呼吸道合胞病毒致毛細(xì)支氣管炎患者腸道菌群變化分析及與病情嚴(yán)重程度的關(guān)系研究

陳蓉燕

（湖南省婦幼保健院普兒科，湖南長沙 410008）

毛細(xì)支氣管炎為細(xì)支氣管的急性炎癥，毛細(xì)支氣管炎患兒常于病毒感染后，臨床多表現(xiàn)為流涕、咽炎、喉炎等前屈癥狀，部分患兒可伴有發(fā)熱，且2~3 d后逐漸出現(xiàn)咳嗽、氣促、喘憋及呼吸困難等，嚴(yán)重者將會(huì)引起喂養(yǎng)困難、煩躁不安、呼吸音粗等[1]。既往研究表明[2]，該疾病病理表現(xiàn)為黏膜下水腫、支氣管上皮細(xì)胞壞死脫落，從而引起氣道分泌物增多，最終引起小氣道阻塞。腸道微生態(tài)系統(tǒng)開始初步構(gòu)建發(fā)生在孕期內(nèi)，母體腸道中的特異性菌株能通過胎盤傳遞給胎兒，定植在胎兒結(jié)腸，并在娩出后2周內(nèi)完成初步演替[3]。腸道微生態(tài)是指腸道正常菌群與宿主之間相互作用、相互影響的統(tǒng)一體[4]。新生兒娩出后腸道為無菌的，免疫系統(tǒng)尚未發(fā)育，導(dǎo)致大量細(xì)菌定植。同時(shí)，腸道菌群能影響全身免疫狀態(tài)，影響機(jī)體多個(gè)免疫系統(tǒng)[5]。呼吸道合胞病毒(RSV)是毛細(xì)支氣管主要病原體，能引起機(jī)體免疫損害[6]。本研究以RSV毛細(xì)支氣管炎嬰幼兒及健康嬰幼兒為對(duì)象，探討RSV致毛細(xì)支氣管炎患兒腸道菌群變化及其與病情嚴(yán)重程度的關(guān)系，結(jié)果報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2019年1月至2021年3月湖南省婦幼保健院兒科收治的呼吸道合胞病毒(RSV)致毛細(xì)支氣管炎的101例嬰幼兒為觀察組，其中男患兒51例，女患兒50例；年齡2個(gè)月~2歲，平均年齡（1.21±0.46）歲；病程1~7 d，平均病程（3.51±0.49）d。對(duì)患兒病情進(jìn)行評(píng)估，根據(jù)評(píng)估結(jié)果分為A組（輕度，41例）、B組（中度，32例）和C組（重度，28例）。另選同期健康體檢的健康嬰幼兒30例作為對(duì)照組，其中男性18例，女性12例；年齡3個(gè)月~2歲，平均年齡（1.19±0.44）歲。組間臨床資料比較差異不具有統(tǒng)計(jì)意義（P＞0.05），具有可比性。本研究獲得湖南省婦幼保健院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，患兒父母或法定監(jiān)護(hù)人知情并簽署知情同意書。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合諸福棠實(shí)用兒科第七版毛細(xì)支氣管炎診斷標(biāo)準(zhǔn)[7]；②均能完成患兒疾病分級(jí)，且可耐受本研究過程；③具有完整的臨床資料及隨訪資料。排除標(biāo)準(zhǔn)：①近2個(gè)月內(nèi)發(fā)生腹瀉或服用益生菌制劑；②入院前2周內(nèi)服用糖皮質(zhì)激素、免疫調(diào)節(jié)劑、抗組胺藥；③合并呼吸、循環(huán)系統(tǒng)疾病或胃食管返流癥。

1.2 研究方法 根據(jù)《毛細(xì)支氣管炎診斷、治療與預(yù)防專家共識(shí)（2014年版）》[8]分級(jí)方法對(duì)患兒病程進(jìn)行評(píng)估，具體方法如下。輕度：喂養(yǎng)量正常，呼吸頻率正?；蛏栽隹?，輕度胸壁吸氣性三凹征；未見鼻翼煽動(dòng)或呻吟，血氧飽和度＞92.0%，精神正常；中度：喂養(yǎng)量下降到正常一半，呼吸頻率＞60次/min，中度胸壁吸氣性三凹征；未見鼻翼煽動(dòng)或呻吟，血氧飽和度88%~92.0%；伴有輕微或間斷煩躁；重度：喂養(yǎng)量下降一半以上或拒食；呼吸頻率＞70次/min；重度胸壁吸氣性三凹征，存在鼻翼煽動(dòng)或呻吟，血氧飽和度＜88.0%，伴有極度煩躁不安、嗜睡。

采用細(xì)菌16SrDNA熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（FQ-PCR）方法測定各組小兒糞便中雙歧桿菌（B）、大腸桿菌（E）數(shù)量，計(jì)算雙歧桿菌/大腸桿菌值（B/E值）。嬰幼兒的糞便3 g，將其放置在無菌瓶中并完成編號(hào)，置于低溫下，備用。腸道菌群分析方法：進(jìn)行快速薄層涂片、固定、革蘭染色、鏡檢，根據(jù)油鏡（10×100倍）下每視野平均細(xì)菌數(shù)將菌群密集度分為Ⅰ~Ⅳ級(jí)，Ⅰ級(jí)：1~10 個(gè)，Ⅱ級(jí)：10~100 個(gè)，Ⅲ級(jí)：100~1000個(gè)，Ⅳ級(jí)：1000個(gè)以上，鏡下所見數(shù)量最多的微生物定義為優(yōu)勢菌；分別記錄每組油鏡視野下的細(xì)菌總數(shù)，分別記錄革蘭陽性桿菌（G＋b）、革蘭陰性桿菌（G－b）和革蘭陽性球菌（G＋c）構(gòu)成比。鏡下所見數(shù)量最多微生物為優(yōu)勢菌。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS 13.0軟件處理數(shù)據(jù)，計(jì)量資料以（）表示，采用t檢驗(yàn)；多組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)。采用Pearson相關(guān)性分析軟件對(duì)腸道微生態(tài)與毛細(xì)支氣管炎病情進(jìn)行相關(guān)性分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 觀察組與對(duì)照組腸道微生態(tài)比較 兩組均完成腸道微生態(tài)測定，并完成相關(guān)數(shù)據(jù)的分析與整理，結(jié)果表明：觀察組毛細(xì)支氣管炎患兒B、B/E值低于對(duì)照組，E值高于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05），見表1。

表1 觀察組與對(duì)照組腸道微生態(tài)比較（ ）

表1 觀察組與對(duì)照組腸道微生態(tài)比較（ ）

B：雙歧桿菌；E：大腸桿菌；B/E：雙歧桿菌/大腸桿菌。

組別 例數(shù) B（克隆數(shù)） E（克隆數(shù)） B/E觀察組 101 7.41±0.59 7.36±0.53 1.01±0.34對(duì)照組 30 7.99±0.67 6.32±0.37 1.26±0.37 t值 -4.581 10.033 -3.465 P值 0.000 0.000 0.000

2.2 觀察組不同病情組別腸道微生態(tài)比較 A組患兒B、B/E值均高于B組和C組，E值低于B組和C組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）；B組患兒B、B/E值均高于C組，E值低于C組，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05），見表2。

表2 觀察組不同病情下腸道微生態(tài)比較（ ）

表2 觀察組不同病情下腸道微生態(tài)比較（ ）

注：與A組比較，*P＜0.05。B：雙歧桿菌；E：大腸桿菌；B/E：雙歧桿菌/大腸桿菌。

組別 例數(shù) B（克隆數(shù)） E（克隆數(shù)） B/E A 組 41 7.92±0.64 6.35±0.39 1.25±0.25 B 組 32 7.42±0.60* 7.38±0.52* 1.01±0.21*C 組 28 7.15±0.53* 7.49±0.59* 0.95±0.15*F值 14.832 58.854 19.786 P值 0.000 0.000 0.000

2.3 腸道微生態(tài)與毛細(xì)支氣管炎病情相關(guān)性分析 毛細(xì)支氣管炎病情嚴(yán)重程度與B、B/E值呈負(fù)相關(guān)性，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與E值呈正相關(guān)性，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表3。

表3 腸道微生態(tài)與毛細(xì)支氣管炎病情相關(guān)性分析

3 討論

毛細(xì)支氣管炎好發(fā)于嬰幼兒，且能引起局部流行。毛細(xì)支氣管炎的病變主要發(fā)生在肺部細(xì)小支氣管，常由普通感冒、流行性感冒等引起，亦可由細(xì)菌感染引起，患兒發(fā)病后以喘息、三凹征、氣促等為主[9]。RSV是毛細(xì)支氣管炎主要致病病原體，患兒感染RSV后會(huì)引起免疫損害。“腸道菌群假說”提出，腸道共生菌在誘導(dǎo)免疫系統(tǒng)促進(jìn)發(fā)育和促進(jìn)免疫平衡中發(fā)揮重要作用。由于嬰幼兒免疫系統(tǒng)和呼吸系統(tǒng)正處于發(fā)育成熟階段，當(dāng)患兒受到某些病原體感染時(shí)，則會(huì)影響機(jī)體的免疫和呼吸系統(tǒng)發(fā)育，引發(fā)喘息等諸多臨床癥狀，嚴(yán)重者將會(huì)演變?yōu)橄璠10]。觀察組毛細(xì)支氣管炎患兒B、B/E值均低于對(duì)照組，E值高于對(duì)照組；A組患兒B、B/E值均高于B組和C組，E值均低于B組和C組。毛細(xì)支氣管炎患兒常伴有腸道微生態(tài)異常，其能反映患兒的疾病嚴(yán)重程度，這主要是由于腸道微生態(tài)的平衡能影響機(jī)體免疫，可減輕胃腸道黏膜充血狀況。同時(shí)，毛細(xì)支氣管炎患兒發(fā)病后可出現(xiàn)低氧血癥，能損害腸黏膜屏障功能，影響腸道正常菌群[11]。

毛細(xì)支氣管炎經(jīng)典的Th1/Th2失衡理論已經(jīng)得到廣泛認(rèn)可，但是近年來一些臨床與實(shí)驗(yàn)室研究結(jié)果并不能完全用該理論解釋[12]。研究表明在人體生命早期，腸道正常菌群的建立是促進(jìn)機(jī)體免疫系統(tǒng)發(fā)育和成熟的重要因素[13]。有研究表明，嬰兒個(gè)體間腸道菌群結(jié)構(gòu)的差異與毛細(xì)支氣管炎的發(fā)展存在緊密的聯(lián)系，腸道梭狀芽孢桿菌定植數(shù)量增多，能加劇病情的變化[14]。腸道微生物中的菌體能利用纖維合成多聚糖，而多聚糖又能調(diào)節(jié)T細(xì)胞分泌白細(xì)胞介素-10，起到強(qiáng)烈的抗炎作用[15]。為了進(jìn)一步分析腸道微生態(tài)與RSV致毛細(xì)支氣管炎病情的關(guān)系，本研究中對(duì)二者進(jìn)行Pearson相關(guān)性分析。結(jié)果表明，毛細(xì)支氣管炎病情嚴(yán)重程度與B、B/E值呈負(fù)相關(guān)性，與E值呈正相關(guān)性，說明毛細(xì)支氣管炎的發(fā)生、發(fā)展與腸道微生態(tài)存在緊密的聯(lián)系。因此，臨床上對(duì)于確診的毛細(xì)支氣管炎患兒應(yīng)加強(qiáng)腸道微生態(tài)調(diào)理，改善患兒預(yù)后。

綜上所述，毛細(xì)支氣管炎患兒常伴有腸道微生態(tài)異常，且與病情嚴(yán)重程度存在相關(guān)性，能為臨床診療提供參考依據(jù)。