新疆灰棗果核木脂素類化學(xué)成分研究

牟鵬云，麥合力幫古麗·尼牙孜，何秋映，萬傳星，周忠波,2*

（1塔里木大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，新疆 阿拉爾 843300）

（2右江民族醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，廣西 百色 533000）

木脂素是一類由苯丙素氧化聚合而成的天然酚類化合物［1-2］，其作為藥用植物中一類比較重要的活性成分，具有多樣的結(jié)構(gòu)和生物活性。木脂素類化合物的藥理活性主要包括抗腫瘤、抗病毒、抗菌、保肝以及作用于心血管和中樞神經(jīng)系統(tǒng)等［3］。

果核作為紅棗加工產(chǎn)生的副產(chǎn)物，具有止渴生津、潤腸通便的功效，可用于治療走馬疳、眼疾、內(nèi)外腑瘡等。前期研究表明，灰棗果核中含有酚類［4-6］、類黃酮［7］及皂苷［8］等化學(xué)成分?；覘椬鳛樾陆匾慕?jīng)濟作物，產(chǎn)量大，果核利用率低，灰棗果核絕大多數(shù)以廢棄物的形式丟棄或作為燃料，未能得到合理利用，造成資源的極大浪費。本文擬研究灰棗果核中木脂素類化學(xué)成分，為提高新疆灰棗果核利用率提供依據(jù)。

1 材料與儀器

1.1 試驗材料及試劑

試驗所用灰棗果核于2018年4月購于新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團第一師十二團，經(jīng)鑒定為鼠李科棗屬植物灰棗（Ziziphus jujuba cv.Huizao）的果核。憑證標本（TLM-201803）存于新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團塔里木盆地生物資源保護利用重點實驗室天然產(chǎn)物研究室。將灰棗核洗凈后自然風(fēng)干備用。

柱層析硅膠（200～300目，青島海洋化工廠），薄層層析硅膠板（青島海洋化工有限公司），無水乙醇（天津市光復(fù)科技發(fā)展有限公司），乙酸乙酯（天津市光復(fù)科技發(fā)展有限公司），石油醚（天津市光復(fù)科技發(fā)展有限公司），甲醇（色譜純，北京百靈威科技有限公司），乙腈（色譜純，北京百靈威科技有限公司），其余試劑均為國產(chǎn)分析純。

1.2 試驗儀器

核磁共振譜儀（Bruker AV-500，德國Bruker公司），Agilent 1100-LC-MSD Trap/SL質(zhì)譜儀（美國安捷倫公司），電子天平（CP224C，奧豪斯儀器（上海）有限公司），電熱套（SZCL-A，博迅實業(yè)有限公司），電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（GZX-9420MBE，上海姚氏儀器設(shè)備廠），高效液相色譜儀（日本島津公司），制備型高效液相色譜儀（日本島津公司），Agilent HPLC色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm，美國Agilent公司），旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（N-1300V-WB，上海愛朗儀器有限公司）。

2 提取與分離

將1 kg去果肉洗凈陰干的灰棗果核粉碎，用95%乙醇熱回流提取3次（料液比1:10，m:v），每次2 h。將提取液合并濃縮得到的灰棗果核浸膏29 g。將浸膏用硅膠拌樣，隨后進行硅膠柱層析，依次用乙酸乙酯和95%乙醇進行洗脫，分別得到乙酸乙酯浸膏5.8 g、95%乙醇浸膏21.2 g。乙酸乙酯浸膏再次進行硅膠柱層析，依次用石油醚:乙酸乙酯為10:1、5:1、3:1、1:1、1:2(v:v)進行洗脫。經(jīng)薄層色譜(TLC)檢測后，石油醚:乙酸乙酯1:1組分合并得到3個組分(Fr.1～Fr.3)，1:2組分合并得到4個組分(Fr.4～Fr.7)。組分Fr.2經(jīng)制備型高效液相色譜（甲醇：水為30:70，流速：10 mL/min）等度洗脫得到4個化合物：化合物1(4.8 mg，tR=14.7 min)、化合物 2(4.4 mg，tR=18.0 min)、化合物 3(1.9 mg，tR=19.2 min)和化合物4(13.4 mg，tR=23.4 min)。組分Fr.7經(jīng)制備型高效液相色譜（乙腈：水為25:75，流速：10 mL/min）等度洗脫得到2個化合物：化合物5(9.6 mg，tR=12.3 min)和化合物6(2.4 mg，tR=18.7 min)（圖1）。

圖1 化合物1～6結(jié)構(gòu)圖

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：淡黃色油狀物，ESI-MS m/z 409［M+Na］+。1H NMR(500 MHz,CD3OD)δ:6.98(1H,s,H-2),6.95(2H,s,H-2′,6′),6.83(1H,d,J=8.5 Hz,H-6),6.77(1H,d,J=8.5 Hz,H-5),6.56(1H,d,J=16.0 Hz,H-7′),6.18(1H,dt,J=16.0,6.5 Hz,H-8′),5.53(1H,d,J=6.0 Hz,H-7),4.11(2H,dd,J=6.0 Hz,H-9′),3.88(3H,s,H-5′-OCH3),3.84(2H,m,H-9),3.82(3H,s,H-3-OCH3),3.55(2H,dd,J=14.0,7.0 Hz,H-8),3.49(1H,dd,J=12.0,6.0 Hz,H-10′),1.22(3H,t,J=7.0 Hz,H-11′);13C NMR(125 MHz,CD3OD) δ:149.6(C-4′),149.3(C-3),147.8(C-4),145.7(C-5′),134.7(C-1),134.2(C-7′),132.4(C-1′),130.5(C-3′),124.7(C-8′),119.9(C-6),116.8(C-2′),116.3(C-5),112.3(C-6′),110.7(C-2),89.5(C-7),72.6(C-9′),66.7(C-10′),65.0(C-9),57.0(C-5′-OCH3),56.5(C-3-OCH3),55.3(C-8),15.6(C-11′)。上述數(shù)據(jù)與文獻報道一致［9］，故鑒定為(+)-(7S,8R,7′E)-4-hydroxy-3,5′-dimethoxy-4′,7-epoxy-8,3′-neolign-7′-ene-9,9′-diol 9′-ethyl ether。

化合物2：無色油狀物，ESI-MS m/z 349［M+H］+。1H NMR(500 MHz,CD3OD)δ:6.62(1H,d,J=8.0 Hz,H-5′′),6.61(1H,d,J=9.0 Hz,H-5′),6.56(1H,dd,J=8.0,1.5 Hz,H-6′),6.52(1H,d,J=1.5 Hz,H-2′),6.50(1H,dd,J=8.0,1.5 Hz,H-6′′),6.49(1H,d,J=1.5 Hz,H-2′′),4.40(1H,d,J=8.5 Hz,H-3),4.09(1H,dd,J=10.5,5.5 Hz,H-1),3.90(1H,dd,J=10.5,7.0 Hz,H-1),3.69(3H,s,H-7′),3.67(3H,s,H-7′′),3.40(1Ha,m,H-1′′′),3.34(1Hb,m,H-1′′′),2.98(1H,m,H-2),1.18(3H,t,J=7.0,H-2′′′);13C NMR(125 MHz,CD3OD) δ:148.5(C-3′),148.4(C-3′′),146.7(C-4′′),146.0(C-4′),133.4(C-1′′),132.8(C-1′),122.6(C-6′),121.3(C-6′′),115.7(C-5′′),115.5(C-5′),114.4(C-2′),112.3(C-2′′),85.8(C-3),65.1(C-1),65.1(C-1′′′),56.3(C-7′),56.3(C-7′′),56.1(C-2),15.6(C-2′′′)。上述波譜數(shù)據(jù)與文獻報道一致［10］，故鑒定為threo-2,3-bis(4-hydroxy-3-methoxypheyl)-3-ethoxypropan-1-ol。

化合物3：無色油狀物，ESI-MS m/z 349［M+H］+。1H NMR(500 MHz,CD3OD)δ:6.69(1H,d,J=3.0 Hz,H-2"),6.68(1H,d,J=5.0 Hz,H-5′),6.66(1H,d,J=8.5,H-6′),6.60(1H,dd,J=8.0,1.5 Hz,H-6"),6.56(1H,dd,J=8.0,1.5 Hz,H-2′),6.47(1H,d,J=1.5 Hz,H-5"),4.60(1H,d,J=5.0 Hz,H-3),3.89(1H,dd,J=10.5,7.0 Hz,Ha-l),3.75(3H,s,C-7′),3.68(1H,dd,J=7.5,4.0 Hz,Hb-l),3.64(3H,s,C-7"),3.36(1H,dd,J=9.0,7.0 Hz,Ha-l′"),3.26(1H,dd,J=9.0,7.0 Hz,Hbl′"),2.84(1H,dd,J=12.0,6.5 Hz,H-2),1.11(3H,t,J=7.0 Hz,H-2′");13C NMR(125 MHz,CD3OD):δ:148.6(C-3"),148.2(C-3′),146.7(C-4′),146.2(C-4"),134.0(C-1′),132.3(C-1"),123.4(C-6"),121.1(C-6′),115.5(C-5′,5"),114.8(C-2"),111.9(C-2′),82.8(C-3),65.2(C-1′"),64.5(C-1),56.5(C-2),56.4(C-7′),56.2(C-7"),15.6(C-2′")。上述波譜數(shù)據(jù)與文獻報道一致［11］，故鑒定為erythro-2,3-bis(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-3-ethoxypropan-1-ol。

化合物 4：黃色固體，ESI-MS m/z 359［M+H］+。1H NMR(500 MHz,CD3OD)δ:6.95(2H,d,J=2.0,H-2,2′),6.81(2H,d,J=8.0,1.5,H-6,6′),6.77(2H,d,J=8.0,H-5,5′),4.70(2H,d,J=4.5,H-7,7′),4.22(2H,dd,J=9.0,7.0,Ha-9,9′),3.85(6H,s,H-3,3′-OCH3),3.82(2H，dd,J=8.0,5.5,Hb-9,9′),3.13(2H,dd,J=6.5,4.5,H-8,8′);13C NMR(125 MHz,CD3OD)δ:149.1(C-4,4′),147.3(C-3,3′),133.8(C-1,1′),120.0(C-6,6′),116.1(C-5,5′),111.0(C-2,2′),87.5(C-7,7′),72.6(C-9,9′),56.4(C-3,3′-OCH3),55.4(C-8,8′)。上述波譜數(shù)據(jù)與文獻報道一致［12］，故鑒定為pinoresinol。

化合物5：無色油狀物，ESI-MS m/z 381［M+Na］+。1H NMR(500 MHz,CD3OD)δ:6.97(1H,s,H-6′),6.95(2H,s,H-2,2′),6.83(1H,dd,J=8.0,1.5 Hz,H-6),6.77(1H,d,J=8.0 Hz,H-5),6.54(1H,d,J=16.0 Hz,H-7′),6.23(1H,dt,J=16.0,6.0 Hz,H-8′),5.52(1H,d,J=6.0 Hz,H-7),4.20(2H,d,J=6.0 Hz,H-9′),3.87(3H,s,H-5′-OCH3),3.81(3H,s,H-3-OCH3),3.79(2H,overlapped,H-9),3.49(1H,dd,J=12.5,6.5 Hz,H-8);13C NMR(125 MHz,CD3OD)δ:149.4(C-4′),149.3(C-3),147.7(C-4),145.6(C-3′),134.7(C-1),132.7(C-1′),132.2(C-7′),130.5(C-5′),127.7(C-8′),119.9(C-6),116.7(C-6′),116.3(C-5),112.2(C-2′),110.7(C-2),89.5(C-7),65.0(C-9),64.0(C-9′),56.9(C-3′-OCH3),56.5(C-3-OCH3),55.3(C-8)。上述波譜數(shù)據(jù)與文獻報道一致［13］，故鑒定為(-)-dehydrodiconiferyl alcohol。

化合物6：淡黃色無定形固體，ESI-MS m/z 363［M+H］+。1H NMR(500 MHz,CD3OD)δ:6.66(2H,d,J=8.0 Hz,H-5,5′),6.59(2H,s,H-2,2′),6.54(2H,d,J=7.5 Hz,H-6,6′),3.74(6H,s,H-3,3′-OCH3),3.59(4H,m,H-9,9′),2.66(2H,dd,J=13.5,6.5 Hz,Ha-7,7′),2.55(2H,dd,J=13.5,7.5 Hz,Hb-7,7′),1.90(2H,m,H-8,8′);13C NMR(125 MHz,CD3OD) δ:149.0(C-3,3′),145.6(C-4,4′),134.0(C-1,1′),122.9(C-6,6′),115.9(C-5,5′),113.6(C-2,2′),62.3(C-9,9′),56.3(C-3,3′-OCH3),44.3(C-8,8′),36.2(C-7,7′)。上述波譜數(shù)據(jù)與文獻報道一致［14］，故鑒定為裂異落葉松脂醇。ethoxypropan-1-ol表現(xiàn)出醌還原酶誘導(dǎo)活性［11］；pinoresinol具有改善記憶障礙，促進海馬LTP的誘導(dǎo)活性，以及針對腫瘤壞死因子(TNF)-α誘導(dǎo)的MH7A細胞炎癥模型的抗類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（RA）活性［18-19］；(-)-dehydrodiconiferyl alcohol能夠通過滅活巨噬細胞NF-κB通路促進細胞愈合［20］；裂異落葉松脂醇可以加速3T3-L1脂肪細胞中脂聯(lián)素的產(chǎn)生［21］。鑒于木脂素類成分具有豐富多樣的生物活性，加大對新疆灰棗果核木脂素類化學(xué)成分的開發(fā)力度，對提高新疆灰棗產(chǎn)品的附加值，推動新疆棗產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展具有重要意義。

4 結(jié)論與討論

灰棗作為滋補保健的佳品，具有健腦安神，補氣益血，保肝降脂，抗氧化等廣泛的藥理活性。目前對灰棗果肉中的有效成分研究較多，灰棗果核作為灰棗加工過程產(chǎn)生的副產(chǎn)品大多被丟棄，造成資源浪費。本研究通過對灰棗果核95%乙醇提取物乙酸乙酯部位化學(xué)成分的研究，共得到6個木脂素類化合物，分別為：(+)-(7S,8R,7′E)-4-hydroxy-3,5′-dimethoxy-4′,7-epoxy-8,3′-neolign-7′-ene-9,9′-diol 9′-ethyl ether（1）、threo-2,3-bis(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-3-ethoxypropan-1-ol（2）、erythro-2,3-bis(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-3-ethoxypropan-1-ol（3）、pinoresinol（4）、(-)-dehydrodiconiferyl alcohol（5）和裂異落葉松脂醇（6），化合物1～6皆為首次從鼠李科中分離得到。據(jù)文獻報道，(+)-(7S,8R,7′E)-4-hydroxy-3,5′-dimethoxy-4′,7-epoxy-8,3′-neolign-7′-ene-9,9′-diol 9′-ethyl ether具有一定的保肝和抗炎活性［9］，以及抑制芳香酶催化活性［15］，在細胞毒、抗氧化、抗HIV-1復(fù)制以及神經(jīng)毒性保護等方面未表現(xiàn)出明顯活性［9,16］；threo-2,3-bis(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-3-ethoxypropan-1-ol具有抑制RAW264.7巨噬細胞中LPS誘導(dǎo)NO產(chǎn)生的活性［17］；erythro-2,3-bis(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-3-