Q-Exactive 高分辨質(zhì)譜同時(shí)測(cè)定生乳中5 類32 種獸藥殘留

高 娃 ， 徐艷偉 ， 王志峰 ， 吳云芳

（1.錫林郭勒職業(yè)學(xué)院，內(nèi)蒙古錫林浩特 026000；2.錫林郭勒盟疾病預(yù)防控制中心，內(nèi)蒙古錫林浩特 026000）

生乳中獸藥殘留主要因泌乳期動(dòng)物使用了獸藥，代謝到分泌的乳中所致。檢測(cè)獸藥殘留的方法很多，最常見的是液相色譜（馬巖等，2018；王煉等，2011）、 氣相色譜串聯(lián)譜質(zhì)譜 （農(nóng)村農(nóng)業(yè)部，2014）、液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜（張炯愷，2019；趙維等，2012） 和高效液相色譜串聯(lián)高分辨質(zhì)譜 （馬俊美等，2021；虞成華等，2017；趙鳳娟等，2014）。 多數(shù)獸藥殘留檢測(cè)方法，是檢測(cè)單一種類的獸藥殘留。獸藥在種類、結(jié)構(gòu)、理化性質(zhì)等方面都存在差異，為了實(shí)現(xiàn)多種類同時(shí)測(cè)定，需要建立快速、高通量的檢測(cè)方法，也是目前的趨勢(shì)。因此本項(xiàng)目通過(guò)優(yōu)化樣品前處理過(guò)程、色譜、質(zhì)譜條件，結(jié)合超高效液相色譜的極高分離技術(shù)和Q Exactive Orbitrap HRMS 高分辨質(zhì)譜技術(shù)于一體的檢測(cè)方法， 開展生乳中獸藥多殘留高通量檢測(cè)技術(shù)的研究工作，旨在建立一種同時(shí)檢測(cè)磺胺類、大環(huán)內(nèi)酯、林可酰胺、酰胺醇、青霉素5 類32 種獸藥殘留的方法。

1 材料與方法

1.1 試劑與耗材 乙腈、甲醇：色譜純，廣州艾欣科學(xué)儀器有限公司；甲酸：色譜純，北京邁瑞達(dá)科技有限公司；無(wú)水硫酸鈉：分析純，東莞市喬科化學(xué)有限公司；PSA：40 ～ 63 μm， 北京綠百草科技發(fā)有限展公司；C18：50 μm，北京綠百草科技發(fā)有限展公司；微孔濾膜：0.22 μm，天津東康科技。

1.2 標(biāo)準(zhǔn)品 磺胺類16 種（甲氧芐氨嘧啶、磺胺二甲嘧啶、琥珀磺胺噻唑、磺胺間甲氧嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺異噁唑、磺胺甲噻唑、磺胺甲氧基噠嗪、磺胺多辛、磺胺甲噁唑、磺胺苯吡唑、磺胺喹噁啉、磺胺吡啶、磺胺噻唑、磺胺嘧啶、磺胺甲基嘧啶），大環(huán)內(nèi)酯類7 種（羅紅霉素、克拉霉素、乙酰螺旋霉素、地紅霉素、阿奇霉素、泰利霉素、替米考星），林可酰胺3 種（克林霉素、林可霉素、吡利霉素），酰胺醇 3 種（氯霉素、氟苯尼考、甲砜霉素），青霉素3 種（納夫西林鈉、苯唑西林鈉、氯唑西林鈉），均購(gòu)自天津阿爾塔科技有限公司。

1.3 儀器 Q Exactive 四極桿/靜電場(chǎng)軌道阱高分辨質(zhì)譜儀（賽默飛世爾科技公司，美國(guó)）；漩渦混合器（無(wú)錫沃信儀器有限公司）；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)公司EV-400）；高速冷凍離心機(jī)（北京北利時(shí)代醫(yī)療科技有限公司）。

1.4 色譜條件 色譜柱：Hypersil GOLD 25002-102130 C18；流動(dòng)相A：0.1%甲酸水；流動(dòng)相B：甲醇；流速：0.4 mL/min；柱溫：40 ℃；進(jìn)樣量：5 μL；沖洗程序：梯度沖洗。

1.5 質(zhì)譜儀的條件 檢測(cè)器：Q Exactive； 離子源：靜電噴霧電離（ESI）源；采集方式：正負(fù)離子交換采集；質(zhì)譜掃描方式：Full MS/dd-MS2。 此處省略了離子源參數(shù)和交叉掃描參數(shù)。

1.6 樣品前處理

1.6.1 樣品的提取 稱取樣品2 g（精確至0.01 g），置于50 mL 聚丙烯離心管中，加入1%氨水乙腈溶液 15 mL、無(wú)水硫酸鈉 5.0 g，渦旋混勻 1 min，4 ℃，9500 r/min 離心5 min， 在另一個(gè) 50 mL 離心管中收集上清液。 剩余樣品重新加入15 mL 1%乙酸乙腈溶液，旋緊螺帽，渦旋 5 min，4 ℃，9500 r/min離心5 min， 吸出上清液， 合并待凈化的兩次有機(jī)相。

1.6.2 樣品的凈化 在乳樣提取溶液中加入QuEChERS 凈化劑 （100 mg PSA、40 mg C18 和600 mg MgSO4），擰緊螺帽，高速渦旋 1 min，4 ℃，9500 r/min 離心5 min。 取所有有機(jī)相溶液，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上于40 ℃減壓蒸發(fā)至近干。 加0.1%甲酸水/甲醇 （V/V，9:1）2.0 mL 溶解殘?jiān)?渦旋 1 min，通過(guò) 0.22 μm 濾膜，上機(jī)測(cè)定。

1.6.3 系列標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液的制備 根據(jù)配制濃度，取定量的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，然后用0.1%甲酸水和甲醇（V/V，9:1）進(jìn)行稀釋，配制成質(zhì)量濃度為2.00 ～ 100.00 ng/mL （氯霉素， 氟苯尼考 0.50 ～40.00 ng/mL）標(biāo)準(zhǔn)曲線系列溶液。 由于有些藥物不穩(wěn)定，混合標(biāo)準(zhǔn)溶液應(yīng)實(shí)驗(yàn)同時(shí)配制和使用，避光，密封并冷凍存放。

1.6.4 空白基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線系列溶液的制備 稱取均質(zhì)的生乳樣品9 份 （精度為0.01 g）， 置于50 mL聚丙烯離心管中， 按照1.6.1 和1.6.2 中樣品前處理方法提取、凈化、離心，吸取有機(jī)相溶液，40 ℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至近干，加入2.0 mL 相應(yīng)質(zhì)量濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，渦旋1 min，過(guò)微孔濾膜，得到質(zhì)量濃 度 分 別 為 2.00、4.00、8.00、20.00、40.00、80.00、100.00 ng/mL（氯霉素、氟苯尼考 0.50、2.00、4.00、8.00、10.00、20.00、40.00 ng/mL） 的空白乳基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線系列溶液。 混合標(biāo)準(zhǔn)溶液應(yīng)實(shí)驗(yàn)同時(shí)配制和使用。

1.6.5 樣品測(cè)定 采用超高效液相色譜高分辨譜儀對(duì)空白基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線系列溶液和試液進(jìn)行測(cè)定。 提取一級(jí)母離子的保留時(shí)間和精確質(zhì)量數(shù)來(lái)實(shí)現(xiàn)初級(jí)定性， 再結(jié)合每種化合物的二級(jí)掃描離子信息，獲得更高的定性和定量結(jié)果數(shù)據(jù)。

2 結(jié)果與討論

2.1 優(yōu)化色譜條件

2.1.1 流動(dòng)相的選擇 對(duì)于提高分離度和改善目標(biāo)化合物的峰形來(lái)說(shuō)， 選擇合適的流動(dòng)相是相對(duì)重要的。 根據(jù)待測(cè)化合物的分子結(jié)構(gòu)及相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道（王立丹，2019），除酰胺醇外的其他化合物均適合在 ESI 源的陽(yáng)離子模式下電離，因此在流動(dòng)相純水相中加入一定比例的甲酸將有助于改善化合物電離效率，并且可使流動(dòng)相處于酸性環(huán)境，改善化合物的峰形， 使pH 保持恒定。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明， 低濃度甲酸不會(huì)影響三種酰胺醇化合物的電離效率和峰形，最后水相選定含有0.1%甲酸的純水溶液。有機(jī)相選擇純甲醇（郭海霞等，2015）和純乙腈（朱萬(wàn)燕等，2017）溶液。 通過(guò)比較得出，有機(jī)相為甲醇時(shí)，噪聲較低，32 種獸藥的色譜峰形、響應(yīng)值、分離效果和靈敏度均優(yōu)于乙腈，其中，磺胺甲氧噠嗪、 磺胺對(duì)甲氧嘧啶和磺胺間甲氧嘧啶三種異構(gòu)體也能很好地分離。當(dāng)有機(jī)相為乙腈時(shí)，32種獸藥的色譜峰響應(yīng)通常良好， 但是對(duì)三種磺胺同分異構(gòu)體不能完全分開（圖1）。

圖1 兩種流動(dòng)相對(duì)三種磺胺異構(gòu)體的分離效果

2.1.2 選擇洗脫程序 由于獸藥數(shù)量多， 同類獸藥的性質(zhì)也非常相似。如果采用等度洗脫方法，難以實(shí)現(xiàn)多組目標(biāo)化合物的分離，因此，使用梯度洗脫程序。 該方法比較了四種不同梯度洗脫方案的色譜峰效應(yīng)，四種梯度洗脫方案如表1 所示。在開始階段，水相在流動(dòng)相中的比例較高，使色譜柱能很快達(dá)到平衡， 接近供試樣品的再溶解溶液的水相有機(jī)相比例，更適合待測(cè)化合物的出峰，可實(shí)現(xiàn)部分較高極性目標(biāo)物的最優(yōu)測(cè)定， 然后逐漸增加有機(jī)相比例，洗脫剩余部分較弱極性的目標(biāo)物，當(dāng)待測(cè)化合物全部檢測(cè)完畢后， 用初始流動(dòng)相比例平衡色譜柱，以滿足連續(xù)進(jìn)樣的需要。 比較程序1 和程序2，當(dāng)始末流動(dòng)相為0.1%甲酸水和甲醇溶液（95：5，V/V）時(shí)在梯度洗脫程序中，供試化合物的色譜峰響應(yīng)值與（90:10，V/V）相比較高，峰形更對(duì)稱、 更銳利。 最后選擇0.1%甲酸水和甲醇溶液（95：5，V/V）作為梯度洗脫程序的始末流動(dòng)相。 通過(guò)比較程序3 和程序4 發(fā)現(xiàn)， 將梯度洗脫時(shí)間延長(zhǎng)到20.0 min 時(shí)，待測(cè)化合物色譜峰的峰形、響應(yīng)值、出峰時(shí)間都能很好地滿足檢測(cè)要求，但是，它需要相對(duì)較長(zhǎng)的時(shí)間， 并且不太適合大量樣本的分析。 當(dāng)梯度洗脫時(shí)間減少到14.5 min，連續(xù)進(jìn)樣幾次后， 發(fā)現(xiàn)樣品中待測(cè)化合物的出峰時(shí)間會(huì)發(fā)生變化，分離效果不滿意，呈現(xiàn)不穩(wěn)定狀態(tài)，這是由于減少了分析平衡時(shí)間， 連續(xù)進(jìn)樣后相互影響。 因此，綜合考慮色譜峰的出峰時(shí)間、響應(yīng)值、峰形、靈敏度等因素，最終確定最佳方案為程序1。

表1 不同梯度洗脫程序

2.1.3 流速的選擇 流動(dòng)相的流速對(duì)受試化合物的分離有影響，適當(dāng)?shù)牧魉倏蓪?shí)現(xiàn)色譜峰很好的分離。 該方法選擇了 0.2、0.3 mL/min 和 0.4 mL/min 3 種流速，根據(jù)掃描圖譜分析，三種流速都可以有效分離待測(cè)化合物，但流速為0.4 mL/min，可調(diào)整測(cè)試化合物的出峰時(shí)間，提高整體檢測(cè)效率。最終流動(dòng)相流速選擇為0.4 mL/min。

2.2 選擇質(zhì)譜條件 Orbitrap 高分辨率質(zhì)譜不需要優(yōu)化每個(gè)化合物的質(zhì)譜條件和碰撞能量， 這可以顯著縮短檢測(cè)方法的開發(fā)時(shí)間。

2.2.1 掃描方式 該方法比較了三種掃描模式Full MS、Target-SIM/dd-MS2 和 Full MS/dd-MS2。雖然可以在全掃描模式下定量檢測(cè)目標(biāo)物， 但只有母離子精確質(zhì)量數(shù)和保留時(shí)間， 比較容易導(dǎo)致假陽(yáng)性結(jié)果；Target-SIM/dd-MS2 掃描方式是通過(guò)四極桿過(guò)濾目標(biāo)母離子， 然后母離子以高能量進(jìn)入碰撞池，獲得碎裂和生成的離子碎片信息，提高目標(biāo)物的定性檢測(cè)精度， 可掃描模式對(duì)測(cè)試化合物的定量略有不足。當(dāng)Full MS/dd-MS2 掃描模式用于測(cè)試化合物的定性篩選和定量時(shí)， 以母離子、特征碎片離子精確質(zhì)量數(shù)和保留時(shí)間，能達(dá)到對(duì)待測(cè)化合物的定性篩查及準(zhǔn)確定量的目的。 因此，選擇 Full MS/dd-MS2 作為掃描模式。32 種獸藥殘留的精確質(zhì)量數(shù)和保留時(shí)間見表2 和圖2。

圖2 32 種獸藥的質(zhì)譜圖

2.2.2 分辨率 對(duì)于復(fù)雜基質(zhì)中痕量組分的定性和定量分析，分辨率起著重要作用。 分辨率決定了分子質(zhì)量的準(zhǔn)確性。分辨率越高越能區(qū)分分子量相近的物質(zhì)。研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)分辨率較高（R=140000）時(shí)，可使掃描速度降低，導(dǎo)致收集的點(diǎn)較少，出現(xiàn)不成峰形，無(wú)法進(jìn)行準(zhǔn)確定量的情況。 在連續(xù)采樣過(guò)程中，有可能結(jié)果不一致，關(guān)鍵質(zhì)譜信息丟失，導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果重現(xiàn)性差，不穩(wěn)定性增加。 當(dāng)一級(jí)全掃描分辨率R=70000 時(shí)， 所有待測(cè)化合物都能與基質(zhì)中的干擾物質(zhì)基線分離，響應(yīng)值顯著提高，基質(zhì)中的干擾明顯降低。考慮檢測(cè)方法的定性和定量精密度和準(zhǔn)確度， 最終選用一級(jí)質(zhì)譜全掃描分辨率為70000，二級(jí)質(zhì)譜掃描分辨率為35000。

2.2.3 理論精確質(zhì)量數(shù) 測(cè)試的32 種化合物中，3 種酰胺醇類藥物殘留以陰離子方式離子化，母離子為[M-H]-，其他29 種藥物殘留均以陽(yáng)離子方式離子化，母離子為[M+H]+。 表2 列出了32 種獸藥殘留的理論精確質(zhì)量數(shù)。通過(guò)對(duì)比參考物質(zhì)的全掃描數(shù)據(jù)進(jìn)行驗(yàn)證，32 種供試化合物精確質(zhì)量的相對(duì)質(zhì)量偏差均小于5 mg/kg， 說(shuō)明待測(cè)化合物的質(zhì)量數(shù)準(zhǔn)確度良好，滿足要求。

2.2.4 二級(jí)掃描條件 根據(jù)全掃描得到的待測(cè)化合物母離子精確質(zhì)量數(shù)， 制作相對(duì)應(yīng)的待測(cè)化合物列表進(jìn)行二級(jí)質(zhì)譜掃描。 待母離子強(qiáng)度達(dá)到閾值設(shè)置（1×106）， 能自動(dòng)獲取二級(jí)質(zhì)譜掃描信息。碰撞能量用梯度定義，分別為CE 20、40、60，也就是說(shuō)有三種碰撞能量來(lái)分裂測(cè)試化合物， 最后加和得到豐富的二級(jí)碎片離子信息。此外，還可以調(diào)整動(dòng)態(tài)排除及頂點(diǎn)觸發(fā)和 Top N 等參數(shù)以獲得有關(guān)碎片離子的高質(zhì)量信息。 將動(dòng)態(tài)排除時(shí)間6、8 s 和 10 s 進(jìn)行比較。 結(jié)果表明， 測(cè)試的 32 種化合物的峰形在8 s 時(shí)較好。 當(dāng)頂點(diǎn)觸發(fā)設(shè)定為2 ～ 6 s 且 Top N=10 時(shí)， 可以獲得滿意的二級(jí)碎片離子信息和圖譜。表2 列出了32 種測(cè)試化合物的保留時(shí)間、 精確質(zhì)量理論值、 精確質(zhì)量測(cè)量值（母離子）、相對(duì)質(zhì)量偏差、二級(jí)碎片離子信息。

表2 32 種藥物的保留時(shí)間、精確質(zhì)量數(shù)、相對(duì)質(zhì)量偏差和二級(jí)碎片離子信息

2.3 樣品前處理?xiàng)l件的優(yōu)化

2.3.1 提取溶劑的選擇 在多組分獸藥殘留分析中， 從樣品中提取出待測(cè)藥物殘留對(duì)于完成準(zhǔn)確測(cè)定是非常重要的。 由于32 種受試化合物的化學(xué)性質(zhì)存在顯著差異，因此在選擇提取劑時(shí)，應(yīng)充分考慮受試化合物的極性和樣品基質(zhì)的性質(zhì)等化學(xué)性質(zhì)。目前使用的提取溶液包括乙腈水溶液（國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局，2007）、 乙腈和含有5%甲酸的乙腈（覃玲等，2018）等。

本研究中采用體積分?jǐn)?shù)為1%氨水乙腈和1%乙酸乙腈兩種不同提取溶液提取待測(cè)化合物。實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，以1%乙酸乙腈對(duì)樣品只提取一次對(duì)磺胺類等堿性化合物的回收率影響較大（回收率在56%左右），主要是由于酸性相對(duì)強(qiáng)時(shí)，磺胺類等堿性化合物的電離度增加，導(dǎo)致在有機(jī)相中的溶解度降低。樣品先用1%氨水乙腈溶液進(jìn)行第一次提取，然后再用1%乙酸乙腈溶液提取第二次， 兩次提取實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，回收率可大幅提高（69%以上）。 所

有的獸藥殘留物回收率在69% ～110%，平均回收率達(dá)到81.3%。 因此，根據(jù)提取情況，本研究最終選取1%氨水乙腈和1%乙酸乙腈溶液分別對(duì)樣品進(jìn)行兩次提取的提取方式。

2.3.2 凈化方式的選擇 本研究選擇QuEChERS凈化方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)分析。 QuEChERS 凈化方法可有效去除奶基質(zhì)中的干擾成分， 減弱基質(zhì)效應(yīng)。同樣的一份樣品，QuEChERS 凈化方法只需要13元左右。 QuEChERS 凈化方法具有高效、安全、經(jīng)濟(jì)、實(shí)用等優(yōu)點(diǎn)，越來(lái)越多地應(yīng)用于動(dòng)物源性產(chǎn)品的藥物殘留檢測(cè)工作， 這是當(dāng)前凈化技術(shù)的發(fā)展趨勢(shì)（謝瑜杰等，2021；張?chǎng)蔚龋?021）。

QuEChERS 凈化方法中使用的常見吸附劑包括 C18、PSA、NH2和 GCB。 其中，NH2和 PSA 吸附劑的吸附機(jī)理相似。兩種吸附劑都具有弱陰離子交換能力，并且可以通過(guò)氫鍵與化合物相互作用。 可有效去除極性干擾物質(zhì)，如色素、脂肪酸、有機(jī)酸、碳水化合物等。C18 吸附劑將十八烷基與硅膠基質(zhì)結(jié)合，可去除一部分非極性雜質(zhì)和脂肪等疏水性共提取物（高彥，2017）。 GCB 凈化劑對(duì)平面分子結(jié)構(gòu)有很強(qiáng)的親和力，對(duì)苯環(huán)和弱極性化合物有很強(qiáng)的吸附作用，其可以凈化色素（葉綠素、類胡蘿卜素等）和一些甾醇類物質(zhì)，凈化能力很強(qiáng)。

本研究從 C18、PSA 、GCB 三種凈化劑中搭配選擇兩種組合作為吸附劑，凈化效果見表3。 結(jié)果表明，當(dāng)C18 與PSA 結(jié)合作為凈化劑時(shí)，可以獲得較好的凈化效果。 兩種組合對(duì)大部分目標(biāo)化合物均能達(dá)到較好的回收率，但用GCB 凈化劑時(shí)對(duì)大環(huán)內(nèi)酯類有明顯的吸附。 因此，最終選擇40 mg C18+100 mg PSA 作為凈化劑。

表3 兩組凈化劑在回收率范圍內(nèi)的獸藥數(shù)量（添加水平：20 μg/kg）

2.3.3 再溶解液的選擇 樣品經(jīng)提取、 凈化、濃縮、再溶解、過(guò)濾后，即可在儀器上進(jìn)行測(cè)定。 在進(jìn)樣測(cè)定分析過(guò)程中， 再溶解溶液最大程度地溶解測(cè)試化合物而不影響色譜峰的基線和峰形是非常重要的。 有文獻(xiàn)報(bào)道用0.1%甲酸水：乙腈（9:1，V/V）（付曉燕，2018） 和 1%甲酸水：1%甲酸乙腈（6:4，V/V）（郭海霞，2018）進(jìn)行再溶解。 本研究比較了水和甲醇（9:1，V/V）、水和乙腈（9:1，V/V） ，0.1%甲酸水和甲醇（9:1，V/V）、0.1%甲酸水和乙腈（9:1，V/V）。水和甲醇（6:4，V/V）、水和乙腈（6:4，V/V），0.1% 甲酸水和甲醇 （6:4，V/V）、0.1% 甲酸水和乙腈（6:4，V/V）對(duì)待測(cè)化合物回收率的影響。根據(jù)各待測(cè)化合物的色譜峰基線、峰形和分離度、回收率計(jì)算等信息， 最終采用0.1%甲酸水和甲醇（9:1，V/V）的溶液作為再溶解液。

2.4 方法學(xué)驗(yàn)證

2.4.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線與檢出限評(píng)價(jià) 取質(zhì)量濃度分別為 2.00、4.00、8.00、10.00、20.00、40.00、80.00、100.00 ng/mL （氯霉素、 氟苯尼考 0.50、2.00、4.00、8.00、10.00、20.00、40.00 ng/mL） 系列標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液，利用標(biāo)準(zhǔn)品的響應(yīng)峰面積和質(zhì)量濃度制作標(biāo)準(zhǔn)曲線， 即可得到相應(yīng)的線性回歸方程。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明， 所有組分在該質(zhì)量濃度范圍內(nèi)均具有良好的線性，相關(guān)系數(shù)（r）為 0.9962 ～ 0.9999。 以 3 倍信噪比計(jì)算的檢出限為1 ～10 μg/kg， 可滿足生乳藥物殘留檢測(cè)要求。

2.4.2 回收率和精密度評(píng)價(jià) 根據(jù)國(guó)家對(duì)所檢獸藥殘留判定依據(jù)（農(nóng)業(yè)農(nóng)村部，2019），制備三個(gè)質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 5.0、20.0、50.0 μg/kg（氯霉素、氟苯尼考1.0、5.0、20.0 μg/kg）的陽(yáng)性樣品，每個(gè)水平進(jìn)行 3次平行實(shí)驗(yàn)。 按照1.6.1 和1.6.2 步驟對(duì)樣品處理后上機(jī)測(cè)定并進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，結(jié)果見表4。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明， 三個(gè)水平樣品的回收率為60.1%～116.7%，RSD 為 1.2%～9.7%。 方法的準(zhǔn)確性和重復(fù)性良好。 符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)《GB/T 27417-2017 合格評(píng)定 化學(xué)分析方法確認(rèn)和驗(yàn)證指南》（國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局等，2017）， 可用于生乳中多種獸藥殘留的快速定性定量測(cè)定。

表4 空白乳樣中待測(cè)化合物的加標(biāo)回收率和測(cè)定重復(fù)性（n=3）

3 結(jié)論

本研究采用QuEChERS 凈化，結(jié)合超高效液相色譜Q Exactive Orbitrap HRMS 高分辨質(zhì)譜技術(shù)與一體的檢測(cè)方法，同時(shí)測(cè)定生乳中5 類32 種獸藥殘留分析， 結(jié)果表明各組待測(cè)化合物的分離度良好，色譜圖峰形尖銳，響應(yīng)值高，基線噪聲低。不僅可以消除奶基質(zhì)中雜質(zhì)的干擾， 而且可以提高待測(cè)化合物的準(zhǔn)確定性和定量結(jié)果， 同時(shí)具有樣品處理過(guò)程簡(jiǎn)單、成本低、測(cè)量周期短、靈敏度高等特點(diǎn)。