大腸癌BRCA-1、ERCC1mRNA 表達(dá)水平對(duì)鉑類化療預(yù)后的影響分析

王先國(guó)

在治療大腸癌方案中,最常用的是鉑類化療藥物,但是鉑類化療的有效性與毒性反應(yīng)仍有顯著的種族差異與個(gè)體差異。目前,大約70%的患者接受抗腫瘤藥物治療療效有限,其余大約30%的患者接受抗腫瘤治療藥物有誤［1］。大腸癌患者手術(shù)后接受鉑類藥物化療后有很大的成效,能夠降低復(fù)發(fā)率和減少轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn),從而疾病的治愈率得以提高。并且對(duì)于晚期患者,使用鉑類化療更能延長(zhǎng)患者生存時(shí)間。因此,目前鉑類化療(即包含奧沙利鉑的FOLFOX 方案)被認(rèn)為是化療的金標(biāo)準(zhǔn),但是,許多大腸癌患者在接受鉑類化療后出現(xiàn)耐藥情況,使得化療失敗［2］。BRCA-1 具有調(diào)控基因的表達(dá)、對(duì)DNA 進(jìn)行重組修復(fù)、調(diào)節(jié)細(xì)胞的周期的功能,從而能抑制腫瘤的發(fā)生,若其功能失活乳腺癌和卵巢癌的發(fā)病率將顯著提高。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn),BRCA-1和核苷酸切除修復(fù)交叉互補(bǔ)基因1(ERCC1)兩種基因與鉑類化療耐藥性有很大的關(guān)聯(lián)［3］,因此,本研究通過(guò)對(duì)58 例大腸癌患者進(jìn)行分析,測(cè)定其標(biāo)本中BRCA-1和ERCC1mRNA 蛋白的表達(dá)水平,探討此兩種基因的表達(dá)與鉑類化療后患者各項(xiàng)生存指標(biāo)的關(guān)系?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2007 年1 月～2010 年3 月本院收治的58 例大腸癌患者作為研究對(duì)象,所有患者均進(jìn)行手術(shù)切除,已經(jīng)病理證實(shí)為大腸癌。58 例患者中男38 例,女20 例；年齡20～85 歲,中位年齡61 歲；臨床分期：Ⅰ期6 例,Ⅱ期32 例,Ⅲ期20 例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移28 例。所有患者均在本院接受化療并有完整的隨訪資料,逐例對(duì)患者隨訪,以電話方式進(jìn)行隨訪,隨訪時(shí)間截止2014 年5 月。隨訪結(jié)果存活32 例,死亡26 例；3 年存活43 例,3 年內(nèi)死亡15 例。

1.2治療方法 所有患者均給予FOLFOX 化療方案：奧沙利鉑(LOHP)100 mg/m2,靜脈滴注,第1 天；亞葉酸鈣(CF)200 mg/(m2·d),在5-氟尿嘧啶(5-FU)前2 h靜脈滴注,第1～2 天；5-氟尿嘧啶400 mg/m2,靜脈注射,第1 天,然后再用 2400 mg/m2,46 h 持續(xù)靜脈滴注,第1～2 天。14 d 后重復(fù)治療,共治療12 個(gè)療程。

1.3BRCA-1、ERCC1mRNA 檢測(cè)方法 取手術(shù)標(biāo)本做好石蠟切片,取組織切片,用快速免疫組化法對(duì)BRCA-1、ERCC1mRNA 進(jìn)行測(cè)定,高倍鏡下觀察細(xì)胞核,若ERCC1mRNA 和 BRCA-1 陽(yáng)性,則在鏡下細(xì)胞核中可以觀察到棕褐色或棕黃色顆粒沉著物。以觀察到有此沉著物且此沉著物顏色較背景色明顯、細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整為標(biāo)準(zhǔn)來(lái)判斷為陽(yáng)性。

1.4陽(yáng)性判斷標(biāo)準(zhǔn) 本實(shí)驗(yàn)以Fromowitz 為評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)［4］：①陽(yáng)性細(xì)胞所占百分比為十個(gè)高倍鏡視野中,黃染的陽(yáng)性細(xì)胞的細(xì)胞總數(shù)與十個(gè)視野中所有細(xì)胞總和的百分比。②以細(xì)胞陽(yáng)性得分與著色強(qiáng)度得分的乘積來(lái)判斷細(xì)胞陽(yáng)性水平,具體如下：陽(yáng)性細(xì)胞率≤10%為1 分,11%～50% 為2 分,51%～75% 為3 分,＞75%為4 分；根據(jù)染色強(qiáng)弱程度計(jì)分：未染色1 分,弱染色2 分,中等程度染色3 分,強(qiáng)染色4 分。二者乘積結(jié)果即為細(xì)胞陽(yáng)性水平：≤4 分為(-)；5～8 分為(+)；9～12 分 為(++)；≥13 分 為(+++)。僅 將(++)和(+++)為陽(yáng)性表達(dá),(-)和(+)為陰性表達(dá)。

1.5觀察指標(biāo) 分析大腸癌組織中BRCA-1、ERCC1mRNA 表達(dá)情況及其與臨床病理特征、預(yù)后的關(guān)系；大腸癌組織中BRCA-1、ERCC1mRNA 表達(dá)的相關(guān)性。

1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS16.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)研究數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù) ± 標(biāo)準(zhǔn)差()表示,采用t 檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率(%)表示,采用χ2檢驗(yàn)；應(yīng)用Kaplan-Meier 法進(jìn)行生存曲線估計(jì),生存分析采用log-rank 檢驗(yàn)；BRCA-1、ERCC1mRNA 表達(dá)的相關(guān)性采用Spearman 相關(guān)分析。P＜0.05 表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1大腸癌組織中BRCA-1、ERCC1mRNA 表達(dá)情況及其與臨床病理特征關(guān)系分析 大腸癌組織切片顯示：BRCA-1 陽(yáng)性表達(dá)37 例,陽(yáng)性表達(dá)率為63.8%(37/58)；ERCC1mRNA 陽(yáng)性表達(dá)25 例,陽(yáng)性表達(dá)率為43.1%(25/58)。不同性別、年齡、分化程度、臨床分期患者的BRCA-1 陽(yáng)性表達(dá)率比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的BRCA-1 陽(yáng)性表達(dá)率明顯低于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。不同性別、年齡、分化程度患者的ERCC1mRNA 陽(yáng)性表達(dá)率比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；臨床分期越高,ERCC1mRNA 陽(yáng)性表達(dá)率越高,不同臨床分期比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的ERCC1mRNA 陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見(jiàn)表1。

表1 大腸癌組織中BRCA-1、ERCC1mRNA 表達(dá)情況與臨床病理特征關(guān)系分析［n(%)］

2.2大腸癌組織中BRCA-1、ERCC1mRNA 表達(dá)情況與預(yù)后的關(guān)系分析 Kaplan-Meier 生存分析顯示：BRCA-1 陽(yáng)性表達(dá)患者的總生存時(shí)間為(52.0±4.0)個(gè)月,明顯長(zhǎng)于BRCA-1 陰性表達(dá)患者的(40.9±3.0)個(gè)月,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；BRCA-1 陽(yáng)性表達(dá)患者的中位生存時(shí)間為48.4 個(gè)月,長(zhǎng)于BRCA-1陰性表達(dá)患者的44.6 個(gè)月。見(jiàn)圖1。ERCC1mRNA 陰性表達(dá)患者的總生存時(shí)間為(48.6±2.0)個(gè)月,明顯長(zhǎng)于ERCC1mRNA 陽(yáng)性表達(dá)患者的(43.8±4.7)個(gè)月,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；ERCC1mRNA 陰性表達(dá)患者的中位生存時(shí)間為45.3 個(gè)月,明顯長(zhǎng)于ERCC1mRNA陽(yáng)性表達(dá)患者的41.7 個(gè)月。見(jiàn)圖2。

圖1 不同BRCA-1 表達(dá)患者生存曲線(個(gè)月)

圖2 不同ERCC1mRNA 表達(dá)患者生存曲線(個(gè)月)

2.3大腸癌組織中BRCA-1、ERCC1mRNA 表達(dá)的相關(guān)性分析 Spearman 相關(guān)分析顯示,大腸癌組織中BRCA-1、ERCC1mRNA 表達(dá)呈負(fù)相關(guān)性(r=-0.628,P＜0.05)。見(jiàn)表2。

表2 大腸癌組織中BRCA-1、ERCC1mRNA 表達(dá)的相關(guān)性分析

3 討論

3.1BRCA1 表達(dá)水平對(duì)鉑類化療預(yù)后的影響 BRCA1在基因的損傷修復(fù)過(guò)程種起著重要作用,BRCA-1 可調(diào)節(jié)G2-M 檢測(cè)點(diǎn),其主要是通過(guò)控制細(xì)胞有絲分裂時(shí)期染色體的分離和重組過(guò)程來(lái)影響細(xì)胞的過(guò)程［5］。BRCA-1 可對(duì)已受損DNA 進(jìn)行編碼,并產(chǎn)生相關(guān)蛋白產(chǎn)物,這些產(chǎn)物可與參與基因修復(fù)蛋白質(zhì)之間相互作用,表達(dá)水平高,使機(jī)體對(duì)鉑類藥物敏感性增強(qiáng),鉑類藥物治療效果明顯［6］。

本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)：BRCA-1 陽(yáng)性表達(dá)患者的總生存時(shí)間為(52.0±4.0)個(gè)月,明顯長(zhǎng)于BRCA-1 陰性表達(dá)患者的(40.9±3.0)個(gè)月,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；BRCA-1 陽(yáng)性表達(dá)患者的中位生存時(shí)間為48.4 個(gè)月,長(zhǎng)于BRCA-1 陰性表達(dá)患者的44.6 個(gè)月?？梢?jiàn),BRCA-1 陽(yáng)性表達(dá)患者經(jīng)鉑類藥物治療后收益更大。此結(jié)論與蘇偉民［7］觀點(diǎn)有所不同,產(chǎn)生這種現(xiàn)象的原因可能與患者臨床分期不同或者本實(shí)驗(yàn)所選取的研究對(duì)象數(shù)目有關(guān),需要進(jìn)一步研究才能進(jìn)一步結(jié)論。

3.2ERCC1mRNA 表達(dá)水平對(duì)鉑類化療預(yù)后的影響機(jī)體在維持基因表達(dá)的過(guò)程中,基因組的功能整體性、機(jī)體的抗癌過(guò)程以及對(duì)致癌基因的損傷性修復(fù)是極為重要的,而這些功能主要是通過(guò)核苷酸切除修復(fù)(NER)過(guò)程來(lái)實(shí)現(xiàn)。研究表明,癌癥患者經(jīng)鉑類治療的效果受DNA 修復(fù)能力的影響,在NER 過(guò)程中,ERCC1 是一種極其關(guān)鍵的核苷酸內(nèi)切酶,且是此過(guò)程的重要限速酶,在DNA 損傷的識(shí)別功能和基因切割修復(fù)上起關(guān)鍵作用［8］。若其表達(dá)水平低或無(wú)表達(dá),則會(huì)引起細(xì)胞基因不穩(wěn)定,增加細(xì)胞的惡性程度,癌細(xì)胞易出現(xiàn)轉(zhuǎn)移。因此,許多學(xué)者認(rèn)為ERCC1 可能是相關(guān)腫瘤患者的預(yù)后指標(biāo)［9］。

目前,臨床上應(yīng)用鉑類藥物治療大腸癌患者時(shí),有許多患者產(chǎn)生耐藥性,并且不同患者之間對(duì)鉑類藥物的敏感性也有所不同。例如在Chang 等［10］報(bào)道中指出,當(dāng)DNA 受損時(shí),可通過(guò)激活的ERCC1 核苷酸內(nèi)切酶的作用將受損的基因切除,對(duì)腫瘤患者進(jìn)行鉑類治療后,鉑類與DNA 能形成加合物,次加合物能使ERCC1 結(jié)合XPF 因子,進(jìn)一步激活ERCC1,達(dá)到基因修復(fù)功能?？梢?jiàn)在鉑類藥物治療腫瘤患者產(chǎn)生耐藥性過(guò)程中,ERCC1 具有重要意義。

本研究采用FOLFOX 化療方案對(duì)大腸癌患者進(jìn)行術(shù)后化療,對(duì)ERCC1mRNA 不同表達(dá)水平進(jìn)行生存分析發(fā)現(xiàn),ERCC1mRNA 陰性表達(dá)患者的總生存時(shí)間為(48.6±2.0)個(gè)月,明顯長(zhǎng)于ERCC1mRNA 陽(yáng)性表達(dá)患者的(43.8±4.7)個(gè)月,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；ERCC1mRNA 陰性表達(dá)患者的中位生存時(shí)間為45.3 個(gè)月,明顯長(zhǎng)于ERCC1mRNA 陽(yáng)性表達(dá)患者的41.7 個(gè)月。可見(jiàn),ERCC1mRNA 陰性表達(dá)患者生存時(shí)間長(zhǎng)于陽(yáng)性表達(dá)患者。其原因可能是陰性表達(dá)患者的ERCC1 對(duì)DNA 修復(fù)能力減弱,使機(jī)體對(duì)藥物敏感性增大,鉑類藥物治療效果明顯。

綜上所述,BRCA-1 陽(yáng)性表達(dá)水平、ERCC1mRNA陰性表達(dá)水平的大腸癌患者,在接受鉑類藥物化療后總生存時(shí)間與中位生存期均較BRCA-1 陰性表達(dá)患者和ERCC1mRNA 陽(yáng)性患者長(zhǎng)。