直腸癌患者化療前后PECAM-1、TRIM14水平變化及對預(yù)后的評估意義*

江波， 王興遠(yuǎn)， 周偉， 龍翔宇， 朱其榮， 應(yīng)偉， 李程， 汪建**， 林超， 劉曉川

(1.四川大學(xué)華西廣安醫(yī)院 腫瘤科， 四川 廣安 638000； 2.川北醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院 感染科， 四川 南充 637000； 3.廣安市廣安區(qū)人民醫(yī)院 心電圖室， 四川 廣安 638000； 4.四川大學(xué)華西廣安醫(yī)院 心胸外科， 四川 廣安 638000)

直腸癌是源于直腸黏膜上皮的惡性腫瘤，目前西方發(fā)達(dá)國家直腸癌發(fā)病率居高不下，而發(fā)展中國家也呈持續(xù)上升趨勢，全球面臨巨大的直腸癌疾病負(fù)擔(dān)；有研究表明，2018年全球直腸癌新發(fā)病例約70萬，居惡性腫瘤第8位，對全世界人類健康造成了巨大威脅[1-3]。隨著基因測序和分子檢測技術(shù)的發(fā)展，腫瘤遺傳學(xué)、表觀遺傳學(xué)等成果層出不窮，血小板內(nèi)皮細(xì)胞黏附分子1(platelet endotheliaal cell adhesion molecule 1，PECAM-1)是一種介導(dǎo)細(xì)胞粘連的跨膜糖蛋白分子，該分子在白細(xì)胞內(nèi)跨內(nèi)皮細(xì)胞遷移，調(diào)節(jié)血小板功能，并可抑制細(xì)胞凋亡和介導(dǎo)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)等；已有研究表明，PECAM-1的表達(dá)升高可促進(jìn)癌細(xì)胞的粘附和浸潤能力，提升癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移風(fēng)險[4-6]。既往研究顯示，三重基序蛋白14(triple motif 14，TRIM14)具有調(diào)控先天免疫反應(yīng)和影響細(xì)胞分化等生理功能，并與惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，能通過多種信號通路影響腫瘤的增殖、浸潤、轉(zhuǎn)移及耐藥等生物學(xué)行為[7-9]。目前在直腸癌中對PECAM-1、TRIM14的研究極少，本研究旨在通過研究觀察這2種蛋白在化療前后的水平變化情況，并分析其與預(yù)后的關(guān)系，現(xiàn)報告如下。

1 對象與方法

1.1 研究對象

選取2016年1月—2020年1月行化療的直腸癌患者，要求符合直腸癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)[10]，接受化療，年齡40～80歲，腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(tumor node metastasis，TNM)分期為Ⅲ期、Ⅳ期且腫瘤可測量，病例資料完整者。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)入組前已治療者；(2)合并其他惡性腫瘤、血液疾??；(3)存在病毒感染；(4)合并糖尿??；(5)合并心腦血管疾病者。共納入直腸癌患者124例，男性88例、女性36例，年齡50～74歲、平均(62.58±6.25)歲，體質(zhì)量指數(shù)(body mass index，BMI)18.12～25.03 kg/m2、平均(21.21±2.11)kg/m2，腺癌115例(管狀腺癌41例、乳頭狀癌43例、黏液腺癌23例及印戒細(xì)胞癌8例)、腺鱗癌5例及未分化癌4例，TNM分期Ⅲ期96例和Ⅳ期28例。

1.2 研究方法

1.2.1療效判定 所有患者行6～8周化療，于化療結(jié)束時采用LS PET-CT 掃描儀(美國GE Discovery )行計算機(jī)體層成像(computertomography，CT)檢測，并根據(jù)RECIST 1.1標(biāo)準(zhǔn)評估患者預(yù)后情況，化療后所有病灶消失視為完全緩解(complete remission，CR)，靶病灶最長徑之和減少30%及以上為部分緩解(partial remission，PR)，靶病灶最長徑之和減少低于30%或增加20%視為疾病穩(wěn)定(stability disease，SD)，靶病灶最長徑之和增加20%及以上或出現(xiàn)新病灶則視為疾病進(jìn)展(progression disease，PD)[11]。

1.2.2PECAM-1和TRIM14檢測 采用直腸鏡鉗取所有患者化療前后腫瘤組織樣本各100 mg，采用Western blot法檢測化療前后PECAM-1、TRIM14蛋白表達(dá)，以GAPDH為內(nèi)參，通過Image-Pro Plus軟件分析蛋白灰度，比較4組不同療效患者腫瘤組織標(biāo)本中PECAM-1、TRIM14蛋白灰度與GAPDH灰度比值。

1.2.3隨訪 對化療后的所有患者通過電話和門診每3月隨訪1次，隨訪時間截止至2021年1月，記錄患者存活與死亡情況。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 化療前后PECAM-1、TRIM14的表達(dá)

化療前，與CR組比較，PR、SD、PD組腫瘤組織標(biāo)本中PECAM-1、TRIM14表達(dá)水平升高，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；與PR組比較，PD組PECAM-1表達(dá)水平升高，SD、PD組TRIM14表達(dá)水平升高，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；與SD組比較，PD組PECAM-1表達(dá)水平升高，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。與化療前相比，化療后直腸癌患者腫瘤組織標(biāo)本中PECAM-1、TRIM14表達(dá)水平下降，同時化療后CR、 PR、SD及PD組患者PECAM-1表達(dá)水下降，CR、PR組患者化療后TRIM14表達(dá)水平也較化療前下降，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；與CR組患者比較，PR、SD、PD組患者化療后PECAM-1、TRIM14表達(dá)水平升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；與PR組患者比較，PD、SD組患者化療后PECAM-1、TRIM14表達(dá)水平升高，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；與SD組患者比較，PD患者化療后PECAM-1、TRIM14表達(dá)水平升高，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 化療前后直腸癌患者PECAM-1和TRIM14表達(dá)變化情況 Tab.1 Changes of PECAM-1 and TRIM14 expression in the patients with rectal cancer before and after chemotherapy

2.2 PECAM-1、TRIM14表達(dá)與患者預(yù)后的相關(guān)性

直腸癌患者化療后隨訪1年內(nèi)死亡15例、生存109例，生存組直腸癌患者化療后PECAM-1、TRIM14表達(dá)水平均低于死亡組患者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05，表2)；Spearman相關(guān)性分析顯示，直腸癌患者化療后PECAM-1、TRIM14表達(dá)水平與預(yù)后不良呈正相關(guān)(r=0.528、0.497，P<0.05)。

表2 不同預(yù)后直腸癌患者PECAM-1、 TRIM14表達(dá)水平比較Tab.2 Comparison of expression levels of PECAM-1 and TRIM14 in the patients with different prognosis

2.3 PECAM-1、TRIM14表達(dá)水平對患者預(yù)后的評估價值

ROC曲線分析顯示，PECAM-1、TRIM14聯(lián)合診斷指標(biāo)曲線下面積為0.965，與各單項指標(biāo)曲線下面積差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；二指標(biāo)最佳截斷值分別為2.09、1.48。見表3和圖1。

表3 PECAM-1、TRIM14表達(dá)水平對直腸癌 患者預(yù)后的評估價值Tab.3 Analysis of the evaluation value of the expression levels of PECAM-1 and TRIM14 on the prognosis of the patients

圖1 PECAM-1、TRIM14表達(dá)水平對直腸癌 患者預(yù)后的評估價值Fig.1 Analysis of the evaluation value of PECAM-1 and TRIM14 expression levels on the prognosis of the patients

2.4 直腸癌患者預(yù)后的單因素和多因素分析

將相關(guān)變量納入Cox回歸模型進(jìn)行量化賦值，以預(yù)后情況為自變量(存活=0，死亡=1)，以性別(女=0，男=1)、年齡(<60歲=0，≥60歲=1)、BMI(<21.21 kg/m2=0，≥21.21 kg/m2=1)、病理分型(腺癌=0，腺鱗癌=1，未分化癌=2)、TNM分期(Ⅲ期=0，Ⅳ期=1)及PECAM-1(<2.09=0，≥2.09=1)、TRIM14(<1.48=0，≥1.48=1)為因變量，多因素Cox回歸分析顯示，TNM分期Ⅳ期、PECAM-1含量≥2.09、TRIM14含量≥1.48是直腸癌患者預(yù)后不良的危險因素，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表4。

表4 直腸癌患者預(yù)后的單因素和多因素分析Tab.4 Univariate and multivariate analysis of poor prognosis of rectal cancer

3 討論

直腸癌中晚期多伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，生存率較低，尤其是晚期直腸癌患者5年生存期僅13%，目前以奧利沙鉑、貝伐珠單抗及西妥昔單抗為代表化療或靶向藥物使用在一定程度上提高了患者的生存期，但患者預(yù)后現(xiàn)狀依然不容樂觀[12-14]。尋找新的治療靶點(diǎn)和評估預(yù)后的標(biāo)志物一直是臨床研究的熱點(diǎn)，這對于控制腫瘤復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移和提高直腸癌患者的生存期具有重要意義，隨著腫瘤分子遺傳學(xué)的發(fā)展，臨床對從細(xì)胞、分子水平上闡述腫瘤的發(fā)生發(fā)展機(jī)制的研究掀起了一波又一波熱潮[15-16]。既往研究發(fā)現(xiàn)TRIM家族與多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，能夠調(diào)控腫瘤細(xì)胞的增殖、浸潤、轉(zhuǎn)移、凋亡及耐藥等多種生物學(xué)行為，TRIM14為該家族的一員，其高表達(dá)水平能通過激活核因子-κB(nuclear factor-κB，NF-κB)信號通路促進(jìn)口腔鱗癌、胰腺癌的增殖、浸潤及轉(zhuǎn)移等惡性進(jìn)程[17-20]。PECAM-1是臨床較常研究的黏附分子，在多種惡性腫瘤中可表達(dá)于腫瘤血管和淋巴管內(nèi)皮，提示該黏附分子參與了腫瘤的發(fā)生和新生血管的形成過程，在促進(jìn)腫瘤增殖和遷移中發(fā)揮了重要作用，同時有研究發(fā)現(xiàn)PECAM-1能夠抑制多種細(xì)胞的凋亡，尤其是造血和血管癌癥細(xì)胞，其高表達(dá)水平是非小細(xì)胞肺癌、胃癌等癌癥晚期不良預(yù)后的危險因子[21-23]。

本研究結(jié)果顯示，化療后整體上直腸癌患者PECAM-1、TRIM14表達(dá)水平下降，且直腸癌不同療效患者機(jī)體PECAM-1表達(dá)水平較化療前降低，CR、PR患者化療后TRIM14表達(dá)水平較化療前下降，化療后PECAM-1、TRIM14表達(dá)水平從低到高依次為CR、PR、SD、PD，這提示PECAM-1、TRIM14在直腸癌化療患者機(jī)體的表達(dá)水平變化可以反映化療效果的差異。吳青紅等[24]研究表明，PECAM-1是腸組織微血管密度的標(biāo)志物，與結(jié)直腸腫瘤血管的生成密切相關(guān)；胡力等[25]結(jié)果顯示，PECAM-1在結(jié)直腸癌患者外周血清中異常表達(dá)，并促進(jìn)了腫瘤的淋巴結(jié)浸潤和肝轉(zhuǎn)移；由此可見PECAM-1、TRIM14表達(dá)水平影響著腫瘤的血管生成、淋巴結(jié)浸潤及遷移的能力，這也進(jìn)一步表明PECAM-1、TRIM14在直腸癌的發(fā)生發(fā)展中扮演著重要角色。丁燕等[26]研究指出，TRIM14在結(jié)直腸癌中表達(dá)會上調(diào)，且其高表達(dá)與患者多種不良臨床特征及預(yù)后有關(guān)，是影響患者預(yù)后的重要標(biāo)志物。對于已出現(xiàn)轉(zhuǎn)移的直腸癌腫瘤患者，通過化療殺滅機(jī)體內(nèi)的腫瘤細(xì)胞，能在一定程度上控制疾病進(jìn)展、改善預(yù)后、提升患者的生存期，但對預(yù)后如何進(jìn)行準(zhǔn)確評估一直是臨床探討的問題。諸多標(biāo)志物逐一在研究中被發(fā)現(xiàn)，其中以蛋白分子為主的一類標(biāo)志物最受重視。本研究結(jié)果也表明，化療后直腸癌患者PECAM-1、TRIM14表達(dá)水平與其預(yù)后不良呈正相關(guān)，這提示PECAM-1、TRIM14表達(dá)水平可能是導(dǎo)致直腸癌患者預(yù)后不良的關(guān)鍵因子，推測預(yù)后不良可能與化療后PECAM-1、TRIM14保持較高的表達(dá)，導(dǎo)致腫瘤仍然具有較高的血管生成、細(xì)胞浸潤及遷移的能力有關(guān)。臨床對于化療后的PECAM-1、TRIM14表達(dá)與患者預(yù)后討論較少，多通過化療前進(jìn)行評估，且尚未發(fā)現(xiàn)直腸癌化療后針對這2個指標(biāo)與預(yù)后的研究。楊金珠等[27]研究表明，PECAM-1較低的胃癌化療后患者中位生存期和無進(jìn)展生存期長于PECAM-1較高者，一定程度上說明化療后的PECAM-1表達(dá)水平與腫瘤患者預(yù)后有關(guān)。為此本研究進(jìn)一步行ROC曲線分析，結(jié)果顯示ECAM-1、TRIM14對直腸癌患者預(yù)后不良均具有較高的預(yù)測價值，從而表明PECAM-1、TRIM14可以作為評估患者預(yù)后的關(guān)鍵指標(biāo)；且這2個指標(biāo)的蛋白表達(dá)水平最佳截斷值分別為2.09、1.48，提示PECAM-1、TRIM14表達(dá)高于截斷值時患者可能導(dǎo)致患者預(yù)后不良；多因素Cox回歸分析也提示PECAM-1、TRIM14是導(dǎo)致直腸癌患者預(yù)后不良的危險因素，進(jìn)一步表明了PECAM-1、TRIM14對患者預(yù)后具有較高的評估價值。此外，本研究結(jié)果顯示化療前各組直腸癌患者PECAM-1、TRIM14表達(dá)水平也存在差異，尤其是CR、PR組患者PECAM-1、TRIM14表達(dá)水平相對較低，說明化療前的PECAM-1、TRIM14表達(dá)水平也對直腸癌化療效果或預(yù)后可能存在一定的影響，但考慮到化療后的數(shù)據(jù)對患者預(yù)后預(yù)測更為準(zhǔn)確，因此本研究以化療后直腸癌患者PECAM-1、TRIM14表達(dá)水平進(jìn)行研究，而化療前的表達(dá)水平是否對其產(chǎn)生影響需要后期進(jìn)一步研究。

綜上所述，PECAM-1、TRIM14在直腸癌患者腫瘤組織中呈高水平表達(dá)，經(jīng)化療后CR、PR患者PECAM-1、TRIM14表達(dá)下調(diào)明顯，SD、PD患者下調(diào)幅度則較低，且保持著較高的表達(dá)水平；PECAM-1、TRIM14高表達(dá)是影響直腸癌患者預(yù)后的危險因素，對直腸癌患者的化療后不良預(yù)后具有較高的評估價值。