：2021DW-30-02。

1.2 實(shí)驗(yàn)藥品

白石湯處方：麩炒白術(shù)20 g，石菖蒲10 g，肉豆蔻10 g，地榆15 g，仙鶴草15 g 和烏梅6 g，均購(gòu)自江蘇省中醫(yī)院中藥房；匹維溴銨片（50 mg × 15 片，國(guó)藥準(zhǔn)字H20133036）購(gòu)自雅培制藥有限公司；番瀉葉購(gòu)自江蘇省中醫(yī)院中藥房。

1.3 實(shí)驗(yàn)器材及試劑

脫水機(jī)（JJ-12J，武漢俊杰電子有限公司）；病理切片機(jī)（RM2016，上海徠卡儀器有限公司）；顯微鏡（E100，Nikon）；5-羥色胺轉(zhuǎn)運(yùn)體抗體（DF8616，艾菲生物公司）；5-羥色胺轉(zhuǎn)運(yùn)體ELISA 試劑盒（貨號(hào)：20210831-J40482，湖南艾方生物科技有限公司）；4%多聚甲醛（貨號(hào)：BL539A，濟(jì)南海納實(shí)驗(yàn)耗材公司）；導(dǎo)尿管（含球囊，8F，蘇械注準(zhǔn)20182660688，可孚醫(yī)療器械公司）。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1 藥品制備

根據(jù)人鼠轉(zhuǎn)換系數(shù)W = 6.25 結(jié)合白石湯臨床用量，計(jì)算大鼠的用藥量為7.91 g/（kg·d）。將白石湯處方全部中藥放入10 倍蒸餾水中浸泡0.5 h 后煎煮，第1次熬藥1 h，第2次熬藥30 min，將2次濾液合并，濃縮為0.79 g/mL溶液，4 ℃保存待用。

取番瀉葉500 g，加水5 000 mL，浸泡30 min，煮沸30 min，過(guò)濾，濃縮為0.6 g/mL 的藥液，密封，4 ℃保存待用。

匹維溴銨片，參考60 kg 成人劑量，將匹維溴銨片碾碎，加蒸餾水配成濃度為1.58 mg/mL混懸液。

1.4.2 造模方法

將40 只SD 大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)3 d 后，全部大鼠隨機(jī)分為空白組、模型組、白石湯組（給予白石湯藥液灌胃）、陽(yáng)性對(duì)照組（給予匹維溴銨混懸液灌胃），每組10 只?？瞻捉M采用生理鹽水灌胃，其余各組采用番瀉葉灌胃+ 束縛方法建立IBS-D 大鼠模型［12］。造模的第1～4周采用番瀉葉煎劑灌胃，灌胃濃度為0.6 g/mL，灌胃劑量為10 mL/kg，每日1 次。從第3 周開始，番瀉葉灌胃后將大鼠放入大小約550 mL 的塑料瓶中，使大鼠在瓶中只能沿直線前后稍運(yùn)動(dòng)，每次3 h，每天1 次，每次束縛開始時(shí)間不固定，連續(xù)2 周。連續(xù)造模4 周后，觀察大鼠一般情況、大鼠體質(zhì)量增長(zhǎng)指數(shù)和AWR實(shí)驗(yàn)結(jié)果，判斷造模是否成功。

造模成功后，每組大鼠灌胃給藥的劑量為10 mL/kg，每日1次。其中空白組和模型組采用生理鹽水灌胃，白石湯組采用白石湯0.79 g/mL 灌胃，陽(yáng)性對(duì)照組采用匹維溴銨混懸液1.58 mg/mL 灌胃，持續(xù)2 周后，檢測(cè)大鼠血清、腦組織和結(jié)腸組織SERT 表達(dá)和腸道菌群變化情況。

1.4.3 檢測(cè)指標(biāo)及方法

1.4.3.1 一般情況

定期觀察大鼠精神狀態(tài)、皮毛色澤、活動(dòng)、糞便性狀并記錄大鼠體質(zhì)量。

1.4.3.2 腹壁撤退反射（AWR）實(shí)驗(yàn)

檢查前各組大鼠禁食16 h、自由飲水，方法如下：8F帶氣囊導(dǎo)尿管外涂抹凡士林，在大鼠清醒、不限制活動(dòng)的狀態(tài)下經(jīng)肛門插入，使氣囊末端距離肛緣1 cm 并固定。待大鼠適應(yīng)環(huán)境呈安靜狀態(tài)時(shí)，擴(kuò)張球囊，觀察AWR等級(jí)評(píng)分為3分（大鼠腹部抬離桌面）時(shí)的氣囊壓力。共進(jìn)行3 次實(shí)驗(yàn)，每次持續(xù)30 s，間隔3 min，取均值。大鼠AWR 評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)［13］：對(duì)結(jié)直腸擴(kuò)張刺激無(wú)行為學(xué)反應(yīng)，計(jì)0分；身體靜止不動(dòng)，頭部運(yùn)動(dòng)減少，計(jì)1分；腹肌收縮，但腹部未抬離桌面，計(jì)2分；腹肌收縮并抬離桌面，計(jì)3分；骨盆抬起，身體呈弓形，計(jì)4分。

1.4.3.3 大鼠結(jié)腸組織病理學(xué)改變

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物禁食12 h，采用10%水合氯醛（3 mL/kg）腹腔麻醉，取出結(jié)腸組織，用4%甲醛溶液固定，分別進(jìn)行常規(guī)浸泡、脫水、包埋、均勻連續(xù)切片。HE 染色后，高倍顯微鏡下觀測(cè)結(jié)腸組織病理變化。

1.4.3.4 酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)大鼠血清SERT含量

剖腹取腹主動(dòng)脈血2 mL，靜置0.5 h，以3 000 r/min速度離心15 min，離心半徑10 cm，取上清液置-80 ℃保存，操作嚴(yán)格按照酶聯(lián)免疫吸附法試劑說(shuō)明進(jìn)行檢測(cè)。

1.4.3.5 免疫組化法檢測(cè)大鼠結(jié)腸組織、海馬區(qū)腦組織SERT蛋白水平

麻醉大鼠，采血后頸椎脫臼處死大鼠，剖腹取結(jié)腸段2 cm，共取3 段，取大鼠全腦，石蠟包埋后切片，經(jīng)抗原修復(fù)和封閉后，孵育一抗、二抗，復(fù)染顯色后置于高倍顯微鏡下，隨機(jī)選擇3 個(gè)視野觀察。用Image J軟件對(duì)SERT 免疫陽(yáng)性率（OD 值）的比值進(jìn)行半定量分析。

1.4.3.6 大鼠腸道菌群檢測(cè)

給藥結(jié)束后，采集大鼠糞便，置于無(wú)菌的離心管中，放入-80 ℃保存?zhèn)溆谩?6S rDNA 高通量測(cè)序運(yùn)用Miseq測(cè)序平臺(tái)對(duì)糞便樣本進(jìn)行腸道菌群多樣性、厚壁菌門/擬桿菌門的比率等分析。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 20.0 軟件數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料數(shù)據(jù)采用均數(shù)± 標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示。多組間數(shù)據(jù)比較采用ANOVA 分析，組內(nèi)比較采用配對(duì)t檢驗(yàn)。以P＜0.05代表差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 大鼠一般狀態(tài)及體質(zhì)量增長(zhǎng)情況

2.1.1 大鼠一般情況比較

造模前大鼠精力充沛，皮毛光澤，喜動(dòng)，大便呈顆粒狀。造模開始后，番瀉葉灌胃第3 天時(shí)大鼠出現(xiàn)腹瀉癥狀，精神逐漸萎靡。塑料瓶束縛時(shí)，大鼠撞擊瓶口，煩躁不安并出現(xiàn)撕咬現(xiàn)象。造模結(jié)束后，模型大鼠精神萎靡，毛發(fā)污穢雜亂，喜蜷縮，飲食減少，體質(zhì)量下降，形體增胖緩慢，溏瀉程度增加。空白組大鼠精神抖擻、皮毛光澤、好動(dòng)、糞便正常。白石湯組和陽(yáng)性對(duì)照組精神較前好轉(zhuǎn)，皮毛光澤無(wú)雜亂，溏瀉程度減輕，體質(zhì)量增長(zhǎng)幅高。

可以看到，顯示面板頂端有1/2/3的三排LED顯示燈帶，代表當(dāng)前每個(gè)濾芯的使用狀態(tài)，滿格為最佳，降至1格甚至更低則提示用戶應(yīng)及早更換濾芯。

2.1.2 各組大鼠體質(zhì)量情況比較

與空白組比較，造模結(jié)束后模型組、白石湯組、陽(yáng)性對(duì)照組大鼠體質(zhì)量增長(zhǎng)緩慢（P＜0.05）；給藥結(jié)束后，與模型組大鼠比較，白石湯組、陽(yáng)性對(duì)照組大鼠體質(zhì)量顯著升高（P＜0.05）。見表1。

表1 各組大鼠體質(zhì)量情況比較（±s，g）

表1 各組大鼠體質(zhì)量情況比較（±s，g）

注：與空白組比較，*P ＜0.05；與模型組比較，△P ＜0.05。

組別空白組模型組白石湯組陽(yáng)性對(duì)照組n 10 10 10 10造模前205.70±5.12 208.00±7.41 209.22±5.09 205.17±7.47造模結(jié)束后428.50±16.00 375.00±38.73*363.89±21.32*368.33±12.52*給藥結(jié)束后478.00±22.26 399.29±23.88*436.11±20.88*△430.00±10.00*△

2.2 各組大鼠AWR實(shí)驗(yàn)情況比較

給藥結(jié)束后，與空白組大鼠比較，模型組大鼠AWR 等級(jí)評(píng)分為3 分時(shí)所需注水量顯著降低（P＜0.001），提示大鼠內(nèi)臟敏感性顯著增高；與模型組大鼠比較，陽(yáng)性對(duì)照組、白石湯組所需注水量明顯增高（P＜0.05）。各組大鼠AWR 等級(jí)評(píng)分為3分時(shí)注水量測(cè)定結(jié)果提示，白石湯能夠降低IBS-D 大鼠內(nèi)臟高敏感性。見表2。

表2 各組大鼠AWR等級(jí)評(píng)分為3分時(shí)注水量比較（±s，mL）

表2 各組大鼠AWR等級(jí)評(píng)分為3分時(shí)注水量比較（±s，mL）

注：與空白組比較，*P ＜0.001；與模型組比較，▲P ＜0.05。

組別空白組模型組白石湯組陽(yáng)性對(duì)照組n 10 10 10 10造模結(jié)束后1.01±0.08 0.63±0.05*0.64±0.06*0.63±0.05*給藥結(jié)束后0.97±0.06▲0.65±0.06 0.93±0.05▲0.93±0.05▲

2.3 各組大鼠結(jié)腸組織病理學(xué)改變情況比較

空白組、模型組、白石湯組、陽(yáng)性對(duì)照組大鼠結(jié)腸組織黏膜結(jié)構(gòu)完整，未見明顯黏膜炎癥以及淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)和間質(zhì)水腫。見圖1。

圖1 各組大鼠結(jié)腸組織病理學(xué)改變情況（HE，×200）

2.4 各組大鼠血清SERT水平比較

與模型組大鼠比較，白石湯組、陽(yáng)性對(duì)照組血清SERT 水平均明顯降低（P＜0.05）。白石湯組與陽(yáng)性對(duì)照組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。與空白組比較，模型組血清SERT 水平明顯提高（P＜0.001）。見表3。

表3 各組大鼠血清SERT水平比較（±s，pg/mL）

表3 各組大鼠血清SERT水平比較（±s，pg/mL）

注：與模型組比較，*P ＜0.05；與模型組比較，▲P ＜0.001。

組別空白組模型組白石湯組陽(yáng)性對(duì)照組n6 6 6 6血清SERT 1 213.58±77.68▲732.40±216.34 1 000.29±145.49*964.01±183.52*

2.5 各組大鼠結(jié)腸和海馬區(qū)腦組織SERT表達(dá)比較

與模型組大鼠比較，白石湯組和陽(yáng)性對(duì)照組大鼠結(jié)腸組織和海馬區(qū)腦組織SERT 表達(dá)均明顯升高（P＜0.05），表明白石湯可以提高大鼠結(jié)腸組織SERT和海馬區(qū)腦組織SERT表達(dá)。見表4、圖2和圖3。

圖2 各組大鼠結(jié)腸組織SERT表達(dá)情況（×200）

圖3 各組大鼠海馬區(qū)腦組織SERT表達(dá)情況（×200）

表4 各組大鼠結(jié)腸組織、海馬區(qū)腦組織SERT表達(dá)比較（±s）

表4 各組大鼠結(jié)腸組織、海馬區(qū)腦組織SERT表達(dá)比較（±s）

注：與模型組比較，*P ＜0.05。

組別空白組模型組白石湯組陽(yáng)性對(duì)照組n 3 3 3 3結(jié)腸組織SERT 0.257±0.048*0.189±0.040 0.243±0.033*0.226±0.023*海馬區(qū)腦組織SERT 0.040±0.011*0.028±0.003 0.038±0.004*0.037±0.008*

2.6 各組大鼠腸道微生物多樣性指數(shù)比較

PD-whole-tree多樣性指數(shù)是微生物α多樣性指數(shù)的一種，兼顧考慮了腸道微生物豐度以及進(jìn)化距離的多樣性指數(shù)。數(shù)值越大，群落多樣性越高。與模型組大鼠比較，白石湯組和陽(yáng)性對(duì)照組大鼠PDwhole-tree 多樣性指數(shù)顯著升高（P＜0.05）。表明白石湯可顯著提高大鼠腸道微生物多樣性和豐度。見表5。

表5 大鼠腸道菌群PD-whole-tree的多樣性指數(shù)比較（±s）

表5 大鼠腸道菌群PD-whole-tree的多樣性指數(shù)比較（±s）

注：與模型組比較，■P ＜0.05。

組別空白組模型組白石湯組陽(yáng)性對(duì)照組n3 3 3 3 PD-whole-tree 72.97±5.46■48.11±2.67 63.78±8.40■62.77±11.53■

2.7 各組大鼠腸道菌群成分分析

圖4 在門水平不同大鼠腸道菌群組成

表6 大鼠腸道微生物的F/B的比率（±s）

表6 大鼠腸道微生物的F/B的比率（±s）

注：與模型組比較，*P ＜0.05。

組別空白組模型組白石湯組陽(yáng)性對(duì)照組n3 3 3 3 F/B 3.95±2.14*11.77±5.82 5.34±2.15*3.95±0.06*

2.8 偏最小二乘法判別分析

偏最小二乘法判別分析（partial leastsquares discrimination analysis，PLS-DA）是一種用于判別分析的多變量統(tǒng)計(jì)分析方法，屬于Beta 多樣性分析的一種。該方法運(yùn)用PLS-DA 建立微生物含量與樣品類別之間的關(guān)系模型，展示樣品間物種多樣性差異，兩點(diǎn)之間距離越大表明兩者的群落構(gòu)成差異越大。模型組大鼠與空白組大鼠相對(duì)處于不同區(qū)域，表明其之間腸道菌群結(jié)構(gòu)及多樣性存在差異。與模型組比較，白石湯組均距離空白組區(qū)域更近，說(shuō)明白石湯組給藥后可減少模型組與空白組大鼠腸道菌群的差異。以上結(jié)果提示，IBS-D 大鼠腸道菌群結(jié)構(gòu)及多樣性發(fā)生紊亂，給予白石湯后，可一定程度調(diào)控并改善紊亂的腸道菌群，使其向正常方向改變。見圖5。

圖5 基于OTU的偏最小二乘法判別分析

3 討論

IBS-D 屬于功能性胃腸疾病，其發(fā)病率逐年上升，發(fā)病機(jī)制未完全闡明。腸黏膜上皮細(xì)胞的SERT通過(guò)快速再攝取5-HT 入胞，再經(jīng)過(guò)單胺氧化酶作用降解失活，這表明SERT 在影響腸內(nèi)5-HT 的可利用性和生物功能的局部調(diào)節(jié)中占有主導(dǎo)地位［15］。腸易激綜合征患者腸道局部SERT 表達(dá)水平降低，導(dǎo)致腸上皮細(xì)胞對(duì)5-HT 的攝取減弱，引起腸道5-HT 含量升高。研究認(rèn)為，SERT表達(dá)的改變是5-HT信號(hào)紊亂的原因，當(dāng)SERT 表達(dá)的失調(diào)增加腸道黏膜對(duì)5-HT 的利用率時(shí)，高水平的腸道分泌和運(yùn)動(dòng)可能會(huì)加速腸易激綜合征的發(fā)展。耿琴等經(jīng)臨床試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，SERT可通過(guò)影響內(nèi)臟敏感性在一定程度上介導(dǎo)IBS-D 的疾病發(fā)展［16］。SERT 基因的表達(dá)和蛋白功能的降低可導(dǎo)致5-HT的過(guò)量堆積，腦-腸-微生物軸功能失調(diào)，進(jìn)而引起腸道運(yùn)動(dòng)性改變［17］和內(nèi)臟高敏感性［18］，導(dǎo)致腹瀉和腹痛的產(chǎn)生，與腸易激綜合征的發(fā)病機(jī)制有關(guān)。

健康的常駐微生物可以防止病原體的侵入，維護(hù)腸道微生物生態(tài)系統(tǒng)的穩(wěn)定，這對(duì)宿主的腸道健康非常重要。正常的常駐菌群中也存在病原菌［19］，當(dāng)腸道環(huán)境發(fā)生變化時(shí)，如使用抗生素、飲食或生活方式改變以及腸道感染時(shí)，病原菌會(huì)增加并被激活其生物活性［20］。腸道微生物群的失調(diào)可通過(guò)增加腸道通透性，激活黏膜免疫反應(yīng)，增加內(nèi)臟敏感性和改變腸道運(yùn)動(dòng)性從而引發(fā)腸易激綜合征［21］。

腸道微生物作用于傳入迷走神經(jīng)和脊髓神經(jīng)末梢的腸道源性分子，間接或直接通過(guò)微生物產(chǎn)生的信號(hào)與大腦溝通。微生物本身也可以被腸神經(jīng)系統(tǒng)中的免疫受體識(shí)別，通過(guò)免疫信號(hào)影響腦腸軸，而且作為IBS病理的一部分，能直接影響內(nèi)臟疼痛和腸道運(yùn)動(dòng)［22］。病原微生物釋放的脂多糖可以增加腸道通透性，改變腸神經(jīng)系統(tǒng)和中樞神經(jīng)系統(tǒng)的活性［23］。因此，腦-腸-微生物軸SERT 低表達(dá)和腸道菌群失調(diào)導(dǎo)致了IBS-D的發(fā)生和發(fā)展。

IBS-D 屬于“泄瀉”的范疇?！端貑枴り庩?yáng)應(yīng)象大論》云：“濕勝則濡瀉”。《金匱鉤玄·附錄六》言：“泄瀉者……皆能動(dòng)乎脾濕”?！毒霸廊珪ば篂a》曰：“怒氣作泄瀉，怒時(shí)夾食，致傷脾胃，肝木克土，脾氣受傷”?！夺t(yī)方考》云：“瀉責(zé)之脾，痛責(zé)之肝；肝責(zé)之實(shí)，脾責(zé)之虛，脾虛肝實(shí)”。可見歷代醫(yī)家多認(rèn)為脾胃虛弱是根本，脾氣不運(yùn)則易生濕，土虛木乘，升降失職，清濁不分則導(dǎo)致泄瀉，脾虛肝郁濕盛是關(guān)鍵病機(jī)。治療上徐景藩教授認(rèn)為，治療脾胃病時(shí)要善用芳香化濕藥，使?jié)裥暗没?，氣機(jī)得暢，脾胃得運(yùn)，從而達(dá)到健脾燥濕、化濕和胃的功效［24］。單兆偉教授依據(jù)張景岳“情志三郁”理論，和肝郁脾虛型泄瀉結(jié)合，主張“身心相和，治神為先”，用藥與疏導(dǎo)憂思怒、調(diào)攝并舉而達(dá)“止瀉”之效［25］。徐陸周教授總結(jié)IBS-D 具有“脾虛為本、肝脾不調(diào)、寒熱夾雜”的病機(jī)特點(diǎn)，提出強(qiáng)化“以治脾為先，肝脾同調(diào)，寒溫并用”的法則要點(diǎn)，創(chuàng)制中藥方劑白石湯。

白石湯由麩炒白術(shù)、石菖蒲、肉豆蔻、地榆、仙鶴草、烏梅6 味藥組成。本方具有疏肝健脾、清利濕熱、澀腸止瀉的作用。俞蕾敏等研究發(fā)現(xiàn)炒白術(shù)可以影響IBS 小鼠的腸道菌群代謝，從而改善IBS 小鼠內(nèi)臟敏感性及糞便性狀［26］。石菖蒲芳香開竅，研究發(fā)現(xiàn)其水提物和石油醚提取物可以雙向調(diào)節(jié)腦組織中SERT 活性［27］。李麗等研究發(fā)現(xiàn)地榆可以修復(fù)結(jié)腸黏膜損傷，降低血清及結(jié)腸組織促炎因子含量，并改善大鼠腸道菌群多樣性［28］。張衣國(guó)研究發(fā)現(xiàn)，仙鶴草具有消炎止瀉的作用［29］。本方中麩炒白術(shù)為君藥，健脾益氣、燥濕止瀉；石菖蒲化濕和胃，可以加強(qiáng)溫中化濕的功效，具有“醒脾”的作用；肉豆蔻溫中行氣，善治脾虛寒濕滯留，與炒白術(shù)合用治療脾虛泄瀉；地榆清熱涼血，其清化作用可使白術(shù)、豆蔻補(bǔ)澀而不滯，清除肝經(jīng)郁熱；仙鶴草補(bǔ)虛健脾而止瀉，選用烏梅酸柔養(yǎng)津而使肝氣升達(dá)，調(diào)暢情志。

綜上所述，白石湯可能通過(guò)作用于腦-腸-微生物軸，提高了IBS-D 大鼠血清、海馬區(qū)腦組織和結(jié)腸組織中SERT 的表達(dá)，改善了IBS-D 大鼠腸道菌群的結(jié)構(gòu)組成，恢復(fù)腸道菌群多樣性，進(jìn)而治療IBS-D。