陳 陽,高 健,朱 平,高洪軍,婁翼來,王義東
(1.天津師范大學(xué) 天津市水資源與水環(huán)境重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,天津 300387;2.天津師范大學(xué) 地理與環(huán)境科學(xué)學(xué)院,天津 300387;3.吉林省農(nóng)業(yè)科學(xué)院 農(nóng)業(yè)資源與環(huán)境研究所,長春 130033;4.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 農(nóng)業(yè)環(huán)境與可持續(xù)發(fā)展研究所,北京 100081)
土壤有機(jī)質(zhì)(soil organic matter,SOM)是土壤質(zhì)量的關(guān)鍵屬性,在土壤肥力、生產(chǎn)力、生物多樣性、可持續(xù)發(fā)展和氣候變化等方面起著重要作用[1].目前,針對SOM的研究主要集中在數(shù)量方面,對其化學(xué)成分的認(rèn)識還較為薄弱[1].SOM的化學(xué)成分主要包括脂肪族化合物、芳香族化合物、木質(zhì)素、酚類化合物、多糖類化合物以及含氮化合物[2],這些化合物成分是SOM發(fā)揮功能的基礎(chǔ),因此探討SOM的化學(xué)成分特征變化具有重要意義[1-2].SOM的組分和結(jié)構(gòu)復(fù)雜,存在高度異質(zhì)性[3],即不同組分的理化性質(zhì)和周轉(zhuǎn)穩(wěn)定存在顯著差異.物理分組是探究SOM化學(xué)成分變化的重要方法,包括密度分組、粒級分組和團(tuán)聚體分組.相比于化學(xué)分組,物理分組對土壤的化學(xué)性質(zhì)破壞性較小,能更好地保護(hù)有機(jī)質(zhì)特性.Six等[4]提出的團(tuán)聚體分組技術(shù)已被廣泛應(yīng)用于SOM的研究中.粒級分組能夠有效地反映有機(jī)質(zhì)的賦存狀態(tài)和腐解程度,因?yàn)轭w粒態(tài)組分(particulate organic matter,POM)和礦質(zhì)結(jié)合組分(mineral-associated organic matter,MAOM)是通過特定過程形成的,具有不同的持久性和功能性[5].顆粒態(tài)組分主要包含未分解或半分解的動植物殘?bào)w,其碳氮比(C/N)一般為10~40,易被微生物分解利用;而礦質(zhì)結(jié)合組分是SOM分解較徹底且與土壤礦質(zhì)相結(jié)合的部分,主要來自微生物殘?bào)w,其C/N通常為8~13[6-7],難被微生物進(jìn)一步利用,因此表現(xiàn)出較強(qiáng)的穩(wěn)定性和較長的滯留時(shí)間[8].顆粒態(tài)組分可以進(jìn)一步分級為粗顆粒組分(coarse particulate organic matter,cPOM:>250μm)和細(xì)顆粒組分(fine particulate organic matter,f POM:53~250μm)[9].有機(jī)培肥是農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中一項(xiàng)重要的管理措施,長期有機(jī)培肥(有機(jī)肥施用、秸桿還田)會影響SOM的含量、元素組成和化學(xué)成分[10-13],但如何影響SOM的粒級分異及化學(xué)特征尚不清楚,亟需深入研究.
黑土是我國寶貴的高肥力土壤資源,本課題組借助東北黑土長期定位實(shí)驗(yàn),基于粒級分組,利用元素分析儀和熱裂解-氣相色譜/質(zhì)譜技術(shù)(Py-GC/MS)研究有機(jī)培肥對SOM粒級分異和化學(xué)特征的影響.假設(shè):①相比于有機(jī)培肥,粒級主要調(diào)控著SOM的碳、氮組成和化學(xué)成分特征,因?yàn)椴煌<壨碚髦鳶OM的不同腐解程度;②秸稈還田和有機(jī)肥施用對SOM的碳、氮組成和化學(xué)成分具有不同的影響,因?yàn)槎咴诘孜镔|(zhì)量上差異明顯.
公主嶺黑土長期施肥試驗(yàn)地位于吉林省公主嶺的國家黑土肥力和肥料效益長期定位實(shí)驗(yàn)基地(43°30′23″N,124°48′34″E),屬溫帶大陸性季風(fēng)氣候,年平均氣溫5.6℃,年降水量450~600 mm,年蒸發(fā)量1 200~1 600 mm.全年無霜期為144 d,每年日照時(shí)間約為2 330 h.該區(qū)土壤母質(zhì)為第四紀(jì)黃土狀沉積物,屬于黑土土類黑土亞類肥黑土土種.田間耕作方式為玉米連作或者玉米-大豆輪作,一年一熟,且為雨養(yǎng)農(nóng)業(yè),常規(guī)操作.
初始耕層土壤性質(zhì):pH值為7.6、土壤有機(jī)碳(SOC)13.23 g/kg、總氮(TN)1.4 g/kg、總磷(TP)1.39 g/kg、總鉀(TK)22.1 g/kg、堿解氮114 mg/kg、速效磷27 mg/kg、速效鉀190 mg/kg.
實(shí)驗(yàn)開始于1990年,共設(shè)置12種實(shí)驗(yàn)處理,本研究選取其中3種處理:施加氮肥+磷肥+鉀肥(NPK—單施化肥)、NPK+秸稈(NPKS—秸稈還田)、NPK+豬糞(NPKM—有機(jī)肥施用).所施用的化肥量分別為:氮肥16.5 kg/hm2、磷肥82.5 kg/hm2、鉀肥82.5 kg/hm2.有機(jī)肥豬糞作底肥,施用量為23 000 kg/hm2,1/3氮肥、磷肥和鉀肥作口肥,而其余2/3氮肥于拔節(jié)前追施于表土下10 cm處.秸稈還田即將每季作物秸稈的一半還田,不考慮其養(yǎng)分.2017年秋收后,在每個(gè)小區(qū)內(nèi)采用“S”型取樣法隨機(jī)選擇5個(gè)點(diǎn),使用螺旋鉆采集取樣點(diǎn)處0~20 cm深度的土壤,均勻混合成一個(gè)樣品后裝入自封袋中,編號并密封,每種處理重復(fù)取樣3次.將樣品帶回實(shí)驗(yàn)室,去除雜質(zhì)(如動植物殘基、礫石等),在室溫下風(fēng)干,過2 mm篩后保存?zhèn)溆?
參照文獻(xiàn)[4,13]的改良方法,用濕篩法分離土壤的3個(gè)粒級(cPOM:>250μm,fPOM:53~250μm,MAOM:<53μm).具體操作方法為:稱取土壤樣品25 g,置于100 mL塑料瓶中,加入25顆玻璃珠(直徑4 mm),60 mL超純水,將塑料瓶置于振蕩器上,在180 r/min轉(zhuǎn)速下振蕩1 h(25℃),之后將土樣混合液用250μm的篩網(wǎng)篩分,用超純水沖洗篩上部分至流下的水澄清.將篩上殘留部分收集至鋁盒中,在60℃下烘干至恒重,得到粗顆粒組分.將篩下部分物質(zhì)用超純水沖洗到大鋁盒中,在60℃條件下烘干至恒重,之后將土樣轉(zhuǎn)移至100 mL塑料瓶內(nèi),加入60 mL六偏磷酸鈉溶液(5 g/L)和25顆玻璃珠,將塑料瓶置于振蕩器上,在180 r/min轉(zhuǎn)速下振蕩18 h(25℃).振蕩完成后將塑料瓶中土樣混合液用53μm的篩網(wǎng)篩分,用超純水沖洗篩上部分至流下的水澄清,將篩上和篩下部分分別轉(zhuǎn)移到鋁盒中,在60℃下烘干至恒重.篩上部分為細(xì)顆粒組分,篩下部分為礦質(zhì)結(jié)合組分.冷卻后,對3部分樣品分別進(jìn)行稱重,將土壤樣品研磨并通過100目的土壤篩,留存?zhèn)溆?
利用元素分析儀(PerkinElmer 2400Ⅱ,美國)測定全土與各粒級組分中SOC和TN的含量,C/N為SOC和TN含量的比值.利用雙擊式裂解器(PY-2020iD,F(xiàn)rontier Laboratories Ltd,日本)與聯(lián)用的QP2010氣相色譜-質(zhì)譜儀(GC/MS,QP-2010Ultra,日本)對樣品進(jìn)行化學(xué)成分測定.取5 mg充分研磨后的土樣置于白金小舟中,以自由落體方式將樣品投入到石英裂解管中(裂解溫度550℃).裂解結(jié)束后,將化合物轉(zhuǎn)入氣相色譜儀(界面溫度為300℃).實(shí)驗(yàn)采用DB-5型色譜柱(30 m×0.25 mm×0.25μm,F(xiàn)rontier Laboratories Ltd,日本),分流進(jìn)樣比為100∶1(載氣為He,流速為0.8 mL/min).升溫順序?yàn)椋撼跏紲囟葹?0℃,保持3 min,然后以10℃/min的速率升至260℃后,再以15°C/min的速率升至300℃,保持5 min.質(zhì)譜條件采用電子轟擊離子源(EI)模式,電子能量為70 eV,接口溫度為300℃,全掃描模式,質(zhì)荷比(m/z)的掃描范圍為29~500.參照國家標(biāo)準(zhǔn)與技術(shù)研究所(NIST)化合物數(shù)據(jù)庫(2011版)、已發(fā)布的光譜標(biāo)準(zhǔn)和實(shí)際標(biāo)準(zhǔn),采用歸一化法計(jì)算峰面積,從而對熱裂解產(chǎn)物進(jìn)行分析鑒定.共鑒定出了332種化學(xué)成分,根據(jù)化學(xué)結(jié)構(gòu)和相似性分析分為10組[14-15]:脂肪族化合物、單環(huán)芳香烴、多環(huán)芳香烴、木質(zhì)素、酚類化合物、多糖、氨基酸氮、雜環(huán)氮、其他含氮化合物和其他化合物.熱裂解過程中,氨基酸氮易轉(zhuǎn)化為常見的腈、吲哚、咪唑、吡咯、吡啶、吡嗪[15],因此將這6種含氨基氮的化合物組合在一起,以減少分類誤差.其他化合物包括含有鹵素原子(Br、I、Cl)的化合物和具有更復(fù)雜分子結(jié)構(gòu)的化合物.
所有熱裂解化合物分為3種來源:植物來源、微生物來源和多重來源(植物+微生物)[16].長鏈脂質(zhì)(>18個(gè)C原子)、木質(zhì)素、酚類化合物、多糖、氨基酸氮(吲哚類)和雜環(huán)氮(嗪類)主要?dú)w為植物來源;短鏈脂質(zhì)(<16個(gè)C原子)、芳香族化合物、氨基酸氮(吡咯、吡啶、腈)和其他含氮化合物被歸為微生物來源;而一些脂類(16~18個(gè)C原子)和其他化合物歸為多重來源化合物[14-16].
采用單因素方差分析(one-way ANOVA)中的Tukey多重比較和對應(yīng)分析檢驗(yàn)不同施肥處理以及不同粒級組分下物質(zhì)間的差異性(P<0.05).用SPSS 26進(jìn)行方差分析和對應(yīng)分析,用Origin 2018進(jìn)行繪圖.
不同施肥條件下不同粒級土壤有機(jī)質(zhì)質(zhì)量占比特征如圖1所示.
圖1 不同施肥條件下不同粒級土壤有機(jī)質(zhì)質(zhì)量占比特征Fig.1 Mass distribution of the different particle size classes under different fertilization regimes
土壤各粒級組分的質(zhì)量占比特征為:礦質(zhì)結(jié)合組分(>80%)>粗顆粒組分(7%~9%)>細(xì)顆粒組分(6%~7%),礦質(zhì)結(jié)合組分的質(zhì)量占比顯著高于粗顆粒組分和細(xì)顆粒組分的質(zhì)量占比(P<0.05).有機(jī)肥施用使細(xì)顆粒組分質(zhì)量占比提高了19.7%,使礦質(zhì)結(jié)合組分質(zhì)量占比降低了4.1%;秸稈還田對不同粒級土壤組分無顯著影響.
不同粒級土壤中有機(jī)碳和總氮的含量以及碳氮比如圖2所示.
圖2 土壤有機(jī)碳和總氮的含量以及碳氮比在全土和不同粒級組分中的分布Fig.2 Pools of SOC and TN content,and C/N ratio in the bulk soil and different particle size classes
經(jīng)過27 a的實(shí)驗(yàn),與單施化肥相比,秸稈還田、有機(jī)肥施用分別使全土中SOC含量提高了19%和65%,礦質(zhì)結(jié)合組分中SOC含量最高,與顆粒態(tài)組分中SOC含量的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義.有機(jī)肥施用使粗顆粒、細(xì)顆粒、礦質(zhì)結(jié)合組分的SOC含量分別提升了162%、174%、40%(圖2(a)).對于TN而言,秸稈還田和有機(jī)肥施用分別使全土中TN的含量顯著提升了92%和96%.各個(gè)粒級組分TN含量與SOC含量的變化趨勢一致,礦質(zhì)結(jié)合組分中TN的含量遠(yuǎn)超過其他兩種組分中的含量.添加秸稈未改變顆粒態(tài)組分的TN含量,但使礦質(zhì)結(jié)合組分中TN的含量顯著提升98%;有機(jī)肥的添加使粗顆粒組分、細(xì)顆粒組分、礦質(zhì)結(jié)合組分的TN含量分別提升244%、302%和77%(圖2(b)).秸稈還田顯著降低了全土中的C/N,約降低38%.同一施肥方式下C/N隨著粒級的減小呈現(xiàn)出降低的趨勢,顆粒態(tài)有機(jī)質(zhì)的C/N顯著高于礦質(zhì)結(jié)合組分的C/N.秸稈還田和有機(jī)肥施用均使得各個(gè)顆粒組分的C/N降低約13%~40%(圖2(c)).
不同粒級土壤中有機(jī)質(zhì)組分的化學(xué)成分也有所不同,成分及分析如圖3和圖4所示.
圖3 土壤有機(jī)質(zhì)化學(xué)成分Fig.3 Chemical composition of soil organic matter
顆粒態(tài)組分主要富集脂肪族化合物、單環(huán)芳香烴、酚類化合物和多糖,其中,細(xì)顆粒組分的脂肪族化合物和單環(huán)芳香烴相對豐度分別比礦質(zhì)結(jié)合組分高出20%和25%,而礦質(zhì)結(jié)合組分主要富集含氮化合物,相對豐度占比超過75%.與單施化肥相比,有機(jī)肥施用使全土中木質(zhì)素和酚類化合物的相對豐度分別提高了174%和58%,秸稈還田使全土中酚類化合物相對豐度增加了129%.有機(jī)肥施用使粗顆粒組分中氨基酸氮的相對豐度降低了49%,細(xì)顆粒組分中脂肪族化合物的相對豐度降低了37%,礦質(zhì)結(jié)合組分中多環(huán)芳香烴的相對豐度降低92%,但細(xì)顆粒中的木質(zhì)素和多糖相對豐度分別提升了1 188%和23%.秸稈還田幾乎未對各粒級土壤化學(xué)組成產(chǎn)生顯著影響.由圖4可知,以維度1原點(diǎn)為界,礦質(zhì)結(jié)合組分分布在左側(cè),而顆粒態(tài)組分主要分布在右側(cè);多環(huán)芳香烴、含氮化合物和其他化合物富集在左側(cè),脂肪族化合物、單環(huán)芳香烴、木質(zhì)素、酚類化合物和多糖富集在右側(cè),表明化學(xué)成分存在明顯的粒級分異.
圖4 土壤有機(jī)質(zhì)化學(xué)成分(相對豐度)對應(yīng)分析Fig.4 Correspondence analysis of the chemical composition(relative abundance)of soil organic matter
不同粒級土壤有機(jī)質(zhì)來源也有所不同,如圖5和圖6所示.植物來源化合物在粗顆粒和細(xì)顆粒中相對富集,相對豐度達(dá)到20%~45%;而在礦質(zhì)結(jié)合組分中,微生物來源化合物相對富集,相對豐度達(dá)到55%~72%.全土中植物來源化合物約占17%~20%,微生物來源占56%~70%,不同施肥方式對化合物來源的影響不大.但添加有機(jī)肥料后,礦質(zhì)結(jié)合組分中植物來源化合物為13%~20%,顯著低于其他2個(gè)組分(P<0.05).秸稈還田和有機(jī)肥施用使細(xì)顆粒的植物來源化合物分別增加了76%和91%,微生物來源化合物均減少了約20%,多重來源化合物分別減少了47%和82%.由圖6可知,以維度1原點(diǎn)為界,礦質(zhì)結(jié)合組分主要分布在左側(cè),而顆粒態(tài)組分主要分布在右側(cè);多重來源化合物富集在左側(cè),植物來源化合物富集在右側(cè),而微生物來源化合物處于中間位置,表明有機(jī)質(zhì)來源存在粒級分異,但分異較小.
圖5 土壤有機(jī)質(zhì)來源Fig.5 Sources of soil organic matter
圖6 土壤有機(jī)質(zhì)來源(相對豐度)對應(yīng)分析Fig.6 Correspondence analysis of sources(relative abundance)of soil organic matter
本研究顯示,長期不同施肥條件下,黑土中礦質(zhì)結(jié)合組分質(zhì)量占比均最大(>80%),顯著高于其他2個(gè)組分.大部分SOC和TN集中在礦質(zhì)結(jié)合組分中,主要是由于礦質(zhì)結(jié)合組分在農(nóng)業(yè)用地土壤中所占比例很高[5-6,9],周轉(zhuǎn)速率慢,有利于SOC和TN的穩(wěn)定與固存[17],進(jìn)而更能被微生物持續(xù)性利用,這支持了前文第一個(gè)假設(shè).SOM結(jié)構(gòu)復(fù)雜,能夠?qū)Σ煌氖┓侍幚矸绞窖杆夙憫?yīng),從而改變土壤的理化性質(zhì)[18].就有機(jī)培肥而言,有機(jī)肥施用提升了粗顆粒組分和細(xì)顆粒組分的質(zhì)量占比,降低了礦質(zhì)結(jié)合組分的質(zhì)量占比,且細(xì)顆粒組分和礦質(zhì)結(jié)合組分受有機(jī)肥施用處理影響顯著,這與以往的研究結(jié)果類似.因此,長期施用有機(jī)肥會增加作物生物量(地上部分和地下根系)和根系代謝產(chǎn)物,促進(jìn)新鮮有機(jī)質(zhì)的輸入,從而促進(jìn)小粒級組分向大粒級組分膠結(jié)[19].秸稈還田沒有顯著增加SOC的含量,可能是因?yàn)榻斩掃€田量以及還田年限的限制[12].2種有機(jī)培肥處理均顯著增加了全土和各個(gè)粒級組分中TN的含量.
SOC和TN的變化使得粗顆粒組分和細(xì)顆粒組分具有較高的C/N,而礦質(zhì)結(jié)合組分的C/N最低,這與粗顆粒組分和細(xì)顆粒組分中植物來源化合物較多的結(jié)果相符.此外,有機(jī)物肥料的添加可使C/N降低,而C/N越低,表明有機(jī)質(zhì)的腐解程度越高.對此提出2個(gè)解釋:①POM部分受到團(tuán)聚體的保護(hù)[9],因此分解程度低;②隨著秸稈還田和有機(jī)肥施用的投入,土壤中微生物活動及其代謝作用增強(qiáng),有足夠的氮來進(jìn)行消耗,而同化同質(zhì)量的氮需要消耗更多的碳,從而反作用于土壤的C/N[20].
相比于礦質(zhì)結(jié)合組分,粗顆粒組分和細(xì)顆粒組分可富集更多的脂肪族化合物、單環(huán)芳香烴、木質(zhì)素、酚類化合物和多糖[21-22].POM組分選擇性地保留了具有頑固性特點(diǎn)的植物來源化合物,以實(shí)現(xiàn)短期的持久性運(yùn)轉(zhuǎn),盡管長期以來,物理保護(hù)是這些物質(zhì)長期留存的主要原因[7,23].另外,部分細(xì)顆粒組分可能被微團(tuán)聚體封閉[12],保留芳香族化合物和木質(zhì)素.而礦質(zhì)結(jié)合組分中含氮化合物的相對豐度很高[7],這也表明了它積累了許多微生物殘?bào)w[7,15],它們很容易被黏土礦物吸附,形成有機(jī)質(zhì)礦物結(jié)合體,從而增加這些礦質(zhì)結(jié)合組分在土壤中的貯存時(shí)間[2,24].基于單因素方差分析,發(fā)現(xiàn)SOM的化學(xué)成分主要在粒級方面產(chǎn)生分異,這支持了第一個(gè)假設(shè).但本研究結(jié)果也再次表明,細(xì)顆粒組分并不是3種粒級組分的過渡部分,這可能歸因于:①與沙粒相關(guān)的有機(jī)質(zhì)向粗顆粒組分偏移;②微團(tuán)聚體對細(xì)顆粒組分有物理保護(hù)[9].
全土中,有機(jī)培肥主要影響的是木質(zhì)素和酚類化合物的含量.對各個(gè)粒級組分主要影響為:粗顆粒組分中氨基酸氮減少;細(xì)顆粒組分中脂肪族化合物減少,木質(zhì)素和多糖增多;礦質(zhì)結(jié)合組分中多環(huán)芳香族化合物減少.由于木質(zhì)素類化合物和多糖類化合物是由植物殘?bào)w(細(xì)胞壁)衍生而來,其中部分產(chǎn)物在動物消化和微生物代謝中得以保留[25],這可以解釋在有機(jī)培肥作用下,細(xì)顆粒組分中這些物質(zhì)相對增加,這一結(jié)論也支持了第二個(gè)假設(shè),微團(tuán)聚體對細(xì)顆粒組分的物理保護(hù)為這一結(jié)果做出了進(jìn)一步解釋[9].但是與單施化肥相比,粗顆粒組分的氨基酸氮隨著有機(jī)肥施用而減少,這可能與含氮物質(zhì)被利用有關(guān).而在全土以及其他2個(gè)組分中,含氮化合物的相對豐度幾乎不受施肥條件的影響,因?yàn)檫@些含氮化合物主要來自微生物,從而促成了其穩(wěn)定的來源[14-16].
微生物來源的化合物對SOM的總體貢獻(xiàn)率為55%~70%,這與以往的研究結(jié)果類似[16].本研究顯示,礦質(zhì)結(jié)合組分中植物來源化合物降低,微生物來源相應(yīng)增加,木質(zhì)素和多糖含量的降低也直接造成了這一結(jié)果.含氮化合物以氨基酸氮為主,其主要來源為微生物,有研究表明微生物來源的化合物能夠穩(wěn)定在土壤礦物表面[14],這也印證了本研究的結(jié)果.SOM的穩(wěn)定性和周轉(zhuǎn)速率取決于其分子的化學(xué)組成特征[26],但是在添加有機(jī)肥后,除細(xì)顆粒組分的化合物中植物來源增多以及微生物和多重來源減少外,全土和其他2個(gè)組分并未對來源組成做出響應(yīng).
本研究以東北黑土長期有機(jī)培肥為研究平臺,研究了不同粒級土壤有機(jī)質(zhì)的碳、氮含量和化學(xué)組成特征,結(jié)論如下:
(1)各粒級組分中,礦質(zhì)結(jié)合組分質(zhì)量占比最大,且主導(dǎo)著SOC、TN庫.秸稈還田增加了TN的含量,而有機(jī)肥施用增加了SOC和TN含量.
(2)有機(jī)培肥后顆粒態(tài)組分中脂肪族化合物、芳香族化合物、木質(zhì)素、酚類化合物和多糖相對豐度增加.礦質(zhì)結(jié)合組分中含氮化合物,特別是氨基酸氮相對豐度增加.有機(jī)培肥后礦質(zhì)結(jié)合組分的化學(xué)組成變化小,表明該部分的SOM化學(xué)特征比較穩(wěn)定.SOM的來源組成在粒級間變化不明顯,但2種有機(jī)培肥均改變了細(xì)顆粒SOM的來源.
綜上,粒級組分主要調(diào)控著SOM的含量與元素組成、化合物組成特征,而有機(jī)培肥的影響相對較小.