車南青
(茂名市農(nóng)業(yè)科技推廣中心,廣東 茂名 525000)
2021年7月15日,廣東省信宜市一家養(yǎng)殖場草魚發(fā)病,茂名市農(nóng)業(yè)科技推廣中心立即組織技術(shù)員抵達現(xiàn)場了解情況,并采集水樣、魚樣進行檢測。
發(fā)病魚塘約5畝,東西走向,水深1.5米,單養(yǎng)草魚,放養(yǎng)草魚4 500尾(規(guī)格約500克/尾),主要投喂配合飼料和青飼料,每天2次。養(yǎng)殖池塘屬于老塘,養(yǎng)殖前未進行清淤曬塘處理,池塘配置增氧機2臺。
據(jù)養(yǎng)殖戶反映,7月11日將草魚過塘,7月14日開始出現(xiàn)數(shù)十尾草魚在塘邊靜止不動、對外界刺激不敏感,有的發(fā)生陣發(fā)性亂竄、亂游。
7月15日上午取水樣進行檢測,水體透明度21厘米、溶氧4.3毫克/升、pH 7.2、亞硝酸鹽0.339毫克/升、氨氮0.35毫克/升。
魚體表黏液增多,上下頜、口腔、鰓蓋、鰭條及魚體兩側(cè)輕度充血,腹部稍膨大(圖1)。解剖病魚發(fā)現(xiàn)腹腔內(nèi)有少量淡黃色透明腹水,肝腎腫大、色淡,腸內(nèi)有少量食物(圖2)。取病魚患病部位體表黏液、鰓絲等顯微鏡檢測,未發(fā)現(xiàn)寄生蟲。
圖1 病魚外表
圖2 病魚解剖
(1)細菌分離、純化。用70%的酒精消毒病魚體表,斷尾放血后解剖,用灼燒后冷卻的接種環(huán)蘸取肝、腎、脾組織,分別接種至營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上,倒置于28℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時,長出優(yōu)勢菌落。菌落呈淡黃色、圓形、光滑、微凸形態(tài)。用接種環(huán)挑選單菌落,在培養(yǎng)基上進行3次重復(fù)單菌落劃線。
(2)革蘭氏染色。選取6株優(yōu)勢菌株進行革蘭氏染色,結(jié)果顯示6株細菌均為革蘭氏陰性菌。鏡檢觀察,6株菌體大都呈桿狀,多數(shù)單個、個別雙個排列。
(3)生理生化鑒定。取6株優(yōu)勢菌株(編號為1~6)進行生理生化鑒定,6株分離菌株均氧化酶陽性、接觸酶陽性、精氨酸雙水解酶陽性、賴氨酸脫羧酶陽性、鳥氨酸脫羧酶陰性、發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣、不發(fā)酵肌醇、甘油產(chǎn)氣、V.P.試驗陽性、M.R.試驗陰性、發(fā)酵阿拉伯糖、水楊甙陽性、半乳糖苷酶陽性、水解七葉靈。根據(jù)《伯杰氏細菌鑒定手冊》(第9版),初步鑒定1~6號菌株為嗜水氣單胞菌。
(4)PCR技術(shù)檢測。取1~6號菌株進行PCR檢測,結(jié)果顯示6株菌株均為嗜水氣單胞菌。
(5)藥敏試驗。采用恩諾沙星、氟苯尼考、慶大霉素、土霉素4種藥物(每種藥物兩個重復(fù)求平均值)對各菌株進行藥敏試驗,測量其抑菌圈大小,結(jié)果見表1。菌株對慶大霉素、恩諾沙星、氟苯尼考極敏感,對土霉素敏感。
表1 藥物對菌株的抑菌圈直徑
根據(jù)調(diào)查、檢測,診斷病魚為感染嗜水氣單胞菌引起的細菌性敗血病。
細菌性敗血病流行時間為3-11月,高峰期常為5-9月,水溫9~36℃均有流行,尤以水溫持續(xù)在25℃以上時嚴重。拉網(wǎng)捕魚、搬運過程中導(dǎo)致魚體表皮機械損傷,從而為致病菌入侵提供機會。
發(fā)病魚塘是多年老塘,養(yǎng)殖前未做好塘底清淤消毒工作,池塘底質(zhì)老化、溶氧低、有害物質(zhì)多,氨氮、亞硝酸鹽明顯高于正常標準,一方面給病原細菌的滋生提供了溫床;另一方面魚整天生活在此水體中,抵抗力下降,易引發(fā)疾病。
魚類細菌性敗血病最有效的治療方法是采用外潑殺菌藥和內(nèi)服藥飼相結(jié)合。7月16日,全池潑灑漂白粉1克/米3;17日用氟苯尼考拌飼投喂,每千克魚體重使用20毫克(1次量),連用5天。用藥1周內(nèi)觀察效果,基本控制了細菌性敗血病的蔓延。
養(yǎng)殖前清除塘底過多淤泥或排干池水后對池底進行翻曬。用生石灰清塘,干法清塘用量為60~75千克/畝,帶水清塘用量為125~150千克/畝。清塘后7~10天藥性消失,即可放入水產(chǎn)養(yǎng)殖動物。
魚種下塘前,注射預(yù)防細菌性敗血病的疫苗,用高錳酸鉀15~20毫克/升藥浴10~30分鐘或4%的食鹽水藥浴5~20分鐘;選擇優(yōu)質(zhì)健壯魚種,放養(yǎng)密度要合理,根據(jù)養(yǎng)殖技術(shù)水平及防病能力確定放養(yǎng)密度。
在養(yǎng)殖過程中定期加換新水,一般每7~10天加水1次,每次加入新水20~30厘米;每20天換水1次,每次換水30%左右,換水應(yīng)在晴天白天進行。發(fā)病季節(jié)每月用生石灰20~30克/米3全池遍灑1~2次,使池水的pH保持在8左右。
正確掌握投飼量,多投喂天然飼料及優(yōu)質(zhì)飼料,以提高魚體抗病力。草魚飼料主要有兩種,一種是配合飼料,一種是青飼料,投喂應(yīng)以配合飼料為主、青飼料為輔。每周食場周圍潑灑漂白粉1~2次,消毒食場,用量視食場大小及水深而定,一般為250~500克。
在拉網(wǎng)前后要用漂白粉等含氯消毒劑消毒池塘水,減少魚感染細菌的機會。當發(fā)現(xiàn)養(yǎng)殖魚患病時切忌拉網(wǎng),否則會加劇病魚的死亡。
加強巡塘工作,定期抽取魚樣并進行檢測,發(fā)現(xiàn)魚病及時進行防治。在發(fā)病季節(jié),定期殺滅寄生在魚體外的寄生蟲,防止寄生蟲破壞魚體表而受細菌入侵。發(fā)病魚池用過的工具要進行消毒,病死魚要及時撈出深埋,不能到處亂扔。病好后仍應(yīng)繼續(xù)做好防病工作,否則魚還會再次感染發(fā)病。