miR-574-5p 和miR-144-5p在腹主動脈瘤患者外周血中的表達水平及其與腔內(nèi)血栓厚度的關(guān)系

姚 瑋 宋志明 楊忠信

腹主動脈瘤(abdominal aortic aneurysm，AAA)是與動脈擴張相關(guān)的疾病[1]，即為腹主動脈壁直徑擴張至正常主動脈的1.5倍或者擴張大于3 cm，因此一旦出現(xiàn)破裂，死亡率極高，嚴(yán)重危及患者生命健康[2-3]。目前，有研究指出AAA的發(fā)生發(fā)展以及破裂與腔內(nèi)血栓(intraluminal thrombus，ILT)密切相關(guān)[4]。microRNA(miRNA)作為由18～22個核苷酸組成的非編碼小RNA[5]，可參與機體多種生理以及病理過程[6]，且miRNA具有檢測簡單、穩(wěn)定性以及特異性高等優(yōu)勢，有成為多種疾病的診斷及預(yù)后評估指標(biāo)的潛力[7]。有研究指出miR-574-5p和miR-144-5p表達水平與主動脈瘤有關(guān)，其中miR-574-5p與胸主動脈瘤的發(fā)病機制有關(guān)，在AAA中出現(xiàn)表達上調(diào)[8]，miR-144-5p的表達水平在AAA中出現(xiàn)下調(diào)[9]，但是與ILT厚度的關(guān)系尚無研究報道。本研究選取miR-574-5p和miR-144-5p在腹主動脈瘤患者外周血中的表達水平作為研究對象，分析其與ILT厚度的關(guān)系，為未來尋求腹主動脈瘤ILT厚度的相關(guān)生物性指標(biāo)提供了新思路。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取2017年9月至2020年9月本院收治的50例腹主動脈瘤患者，年齡45～76歲，男性46例，女性4例。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合《2018年美國血管外科學(xué)會(ASVS)腹主動脈瘤診治臨床實踐指南》[10]標(biāo)準(zhǔn)，經(jīng)病理檢查確診為腹主動脈瘤；②患者經(jīng)CT檢查腎下腹主動脈≥3.00 cm；③患者及家屬已簽字知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并感染性疾??；②合并其他惡性腫瘤患者；③合并心肺等器質(zhì)嚴(yán)重性病變患者。

1.2 臨床資料收集

收集患者年齡、性別、生活習(xí)慣(包括吸煙等)以及既往病史(包括心梗史、高血壓史)等。記錄患者腹主動脈最大直徑，主要經(jīng)CT測量由腎動脈至主動脈分叉處最大直徑。

1.3 ILT厚度測量

通過影像學(xué)測量患者的主動脈瘤CTA。在ILT 橫截面上選取3、6、9、12點鐘方向，測量其厚度，計算其平均值，即為該患者的ILT厚度，為7.89 mm。參考文獻[11]根據(jù)平均值7.89 mm，將患者分為2組，分別為薄ILT組(LIT厚度≤7.89 mm)，厚ILT組(LIT厚度>7.89 mm)。

1.4 外周血miR-574-5p和miR-144-5p水平檢測

抽取患者外周靜脈血5 ml于EDTA-K2抗凝管，離心后收集血清，并于-80 ℃保存待檢。使用血漿RNA提取試劑盒(購自賽默飛世爾科技有限公司)提取總RNA，并使用反轉(zhuǎn)錄試劑盒(賽默飛世爾科技有限公司)進行反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。取反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物進行RT-PCR擴增，擴增條件為95 ℃預(yù)變性5 min，95 ℃ 30 s，60 ℃ 20 s，72 ℃ 20 s，循環(huán)40次。將U6作為內(nèi)參，用2-ΔΔCt法計算各組基因的相對表達量。引物均送上海生工生物公司合成。

1.5 統(tǒng)計學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 2組一般資料比較

根據(jù)ILT平均厚度7.89 mm為界，分為薄ILT組22例，厚ILT組28例，比較2組一般資料，發(fā)現(xiàn)2組患者在年齡、吸煙史、高血壓史以及腹主動脈最大直徑方面差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，但厚ILT組的心梗史概率明顯高于薄ILT組(P<0.05)，見表1。

表1 2組的一般資料比較

2.2 2組外周血miR-574-5p和miR-144-5p水平比較分析

厚ILT組miR-144-5p水平明顯低于薄ILT組(P<0.05)，厚ILT組miR-574-5p水平明顯高于薄ILT組(P<0.05)，見表2。

表2 2組外周血miR-574-5p和miR-144-5p水平比較

2.3 影響腹主動脈瘤患者ILT厚度增大的多因素logistic分析

多因素logistic 回歸分析顯示，miR-574-5p水平上升和miR-144-5p水平下降為影響ILT厚度增大的獨立危險因素(P<0.05)，見表3。

表3 影響腹主動脈瘤患者ILT厚度增大的多因素logistic分析

2.4 相關(guān)性分析

經(jīng)Spearman相關(guān)性分析法發(fā)現(xiàn)，miR-574-5p與miR-144-5p水平呈負(fù)相關(guān)(γ=-0.213，P<0.001)，見圖1。

圖1 腹主動脈瘤患者miR-574-5p、miR-144-5p水平相關(guān)性分析

3 討論

AAA 作為臨床常見疾病，以主動脈擴張為特征，其中主動脈由3層組成，分別為內(nèi)膜、中膜和外膜。內(nèi)膜由與血液直接接觸的內(nèi)皮細(xì)胞組成，中膜與AAA發(fā)病機制密切相關(guān)，外膜主要由成纖維細(xì)胞、神經(jīng)纖維組成[12]。發(fā)病的原因主要在于動脈瘤的外膜及其外層基質(zhì)出現(xiàn)了炎癥反應(yīng)，細(xì)胞外基質(zhì)由于蛋白酶的高度表達，引起動脈壁因失衡而導(dǎo)致重塑，加上血管平滑肌細(xì)胞凋亡引起中膜出現(xiàn)破損以及變薄，最后導(dǎo)致主動脈功能異常[13-14]。其中大多數(shù)AAA患者存在ILT[15]，有研究稱在血栓內(nèi)釋放和激活細(xì)胞因子有助于在血管壁中傳導(dǎo)，導(dǎo)致動脈瘤發(fā)展加快[16-17]。動脈瘤發(fā)展也被證實與ILT厚度有關(guān)[18]。ILT厚度被證實與動脈瘤直徑、血管平滑肌細(xì)胞凋亡等關(guān)系存在相關(guān)性[19-20]。本研究表明ILT厚度與患者年齡、吸煙史、高血壓史以及腹主動脈最大直徑無關(guān)，與心梗史有關(guān)，該結(jié)果與已有的研究不同，雖然厚ILT組的腹主動脈最大直徑比薄ILT組大，但是差異不顯著，可能與樣本量不足有關(guān)，需要進一步擴大數(shù)據(jù)庫以便得到更為準(zhǔn)確的結(jié)果。

非編碼RNA(ncRNA)是一類非蛋白質(zhì)編碼RNA，包括miRNA和ciRNA等。MiRNA是一種短鏈非編碼RNA[21]，可以參與基因表達調(diào)控和機體多種生命進程，包括炎癥反應(yīng)、腫瘤生長以及干細(xì)胞分化等[22-23]。從進化方面來說，miRNA起源于植物界，可保護遺傳物質(zhì)不受外界干擾[24],因其檢測方便、特異性強等優(yōu)勢成為了多種疾病生物標(biāo)志物的首選[25]。MiRNA與RNA結(jié)合蛋白、高密度脂蛋白有關(guān)[26]，有研究稱miRNA水平與主動脈有關(guān)，與主動脈相關(guān)的疾病中出現(xiàn)了表達失調(diào)[27]。有研究發(fā)現(xiàn)miR-144-5p在AAA中出現(xiàn)表達下調(diào)[28]，還發(fā)現(xiàn)了過度表達miR-144-5p可以減少主動脈擴展并提高AAA小鼠的存活率，還可降低AAA發(fā)病率[29]。有研究稱miR-574-5p在動脈瘤中的表達水平出現(xiàn)變化，主動脈瘤患者的miR-574-5p水平高于對照組[30]。本研究發(fā)現(xiàn)厚ILT組miR-144-5p水平明顯低于薄ILT組，厚ILT組miR-574-5p水平明顯高于薄ILT組；多因素logistic 回歸分析顯示，miR-574-5p水平上升和miR-144-5p水平下降為影響ILT厚度增大的獨立危險因素。由于ILT厚度與AAA發(fā)展有關(guān)，因此進一步證實了miR-574-5p和miR-144-5p水平有作為ILT生物標(biāo)志物的潛力。

綜上所述，本研究結(jié)果表明了外周血miR-144-5p和miR-574-5p水平與腹主動脈瘤患者腔內(nèi)血栓厚度密切相關(guān)，對未來關(guān)于腹主動脈瘤患者的臨床研究提供了一定的數(shù)據(jù)基礎(chǔ)。但是本研究結(jié)果存在一定局限性，主要是由于中心單一、數(shù)據(jù)少等缺點，因此在未來關(guān)于腹主動脈瘤研究中需要進一步完善數(shù)據(jù)，使結(jié)果更為準(zhǔn)確可信。