云南粳型地方稻資源抗稻瘟病鑒定評(píng)價(jià)

管娟 肖素勤 陳玲 張敦宇 張?jiān)?程在全

摘要：【目的】鑒定和篩選獲得云南粳型地方稻抗稻瘟病種質(zhì)資源，明確其稻瘟病抗性及抗病基因分布，為合理利用水稻抗稻瘟病種質(zhì)資源及其布局提供參考?！痉椒ā坎捎貌∑宰匀昏b定與人工接種相結(jié)合的方法，對(duì)150份云南粳型地方稻資源的稻瘟病抗性進(jìn)行鑒定，并利用9個(gè)已克隆基因（Pid4、Pi25、Pi35、Pi36、Pikm、Pigm、Pi37、Pi56、Pi33）和2個(gè)已定位基因（Pi27、Pi23）對(duì)供試稻種資源進(jìn)行基因型檢測，明確抗病基因在抗稻瘟病材料中的分布。【結(jié)果】從150份水稻材料中共鑒定出抗稻瘟?。ㄈ~瘟或穗頸瘟）材料45份，45份材料中攜帶Pi25、Pi23、Pikm、Pi35、Pi36、Pi33、Pi27、Pi37、Pid4、Pigm抗性基因的材料分別有34份（75.6%）、25（55.6%）、25份（55.6%）、22份（48.9%）、14份（31.1%）、14份（31.1%）、12份（26.7%）、10份（22.2%）、6份（13.3%）和5份（11.1%），未檢測到含有Pi56的材料。45份抗性材料含有的抗性基因數(shù)量介于1～7，大部分含有3～5個(gè)，其中攜帶3個(gè)抗性基因材料13份占28.9%，攜帶4個(gè)抗性基因材料8份占17.8%，攜帶5個(gè)抗性基因材料11份占24.4%?？共∧芰^強(qiáng)的材料黑殼谷攜帶6個(gè)抗病基因（Pi25、Pi35、Pi36、Pikm、Pi37和Pi33），光殼花糯攜帶5個(gè)抗病基因（Pi35、Pi36、Pikm、Pi37和Pi33）?！窘Y(jié)論】研究獲得45份云南粳型抗稻瘟病地方稻材料，鑒定獲得2份（黑殼谷和光殼花糯）全生育期抗葉瘟和穗頸瘟材料，這2份抗性材料均攜帶Pi35-Pi36-Pikm-Pi37-Pi33基因組合，可作為抗稻瘟病分子育種的優(yōu)異抗源材料。

關(guān)鍵詞： 水稻;稻瘟病;表型鑒定;基因分析;云南省

中圖分類號(hào)： S435.111.41? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A 文章編號(hào)：2095-1191（2022）01-0047-10

Evaluation of resistance to rice blast of japonica rice landrace resources in Yunnan

GUAN Juan1，2， XIAO Su-qin2， CHEN Ling2，ZHANG Dun-yu2，

ZHANG Yun2*， CHENG Zai-quan2*

（1 School of Resource Plants， Yunnan University， Kunming? 650504， China; 2 Biotechnology and Germplasm

Resources Institute， Yunnan Academy of Agricultural Sciences， Kunming? 650205， China）

Abstract：【Objective】Yunnan japonica rice blast resistant germplasm resources were obtained through identification and screening. Furthermore， the distribution of rice blast resistance genes in Yunnan japonica local rice resources were studied， which provided reference for rational utilization and distribution of rice blast resistance germplasm resources.【Method】The blast resistance of Yunnan japonica local rice resources was identified by natural identification in nursery and artificial inoculation. Rice blast resistance of 150 Yunnan japonica local rice resources was identified. Nine cloned genes （Pid4， Pi25， Pi35， Pi36， Pikm， Pigm， Pi37， Pi56， Pi33） and two localized genes （Pi27， Pi23） were used to detect the genotypes of the tested rice germplasms to determine the distribution of resistance genes in rice blast resistance materials. 【Result】A total of 45 rice materials resistant to rice blast （leaf blast or panicle neck blast） were identified from 150 rice materials. The numbers of resistant materials carrying resistance genes Pi25， Pi23， Pikm， Pi35， Pi36， Pi33， Pi27， Pi37， Pid4 and Pigm were 34 （75.6%）， 25 （55.6%）， 25 （55.6%）， 22 （48.9%）， 14 （31.1%）， 14 （31.1%）， 12 （26.7%）， 10 （22.2%）， 6 （13.3%） and 5 （11.1%）. No material containing Pi56 was detected. The number of resistance genes in 45 resistant materials ranged from 1 to 7， and most of them contained 3 to 5 resistance genes， including 13 materials carr-ying three resistance genes（28.9%）， 8 materials carrying 4 resistance genes（17.8%） and 11 materials carrying 5 resistance genes（24.4%）. Heikegu with strong disease resistance carried 6 resistance genes （Pi25， Pi35， Pi36， Pikm， Pi37 and Pi33）， and Guangkehuanuo carried 5 resistance genes （Pi35， Pi36， Pikm， Pi37 and Pi33）. 【Conclusion】In this study，45 japonica rice blast resistant materials in Yunnan were obtained. And 2 materials with resistance to leaf blast and neck blast were identified as Heikegu and Guangkehuanuo during the whole growth period they the gene combination of Pi35-Pi36-Pikm-Pi37-Pi33. This study can provide resistance source materials for molecular breeding and gene mapping of resistance to rice blast.

Key words： rice; rice blast; phenotypic identification; gene analysis; Yunnan

Foundation items： Yunnan Talents Special Project（YNWR-QNBJ-2018-284）; Project of Yan Long’an Academician Workstation of Yunnan（202005AF150032）; Graduate Research Innovation Project of Yunnan University（2020325）

0 引言

【研究意義】水稻（Oryza sativa L.）是全球約1/2人口的主糧。由子囊真菌（Magna-porthe oryzae）引起的稻瘟病被稱為“水稻癌癥”，其嚴(yán)重影響水稻產(chǎn)量和稻米品質(zhì)，對(duì)世界糧食安全構(gòu)成嚴(yán)重威脅。在25～28 ℃、空氣濕度達(dá)96%的高溫高濕環(huán)境下最易發(fā)生稻瘟?。◤埿』ǖ?，2021）。稻瘟菌具有遺傳復(fù)雜性、致病多樣性和變異高度性的特點(diǎn)，水稻品種經(jīng)過長時(shí)間種植易喪失抗性而成為感病品種（Wilson and Talbot，2009;徐志健等，2020）。云南是水稻的起源和演化中心之一，具有豐富且遺傳多樣性水平高的稻種資源（陳越等，2019），由于特殊的地理隔離環(huán)境，這些資源外觀表型差異大，長期的稻種隔離進(jìn)化或演化，在多種多樣病原菌的脅迫下，極易演化出多種多樣的抗稻瘟病基因，是拓寬現(xiàn)代栽培稻抗稻瘟病遺傳基礎(chǔ)的重要資源。在云南省水稻品種審定中稻瘟病實(shí)行一票否決制?；诰G色發(fā)展理念，優(yōu)化栽培管理措施、栽種抗稻瘟病品種是防治稻瘟病的有效手段（溫小紅等，2013），而開展水稻種質(zhì)資源的抗病性評(píng)價(jià)，綜合選育出適合當(dāng)?shù)卦耘嗟母弋a(chǎn)優(yōu)質(zhì)抗病新品系（新品種），是水稻抗性資源利用的基礎(chǔ)工作?？共』虮煌诰?、定位和克隆為水稻抗稻瘟病育種提供了豐富的抗源（殷得所等，2011）。利用基因序列信息，發(fā)展特異性功能標(biāo)記，可快速檢測品種的抗稻瘟病基因型（何重等，2014），對(duì)全面了解我國水稻抗稻瘟病的基因型及其合理布局與輪換具有重要意義?！厩叭搜芯窟M(jìn)展】國內(nèi)外對(duì)稻瘟病抗性基因已有較系統(tǒng)深入的研究，隨著抗瘟基因定位、克隆及分子標(biāo)記的發(fā)展，分子標(biāo)記輔助育種的效率得以大幅度提高（王生軒等，2017）。近年來已從水稻種質(zhì)資源中篩選和鑒定出一批優(yōu)良的抗稻瘟病資源，并利用分子標(biāo)記技術(shù)鑒定和定位出約100多個(gè)稻瘟病抗性基因（徐小金，2016），鑒定的抗稻瘟病QTLs有500多個(gè)（Li et al.，2019），其中已克隆37個(gè)NBS-LRR基因Pit、Pi37、Pish、Pi35、Pi64、Pib、Pi63、Pi2、Pi9、Piz-t、Pigm、Pid3、Pid3-A4、Pi25、Pi50、Pi36、Pi33、Pi5、Pii、Pi56、Pia、Pi-CO3911、Pi54、Pi54rh、Pi54of、Pik、Pi-1、Pikh、Pikm、Pikp、Pike、Piks、Pb1、Pi-ta、Pid4、rbr2）、Pi48（楊紅等，2008;盛浩聞，2014;陳智雄，2018;Chen et al.，2018;高清等，2021）及6個(gè)其他結(jié)構(gòu)類型基因bsr-d1（MYB轉(zhuǎn)錄因子）、pi21（富含脯氨酸蛋白）、Pid2（RLK）、bsr-k1（富含TPRs蛋白）、Ptr（富含ARM蛋白）、Pi65（LRR-RLK）（高清等，2021;Wang et al.，2021）。利用抗性基因的功能標(biāo)記或緊密連鎖分子標(biāo)記，可準(zhǔn)確地開展水稻種質(zhì)資源抗稻瘟病基因型鑒定工作，已相繼從云南地方稻資源中鑒定出一批含有抗稻瘟病基因的種質(zhì)，如董麗英等（2012）利用由24個(gè)稻瘟病抗性單基因系組成的鑒別材料對(duì)云南稻區(qū)的稻瘟病菌群體致病性進(jìn)行分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)Piz-t、Pi9和Pi5等基因是改良品種抗病性的重要基因源;在云南秈稻區(qū)對(duì)稻瘟病菌抗性頻率高于80%的基因主要有Pi9、Pi5、Pik-h、Pita-2、Piz-5、Pita和Piz，在粳稻區(qū)對(duì)稻瘟病菌抗性頻率高于80%的基因主要有Pi9、Pi5、Piz-t和Pi20;李進(jìn)斌等（2012b）對(duì)云南省176份地方水稻品種進(jìn)行Pita和Pib基因型檢測，發(fā)現(xiàn)攜帶Pita或Pib基因的品種對(duì)稻瘟病的抗性較好;孫一丁等（2018）研究5個(gè)抗稻瘟病主效基因在云南省抗稻瘟病育種中的利用狀況，用分子標(biāo)記對(duì)云南省推廣品種和優(yōu)異地方稻種進(jìn)行了分子檢測，發(fā)現(xiàn)Pik-h、Pi5和Pita在地方品種中出現(xiàn)頻率較高;馬繼瓊等（2021）研究結(jié)果表明，Pib、Pikh、Piz、Pi9和Pi5等5個(gè)基因在云南秈粳稻交錯(cuò)區(qū)—溫暖粳稻亞區(qū)具有廣泛的利用價(jià)值?！颈狙芯壳腥朦c(diǎn)】前人雖然已有對(duì)云南地方稻資源進(jìn)行抗稻瘟病鑒定的報(bào)道，但往往僅限于單一的葉瘟或穗頸瘟鑒定;對(duì)材料既進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室和田間自然鑒定、又進(jìn)行苗期和孕穗期接菌鑒定的較少見，且云南地方稻材料中是否攜帶9個(gè)已克隆基因Pid4、Pi25、Pi35、Pi36、Pikm、Pigm、Pi37、Pi56、Pi33和2個(gè)已定位基因Pi27、Pi23的研究尚未可知?！緮M解決的關(guān)鍵問題】采用多種表型鑒定與基因型鑒定相結(jié)合的方法，對(duì)150份云南粳型地方稻抗稻瘟病及其所攜帶9個(gè)已克隆基因（Pid4、Pi25、Pi35、Pi36、Pikm、Pigm、Pi37、Pi56、Pi33）和2個(gè)已定位基因（Pi27、Pi23）情況進(jìn)行鑒定，明確供試云南粳型地方稻資源的稻瘟病抗性及本研究所檢測基因的分布，以鑒定和篩選獲得云南粳型地方稻抗稻瘟病種質(zhì)資源，為合理利用水稻抗稻瘟病種質(zhì)資源及其布局提供參考。

1 材料與方法

1. 1 試驗(yàn)材料

供試水稻材料為云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院生物技術(shù)與種質(zhì)資源研究所提供的150份來源于云南16個(gè)州（市）的粳型地方稻資源，以蒙古稻為誘發(fā)材料，以感病品種麗江新團(tuán)黑谷為陰性對(duì)照。供試稻瘟病菌菌株：供試菌株8個(gè)，為云南強(qiáng)致病稻瘟病菌株491、66b、540、129、179、463、YN355和226，由云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院環(huán)境資源研究所楊勤忠老師和云南農(nóng)業(yè)大學(xué)植物保護(hù)學(xué)院李成云老師提供。

1. 2 試驗(yàn)方法

1. 2. 1 稻瘟病菌培養(yǎng)和孢子懸浮液制備 分別采用PDA培養(yǎng)基（Liu and Stützel，2004）（去皮馬鈴薯200 g、葡萄糖10 g、瓊脂15 g、蒸餾水1000 mL）和番茄燕麥產(chǎn)孢培養(yǎng)基（張國珍等，2002）（燕麥片40 g、番茄汁150 mL、瓊脂20 g、蒸餾水1000 mL）進(jìn)行稻瘟病菌菌絲培養(yǎng)及孢子培養(yǎng)。制備稻瘟病菌孢子懸浮液時(shí)，先在產(chǎn)孢的培養(yǎng)皿中加入5 mL滅菌水，用棉簽或載玻片刮洗，洗下培養(yǎng)基表面的分生孢子，過濾收集孢子懸浮液，菌液用紗布（或?qū)Ｓ脼V布）過濾，濾液在100倍顯微鏡下觀察有20～50個(gè)孢子時(shí)可供苗期噴霧接菌和孕穗期注射接菌使用（李進(jìn)斌等，2012a）。

1. 2. 2 稻瘟病菌的苗期接種鑒定 將供試水稻材料浸種至露白，分批播于50孔加深育苗盤（54.0 cm×28.0 cm×9.5 cm）中，以麗江新團(tuán)黑谷為感病對(duì)照，每個(gè)材料播種16株，2.5葉期每盤施0.5 g尿素（李進(jìn)斌等，2012a），1 d后追施第2次，施肥7 d后用加入0.2% Tween-20的混合菌懸浮液（66b、129、491、179、463、226、540和YN355）進(jìn)行噴霧接種（夏小東等，2011）。接種后的稻苗置于26～28 ℃、濕度95%的人工氣候箱中暗處理24 h，隨后在12 h光照∶12 h黑暗、溫濕度保持不變的環(huán)境下培養(yǎng)，7 d后進(jìn)行調(diào)查。

1. 2. 3 稻瘟病菌的自然誘發(fā)鑒定和接種鑒定 在云南省玉溪市易門縣實(shí)驗(yàn)基地田間自然誘發(fā)鑒定圃對(duì)參試材料進(jìn)行苗期和孕穗期自然誘發(fā)鑒定及孕穗期人工注射接種鑒定。

人工接種鑒定時(shí)考慮到8個(gè)菌工作量較大，因此只用3個(gè)致病菌株491、66b和540在參試材料孕穗期時(shí)對(duì)破肚前3～4 d的穗包進(jìn)行人工注射接菌法鑒定穗頸瘟。每個(gè)菌株分別接種10株，每穗接種5～10 mL菌液，接種20 d或成熟后進(jìn)行調(diào)查。

1. 2. 4 發(fā)病調(diào)查標(biāo)準(zhǔn) 參照國際水稻研究所葉瘟抗性評(píng)價(jià)分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)發(fā)病情況進(jìn)行調(diào)查，按照病情指數(shù)=∑（各級(jí)病株數(shù)×該病級(jí)值）/（調(diào)查總株數(shù)×最高級(jí)值）×100進(jìn)行病情指數(shù)計(jì)算。病情指數(shù)為0表示高抗（HR），0～5.0%為抗（R），5.1%～15.0%為中抗（MR），15.1%～25.0%為中感（MS），25.1%～50.0%為感（S），≥50.1%為高感（HS）（何奕霏等，2021）。人工注射接種鑒定穗頸瘟參考GB/T 15790—2009《稻瘟病測報(bào)調(diào)查規(guī)范》制定的稻瘟病9級(jí)（以穗為單位）標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行調(diào)查（董麗英等，2018），計(jì)算出穗平均損失率后對(duì)應(yīng)9級(jí)發(fā)病等級(jí)。注射接種鑒定抗1～3個(gè)接種稻瘟病菌株記為抗，感3個(gè)菌株時(shí)記為感。

1. 2. 5 抗性基因的分子標(biāo)記檢測 在水稻分蘗期或拔節(jié)期，取新鮮水稻葉片用試劑盒的方法提取DNA?？剐曰蚍肿訕?biāo)記序列見表1，PCR檢測方法參照表1的相關(guān)文獻(xiàn)。以麗江新團(tuán)黑谷為陰性對(duì)照，引物均由北京擎科新業(yè)生物技術(shù)有限公司合成。

1. 3 統(tǒng)計(jì)分析

采用Excel 2016對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行整理和作圖。采用SPSS 23.0對(duì)不同水稻品種含有的抗瘟基因數(shù)與抗性頻率間的相關(guān)性進(jìn)行分析。

2 結(jié)果與分析

2. 1 稻瘟病表型鑒定結(jié)果

自然誘發(fā)和人工接種鑒定結(jié)果顯示蒙古稻和麗江新團(tuán)黑谷發(fā)病均達(dá)9級(jí)，表明試驗(yàn)結(jié)果數(shù)據(jù)可靠。葉瘟發(fā)病情況如圖1～圖3，以自然誘發(fā)和噴霧接菌均中抗及以上的材料記為抗葉瘟，反之記為感葉瘟。自然誘發(fā)鑒定出抗葉瘟材料5份、中抗材料56份、中感材料53份、感病材料32份、高感材料4份;室內(nèi)人工接種鑒定共鑒定出抗葉瘟材料2份、中抗材料22份、中感材料63份、感病材料63份。綜合自然誘發(fā)和人工噴霧2種方法接種鑒定葉瘟，共鑒定出葉瘟發(fā)病等級(jí)在0～4級(jí)、病情指數(shù)在15%以下的抗葉瘟材料8份。

穗頸瘟鑒定結(jié)果（圖4），自然誘發(fā)鑒定發(fā)現(xiàn)高抗材料6份，抗病材料28份，中抗材料46份，中感材料29份，感病材料20份，高感材料21份。注射接種鑒定發(fā)現(xiàn)150份供試材料中同時(shí)抗491、66b和540菌株的材料7份;抗2個(gè)菌株的材料18份，其中抗491和540菌株的材料8份，抗66b和540菌株的材料5份，抗491和66b菌株的材料5份;只抗1個(gè)菌株的材料43份，其中只抗491菌株的材料13份，只抗66b菌株的材料12份，只抗540菌株的材料18份;不抗3個(gè)菌株的材料82份。綜合自然誘發(fā)鑒定和人工注射接種鑒定結(jié)果，自然誘發(fā)鑒定在0～3級(jí)且至少抗1個(gè)接種稻瘟病菌株的材料統(tǒng)計(jì)為抗穗頸瘟，共鑒定出抗穗頸瘟材料39份。

綜合葉瘟和穗頸瘟鑒定結(jié)果，共篩選出表型抗稻瘟?。ㄈ~瘟或穗頸瘟）材料45份，感稻瘟病材料105份。45份抗稻瘟病材料中抗穗頸瘟、感葉瘟材料37份，占供試材料的24.7%，抗葉瘟、感穗頸瘟材料6份，占供試材料的4.0%，既抗葉瘟又抗穗頸瘟材料2份（黑殼谷和光殼花糯），占供試材料的1.3%，該2份材料可作為抗稻瘟病育種優(yōu)異抗性親本（表2）。

2. 2 抗性基因在參試水稻材料中的分布

對(duì)從云南粳型地方稻材料中篩選出的45份表型抗葉瘟或穗頸瘟材料進(jìn)行分子標(biāo)記檢測，根據(jù)11個(gè)抗稻瘟病基因的特異性功能標(biāo)記或緊密連鎖分子標(biāo)記進(jìn)行PCR擴(kuò)增，以麗江新團(tuán)黑谷為陰性對(duì)照，以谷梅4號(hào)為Pigm基因的陽性對(duì)照（Deng et al.，2006），分析11個(gè)基因及其同源基因在45份材料中的分布情況。結(jié)果表明，攜帶Pi25、Pi23、Pikm、Pi35、Pi36、Pi33、Pi27、Pi37、Pid4和Pigm抗性基因的抗性供試材料分別有34份（75.6%）、25份（55.6%）、25份（55.6%）、22份（48.9%）、14份（31.1%）、14份（31.1%）、12份（26.7%）、10份（22.2%）、6份（13.3%）和5份（11.1%）。在45份供試抗性材料中，11個(gè)抗性基因的分布以 Pi25、Pi23和Pikm最多，Pid4和Pigm較少，未檢測到含Pi56的材料。沒有材料同時(shí)含有11個(gè)檢測抗性基因，也沒有材料不含任何抗性基因。

2. 3 攜帶抗性基因數(shù)量與水稻的抗病性

45份抗性材料含有的抗性基因數(shù)量介于1～7個(gè)，大部分含有3～5個(gè)，其中攜帶1個(gè)抗性基因的材料2份占4.4%，攜帶2個(gè)抗性基因的材料7份占15.6%，攜帶3個(gè)抗性基因的材料13份占28.9%，攜帶4個(gè)抗性基因的材料8份占17.8%，攜帶5個(gè)抗性基因的材料11份占24.4%，攜帶6個(gè)抗性基因的材料3份占6.7%，攜帶7個(gè)抗性基因的材料1份占2.2%。抗病能力較強(qiáng)的材料黑殼谷攜帶6個(gè)抗病基因（Pi25、Pi35、Pi36、Pikm、Pi37和Pi33），光殼花糯攜帶5個(gè)抗病基因（Pi35、Pi36、Pikm、Pi37和Pi33）（表3）。

參試材料的抗病性大致隨著攜帶抗性基因數(shù)量的增多呈上升趨勢。利用SPSS 23.0對(duì)45份材料攜帶抗性基因數(shù)量與葉瘟、穗頸瘟抗性水平（R記為1，S記為0）進(jìn)行Pearson相關(guān)性分析，結(jié)果顯示抗性基因數(shù)量與葉瘟和穗頸瘟抗性水平的相關(guān)系數(shù)分別為0.133和0.019，表明攜帶的抗性基因數(shù)量與葉瘟和穗頸瘟抗性水平均無顯著相關(guān)（P>0.05）。

3 討論

研究表明，培育廣譜持久抗稻瘟病品種和抗病品種合理布局是綠色防控稻瘟病最經(jīng)濟(jì)、有效的措施，而開展稻瘟病抗性品種鑒定是篩選優(yōu)良抗病品種和抗瘟基因的重要基礎(chǔ)。本研究從150份云南粳型地方稻材料中綜合鑒定獲得45份抗性種質(zhì)資源，其中，抗穗頸瘟材料39份，抗葉瘟材料8份，既抗葉瘟又抗穗頸瘟材料2份，為黑殼谷和光殼花糯。本研究鑒定的抗稻瘟病資源對(duì)云南現(xiàn)有稻瘟病菌具有顯著抗性，可作為稻瘟病育種和抗病基因研究的優(yōu)異抗源材料。因水稻品種抗病性差異、稻瘟病生理小種侵染能力強(qiáng)弱、抗病鑒定生態(tài)區(qū)不同和氣溫年際間差異等，在稻種資源葉瘟抗性與穗頸瘟抗性關(guān)系的研究結(jié)果中有一定差異，葉瘟抗性變化較穗頸瘟大（陳福如等，2006）。本研究發(fā)現(xiàn)水稻的葉瘟抗性與穗頸瘟抗性并非一一對(duì)應(yīng)，感葉瘟的材料到后期不一定就感穗頸瘟，與殷春淵等（2017）的研究結(jié)論一致。從整個(gè)表型鑒定結(jié)果來看，篩選出的抗葉瘟材料少于抗穗頸瘟材料，可能是因?yàn)槿~瘟與穗頸瘟鑒定試驗(yàn)的嚴(yán)格程度、接種環(huán)境和接種菌株數(shù)量的不同而導(dǎo)致。與穗頸瘟田間鑒定相比，葉瘟鑒定是在嚴(yán)格控溫控濕的人工氣候室內(nèi)噴霧接種8個(gè)菌株的混合菌懸液，不但人為控制了發(fā)病條件，而且噴霧接種的菌株數(shù)量比注射接種的菌株數(shù)量多。

一定程度上，聚合多個(gè)抗性基因有利于拓寬品種的抗譜，提高材料的抗病性，可作為培育稻瘟病持久抗性的有效方法（張銀霞等，2016）。但攜帶基因數(shù)量不是影響抗性的唯一因素，供試材料來源、遺傳背景、基因組合類型和聚合方式以及基因之間的互作均會(huì)影響稻瘟病抗性（鄧釗等，2022）。王麗麗等（2017）研究認(rèn)為抗瘟基因聚合與抗病性并非完全正相關(guān)，本研究對(duì)不同抗稻瘟病基因的抗病效應(yīng)進(jìn)行相關(guān)性分析，發(fā)現(xiàn)抗性基因數(shù)量與材料的稻瘟病抗性無顯著相關(guān)，即表型抗感與攜帶抗性基因個(gè)數(shù)并非一一對(duì)應(yīng)關(guān)系。其中，從2份抗葉瘟和穗頸瘟材料（黑殼谷和光殼花糯）發(fā)現(xiàn)Pi35-Pi36-Pikm-Pi37-Pi33基因組合在本研究中表現(xiàn)抗病能力最強(qiáng)，黑殼谷比光殼花糯多攜帶1個(gè)抗瘟基因Pi25，但表型抗葉瘟和穗頸瘟能力弱于光殼花糯，說明抗稻瘟病基因間的互作關(guān)系十分復(fù)雜，抗稻瘟病基因的聚合在一定程度上能提高水稻抗性，但水稻抗瘟能力的提高并不是簡單的抗瘟基因疊加的結(jié)果。因此，對(duì)抗稻瘟病水稻親本的選擇，應(yīng)從田間篩選出抗病性較強(qiáng)的親本作為抗稻瘟病育種的候選親本。

4 結(jié)論

通過表型鑒定與基因分析相結(jié)合的方法從150份來自云南多地的粳型地方稻資源進(jìn)行抗稻瘟病分析，鑒定出表型抗稻瘟病（葉瘟或穗頸瘟）材料45份，其中黑殼谷和光殼花糯2份材料在表型鑒定中既抗葉瘟又抗穗頸瘟，攜帶Pi35-Pi36-Pikm-Pi37-Pi33基因組合的抗病能力最強(qiáng)，可作為抗稻瘟病分子育種的優(yōu)異抗源材料。

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（責(zé)任編輯 麻小燕）