登革熱患者臨床特征及血清細(xì)胞因子分析*

陳勝杰，黃俊遠(yuǎn)，汪 楊，周迎春，李 溪

廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東廣州 510405

登革熱是由登革病毒(DENV)感染引起，通過埃及伊蚊或白蚊伊蚊傳播的急性傳染病。人群對(duì)DENV普遍易感，登革熱是多種因素作用的結(jié)果，登革熱的發(fā)病機(jī)制至今尚未完全闡明，近年來免疫應(yīng)答及細(xì)胞因子風(fēng)暴理論受到國(guó)內(nèi)外學(xué)者的廣泛關(guān)注[1]。鑒于細(xì)胞因子水平與登革熱疾病嚴(yán)重程度之間的關(guān)系目前并無確切結(jié)論，國(guó)內(nèi)關(guān)于DENV感染后白細(xì)胞介素(IL)-8、IL-10、IL-6和腫瘤壞死因子-α(TNF-α)表達(dá)水平的研究較少，本研究探討了登革熱患者血清IL-8、IL-10、IL-6和TNF-α的表達(dá)水平，希望明確以上指標(biāo)在診斷登革熱中的臨床意義。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2016年1月至2019年12月在本院確診的297例登革熱患者為研究組，診斷符合《登革熱診療指南(2014年第2版)》[2]標(biāo)準(zhǔn)：患者發(fā)病前14 d曾到過登革熱流行區(qū)，或其居住場(chǎng)所或工作場(chǎng)所周圍1個(gè)月內(nèi)曾出現(xiàn)過登革熱患者；急性起病，突發(fā)高熱；有明顯的疲乏、厭食、惡心等癥狀；常伴有較劇烈的頭痛、眼眶痛、全身肌肉痛、骨關(guān)節(jié)痛等癥狀，可伴面部、頸部、胸部潮紅，結(jié)膜充血等，有皮疹或出血傾向；白細(xì)胞計(jì)數(shù)(WBC)和(或)血小板計(jì)數(shù)(PLT)降低，血清DENV的IgM抗體陽(yáng)性；同時(shí)血清檢測(cè)出DENV的NS1抗原。另選擇同期體檢健康者20例作為對(duì)照組，無基礎(chǔ)疾病，且DENV特異性IgM/IgG 抗體和NS1抗原篩查均為陰性。

1.2方法 收集297例登革熱患者的年齡、性別、相關(guān)臨床癥狀、體征。比較兩組研究對(duì)象常規(guī)實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)檢查結(jié)果(如血常規(guī)、肝功能等)等資料。采集所有研究對(duì)象血清標(biāo)本，-40 ℃保存，采用Biolegend公司的LEGENDplexTM試劑盒(熒光微球技術(shù)的免疫“雙夾心”和流式細(xì)胞儀結(jié)合的免疫學(xué)分析方法)定量檢測(cè)所有標(biāo)本的細(xì)胞因子水平，包括IL-8、IL-10、IL-6和TNF-α，比較兩組研究對(duì)象細(xì)胞因子的表達(dá)情況。

2 結(jié) 果

2.1登革熱患者流行病學(xué)特征分析 共納入登革熱患者297例，年齡1～87 歲，平均(41.00±18.39)歲，30～<40歲登革熱患者占25.59%，明顯高于其他年齡段人群的構(gòu)成比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；不同性別登革熱患者構(gòu)成比比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；登革熱好發(fā)于8～11月，9月和10月登革熱發(fā)病人數(shù)構(gòu)成比明顯高于其他月份，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 登革熱患者流行病學(xué)特征分析

2.2兩組常規(guī)實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)比較 研究組WBC、PLT、血清尿素(Urea)水平明顯低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。研究組血清肌酐(Crea)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)和天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)水平明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 兩組常規(guī)實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)比較

2.3兩組血清細(xì)胞因子表達(dá)情況比較 研究組血清細(xì)胞因子IL-6、IL-8、 IL-10和TNF-α水平均明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表3。

表3 兩組血清細(xì)胞因子比較

3 討 論

登革熱是由DENV引起的急性蚊媒傳染病，以發(fā)熱、皮疹、肌肉及骨關(guān)節(jié)疼痛為主要臨床表現(xiàn)[3-4]。登革熱廣泛流行于熱帶及亞熱帶國(guó)家及地區(qū)，并成為日益嚴(yán)重的全球性公共衛(wèi)生問題[5]。部分有基礎(chǔ)疾病患者感染登革熱后可發(fā)展為重癥登革熱，重癥登革熱的主要并發(fā)癥為休克、出血及嚴(yán)重器官損傷，嚴(yán)重者可危及患者生命。由于目前登革熱尚無特效治療藥物，重癥登革熱病死率較高，早期識(shí)別登革熱是降低病死率的關(guān)鍵[6]。因此，對(duì)登革熱感染提出預(yù)警信號(hào)顯得尤為迫切。

本研究對(duì)2016-2019年本院收治的登革熱患者進(jìn)行流行病學(xué)分析，發(fā)現(xiàn)登革熱流行時(shí)間主要集中于每年的8～11月，9月和10月登革熱患者明顯增多，其中10月出現(xiàn)流行高峰，該發(fā)現(xiàn)和既往報(bào)道一致[4-6]。本研究的279例登革熱患者年齡為1～87歲，平均(41.00±18.39)歲，其中30～<40歲患者占25.59%，高于其他年齡段人群，這可能與青壯年外出務(wù)工多，流動(dòng)性大等因素有關(guān)。既往有報(bào)道稱登革熱發(fā)病高峰年齡為20～<60歲，好發(fā)于青壯年人群(73.72%～90.30%)，本研究結(jié)論與之基本一致[7]。不同性別登革熱患者的構(gòu)成比比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

DENV可抑制骨髓中白細(xì)胞和血小板的生成，導(dǎo)致WBC、PLT降低，臨床上普遍認(rèn)為PLT下降幅度與病情嚴(yán)重程度呈正比[8]。本研究數(shù)據(jù)顯示，與體檢健康者比較，登革熱患者WBC和PLT明顯降低，PLT降低大大增加了出血風(fēng)險(xiǎn)，這也是登革熱患者典型的實(shí)驗(yàn)室特征。同時(shí)，本研究結(jié)果顯示，登革熱患者肝功能指標(biāo)AST、ALT水平較體檢健康者明顯升高，肝功能異常是登革熱較常見的并發(fā)癥，與文獻(xiàn)[9]報(bào)道肝臟是DENV靶細(xì)胞的觀點(diǎn)一致。肝功能指標(biāo)AST、ALT水平的升高可能與免疫激活釋放細(xì)胞因子造成免疫損傷有關(guān)。研究組Crea水平明顯高于對(duì)照組，Urea水平明顯低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，登革熱患者出現(xiàn)腎功能不全可能誘因是嚴(yán)重消化道癥狀導(dǎo)致攝入不足，嚴(yán)重血漿滲漏導(dǎo)致有效血容量不足，低血壓所致組織缺氧、溶血等[10]。

此外，近年來研究發(fā)現(xiàn)機(jī)體免疫與DENV相互作用是重癥登革熱發(fā)生的主要原因之一，細(xì)胞因子在其中起重要作用，有學(xué)者將細(xì)胞因子作為新的重癥登革熱預(yù)警指標(biāo)并用于臨床研究，取得了一些進(jìn)展[11]。原發(fā)性病毒感染時(shí)，宿主的T細(xì)胞及B細(xì)胞免疫應(yīng)答產(chǎn)生的輔助性T細(xì)胞(Th)1分泌IL-2、TNF-α、干擾素(INF)-γ等，能清除病毒，促進(jìn)患者機(jī)體恢復(fù)；Th2分泌IL-4、IL-6、IL-10等，刺激B細(xì)胞產(chǎn)生抗體，輔助體液免疫應(yīng)答，能促進(jìn)炎性反應(yīng)，導(dǎo)致病情惡化。Th1與Th2之間的平衡調(diào)節(jié)主要由IL-10、IFN-γ介導(dǎo)[12-13]。本研究發(fā)現(xiàn)，與體檢健康者比較，登革熱患者外周血血清中IL-8、IL-10、IL-6、TNF-α水平明顯升高，說明DENV感染能激活機(jī)體免疫，釋放多種細(xì)胞因子引起免疫損傷，提示這些細(xì)胞因子可能可作為登革熱診斷的輔助診斷指標(biāo)。

本研究通過分析登革熱患者流行病學(xué)特征，同時(shí)分析登革熱患者常規(guī)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果和血清細(xì)胞因子的差異，為更好地診治與管控登革熱，以及進(jìn)一步闡明細(xì)胞因子在登革熱中的作用及其機(jī)制提供了依據(jù)。