探討M-CSF、CA153、HPV聯(lián)合檢測(cè)在宮頸癌早期篩查中的臨床意義

尤鑫，戚潤(rùn)鵬，溫瑞，謝輝

(1.河南中醫(yī)藥大學(xué)人民醫(yī)院/鄭州人民醫(yī)院 檢驗(yàn)科，河南 鄭州 450000；2.開封市疾病預(yù)防控制中心 慢病科，河南 開封 475000)

宮頸癌發(fā)生率較高，在女性惡性腫瘤排行榜中位居第二，僅次于乳腺癌，其中50 ～55 歲女性為此病高發(fā)人群；宮頸癌早期以陰道流血、月經(jīng)期延長(zhǎng)、陰道異常排液等非特異性癥狀為主要表現(xiàn)，這一特征導(dǎo)致部分患者確診時(shí)病情往往已發(fā)展為中晚期。為及時(shí)遏制宮頸癌細(xì)胞擴(kuò)散，盡早檢測(cè)出該疾病并予以有效治療是改善宮頸癌患者預(yù)后的關(guān)鍵因素，因此，臨床十分重視對(duì)宮頸癌的早期篩查。巨噬細(xì)胞集落刺激因子(M-CSF)被認(rèn)為參與多種惡性腫瘤形成發(fā)展活動(dòng)，主要發(fā)揮腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)、侵襲及轉(zhuǎn)移的調(diào)控作用。此外，經(jīng)調(diào)查研究發(fā)現(xiàn)，在宮頸癌患者中存在高危型HPV 的感染者達(dá)到90%，糖類抗原153(CA153)等腫瘤標(biāo)志物常在生殖系統(tǒng)惡性腫瘤細(xì)胞學(xué)檢測(cè)中呈現(xiàn)高表達(dá)。綜合以上說法發(fā)現(xiàn)，宮頸癌進(jìn)展過程中有多種物質(zhì)參與，而綜合分析以上細(xì)胞因子與宮頸癌病癥的關(guān)系或能夠?yàn)榕R床診斷提供參考依據(jù)。基于此，本研究對(duì)本院收治的192 例疑似宮頸癌患者實(shí)施M-CSF、CA153、HPV 聯(lián)合檢測(cè)，探討其對(duì)于宮頸癌早期篩查的臨床意義，報(bào)告如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2017年5月至2019年8月于本院診治的192例疑似宮頸癌患者為研究對(duì)象，患者年齡在26 ～59 歲，平均(41.11±3.04)歲。173 例查體時(shí)出現(xiàn)白帶異常癥狀，152 例查體發(fā)現(xiàn)陰道感染，191 例存在外陰瘙癢，94 例出現(xiàn)接觸性出血。納入標(biāo)準(zhǔn)：均為已婚女性。排除標(biāo)準(zhǔn)：存在子宮切除手術(shù)史或?qū)m頸手術(shù)史；合并其他類型惡性腫瘤者；妊娠期女性；入組前3 個(gè)月內(nèi)服用過激素類藥物或于?？茩z查前自行沖洗過陰道。此研究經(jīng)醫(yī)學(xué)倫理會(huì)批準(zhǔn)，192 例患者及家屬均知曉研究方案并簽署知情同意書。

1.2 方法

M-CSF 檢測(cè)： 取患者空腹靜脈血5 mL， 離心15 min，置于-85℃環(huán)境中保存，檢測(cè)時(shí)取出。以酶聯(lián)免疫吸附法進(jìn)行M-CSF 檢測(cè)，試劑盒由中國(guó)聯(lián)科生物有限公司提供，M-CSF 平均濃度為231 pg/mL。

CA153 檢測(cè)：取患者空腹靜脈血，以2000 r/min的速度離心10 min，提取上層血清并采用全自動(dòng)生化分析儀( 濟(jì)南漢方醫(yī)療器械有限公司，魯械注準(zhǔn)20192220878，型號(hào)：HF-240)進(jìn)行CA153 檢測(cè)，相關(guān)試劑由羅氏公司提供。CA153 水平＞31.3 U/mL 可判定為陽性。

HPV 檢測(cè)：于月經(jīng)后3 ～7 d 進(jìn)行檢測(cè)，囑患者檢查前72 h 避免使用陰道藥物或沖洗陰道，檢查前48 h禁性生活。在陰道窺器協(xié)助下將專用采集刷置入宮頸管，旋轉(zhuǎn)3 ～5 圈，獲取標(biāo)本并裝入專用細(xì)胞保存液中，標(biāo)注好患者信息。對(duì)標(biāo)本進(jìn)行離心處理，取底部沉淀物，以PCR- 反向點(diǎn)雜交法進(jìn)行HPV 基因檢測(cè)，檢測(cè)23 個(gè)基因型，其中高危型為：HPV16、18、35、52等，低危型包括：HPV6、11、42、43、81、83。HPVDNA ≥1 pg/mL 可判定為陽性。

病理檢查：對(duì)M-CSF、CA153、HPV 任一檢查陽性患者進(jìn)行病理檢查，借助陰道鏡獲取可疑點(diǎn)組織標(biāo)本，病理結(jié)果為正常或炎癥則判定為陰性，宮頸不典型增生(CIN)和宮頸癌則判定為陽性，CIN 可依據(jù)程度不同分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ度。

1.3 觀察指標(biāo)

以病理檢查結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)，計(jì)算M-CSF、CA153、HPV 單獨(dú)檢測(cè)及聯(lián)合檢測(cè)的靈敏度、特異度、診斷符合率、假陽性率、假陰性率等，并比較不同類型患者的M-CSF、CA153 表達(dá)水平和HPV 病毒載量。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié) 果

2.1 觀察患者的M-CSF、CA153、HPV 檢測(cè)結(jié)果

192 例患者中，經(jīng)病理檢查確診陰性患者135 例，陽性患者57 例，陽性患者中CIN Ⅰ度30 例、CIN Ⅱ度12 例、CIN Ⅲ度13 例、宮頸癌2 例。CSF 檢測(cè)中呈陽性患者72 例，呈陰性患者120 例，其中假陽性40 例，假陰性25 例。CA153 檢測(cè)中陽性患者88 例，陰性患者104例，其中假陽性49 例，假陰性18 例。HPV 檢測(cè)中呈陽性患者90 例，陰性患者102 例，其中假陽性47 例，假陰性14 例。聯(lián)合檢測(cè)共檢出陽性患者62 例，陰性患者130 例，其中假陽性10 例，假陰性5 例。

M-CSF、CA153、HPV 聯(lián)合檢測(cè)的靈敏度、特異度、診斷符合率均高于各項(xiàng)指標(biāo)單一檢測(cè)，假陰性率、假陰性率低于單一檢測(cè)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(＜0.05)。見表1。

表1 M-CSF、CA153、HPV 單獨(dú)檢測(cè)及聯(lián)合檢測(cè)的診斷價(jià)值比較

2.2 觀察不同類型患者的M-CSF、CA153 水平及HPV 病毒載量的變化

CIN Ⅰ、CIN Ⅱ、CIN Ⅲ及宮頸癌患者M(jìn)-CSF、CA153 水平及HPV 病毒載量均高于陰性患者，且隨著病情加重呈遞增趨勢(shì)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(＜0.05)。見表2。

表2 不同類型患者的M-CSF、CA153 水平及HPV 病毒載量的變化

2.3 宮頸癌與血清M-CSF、CA153 水平及HPV 病毒載量的相關(guān)性分析

宮頸癌與血清M-CSF、CA153 水平及HPV 病毒載量均為正相關(guān)，血清M-CSF、CA153 水平及HPV 病毒載量均為宮頸癌獨(dú)立危險(xiǎn)因素。見表3。

表3 宮頸癌與血清M-CSF、CA153 水平及HPV 病毒載量的相關(guān)性分析

3 討 論

宮頸癌是影響女性生殖系統(tǒng)功能的常見惡性腫瘤類型，該病呈慢性發(fā)展且逐漸呈現(xiàn)出年輕化趨勢(shì)，早期僅以月經(jīng)量異常、陰道感染等非特異性病理表現(xiàn)為主，考慮到宮頸癌由癌前病變發(fā)展至癌變需十年以上，因此該疾病屬于一種可預(yù)防疾病，做好早期篩查及預(yù)防工作十分重要，有助于降低宮頸癌發(fā)生率，維護(hù)女性健康。提高早期篩查精準(zhǔn)度的關(guān)鍵在于找準(zhǔn)檢測(cè)指標(biāo)，若能夠找到與宮頸癌病變相關(guān)的血清因子或病原菌，將其作為檢測(cè)指標(biāo)，則有助于提高診斷效率。

3.1 M-CSF、CA153 檢測(cè)在宮頸癌早期篩查中的效能與不足

除HPV 亞型檢測(cè)外，CA153、M-CSF 等指標(biāo)也是判斷患者病情及預(yù)后的重要指標(biāo)。CA153 屬于糖類抗原，被認(rèn)為是胰腺癌、卵巢癌、宮頸癌等多種惡性腫瘤進(jìn)展的血清標(biāo)志物，其在免疫功能損傷、惡性腫瘤細(xì)胞分化等活動(dòng)中發(fā)揮了重要的推動(dòng)作用，主要通過促進(jìn)惡性腫瘤細(xì)胞與正?；准?xì)胞分離、同時(shí)抑制T 淋巴細(xì)胞活性來加快腫瘤細(xì)胞擴(kuò)散。本研究中，CIN Ⅰ、CIN Ⅱ、CIN Ⅲ及宮頸癌患者的CA153 指標(biāo)水平顯著高于陰性患者，且隨著病情加重，患者的CA153 水平呈明顯的遞增趨勢(shì)，說明糖類抗原水平的變化與早期宮頸癌有密切相關(guān)性，對(duì)于宮頸癌早期篩查有重要診斷價(jià)值，可為診斷工作提供參考?？紤]到該指標(biāo)容易存在誤診情況，特異性較差，部分乳腺癌、卵巢癌患者同樣會(huì)出現(xiàn)此類抗原水平升高的跡象，單一檢測(cè)效果不佳，應(yīng)結(jié)合其他指標(biāo)檢測(cè)以進(jìn)一步鑒別宮頸癌變。M-CSF 屬于一種造血生長(zhǎng)因子，廣泛存在于骨髓腔內(nèi)，對(duì)巨噬細(xì)胞的分化、死亡有調(diào)節(jié)作用，可促進(jìn)腫瘤部位新生血管的形成，為多種惡性腫瘤的生長(zhǎng)提供充足的血氧支持；有研究就該項(xiàng)因子水平與宮頸癌患者1年生存率的相關(guān)性進(jìn)行分析后發(fā)現(xiàn)，M-CSF 達(dá)到臨界值或預(yù)示著終點(diǎn)事件的發(fā)生。本研究結(jié)果可見，M-CSF 在CIN 患者及宮頸癌患者中高表達(dá)，其水平顯著高于陰性患者，且患者病情越重，則M-CSF水平越高。這說明M-SCF 可為早期篩查宮頸癌提供重要參考，有效區(qū)分宮頸良性病變、癌前病變及宮頸癌，識(shí)別宮頸癌高危人群，其診斷價(jià)值良好。將M-CSF 檢測(cè)結(jié)果與腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)結(jié)果相結(jié)合，可起到互相印證的作用，同時(shí)評(píng)估腫瘤細(xì)胞增殖期間蛋白激酶、細(xì)胞分泌及合成情況。

3.2 HPV 在宮頸癌早期篩查中的效能與不足

宮頸癌相關(guān)研究指出，高危HPV 持續(xù)感染是該疾病的主要危險(xiǎn)因素，高危型HPV 單一或混合感染人群集中在55 歲以上女性當(dāng)中；作為宮頸癌的發(fā)生的必要條件，不同HPV 類型的癌變風(fēng)險(xiǎn)不同，我國(guó)高危HPV 感染亞型主要為HPV 16、18、31、58 等，對(duì)東莞地區(qū)婦女開展HPV 篩查檢出13.64% 屬于HPV 16 亞型感染者。宮頸癌形成之前的宮頸上皮病變會(huì)經(jīng)歷炎癥、壞死、出血等多個(gè)過程，此過程中各類致病菌的表達(dá)會(huì)破壞宿主免疫機(jī)制，而作為乳頭瘤病毒亞群中結(jié)構(gòu)較簡(jiǎn)單的DNA 病毒，HPV 能夠反映機(jī)體陰道微環(huán)境在炎癥因子、致病菌感染影響下出現(xiàn)的免疫機(jī)制異常改變，尤其高危型HPV會(huì)隨著基底細(xì)胞成熟分化過程而擴(kuò)散至周圍環(huán)境，于免疫系統(tǒng)收縮、宿主基因突變時(shí)于表層顯露，呈現(xiàn)高表達(dá)。由以上分析和數(shù)據(jù)可見，在早期宮頸癌篩查中檢測(cè)HPV具有重要意義。本研究中，HPV 檢測(cè)中高危型HPV 感染的靈敏度、特異度分別為75.44%、65.19%，與病理學(xué)診斷的符合率為68.23%?？梢奌PV 檢測(cè)對(duì)于宮頸癌的篩查有良好的臨床價(jià)值。HPV 檢測(cè)取材簡(jiǎn)單，通過采集刷獲取宮頸細(xì)胞進(jìn)行HPV 檢測(cè)，可發(fā)現(xiàn)患者生殖系統(tǒng)內(nèi)有無HPV 感染及HPV 基因類型，根據(jù)其HPV 病毒載量升高程度來評(píng)估其陰道微環(huán)境受到免疫機(jī)制紊亂影響的程度，明確高危型HPV 活化癌基因的情況，從而評(píng)估其宮頸癌發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)，針對(duì)每位患者的宮頸細(xì)胞HPV 細(xì)胞感染特異性征象開展宮頸癌早期篩查。HPV 檢測(cè)雖能夠利用細(xì)胞特異性征象來協(xié)助臨床明確患者有無宮頸癌基因活化情況，但此類感染在女性群體中較為常見，大部分患者可自行痊愈，持續(xù)性感染患者較少，單一將HPV 作為篩查指標(biāo)易出現(xiàn)較高假陽性率。

3.3 M-CSF、CA153、HPV 聯(lián)合檢測(cè)在宮頸癌早期篩查中的意義

由以上分析及統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)可見，M-CSF、CA153 水平檢測(cè)及HPV 病毒載量分析分別能夠針對(duì)宮頸癌腫瘤新生血管分布情況、惡性腫瘤細(xì)胞分化、致病菌感染情況等多個(gè)方面呈現(xiàn)出因子水平、病毒載量方面的變化，若聯(lián)合分析各項(xiàng)檢測(cè)結(jié)果，則能夠同時(shí)了解宮頸癌變對(duì)機(jī)體陰道微環(huán)境、正常細(xì)胞數(shù)量的影響。本研究結(jié)果中，宮頸癌與血清M-CSF、CA153 水平及HPV 病毒載量均為正相關(guān)關(guān)系，且M-CSF、CA153、HPV 聯(lián)合檢測(cè)的靈敏度、特異度、診斷符合率均高于各項(xiàng)指標(biāo)單一檢測(cè)，假陰性率、假陰性率低于單一檢測(cè)(＜0.05)，以病理診斷結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)，聯(lián)合檢測(cè)符合率達(dá)到92.19%，說明采用聯(lián)合檢測(cè)在宮頸癌早期篩查中有更高臨床應(yīng)用價(jià)值，可有效檢出CIN 患者及宮頸癌。宮頸癌變的形成需要經(jīng)歷一個(gè)復(fù)雜的過程，而不同階段的腫瘤細(xì)胞形態(tài)、增殖速度及鄰近組織的受累情況均有所不同，全面分析M-CSF、CA153 水平及HPV 病毒載量檢測(cè)結(jié)果，不僅能夠了解細(xì)胞質(zhì)內(nèi)M-CSF 等促腫瘤生長(zhǎng)因子的表達(dá)程度，明確腫瘤細(xì)胞周期性變化中依賴- 抑制蛋白激酶之間動(dòng)態(tài)平衡的損傷程度，還能夠了解宮頸癌變組織浸潤(rùn)后引發(fā)的宮頸鱗狀上皮細(xì)胞受損情況，通過評(píng)估HPV 病毒擴(kuò)散情況，全面評(píng)估患者發(fā)生宮頸癌的可能性。與單項(xiàng)檢測(cè)相比，聯(lián)合檢測(cè)較能夠避免單一檢測(cè)的非特異性病毒復(fù)制、細(xì)胞分化類型影響，有效鑒別宮頸癌以及其他表現(xiàn)出HPV 感染、腫瘤細(xì)胞增殖的生殖系統(tǒng)腫瘤，保證從宮頸癌細(xì)胞增殖、分化的多項(xiàng)病理性活動(dòng)中找到典型特征，從而為臨床早期篩查提供全面且準(zhǔn)確的依據(jù)。

綜上所述，M-CSF、CA153、HPV 聯(lián)合檢測(cè)在宮頸癌早期篩查中有重要臨床意義，可依據(jù)其水平變化判斷患者病情發(fā)展情況，評(píng)估宮頸癌風(fēng)險(xiǎn)，為預(yù)防治療早期宮頸癌提供指導(dǎo)。