不同濃度復(fù)合維生素對海參幼苗生長性能、腸道酶活性及其免疫功能的影響

孫尚智，劉文斌，王文喜

（1．江蘇敖眾生物技術(shù)有限公司，江蘇　南京　223001；2．南京農(nóng)業(yè)大學(xué)，江蘇　南京　210095）

全世界海參約有120種[1]均屬海洋種類。在我國海域分布的有10多種，其中以黃、渤海的刺參（Apostichopus japonicas Selenka）品質(zhì)最佳。刺參是蛋白質(zhì)含量高、糖類豐富而不含膽固醇的珍貴海產(chǎn)品，具有很高的食用和藥用價值，其經(jīng)濟(jì)價值可稱之為“參”中之冠[2]?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)證明，海參含有的酸性黏多糖對人體的成骨、生長、創(chuàng)傷愈合以及預(yù)防組織老化、動脈硬化等均有特殊功能[3]；五肽及三萜糖苷等成分具有抗腫瘤、抗炎活性和溶血作用[4－5]。20世紀(jì)90年代來我國沿海地區(qū)海參的人工養(yǎng)殖業(yè)蓬勃發(fā)展，但是由于養(yǎng)殖過程中的不規(guī)范運(yùn)作等，使海參養(yǎng)殖中存在的病害問題也逐漸凸現(xiàn)起來，如皮膚潰瘍、腐皮、水腫，給養(yǎng)殖戶造成了慘重的經(jīng)濟(jì)損失[6－7]。對于海參的病害，人們至今還沒有找到一個合適的解決方法，這種困境嚴(yán)重制約了該產(chǎn)業(yè)的持續(xù)健康發(fā)展[8]。維生素作為一種應(yīng)用免疫增強(qiáng)劑，是水產(chǎn)動物維持正常生長和生命活動所必需的營養(yǎng)物質(zhì)。目前，在水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)界也普遍認(rèn)為在飼料中添加適量的維生素是很有必要的[9]，因?yàn)榇蠖鄶?shù)的維生素在水產(chǎn)動物體內(nèi)是不能合成的，需要從飼料中額外攝取[10]。

復(fù)合維生素作為一種納米級水產(chǎn)用液體維生素，主要含有維生素、肌醇、?；撬?、氨基酸以及免疫促生長因子、抗應(yīng)激活性因子等。它不僅能夠滿足水產(chǎn)動物不同生長階段營養(yǎng)需求，預(yù)防維生素缺乏，還能夠增強(qiáng)免疫力，促進(jìn)食欲。

該試驗(yàn)就是將這種液體維生素添加到海參幼苗飼料中，通過生長性能、腸道酶活性等指標(biāo)來最終確定海參幼苗對這種復(fù)合維生素的最適需求量。

1　材料與方法

1．1試驗(yàn)材料

1．1．1海參刺參為 2 月齡幼苗，體長 0．5～1．0 cm，總初重2．5 kg，規(guī)格為10 000頭/kg左右，由山東省某有限公司提供。

1．1．2試驗(yàn)飼料與復(fù)合維生素試驗(yàn)用飼料選用魚粉、鼠尾藻粉、海帶粉、海泥、滸苔為主要原料。

1．2試驗(yàn)設(shè)計(jì)和養(yǎng)殖條件

試驗(yàn)在山東好當(dāng)家育苗基地進(jìn)行。自2014年7月10日開始，在好當(dāng)家的一個生產(chǎn)車間，選擇28個標(biāo)準(zhǔn)育苗池，每個池子為 9 m×2 m×1．2 m，設(shè)6個試驗(yàn)組和1個對照組，試驗(yàn)組分別用濃度為0．03%、0．05%、0．07%、0．09%、0．11%、0．13%的復(fù)合維生素拌料。對照組為第一組，其余分別為二、三、四、五、六、七組。每組四個重復(fù)，每個育苗池放2．5 kg，規(guī)格為10 000頭/kg左右的海參苗，采用定時定量的投喂方式，每天15:30－16:00之間喂料。5～7 d倒一次池子，同時清理池底排泄物，為期2個月。

表1　復(fù)合維生素的主要組成成分保證值（每1000mL該品中含有）

1．2．1生長測定和樣品采集從試驗(yàn)開始后的第30 d，從各水槽隨機(jī)抽取20個刺參樣品，置于－20℃冰箱內(nèi)作為以后分析刺參生化組成的樣品，在試驗(yàn)結(jié)束后再隨機(jī)抽取20個刺參樣品，測量體質(zhì)量后并置于－20℃冰箱內(nèi)作為生化組成分析的樣品。體質(zhì)量的測量方法是把刺參從培養(yǎng)皿中輕輕取出后，在干濾紙上放置30 s后快速用1/104電子天平稱量。為了減少操作誤差，試驗(yàn)過程中體質(zhì)量的測量均由同一固定試驗(yàn)人員完成。刺參的飼料系數(shù)（FCR）計(jì)算公式為：

飼料系數(shù)（FCR）=投入飼料量（g）/體質(zhì)量增加量（g）。

1．2．2樣品生化組成的分析

1．2．2．1消化酶活性測定總蛋白酶采用福林－酚法[11]（單位定義：在27℃條件下，每分鐘水解酪素產(chǎn)生相當(dāng)于1 μg酪氨酸所需的酶量，規(guī)定為一個酶活力單位）。淀粉酶（單位定義：每毫克蛋白在27℃與底物作用30 min，水解10 mg淀粉定義為1個淀粉酶活力單位）采用南京某公司試劑盒測定。

1．2．2．2吸收酶活性測定Na+,K+－ATP 酶活性（單位定義：每小時每毫克組織蛋白的組織中ATP酶分解ATP產(chǎn)生1μmol無機(jī)磷的量）采用南京某公司試劑盒測定。

1．2．2．3抗氧化指標(biāo)測定CAT、AOC、MDA、SOD均采用南京某公司試劑盒測定。

1．2．2．4免疫指標(biāo)測定

溶菌酶活性采用南京某公司試劑盒測定。

1．3數(shù)據(jù)處理對海參幼苗的生長性能，腸道酶活性及其免疫力用平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示（n=4），經(jīng)SPSS 19．0統(tǒng)計(jì)軟件分析。所有數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析，并進(jìn)行Duncan多重比較。P＜0．05表示差異具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0．01表示差異極具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2．1添加不同濃度復(fù)合維生素對海參幼苗生長性能的影響

圖1　添加不同濃度復(fù)合維生素與海參幼苗增重率的關(guān)系

由圖1可以看出，在一定范圍內(nèi)，隨著復(fù)合維生素添加量的增加，每組的增重率顯著增加（P＜0．05），在達(dá)到最高點(diǎn)后再下降，最高點(diǎn)出現(xiàn)在第五組，即添加量為0．09%時，海參幼苗生長情況最好，復(fù)合維生素添加量超過0．09%時，增重開始下降，且除最高水平組外，試驗(yàn)組增重率均大于對照組，由此可見，復(fù)合維生素添加量在一定范圍內(nèi)可提高海參幼苗的生長速度。復(fù)合維生素添加量在0．09%時對海參的生長最有利，但是在試驗(yàn)中也發(fā)現(xiàn)第五組雖然長勢最好，但是海參苗大小不均，差距很大，小苗（2 000頭/kg以下）基本沒長，在更高水平組也是如此，大苗（2 000頭以上/kg）生長情況良好，小苗長勢差。第三組和第四組，參苗較均勻，小苗均能長起來，所以使用復(fù)合維生素拌料時應(yīng)大小苗區(qū)分開，大苗添加量建議在 0．07%～0．09%，小苗應(yīng)控制在 0．07%以下，最好在 0．05%左右。

由圖2可以看出，隨著復(fù)合維生素添加量的增加，餌料系數(shù)降低，最低點(diǎn)出現(xiàn)在第五組，當(dāng)添加量超過0．09%時，餌料系數(shù)又隨之升高，且除第七組外其余各試驗(yàn)組均低于對照組，通過對比可知，復(fù)合維生素的添加可以降低餌料系數(shù)。

表2　初重、末重、增重率和投喂量

圖2　添加不同濃度復(fù)合維生素與餌料系數(shù)的關(guān)系

2．2添加不同濃度復(fù)合維生素對海參幼苗腸道酶活的影響

2．2．1添加不同濃度復(fù)合維生素對海參幼苗腸道消化酶的影響

由圖3可以看出，在試驗(yàn)開始30 d時的海參幼苗隨著復(fù)合維生素添加量的增加，淀粉酶的活性有一定程度的改變，但是并不顯著，且第一組淀粉酶活性高于其他組（P＞0．05）。在試驗(yàn)60 d的海參幼苗隨復(fù)合維生素添加量的增加發(fā)生顯著性變化，但是第一組的酶活性顯著高于除第三組外的其他試驗(yàn)組（P＜0．05）。隨著添加量濃度的增加，淀粉酶的活性在第五組時處于最低值。

圖3　添加不同濃度復(fù)合維生素對海參幼苗淀粉酶活性的影響

在圖4中，隨著復(fù)合維生素添加量的增加蛋白酶活性發(fā)生了改變。在試驗(yàn)開始30 d時，第四組海參幼苗體內(nèi)蛋白酶的活性最高但差異不具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0．05）。試驗(yàn)開始 60 d時，第六組海參幼苗體內(nèi)蛋白酶的活性最高且變化顯著（P＜0．05）。這種結(jié)果在一定程度上說明了蛋白酶受到復(fù)合維生素含量的影響。

2．2．2添加不同濃度強(qiáng)參液對海參幼苗腸道吸收酶的影響

由圖5可以看出，經(jīng)過30 d和60 d飼養(yǎng)試驗(yàn)，Na+,K+－ATPase酶活性都有相應(yīng)的變化。在30 d時，對照組的酶活性顯著高于其他組且第三組最低。在60 d對照組刺參組織中Na+,K+－ATPase吸收酶的活性較30 d初始酶活性有下降，但在60 d時第六組吸收酶活性顯著高于除第四組外的其他各組（P＜0．05），且隨后有下降。這種趨勢表明強(qiáng)參液對Na+,K+－ATPase酶活性有一定影響。

圖4　添加不同濃度復(fù)合維生素對海參幼苗蛋白酶活性（U/mg protein）的影響

圖5　添加不同濃度復(fù)合維生素對海參幼苗Na+,K+－ATPase酶活性（U/g protein）的影響

2．3添加不同濃度復(fù)合維生素對海參幼苗抗氧化指標(biāo)的影響

添加不同濃度復(fù)合維生素對海參幼苗抗氧化酶指標(biāo)的影響見表3、表4。結(jié)果表明，經(jīng)過30 d、60 d，的分組飼喂后，刺參幼苗的抗氧化酶因復(fù)合維生素添加量的不同而不同，且都有顯著性的變化。在養(yǎng)殖30 d后CAT的活性在第2組顯著高于其他組（P＜0．05），而第五組的酶活性達(dá)到最低值。但是經(jīng)過60 d的飼養(yǎng)后CAT酶活的最高值出現(xiàn)在了第六組，且顯著高于除第四組外的其他各組（P＜0．05），最低組出現(xiàn)在了對照組。對于AOC酶的活性，在養(yǎng)殖30 d后第一組的酶活性顯著高于其他組（P＜0．05），而在60 d時第五組的酶活性又顯著高于其他組（P＜0．05）。在30 d時MDA含量在第六組最高且將近是最低組的兩倍，而在60 d時MDA含量在第六組達(dá)到最大值但差異不具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0．05）。對于SOD來講，它的最大值都發(fā)生在第四組，而酶活性最低的卻不是同一組。

表3　添加不同濃度復(fù)合維生素對30天海參幼苗抗氧化酶指標(biāo)的影響

表4　添加不同濃度復(fù)合維生素對60天海參幼苗抗氧化酶指標(biāo)的影響

2．4添加不同濃度復(fù)合維生素對海參幼苗免疫力的影響

不同濃度復(fù)合維生素對海參幼苗溶菌酶活性的影響如圖6。在30 d和60 d的飼喂試驗(yàn)中，第四組溶菌酶活性均是最高但差異均不具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0．05）。

3　討論

3．1　復(fù)合維生素對刺參幼苗生長性能的影響

圖6　添加不同濃度復(fù)合維生素對海參幼苗溶菌酶活性（μg/mL）的影響

關(guān)于刺參的生物學(xué)特性和生理學(xué)特點(diǎn)，已有一些學(xué)者對其進(jìn)行了研究和報(bào)道[12－13]，刺參主要生活在有機(jī)物豐富的潮間帶和海洋底部，以沉積物、底棲生物以及動植物性有機(jī)碎屑為食物來源。在海參腸道內(nèi)可觀察到有各種無機(jī)微粒，微型海洋底棲生物，海洋動植物碎屑，貝殼碎片及其微生物。刺參不分晝夜都在積極進(jìn)食，每小時大約可吞食6 g沉積物和泥沙。刺參對海洋底泥中的有機(jī)物的消化率大約為15%，對植物性餌料的消化率為67．5%～76．4%，對動物的碎屑、硅藻、細(xì)菌以及真菌的消化率最高，可達(dá)到87%[14－15]。在自然環(huán)境下，這些食物可以充分地滿足海參自身生長的需求，但是對于人工養(yǎng)殖的刺參來講，由于它們自身沒有合成一些維生素的能力或者是體內(nèi)合成的維生素量不能充分滿足其生長、抗逆和抗病的需求，從而造成其成活率降低，并出現(xiàn)生長減緩等癥狀[16]，這就需要在人工喂養(yǎng)的海參飼料中添加一定量的維生素來滿足其生長需求。目前，有關(guān)單一維生素在水生動物上的應(yīng)用已有較多的報(bào)道[17－19]。例如：Okorie 等[20]用精制的海參飼料研究了0～1 045 mg/kg的維生素C對刺參［體質(zhì)量：（1．49±0．07）g］生長性能的影響，這次的研究結(jié)果顯示，在飼料中加入維生素C可以顯著提高它的特定生長率。周歧存等[21]對皺紋盤鮑的研究表明維生素E可以促進(jìn)其生長。楊奇慧等[22]研究發(fā)現(xiàn)飼料中添加適量維生素A在凡納濱對蝦生長的早期有促生長作用。但是，有關(guān)飼料中添加混合性維生素對刺參幼苗生長的影響報(bào)道較少。在該研究中，往飼料中添加不同濃度的混合性維生素復(fù)合維生素對刺參幼苗的增重率和餌料系數(shù)產(chǎn)生了顯著性影響。與對照組相比，試驗(yàn)組第四組的增重率顯著（P＜0．05）高于其他組，且餌料系數(shù)又處于最低水平，結(jié)果表明復(fù)合維生素的添加濃度在0．09%時刺參幼苗的生長和營養(yǎng)利用效率最好。該研究發(fā)現(xiàn)幼參增重率并未隨著復(fù)合維生素添加量的增多而增加，相反，在0．13%添加量時，其增重率略小于對照組，原因可能是過高劑量的混合性維生素加重了幼參代謝負(fù)擔(dān)，同樣在中國明對蝦[23]、斑節(jié)對蝦仔蝦[24]、點(diǎn)帶石斑魚[25]等水生動物上也發(fā)現(xiàn)過高劑量維生素對生長不再具有促進(jìn)作用。

3．2　復(fù)合維生素對海參幼苗腸道酶活性的影響

腸道中的微生物對腸道組織的形態(tài)、代謝以及功能有很大的影響[26]，同時消化系統(tǒng)對有關(guān)營養(yǎng)物質(zhì)的消化和吸收能力又緊緊依賴于腸道中微生物的種類以及數(shù)量。建立良好的腸道微生物的區(qū)系,很有助于提高生物的生產(chǎn)性能及其飼料利用率。近年來關(guān)于調(diào)控水產(chǎn)動物腸道菌群的報(bào)道有很多，例如：在對蝦的飼料應(yīng)用中，Sung等[27]用芽孢桿抑制了斑節(jié)對蝦哈維氏弧菌（Uharveyi）的生長，降低腸道弧菌數(shù)，從而為建立正常的有益微生物區(qū)系提供了條件。Mussattoo等[28]通過用寡糖提高揮發(fā)性脂肪酸的含量從而降低腸道pH值來抑制致病菌的生長，進(jìn)一步刺激雙歧桿菌和乳酸桿菌的生長。這些報(bào)道說明腸道的健康不僅對促進(jìn)機(jī)體生長有很好的作用，而且在控制疾病方面也有很好的療效，特別是對于只有簡單消化系統(tǒng)的生物來說更是尤為重要。在該試驗(yàn)中，通過利用不同濃度的混合性維生素復(fù)合維生素添加到飼料中飼養(yǎng)海參幼苗，結(jié)果顯示消化酶和吸收酶活性都發(fā)生了相應(yīng)的變化。

在消化酶指標(biāo)中，對照組淀粉酶活性始終高于其他組，且第五組最低。這個結(jié)果可能是由于混合性維生素中的一些成分影響了蛋白酶的活性，具體的影響途徑還有待進(jìn)一步研究。在蛋白酶活性測定結(jié)果中，發(fā)現(xiàn)經(jīng)過30 d、60 d的飼養(yǎng)蛋白酶活性的最高值分別在第四組和第六組中。這個結(jié)果表明當(dāng)復(fù)合維生素的濃度在0．09%左右時能夠有效地增強(qiáng)蛋白酶的活性。

在吸收酶指標(biāo)中，在30 d時，對照組的Na+,K+－ATPase酶活性顯著高于其他組，但第三組卻又顯著低于其他組。在60 d時對照組刺參組織中Na+,K+－ATPase吸收酶的活性較30 d初始酶活性有下降，但在60 d時第六組吸收酶活性顯著高于除第四組外的其他各組（P＜0．05）而且第四組是最低的。這種變化說明復(fù)合維生素在一定程度上影響了Na+,K+－ATPase酶活性，但是相對于30 d的養(yǎng)殖時間，60 d的效果更好些。

3．3　復(fù)合維生素對海參幼苗抗氧化指標(biāo)的影響

動物的機(jī)體內(nèi)存在著大量的不飽和脂肪酸，當(dāng)它們被具有強(qiáng)氧化能力的游離基化合物攻擊時將發(fā)生過氧化反應(yīng)從而生成過氧化物。此反應(yīng)是一種連鎖式的反應(yīng)，它一旦開始就將會與周圍各種細(xì)胞膜上的脂質(zhì)雙分子層內(nèi)所包含的脂質(zhì)或著其他的細(xì)胞器產(chǎn)生反應(yīng)，從而影響有關(guān)器官的正常代謝功能或著是其受損時的自我修復(fù)功能。生物機(jī)體對脂質(zhì)的過氧化反應(yīng)損傷有兩種防御體系：一類是非酶促反應(yīng)，包括酚羥基化合物、輔酶Q、維生素和醇類等；另一類就是酶促反應(yīng)，包括超氧化物歧化酶（SOD）、過氧化物酶（CAT）等。它們都可以有效清除活性氧并終止自由基鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，在這個抗氧化系統(tǒng)中CAT、SOD、AOC和MDA是主要參與抗氧化的酶。SOD主要作用于超氧自由基的歧化反應(yīng)，同時在維持機(jī)體體內(nèi)活性氧的動態(tài)平衡、增強(qiáng)吞噬細(xì)胞的防御能力等中起著關(guān)鍵性作用；CAT是過氧化物酶體的標(biāo)志酶，約占過氧化物酶體酶總量的40%，它的作用主要是催化過氧化氫分解；T－AOC是指機(jī)體中存在的多種抗氧化物，包括抗氧化大分子、抗氧化小分子和酶等，他們清除體內(nèi)產(chǎn)生的各種活性氧，阻止活性氧誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激（oxidative stress）的產(chǎn)生的能力。MDA指標(biāo)直接反映機(jī)體內(nèi)脂質(zhì)過氧化的程度，間接地反映出細(xì)胞損傷的程度。MDA的測定常常與SOD的測定相互配合，SOD活力的高低間接反應(yīng)了機(jī)體清除氧自由基的能力，而MDA的高低又間接反應(yīng)了機(jī)體細(xì)胞受自由基攻擊的嚴(yán)重程度[29－32]。盡管到目前為止，有許多研究者都發(fā)現(xiàn)了維生素能有效地影響動物體內(nèi)的抗氧化系統(tǒng)，但是卻仍然沒有一個統(tǒng)一的結(jié)果。Lygren等[33]的試驗(yàn)結(jié)果顯示維生素E對大西洋蛙（Salmo sala L.）體內(nèi)的抗氧化酶沒有顯著影響。但是，萬敏等[34]研究表明飼料中添加VE能有效提高皺紋盤鮑體內(nèi)的抗氧化能力。而該研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，對于刺參幼苗的抗氧化酶系統(tǒng)來說，復(fù)合型維生素復(fù)合維生素對這些指標(biāo)都有顯著性的影響。對于CAT活性來講，在養(yǎng)殖30 d時后CAT的活性在第二組顯著高于其他組（P＜0．05），而第五組的酶活性又達(dá)到最低值。但是經(jīng)過60 d的飼養(yǎng)后CAT酶活的最高值出現(xiàn)在了第六組，最低組出現(xiàn)在了對照組。對于AOC酶的活性，在養(yǎng)殖30 d后第一組的酶活性顯著高于其他組（P＜0．05），而在60 d時第五組的酶活性又是最高的且顯著高于其他組（P＜0．05）。在30 d時MDA含量在第六組最高且將近是最低組的兩倍，而在60 d時MDA含量在第六組達(dá)到最大值。對于SOD來講，它的最大值都發(fā)生在第四組，而最低的酶活性卻不是在同一組。產(chǎn)生這些結(jié)果的原因可能是由于研究的動物器官組織、飼喂方式及生態(tài)養(yǎng)殖條件不同[35]。但是總的來講，隨著復(fù)合維生素的添加量的變化抗氧化酶活性也都發(fā)生了改變，這與萬敏等[34]在皺紋盤鮑研究中顯示出的維生素能夠影響抗氧化酶活性的結(jié)果是一致的。

3．4　復(fù)合維生素對海參幼苗免疫力的影響

溶菌酶是非特異性免疫系統(tǒng)中的重要成員之一，其作用機(jī)制主要是通過溶解細(xì)菌細(xì)胞壁中的膚聚糖成分，從而破壞細(xì)菌的細(xì)胞壁，使細(xì)胞死亡，其作用位點(diǎn)在N－乙酰葡萄糖胺和N－乙酰胞壁酸之間的β－1,4糖苷鍵[36]。在海參中，溶菌酶除了有防御病害的作用外[37]，還有消化和濾食海洋細(xì)菌的作用[36]。目前，大量研究結(jié)果已表明維生素可以很顯著提高多種魚類血清中溶菌酶的活力，但是尚無關(guān)于維生素對海參幼苗溶菌酶活力影響的報(bào)道。該研究表明飼料中添加維生素可以刺激海參幼苗的非特異性細(xì)胞免疫，提高體腔液中溶菌酶的活力。其中，第四組的維生素在30 d和60 d時可以提高溶菌酶的活力，繼續(xù)增加飼料中復(fù)合維生素的添加量，30 d的海參幼苗的溶菌酶活力反而有所降低。該試驗(yàn)結(jié)果類似于維生素對中華鱘血清中溶菌酶的影響[38]。而在試驗(yàn)第60 d時，試驗(yàn)組投喂低濃度和高濃度的復(fù)合維生素的飼料溶菌酶活力都產(chǎn)生了降低現(xiàn)象。以上試驗(yàn)結(jié)果說明，中低濃度的復(fù)合維生素在短期內(nèi)飼喂可以迅速升高溶菌酶的活性，而高濃度的復(fù)合維生素，對免疫活力的提升效果較為緩慢。

4　小結(jié)

該試驗(yàn)以復(fù)合維生素為研究對象，考察其對海參幼苗生長性能、腸道酶活性和免疫功能的影響，通過研究得所得結(jié)論如下。

適當(dāng)量的復(fù)合維生素可顯著提高海參的生長性能、腸道酶活性和免疫功能，添加量為0．09%時達(dá)到最高。

用復(fù)合維生素拌料后，試驗(yàn)組餌料系數(shù)顯著降低，添加量為0．09%時最低，超過0．09%后又隨之上升。

試驗(yàn)過程中，試驗(yàn)組的成活率、吃料情況、生長性能、腸道酶活性和免疫功能要好于對照組。

規(guī)格在2 000頭/kg以上的大苗推薦用量為0．07%～0．09%，小苗建議用量控制在 0．07%以下，在0．05%左右最好。